Спосіб одержання біомаси лактобактерій

1. Спосіб одержання біомаси лактобактерій, що включає внесення до живильного середовища інокуляту, культивування біомаси у живильному середовищі при коригуванні рН, який відрізняється тим, що як інокулят використовують культуру другої генерації маточної культури Lactobacillus plantarum, як живильне середовище використовують казеїново-дріжджове середовище КД-5, культивування біомаси проводять при тиску не більш як 0,3 атм та додаванні глюкози, причому при ко C2 2 (19) 1 3 75233 4 рощування біомаси бактерій та наявність в біомасі тягом 24 - 36 годин. баластних речовин. Тривалість процесу вирощуВикористовують готове або готують казеїнововання займає 15-20 годин. дріждове середовище КД-5, що містить: нативний Задачею винаходу є удосконалення способу дріжджовий автолізат із дріжджів (150 мг %) - 650 одержання біомаси лактобактерій, в якому завдяки мл, триптичний гідролізат казеїну (з вмістом підбору елективного середовища та умов вирощуамінного азоту 150 мг %) - 350 мл, лактоза- 10,0 г, вання скорочується тривалість процесу нарощунатрію хлорид - 5,0 г, 1--цистеін-0,1 г, агар вання біомаси та зменшується кількість баластних мікробіологічний - 0, 75 г, відвар із печінки ялової речовин. (1 : 2 ) - 100 мл. Поставлена задача вирішується запропоноваДо біору у підготовлене живильне середовище ним способом одержання біомаси лактобактерій, - казеїново-дріжджове середовище КД-5 (маса 60 що включає внесення до живильного середовища 110 л, температура 38±1 "С) вносять інокулят інокуляту, культивування біомаси у живильному культуру другої генерації маточної культури Lactoсередовищі при коригуванні рН, в якому як bacillus plantarum N 38. інокулят використовують культуру другої генерації Інокулят подається за допомогою тиску чи ваматочної культури Lactobacillus plantarum, як жикууму. Культивування біомаси проводять при вильне середовище використовують казеїновотемпературі 38±1 °С, додаванні глюкози у вигляді дріжджове середовище КД-5. Культивування 40%-ного водного розчину і коригуванні рН. Тиск біомаси проводять в атмосфері повітря чи аргону підтримують не більш як 0,3 атм очищеним атмопри тиску не більш як 0,3 атм та при додаванні сферним повітрям чи аргоном. Перемішування, глюкози. Причому при коригуванні рН, яке яке здійснюють під час коригування рН, додаванні підтримують на рівні 5,0 - 6,8 за допомогою 5-10 розчину глюкози та відбору проб, триває протягом %-ного розчину аміаку, та/або додаванні глюкози 3-7 хв. при 70-100 об./хв. В процесі культивування здійснюють перемішування протягом 3 - 7 хв. при біомаси рН підтримують на рівні 5-6,8. Коригуван70 - 100 об./хв. Глюкозу додають у вигляді 40 %ня рН здійснюють 5-10%-им розчином аміаку. ного водного розчину. Кінець процесу культивування встановлюють за Для одержання інокуляту першу та другу оптичною щільністю. генерації маточної культури Lactobacillus plantarum Нарощування біомаси займає 7-10 годин. вирощують у живильному середовищу, де як таке Кількість біомаси після концентрування становить використовують МРС-1. - 5 - 10 кг. Культивування біомаси здійснюють при Приклад 1 температурі 38±1 °С. Ліофілізований штам Lactobacillus plantarum N Експериментально нами були виявлені умови, 38 з ампули розводять поживним середовищем що є найбільш сприятливими для нарощування МРС-1 методом десятикратних розведень. біомаси бактерій Lactobacillus plantarum та викориПосіви у вигляді окремих ізольованих колоній стання живильного середовища. Було встановлевитримують у скляній ємності, наповненій на но, що нарощування біомаси у казеїновочверть живильним середовищем МРС-1, при дріждовому середовищі КД-5 при тиску не більш як температурі 38 °С протягом 28 годин. 