Похідні фосфономоноефірів нуклеїнових кислот та олігонуклеотидвмісні похідні фосфономоноефірів нуклеїнових кислот

1 Производные фосфономоноэфиров нуклеиновых кислот формулы (I), NR y C(=O)OR, OC(=O)NR R И NR C(=O)NR R10, ИЛИ радикалы В независимо друг от друга означают природное или неприродное нуклеооснование или репортерный лиганд, А-В может также означать конденсированную через карбоксильную группу D- или L-аминокислоту или пептиды, состоящие из этих аминокислот, с длиной до 5 аминокислотных остатков, радикалы L независимо друг от друга означают N или R1N+, и R1 - водород или алкил с 1-6 атомами углерода, незамещенный или замещенный гидроксилом, алкоксилом с 1-6 атомами углерода, алкилтиогруппой с 1-6 атомами углерода или аминогруппой, радикалы А независимо друг от друга означают простую связь, метилен или группу формулы (Па) или (N6) 9 9 9 9 1 где п -число 0-100, радикалы В независимо друг от друга означают водород, гидроксил, алкил с 1-20 атомами углерода, алкоксил с 1-20 атомами углерода, алкилтио с 1-20 атомами углерода, арил с 6-20 атомами углерода, арилалкил с 6-20 атомами углерода в арильной части и 1-6 атомами углерода в алкильной части, арилалкоксил с 6-20 атомами углерода в арильной части и 1-6 атомами углерода в алкоксильной части, арилалкилтио с 6-20 атомами углерода в арильной части и 1-6 атомами углерода в алкилтио-части, ароматическую группу или гетероциклическую группу, при этом алкил, арил и/или ароматическая, или гетероциклическая группы незамещены или замещены, по меньшей мере, одним остатком из группы, включающей гидроксил, алкоксил с 1-4 атомами углерода, -NR9R , С(О)ОН, оксо, -C(O)OR8, -C(O)NR9R1 , -CN, -F, -СІ, -Br, -NO2, алкоксиалкил с 2-6 атомами углерода, S(O)mR8, anKnn-S(O)mR8 с 1-6 атомами углерода в алкильной части, -NHC(=NH)NHR8, -C(=NH)NHR8, О го J Ю (Нб) Y'-=O, =S, =CH2, =С(СН3)2 или =NR1, при этом R1 имеет вышеуказанное значение, М - простая связь, -О-, -S- или -NR1-, при этом R1 имеет вышеуказанное значение, R2 и R3 независимо друг от друга означают водород, гидроксил, алкоксил с 1-6 атомами углерода, алкилтио с 1-6 атомами углерода, амино, галоген или алкил с 1-6 атомами углерода, незамещенный или замещенный гидроксилом, алкоксилом с 1-6 44253 алкилтио-группой с 1-6 тем, что атомами углерода или п - число 0-50, атомами углерода, радикалы В независимо друг от друга означают р и q независимо друг от друга означают 0-5, природное или неприродное нуклеооснование, г и s независимо друг от друга означают 0-5, L-N, D и G независимо друг от друга означают CRW, А - группа формулы (116), где г =1 и s = 0, и R2, R3 R5 и R6 независимо друг от друга означают водо- Н и Y - О и М -простая связь, род, алкил с 1-6 атомами углерода, арил с 6-20 D и G независимо друг от друга означают CHR5, атомами углерода, арилалкил с 6-20 атомами угR5-BOflopofl, лерода в арильной части и 1-6 атомами углерода Х- -О-, в алкильной части, гидроксил, алкоксил с 1-6 атоY- = 0, мами углерода, алкилтио с 1-6 атомами углерода, алкил и арил незамещены или замещены группой Z гидроксил, метоксил, этоксил, (4SR1 или NR1R1, при этом R1 имеет вышеуказаннитрофенол)этокси, пропокси, изопропокси, бутокное значение и R1 имеет то же самое значение, си, пентокси, фенокси или аллилокси, что и R1, Q и Q' независимо друг от друга означают водород, R8 или немодифицированные или модифициX - -О-, -S- или -NR1-, где R1 имеет вышеуказанное рованные олигонуклеотиды, при этом значение, а) 3'- и/или 5'-мостики сложных