Спосіб неінвазивної імунодіагностики стану клітинного адаптативного імунітету

Спосіб неінвазивної імунодіагностики стану клітинного адаптативного імунітету, за яким до епітелію поверхні будь-якої слизової оболонки (ока, ротової порожнини, вуха, носа) з зусиллям 100-150 г прикладають стерильні пластинкипереносники, після чого їх з відбитком шару клітин 3 67099 алом, який може бути інфікованим (бактеріальна флора, вірус ВІЛ, цитомегаловірус, вірус гепатиту А, В,С тощо). Сьогодні відомо використання пластинокпереносників для цитологічного дослідження кон'юнктиви при офтальмогерпесі (патент України 51977А Кульбаба О.Г., Салдан Й.Р., Боцюм П.М.), але до цього часу пластинки-переносники не використовувалися для оцінювання стану клітинного адаптативного імунітету. Проблема розробки неінвазивних валідних методів імунодіагностики залишається не вирішеною, а втім вона є вельми важливою для багатьох галузей сучасної медицини. В основу корисної моделі поставлена задача розробки способу неінвазивної імунодіагностики клітинного адаптативного імунітету шляхом визначення стану місцевого імунного гомеостазу за допомогою імуногістохімічних методів дослідження, за рахунок чого стає можливим оцінювання стану імунологічної реактивності організму при різних видах запальних процесів, що дозволить виявити наявність дезадаптаційних реакцій в нейроімуноендокринній регуляції в організмі людини, які є передвісниками розвитку патологічних процесів. Поставлена задача вирішується тим, що у способі неінвазивної імунодіагностики порушень клітинного адаптативного імунітету, відповідно до корисної моделі, проводять імуногістохімічні дослідження окремих зразків секретів слизових оболонок, а також епітелію слизових оболонок, відповідно до мети дослідження імунного гомеостазу конкретної біологічної системи організму, для чого до епітелію поверхні будь-якої слизової оболонки (ока, ротової порожнини, вуха, носа) з зусиллям 100-150 г прикладають стерильні пластинкипереносники, після цього їх з відбитком шару клітин епітелію і різних видів лейкоцитів відтискують на предметне скло, потім предметне скло з мазками-відбитками фіксують у 10 %-ному забуферному нейтральному формаліні, здійснюють послідовні етапи імуногістохімічного дослідження з використанням імунного комплексу пероксидазаантипероксидаза (ПАП-метод) і визначають вміст субпопуляцій імунокомпетентних клітин-кілерів (CD 16), маркери активації, адгезії, секреції цитокінів (CD 7), маркер активації ендотеліальних та епітеліальних клітин під час запалення (CD 45), апоптозу (CD 95) і аутоагресії (CD 5), і за отриманими показниками функціонального стану рецеп 4 торного апарата спеціалізованих клітин оцінюють стан клітинного адаптативного імунітету. Причинно-наслідкові зв’язки: 1. Використання стерильних пластинокпереносників при проведенні імунодіагностики за рахунок отримання відбитків шару клітин епітелію та різних видів лейкоцитів неінвазивним шляхом дозволяє виключити можливість інфікування бактеріальною флорою та вірусами як пацієнта, так і медперсоналу. 2. Визначення функціонального стану рецепторного апарату як епітеліальних так і субпопуляцій імунокомпетентних клітин за допомогою ПАПметоду дозволяє оцінити стан клітинного адаптативного імунітету. Опис способу. До епітелію поверхні будь-якої слизової оболонки (ока, ротової порожнини, вуха, носа) з зусиллям 100-150 г прикладають квадратні, розміром 10×10 мм поролонові стерильні пластинкипереносники. Пластинку з відбитками клітин епітелію та різних видів лейкоцитів відтискують на предметне скло. Предметні стекла з мазкамивідбитками фіксують у 10 %-ному забуферному нейтральному формаліні. Надалі здійснюють етапи імуногістохімічної діагностики при використанні імунного комплексу пероксидаза-антипероксидаза (ПАП-метод) з специфічними моноклональними антитілами до CD-рецепторів. Приклади. Згідно з запропонованим способом була здійснена неінвазивна імунодіагностика у двох соматично здорових людей і у двох пацієнтів з ураженнями епітеліальної оболонки ротової порожнини інфекційного ґенезу. Отриманий за допомогою пластинок-переносників діагностичний матеріал фіксували і обробляли, як описано вище. Визначали вміст: a) CD 7 (модифікатор адгезії, індуктор секреції цитокінів); б) CD 16 (експресований на рецепторах гранулоцитів, макрофагів; в) CD 54 (активатор ендотеліальних та епітеліальних клітин під час запалення); г) CD 150 (підсилювач проліферації епітеліальних клітин та секреторних імуноглобулінів). Отримані результати виявили, що вміст CD 7, CD 16, CD 54 CD 150 у здорових осіб (20 осіб) значно відрізнявся від аналогічних показників у пацієнтів з запальними процесами слизових оболонок (табл. 1). Таблиця 1 Вміст CD 7, CD 16, CD 54, CD 150 у здорових і у пацієнтів з ураженнями ротової порожнини, %. CD 16 CD 7 CD 54 CD 150 здорові особи 14,3±2 10,4±4 10,1±2 12,5±2 Отримані нами результати щодо оцінки стану місцевого імунітету (слина, секрет і відбитки епітелію як об'єкти досліджень), завдяки використанню хворі 20,4±2 18,2±2 28,6±6 30,7±2 запропонованого способу, довели значні відмінності в стані імунної реактивності організму у здоро 5 вих осіб і пацієнтів з патологічними процесами запального ґенезу. Таким чином, отримані результати свідчать про валідність запропонованого нами способу неінвазивної імунодіагностики стану клітинного адаптативного імунітету. Переваги запропонованого способу полягають у наступному: 1) Взяття зразків матеріалу для діагностичних досліджень не потребує безпосереднього контакту медперсоналу з фізіологічними виділеннями піддослідного, що свідчить про безпеку методу, особливо у такий час, коли зростає чисельність інфікованих і хворих на СНІД, вірусний гепатит та інші хвороби. 2) Простота та швидкість отримання діагностичного матеріалу, завдяки використанню сучасних біотехнологій. 3) Точність та інформативність оцінювання функціонального стану рецепторного апарату спеціалізованих клітин. Запропонований спосіб неінвазивної імунодіагностики з використанням специфічних монокло Комп’ютерна верстка Д. Шеверун 67099 6 нальних антитіл дозволяє визначати стан клітинного адаптативного імунітету за оцінюванням функціонального стану рецепторного апарату епітеліальних та імунокомпетентних клітин. Приймаючи до уваги те, що імунологічні порушення передують розвитку клінічних ознак патологічних процесів, доцільно здійснювати впровадження запропонованого неінвазивного імунодіагностичного способу для вирішення вельми актуальних для клінік різного профілю наступних питань: - діагностика дезадаптативних реакцій в стані нейроімунореактивної регуляції в організмі, які передують прояву клінічних ознак будь-яких видів патології; - прогнозування розвитку патологічних процесів запального, інфекційно-алергічного та аутоімунного ґенезу; - проведення моніторингу щодо оцінки імунотропного впливу імунопрофілактичних та імунореабілітаційних заходів (натуральні метаболіти, біостимулятори, фізіотерапевтичні методи тощо). Підписне Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601