0,3 атм та додаванні глюкози і обмеженому При відсутності сторонньої мікрофлори в мазперемішуванні проходить енергійно і продуктивно ках і контрольних середовищах, типові колонії без утворення баластних речовин. першої генерації пересівають у балон, наповненоСпосіб здійснюється таким чином. му на чверть живильним середовищем МРС-1. Ліофілізований штам Lactobacillus plantarum N Посіви витримують при температурі 38 °С протя38 з ампули розводять поживним середовищем гом 24 годин. МРС-1 методом десятикратних розведень. До біору у підготовлене живильне середовище До складу поживного середовища МРС-1 вхо- казеїново-дріжджове середовище КД-5 (маса 60 дять наступні компоненти: марганець л, температура 38 °С) вносять інокулят - культуру сірчанокислий п'ятиводний - 0,05 г, цистеїн солядругої генерації маточної культури Lactobacillus нокислий - 0,2 г, магній сірчанокислий семиводний plantarum N 38. - 0,2 г, калій фосфорнокислий двохзаміщений триІнокулят подається за допомогою тиску. Кульводневий - 2,0 г, амоній лимонокислий - 2,0 г, тивування біомаси проводять при температурі 38 натрій оцтовокислий триводневий - 5,0 г, °С, додаванні глюкози у вигляді 40%-ного водного печінковий екстракт- 100,0 мл, дріжджовий розчину і коригуванні рН. Тиск підтримують 0,2 атм автолізат - 50,0 мл, пептон сухий ферментативний очищеним атмосферним повітрям. - 10,0 г, гідролізат знежиреного молока - 330,0 мл, Перемішування, яке здійснюють під час коригутвін 80-1,0 мл, глюкоза - 20,0 г, вода очищена - до вання рН, додаванні розчину глюкози та відбору 1 л. проб, триває протягом 5 хвилин при 100 об./хв. В Посіви у вигляді окремих ізольованих колоній процесі культивування біомаси рН підтримують на витримують у скляній ємності, наповненій на рівні 5,3-5,8. Коригування рН здійснюють 10%-им чверть живильним середовищем МРС-1, при розчином аміаку. Кінець процесу культивування температурі 38±0,5 °С протягом 24 - 36 годин. встановлюють за оптичною щільністю. При відсутності сторонньої мікрофлори в мазНарощування біомаси займає 9 годин. ках і контрольних середовищах, типові колонії Кількість біомаси після концентрування станопершої генерації пересівають у балон, наповненовить - 8,5 кг. му на чверть живильним середовищем МРС-1. Приклад 2 Посіви витримують при температурі 38±1 °С проЛіофілізований штам Lactobacillus plantarum N 5 75233 6 38 з ампули розводять поживним середовищем 38 °С, додаванні глюкози у вигляді 40%-ного водМРС-1 методом десятикратних розведень. ного розчину і коригуванні рН. Тиск підтримують Посіви у вигляді окремих ізольованих колоній 0,3 атм аргоном. Перемішування, яке здійснюють витримують у скляній ємності, наповненій на під час коригування рН, додаванні розчину глюкочверть живильним середовищем МРС-1, при зи та відбору проб, триває протягом 7 хв. при 70 температурі 38 °С протягом 34 годин. об./хв. В процесі культивування біомаси рН При відсутності сторонньої мікрофлори в мазпідтримують на рівні 6,0- 6,4. Коригування рН ках і контрольних середовищах, типові колонії здійснюють 5%-им розчином аміаку. Кінець процепершої генерації пересівають у балон, наповненосу культивування встановлюють за оптичною му на чверть живильним середовищем МРС-1. щільністю. Посіви витримують при температурі 38 °С протяНарощування біомаси займає 10 годин. гом 29 годин. Кількість біомаси після концентрування станоДо біору у підготовлене живильне середовище вить - 9,5 кг. - казеїново-дріжджове середовище КД-5 (маса 110 Таким чином, запропоновано ефективний л, температура 38 °С) вносять інокулят -культуру спосіб вирощування біомаси бактерій Lactobacillus другої генерації маточної культури Lactobacillus plantarum, який дозволяє скоротити тривалість plantarum N 38. процесу нарощування біомаси та зменшити Інокулят подається за допомогою вакууму. кількість баластних речовин у отриманій біомасі. Культивування біомаси проводять при температурі Комп’ютерна верстка М. Клюкін Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601