диэфиров фосY - = O или =S форной кислоты полностью или частично заменеZ - -OR8, -NR R10 или X'Q", при этом Xі имеет то ны мостиками фосфортиоата, фосфордитиоата, же самое значение, что и X, a Q" имеет то же са^4 мое значение, что и Q, R8 - водород, алкил с 1-18 атомами углерода, алфосфорамидата, фосфат-О-метилового эфира, кенил с 2-18 атомами углерода, алкинил с 3-18 фосфат-О-этилового эфира, фосфат-О-изоатомами углерода, арил с 6-12 атомами углерода, пропилового эфира, метилфосфоната или феарилалкил с 6-12 атомами углерода в арильной нилфосфоната, части и 1 -6 атомами углерода в алкильной части, б) 1,2 или 3 3'- или 5'-мостика сложных диэфиров при этом алкил незамещен или замещен, по фосфорной кислоты в положениях пиримидина и у меньшей мере, одним остатком из группы, вклю5'-конца и/или у З'-конца заменены формацеталячающей гидроксил, алкоксил с 1-4 атомами углеми и/или З'-тиоформацеталями, рода, фтор, хлор и бром, и арил незамещен или в) остаток фосфорного сахара полностью или часзамещен 1-3 остатками из группы, включающей тично заменен ПНК или ПНК-ДНК-гибридами, гидроксил, алкоксил с 1-4 атомами углерода, алг) остатки (3-0-2'-десоксирибозы полностью или кил с 1-4 атомами углерода, фтор, хлор, бром, частично заменены 2'-Р-2'-десоксирибозой, 2'-ОNO2, -NR9R10, -С(О)ОН, -С(О)О-алкил с 1-8 атомаалкилрибозой с 1-6 атомами углерода в алкильной ми углерода в алкильной части, -C(O)NR9R10, при части, 2'-О-алкенилрибозой с 2-6 атомамиуглероэтом арил незамещен или монозамещен остатком да в алкенильной части, 2'-МЬІ2-2'-десоксирибозой, из группы, включающей алкоксил с 1-4 атомами д) природные нуклеозидные основания полностью углерода, алкил с 1- 4 атомами углерода, фтор, или частично заменены остатком из группы, вклюхлор, бром и NO2, чающей 5-алкилурацил с 1-6 атомами углерода в R9 и R10 независимо друг от друга означают водоалкильной части, 5-алкенилурацил с 2-6 атомами род, алкил с 1-18 атомами углерода, алкенил с 1углерода в алкенильной части, 5-алкинилурацил с 18 атомами углерода, алкинил с 1 -18 атомами 2-6 атомами углерода в алкинильной части, 5углерода, арил с 6-12 атомами углерода, арилалалкилцитозин с 1-6 атомами углерода в алкильной кил с 6-12 атомами углерода в арильной части и 1части, 5-алкен ил цитозин с 2-6 атомами углерода в 6 атомами углерода в алкильной части, при этом алкенильной части, 5-алкинилцитозин с 2-6 атоалкил незамещен или замещен по меньшей мере мами углерода в алкинильной части, 5одним остатком из группы, включающей гидрофторурацил, 5-фторцитозин, 5-хлорурацил, 5ксил, алкоксил с 1-4 атомами углерода, фтор, хлор хлорцитозин, 5-бромурацил, 5-бромцитозин, 7и бром, и R9 и R10 вместе с несущим их атомом деаза-7-алкинилгуанин с 2-7 атомами углерода в азота образуют 4-7-членное кольцо, алкинильной части, 7-деаза-7-алкиниладенин с 2Q и Q' независимо друг от друга означают водо7 атомами углерода в алкинильной части, 7-деазарод или R8, означают конъюгаты, оказывающие 7-алкен ил гуанин с 2-7 атомами углерода в алкеположительное влияние на свойства антисмыслонильной части, 7-деаза-7-алкениладенин с 2-7 вых олигонуклеотидов или олигонуклеотидов, обатомами углерода в алкенильной части, 7-деазаразующих тройную спираль, служащие в качестве 7-алкилгуанин с 1-7 атомами углерода в алкильмаркировки ДНК-зонда, или же при гибридизации ной части, 7-деаза-7-алкиладенин с 1-7 атомами аналога олигонуклеотида с нуклеиновой кислотойуглерода в алкильной части, 7-деаза-7мишенью разрушающие последнюю