Спосіб отримання мезенхімальних стовбурових клітин із пупкового канатику собак

Реферат: Спосіб отримання мезенхімальних стовбурових клітин із пупкового канатику собак, у який входить отримання пупкового канатику собак, а на останньому етапі - центрифугування суспензії клітин протягом 10 хвилин при 300 g. З пупкового канатику видаляють кровоносні судини. Після цього подрібнюють на фрагменти розміром 2-3 мм, піддають 10-15 хвилинній механічній дезагрегації на магнітній мішалці за кімнатної температури з наступним фільтруванням суспензії клітин через стерильну марлеву серветку та з подальшим центрифугуванням. UA 93756 U (12) UA 93756 U UA 93756 U 5 10 15 20 25 30 35 40 Корисна модель належить до галузей ветеринарної медицини та біотехнології. Відомий аналог [Zucconi Eder. Mesenchymal stem cells derived from canine umbilical cord veina novel source for cell therapy studies / Eder Zucconi, Natassia M. Vieira, Daniela F. Buenoet al. // Stem cells and development. - 2010. - Vol. 19. - № 3. - P. 395-402], при якому отриманий пупковий канатик разом із судинами ферментативно дезагрегують шляхом інкубування протягом 15 хвилин при t 37 °C у 0,1 %-ому розчині колагенази, приготовленому на фосфатному буфері, промивають їх поверхню культуральним середовищем, а відокремлені від вен пупкового канатику клітини, ресуспендовані у середовищі, відбирають за допомогою піпетки. Недоліком даного способу є наявність в отриманій суспензії значної кількості прогеніторних клітин, що, відповідно, впливає на цитодиференціювання отриманих мезенхімальних стовбурових клітин пупкового канатику, а використання як дезагрегуючий фактор колагенази здорожує процедуру отримання. Задачею корисної моделі є вдосконалення способу отримання мезенхімальних стовбурових клітин із пупкового канатику собак, який може бути використаний для напрацювання біологічного матеріалу з метою подальшого його застосування. Поставлена задача вирішується тим, що у способі отримання мезенхімальних стовбурових клітин із пупкового канатику собак, у який входить отримання пупкового канатика, звільнення його тканин від кровоносних судин, подрібнення отриманої тканини на фрагменти, які після цього піддають механічній дезагрегації, а отриману суспензію клітин фільтрують через стерильну марлеву серветку. Запропонований спосіб є простим у виконанні, дає змогу зменшити кількість в отриманій суспензії прогеніторних клітин, збільшити площу контакту тканин пупкового канатику з механічним дезагрегуючим фактором, а отже, підвищити вихід стовбурових клітин та здешевити процедуру їх отримання. Запропонований нами спосіб полягає в отриманні пупкового канатику собак, відділенні кровоносних судин, подрібненні пупкового канатика на фрагменти розміром 2-3 мм з наступною 10-15 хвилинною механічною дезагрегацією на магнітній мішалці за кімнатної температури та фільтруванні отриманої суспензії клітин через стерильну марлеву серветку. Спосіб здійснюється наступним чином. Фрагменти пупкового канатика розміром 2-3 мм 3 3 загальною вагою 15-20 г внести у стерильну скляну колбу об'ємом 100 см із 60 см фосфатнобуферного розчину і піддати суміш механічній дезагрегації за кімнатної температури на магнітній мішалці протягом 10-15 хв. Після дезагрегації фрагментів пупкового канатика отриману суспензію клітин профільтрувати крізь 4 шари стерильної марлевої серветки у 3 стерильні центрифужні пробірки об'ємом 15 см та відцентрифугувати при 300 g протягом 10 хв. Осад клітин ресуспензувати у відповідній кількості поживного середовища і використати за призначенням. Технічним рішенням пропонованої новизни корисної моделі є те, що за допомогою способу отримання мезенхімальних стовбурових клітин із пупкового канатику собак вдається зменшити кількість в отриманій суспензії прогеніторних клітин. Збільшивши площу контакту тканин пупкового канатику з механічним дезагрегуючим фактором, підвищується вихід стовбурових клітин, що здешевлює процедуру їх отримання. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 45 50 Спосіб отримання мезенхімальних стовбурових клітин із пупкового канатику собак, у який входить отримання пупкового канатику собак, а на останньому етапі - центрифугування суспензії клітин протягом 10 хвилин при 300 g, який відрізняється тим, що з пупкового канатику видаляють кровоносні судини, після чого подрібнюють на фрагменти розміром 2-3 мм, піддають 10-15 хвилинній механічній дезагрегації на магнітній мішалці за кімнатної температури з наступним фільтруванням суспензії клітин через стерильну марлеву серветку та з подальшим центрифугуванням. Комп’ютерна верстка Г. Паяльніков Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 1