при связывабромгуанин и 7-деаза-7-бромаденин нии или поперечном сшивании, или означают не3 Производные фосфономоноэфиров нуклеиномодифицированные или модифицированные оливых кислот формулы (I) по пп 1 или 2, отличаюгонуклеотиды, или Q и Q' связаны, т е образуют щиеся тем, что циклическую молекулу, при этом, однако, также п - число 0-30, существует возможность, что Q и Q' вместе обраQ и Q' независимо друг от друга означают водозуют простую связь род, R8, где R8 означает водород, алкил с 1-6 ато2 Производные фосфономоноэфиров нуклеиномами углерода, фенил или 2-(4-нитрофенилэтил), вых кислот формулы (I) по п 1 , отличающиеся или немодифицированные или модифицирован з 44253 ные олигонуклеотиды, при этом а) 3'- и/или б'-мостики сложных диэфиров фосфорной кислоты полностью или частично заменены мостиками фосфортиоата, фосфор-дитиоата или метилфосфоната, б) 1,2 или 3 3'- или 5'-мостика сложных диэфиров фосфорной кислоты у 5'-конца и/или у З'-конца заменены, в) остаток фосфорного сахара полностью или частично заменен ПНК или ПНК-ДНК-гибридами, г) остатки Р -О-2'-десоксирибозы полностью или частично заменены 2'-Р-2'-десоксирибозой, 1-0алкилрибозой с 1-4 атомами углерода в алкильной части, 2'-О-алкенилрибозой с 2-4 атомами углерода в алкенильной части, 2'-МЬІ2-2'-десоксирибозой, д) природные нуклеозидные основания полностью или частично заменены остатком из группы, включающей 5-алкилурацил с 3-6 атомами углерода в алкильной части, 5-алкенилурацил с 2-6 атомами углерода в алкенильной части, 5-алкинилурацил с 2-6 атомами углерода в алкинильной части, 5алкилцитозин с 1-6 атомами углерода в алкильной части, 5-алкен ил цитозин с 2-6 атомами углерода в алкенильной части, 5-алкинилцитозин с 2-6 атомами углерода в алкинильной части, 7-деаза-7алкинилгуанин с 2-7 атомами углерода в алкинильной части, 7-деаза-7-алкиниладенин с 2-7 атомами углерода в алкинильной части, 7-деаза7-алкен ил гуанин с 2-7 атомами углерода в алкенильной части, 7-деаза-7-алкениладенин с 2-7 атомами углерода в алкенильной части, 7-деаза7-алкилгуанин с 1-7 атомами углерода в алкильной части, 7-деаза-7-алкиладенин с 1-7 атомами углерода в алкильной части, 7-деаза-7бромгуанин и 7-деаза-7-бромаденин радикалы В независимо друг от друга означают природное нуклеооснование, Z-гидроксил, этоксил, (4-нитрофенол)этоксил или феноксил, Q и Q1 независимо друг от друга означают водород, R8, где R8 означает водород, алкил с 1-6 атомами углерода, фенил или 2-(4-нитрофенилэтил), или немодифицированные или модифицированные олигонуклеотиды, при этом а) 3'- и/или 5'-мостики сложных диэфиров фосфорной кислоты полностью или частично заменены мостиками фосфортиоата, в) остаток фосфорного сахара полностью или частично заменен ПНК или ПНК-ДНК-гибридами, 4 Производные фосфономоноэфиров нуклеиновых кислот формулы (I) по пп 1-2, отличающиеся тем, что п - число 0-25, г) остатки Р -0-2'-десоксирибозы полностью или частично заменены 2'-0-метилрибозой, 2'-0аллилрибозой, 2'-0-бутилрибозой, д) природные нуклеозидные основания полностью или частично заменены остатком из группы, включающей 5-гексинилцитозин, 5-гексинилурацил, 5гекси нил цитозин, 7-деаза-7-пропинил гуанин, 7деаза-7-пропиниладенин, 7-деаза-7-метил гуанин, 7-деаза-7-метиладенин, 7-деаза-7-бромгуанин и 7деаза-7-бромаденин 5 Олигонуклеотидсодержащие производные фосфономоноэфиров нуклеиновых кислот формул S'-OLIGO-PMENA S'-PMENA-OLIGO S'-OLIGO-PMENA-OLIGO 5'-OLIGO-(PMENA-OLIGO)a S'-PMENA-OLIGO-PMENA 5'-PMENA-(OLIGO-PMENA)a, при этом а означает число 1-20, условное сокращение OLIGO означает немодифицированные или модифицированные олигонуклеотиды, PMENA означает соединение формулы (I) по пп 1-4, где Q и Q' означают водород Изобретение относится к новым аналогам олигонуклеотидов с ценными физическими, биологическими и фармакологическими свойствами, в частности к производным фосфономоноэфиров нуклеиновых кислот нижеприведенной формулы (I), применяемым в качестве ингибиторов экспрессии генов (таких, как, например, антисмысловые олигонуклеотиды, рибозимы, смысловые олигонуклеотиды и триплекс-образующие олигонуклеотиды), зондов для доказательства наличия нуклеиновых кислот и вспомогательных веществ в области молекулярной биологии Олигонуклеотиды во все возрастающей мере применяются в качестве ингибиторов экспрессии генов (см J F Milhgan, M D Matteucci и J С Martin, J Med Chem 36 (1993) 1923, E Uhlmann и A Peyman, Chemical Reviews 90 (1990) 543, S T Crooke, Annu Rev Pharmacol Toxicol 32 (1992) 329) Антисмысловые олигонуклеотиды представляют собой фрагменты нуклеиновой кислоты, по следовательность основании которых является комплиментарной к ингибируемой мРНК Эта мРНК-мишень может быть клеточного, вирусного или прочего патогенного происхождения В качестве клеточных последовательностей-мишеней можно назвать, например, последовательности рецепторов, ферментов, факторов роста, иммуномодуляторов, ионных канальцев или онкогенов Ингибирование размножения вирусов с помощью антисмысловых олиго-нуклеотидов описано, например, в случае вируса саркомы Руса (Rous Sarcoma Virus), вируса простого герпеса типа I и II (HSV-1, HSV-2), ВИЧ (вируса иммунодефицита человека) и вирусов инфлюенцы При этом применяют олигонуклеотиды, являющиеся комплементарными к вирусной нуклеиновой кислоте В отличие от антисмысловых олигонуклеотидов смысловые олигонуклеотиды, однако, имеют последовательность, обеспечивающую связывание ("улавливание"), например, протеинов, связывающих нуклеиновую кислоту, или же ферментов, 44253 подвергающих процессингу нуклеиновую кислоту, и, таким образом, ингибирование их биологической активности (см С Helene и J J Toulme, Biochim Biophys Acta 1049 (1990) 99) В качестве вирусных мишеней можно назвать, например, обратную транскриптазу, ДНК-полимеразу и белкитрансактиваторы Триплекс-образующие олигонуклеотиды в общем имеют ДНК в качестве мишени и после связывания с ней образуют тройную спираль В то время, как с помощью антисмысловых олигонуклеотидов в общем ингибируют процессинг (сплайсинг и т п ) мРНК или ее трансляцию в белок, триплекс-образующие олигонуклеотиды ингибируют транскрипцию или репликацию ДНК (см N Т Thuong и С Helene, Angew Chem 105 (1993) 697, Uhlmann и Peyman, Chemical Reviews 90 (1990) 543) Однако также возможно в первой гибридизации связывать однонитевые нуклеиновые кислоты с антисмысловым олигонуклеотидом при образовании двойной нити, которая в ходе второй гибридизации вместе с триплексобразующим олигонуклеотидом образует триплексную структуру При этом области связывания антисмысловых олигонуклеотидов и триплексобразующих олигонуклеотидов могут находиться или в двух отдельных олигонуклеотидах, или же в одном олигонуклеотиде Далее, синтетические олигонуклеотиды применяются в качестве так называемых рибозим, разрушающих РНК-мишень из-за их активности рибонуклеазы (см L Castanotto, J J Rossi, J О Deshler, Critical Rev Eukar Gene Expr 2 (1992)331) В области диагностики ДНК фрагменты нуклеиновой кислоты с пригодной маркировкой применяют в качестве так называемых ДНК-зондов для специфической гибридизации с детектируемой нуклеиновой кислотой При этом за специфическим образованием новой двойной нити следуют с помощью маркировки, предпочтительно нерадиоактивной Таким образом, можно доказывать наличие генетических, злокачественных, вирусных или вызванных другими патогенами болезней Для большинства названных областей применения олигонуклеотиды в их естественной форме мало или совсем не пригодны Их необходимо химически модифицировать так, чтобы они отвечали специальным требованиям Для применения олигонуклеотидов в биологических системах, например для ингибирования размножения вирусов, они должны удовлетворять следующим предпосылкам 1 Они должны обладать достаточно высокой стабильностью в условиях in vivo, т е и в сыворотке, и внутри клетки 2 Они должны иметь структуру, позволяющее прохождение через мембрану клетки и мембрану ядра 3 Они должны в физиологических условиях специфическим для оснований образом связывать с их нуклеиновой кислотой-мишенью для обеспечения ингибирующего эффекта Для ДНК-зондов указанные условия не являются непременными Эти олигонуклеотиды, одна 8 ко, должны быть произведены так, чтобы было возможно доказывание наличия, например, путем флуоресценции, хемилюминесценции, колориметрии или специфического окрашивания (см Beck и Koster, Anal Chem 62(1990)2258) Известен целый ряд химических вариантов олигонеклеотидов, синтезированных с тем, чтобы лучше немодифицированных олигонуклеотидов удовлетворять вышеприведенным требованиям Химическое изменение олигонуклеотидов осуществляется, как правило, таким образом, что фосфатный остаток, остаток рибозы или нуклеооснование изменяют соответствующим образом (см Uhlmann и Peyman, Chemical Review 90 (1990) 543) Из числа модификаций есть метод, согласно которому фосфатный мостик, а также сахарный остаток заменены другими группами, например, "морфолинонуклеозид"-олигомерами (см Е Р Stirchak и др , Nucleic Acids Res 17 (1989) 6129) или "ПНК" (см Р Е Nielsen и др , Bioconj Chem 5 (1994) 3) В частности ПНК отличаются чрезвычайно высоким сродством к РНК-мишени, страдают, однако, от других неблагоприятных свойств, таких, как, например, недостаточная растворимость или недостаточное проникновение клетки (см W Wang и др , Tetrahedron Letters 36 (1995) 1181, М Egholm и др, в "Innovation and Perspectives in Solid Phase Synthesis, Peptides, Proteins, Nucleic Acids", Roger Epton, Ed Mayflower Worldwide Limited, Birmingham, 1994, 145-148) Поэтому задачей изобретения является предоставление новых аналогов олиго-нуклеотидов с благоприятными свойствами Объектом изобретения являются производные фосфономоноэфиров нуклеиновых кислот формулы (I) где п - число 0-100, радикалы В независимо друг от друга означают водород, гидроксил, алкил с 1 20 атомами углерода, алкоксил с 1 - 20 атомами углерода, алкилтио с 1 -20 атомами углерода, арил с 6 - 20 атомами углерода, арилалкил с 6 -20 атомами углерода в арильной части и 1 - 6 атомами углерода в алкильной части, арилалкоксил с 6 20 атомами углерода в арильной части и 1 -6 атомами углерода в алкоксильной части, арилалкилтио с 6 - 20 атомами углерода в арильной части и 1 - 6 атомами углерода в алкилтио-части, ароматическую группу или гетероциклическую группу, при этом алкил, арил и/или ароматическая или гетероциклическая группы незамещены или замещены по меньшей мере одним остатком из группы, включающей гидроксил, алкоксил с 1 - 4 атомами углерода, -NR9R10, -C(O)OH, оксо, C(0)OR8, -C(0)NR9R10, -CN, -F, -СІ, -Br, -NO?) алкоксиалкил с 2 -6 атомами углерода, -S(O)mR , алкилS(O)mR8 с 1 - 6 атомами углерода в алкильной части, -NHC(=NH)NHR8, -C(=NH)NHR8, NR9C(=O)R8, =NOR8, NR9C(=0)OR10, OC(=0)NR9R10 и NR9C(=O)NR9R10, или радикалы В 44253 независимо друг от друга означают неестественное или естественное нуклеооснование или репортерный лиганд, А - В может также означать конденсированную через карбоксильную группу D-или Lаминокислоту или пептиды, состоящие из этих аминокислот, с длиной до 5 аминокислотных остатков, радикалы L независимо друг от друга означают N или R1N+, и R1 - водород или алкил с 1 6 атомами углерода, незамещенный или замещенный гидроксилом, алкоксилом с 1 - 6 атомами углерода, алкилтио-группой с 1 - 6 атомами углерода или амино-группой, предпочтительно водород или метил, радикалы А независимо друг от друга означают простую связь, метилен или группу формулы (На) или (Мб) .1 (На) (116), Y'-=0, =S, =CH2, =С(СН3)2 или =NR1, при этом 1 R имеет вышеуказанное значение, М - простая связь, -О-, -S- или -NR1-, при этом R1 имеет вышеуказанное значение, R2 и R3 независимо друг от друга означают водород, гидроксил, алкоксил с 1 6 атомами углерода, алкилтио с 1 - 6 атомами углерода, амино, галоген или алкил с 1 - 6 атомами углерода, незамещенный или замещенный гидроксилом, алкоксилом с 1 - 6 атомами углерода или алкилтио-группой с 1 - 6 атомами углерода, р и q независимо друг от друга означают 0 - 5 , г и s независимо друг от друга означают 0-5, D и G независимо друг от друга означают CR5R6, R5 и R6 независимо друг от друга означают водород, алкил с 1 - 6 атомами углерода, арил с 6 - 20 атомами углерода, арилалкил с 6 - 20 атомами углерода в арильной части и 1 - 6 атомами углерода в алкильной части, гидроксил, алкоксил с 1 - 6 атомами углерода, алкилтио с 1 - 6 атомами углерода, алкил и арил незамещены или замещены группой SR1 или NR A \ при этом R1 имеет вышеуказанное значение и R1 имеет то же самое значение, что и R1, X - О-, -S- или -NR1-, где R1 имеет вышеуказанное значение, Y - =0 или =S, Z - OR8, -NR R10 или X'Q", при этом X имеет то же самое значение, что и X, a Q" имеет то же самое значение, что и Q, R8 - водород, алкил с 1 - 18 атомами углерода, алкенил с 2 - 18 атомами углерода, алкинил с 3 18 атомами углерода, арил с 6 - 12 атомами углерода, арилалкил с 6 - 12 атомами углерода в арильной части и 1 - 6 атомами углерода в алкильной части, при этом алкил незамещен или замещен по меньшей мере одним остатком из группы, включающей гидроксил, алкоксил с 1 - 4 атомами углерода, фтор, хлор и бром, и арил незамещен или замещен 1 - 3 остатками из группы, включающей гидроксил, алкоксил с 1 -4 атомами углерода, алкил с 1 - 4 атомами углерода, фтор, хлор, бром, NO2, -NR9R10, -C(O)OH, -С(О)О-алкил с 1 - 8 атомами углерода в алкильной части, C(O)NR9R10, при этом арил незамещен или монозамещен остатком из группы, включающей алкоксил с 1 - 4 атомами углерода, алкил с 1 -4 атома 10 ми углерода, фтор, хлор, бром и NO2, R и R независимо друг от друга означают водород, алкил с 1 - 18 атомами углерода, алкенил с 1 - 18 атомами углерода, алкинил с 1 - 18 атомами углерода, арил с 6 -12 атомами углерода, арилалкил с 6 - 1 2 атомами углерода в арильной части и 1 - 6 атомами углерода в алкильной части, при этом алкил незамещен или замещен по меньшей мере одним остатком из группы, включающей гидроксил, алкоксил с 1 - 4 атомами углерода, фтор, хлор и бром, и R9 и R10 вместе с несущим их атомом азота образуют 4- до 7-членное кольцо, Q и Q' независимо друг от друга означают водород или R8, означают конъюгаты, оказывающие положительное влияние на свойства антисмысловых олиго-нуклеотидов или олигонуклеотидов, образующих тройную спираль, служащие в качестве маркировки ДНК-зонда, или же при гибридизации аналога олигонуклеотида с нуклеиновой кислотоймишенью разрушающие последнюю при связывании или поперечном сшивании, или означают немодифицированные или модифицированные олигонуклеотиды, или Q и Q' связаны, т е образуют циклическую молекулу, при этом, однако, также существует возможность, что Q и Q' вместе образуют простую связь В качестве примеров модификаций можно назвать следующие варианты а) полная или частичная замена 3'- и/или 5'мостиков сложных диэфиров фосфорной кислоты, например мостиками фосфортиоата, фосфордитиоата, ^^ 4 '-фосфорамидата, боранфосфата, сложных О-алкилэфиров фосфорной кислоты с 1 21 атомами углерода в алкильной части, сложных арил-О-алкилэфиров фосфорной кислоты с 6 - 12 атомами углерода в арильной части и 1 - 21 атомами углерода в алкильной части, 2,2,2трихлордиметилэтилфосфоната, алкилфосфоната с 1 - 8 атомами углерода в алкильной части или арилфосфоната с 6 - 12 атомами углерода в арильной части, при этом R4 и R4' независимо друг от друга означают водород, алкил с 1 -18 атомами углерода, арил с 6 - 20 атомами углерода, арилалкил с 6 -14 атомами углерода в арильной части и 1 - 8 атомами углерода в алкильной части или (CH2)c-[NH(CH2)c]d-NR7R , где с означает число 2 6 и d означает число 0 - 6, и радикалы R7 независимо друг от друга означают водород, алкил с 1 - 6 атомами углерода или алкоксиалкил с 1 - 4 атомами углерода в алкоксильной части и 1 - 6 атомами углерода в алкильной части, причем R4 и R4' предпочтительно означают водород, алкил с 1 -8 атомами углерода или метоксиэтил, особенно предпочтительно водород, алкил с 1 - 4 атомами углерода или метоксиэтил, или же R4 и R4 вместе с несущим их атомом азота образуют 5- до 6членное гетероциклическое кольцо, которое может содержать дополнительный гетероатом из числа О, S, N, б) полная или частичная замена 3'- и/или 5'мостиков сложных диэфиров фосфорной кислоты, например "дефосфо"-мостиками, такими, как, например, формацеталь, З'-тиоформацеталь, метилгид роксиламин, оксим, метилендиметилгидразо, диметиленсульфон или силильные группы, в) полная или частичная замена остатка фос 11 44253 12 3'- и 5'-5'-инверсии фатного сахара, например "морфолинонуклеоАроматическими группами могут являться, назид"-олигомерами или "ПНК" или ПНК-ДНКпример, фенил, нафтил, пиренил, антраценил, гибридами, фенантрил, бифенил, бинафтил, тетраценил, пенг) полная или частичная замена остатков p-Dтаценил, гексаценил, трифениленил, хризенил 2'-десоксирибозы, например, a-D-2'или бензопиренил десоксирибозой, І_-2'-десоксирибозой, 2'-F-2'десоксирибозой, 2'-О-алкил-рибозой с 1 - 6 атоПод термином "гетероциклические группы" мами углерода в алкильной части, 2'-О-алкенилподразумевают, например, хроманил,хроменирибозой с 2 - 6 атомами углерода в алкенильной лий-1-ил, фуранил, изохроманил, изохроменил, части, 2'-г\ІН2-2'-десокси-рибозой, p-Dизохинолил, пипе-разинил, хинолинил, пиридинил, ксилофуранозой, а-арабинофуранозой, 2,4пиррол ид инил, имидазил, тетрагидрофуранил, дидеокси-р-О-эритрогексо-пиранозой, карбоциказиранил, оксиранил, тиофенил, пиримидинил, лическими аналогами сахара и аналогами сахара тиеланил, тиазолил, азепинил, пирролил, тетрас открытой цепью или бицикло-аналогами сахара, гидропирролил, бензофуранил, индол ил, изоиндолил, изатинил, диоксиндолил, индоксилил, куд) полная или частичная замена естественных маринил, кумаронил, карбазолил, пиразолил, нуклеозидных оснований, например остатком из пирролил, индазолил, оксазолил, изоксазолил, группы, включающей 5-(гидроксиметил)урацил, 5тиазолил, 1,2,4-триазолил, 1,2,3-триазолил, тетрааминоурацил, псевдоурацил, дигидроурацил, 5золил, пентазолил, пиперидинил, пирадизинил, алкил-урацил с 1 - 6 атомами углерода в алкильфеназинил, феноксазинил, фенотиазинил, морной части, 5-алкенил-урацил с 2 - 6 атомами углефол инил, тиазинил, бензодиазепинил, пуринил, рода в алкенильной части, 5-алкинил-урацил с 2 ксантинил, гипоксантинил, теофиллинил, теобро6 атомами углерода в алки-нильной части, 5минил, коффеинил, птери-динил, птеринил, алалкил-цитозин с 1 - 6 атомами углерода в алкильлоксазинил и нортропинил ной части, 5-алкенил-цитозин с 2 - 6 атомами углерода в алкенильной части, 5-алкин ил-цитозин с Под термином "естественные нуклеооснова2 - 6 атомами углерода в алкинильной части, 5ния" подразумевают, например, урацил, цитозин, фтор-урацил, 5-фторцитозин, 5-хлорурацил, 55-метилурацил, аденин и гуанин, а под термином хлорцитозин, 5-бромурацил, 5-бромцитозин и 7"неестественные нуклеооснования" подразумевадеаза-7-замещенные пурины ют, например, 5-нитроиндол, 5-(гидроксиметил) урацил, 5-аминоурацил, псевдоурацил, дигидроQ и Q' могут также означать конъюгаты, урацил, 5-алкил-урацил с 1 -6 атомами углерода в имеющие положительное влияние на свойства алкильной части, 5-алкенил-урацил с 2 - 6 атомаантисмысловых олигонуклеотидов или образуюми углерода в алкенильной части, 5-алкинилщих тройную спираль олигонуклеотидов (наприурацил с 3 - 6 атомами углерода в алкинильной мер, проникновение клетки, расщепление нуклеачасти, 5-алкил-цитозин с 1 - 6 атомами углерода в зы, сродство к РНК-ДНК-мишени, алкильной части, 5-алкенил-цитозин с 2 - 6 атофармакокинетика), служащие в качестве маркимами углерода в алкенильной части, 5-алкинилровки ДНК-зонда, или при гибридизации аналога цитозин с 3 - 6 атомами углерода в алкинильной олигонуклеотида с нуклеиновой кислотойчасти, 5-фторурацил, 5-фторцитозин, 5мишенью разрушающие последнюю при связывахлорурацил, 5-хлорцитозин, 5-бромурацил, 5нии или поперечной сшивке Примерами являются бромцитозин и 7-деаза-7-замещенные пурины, как конъюгаты с поли-лизином, интеркалаторами, та7-деаза-7-алкинилгуанин с 3 - 7 атомами углерода кими, как, например, пирен, акридин, феназин, в алкинильной части, 7-деаза-7-алкиниладенин с 3 фенантридин, флуоресцирующими соединениями - 7 атомами углерода в алкинильной части, 7как флуоресцеин, кросс-линкерами, такими, как деаза-7-алкен ил гуанин с 2 - 7 атомами углерода в псорален, азидопрофлавин, липофильными молеалкенильной части, 7-деаза-7-алкениладенин с 2 кулами, такими, как алкил с 12 - 20 атомами угле7 атомами углерода в алкенильной части, 7-деазарода, липидами, такими, как 12-ди-гексадецил7-алкилгуанин с 1 - 7 атомами углерода в алкильглицерин в виде рацемата, стероидами, такими, ной части, 7-деаза-7-алкиладенин с 1 - 7 атомами как холестерин или тестостерон, витаминами, тауглерода в алкильной части, 7-деаза-7кими, как витамин Е, поли- или олигоэтиленгликобромгуанин и 7-деаза-7-бромаденин лем, сложными диалкиловыми эфирами фосфорной кислоты с 12 - 18 атомами углерода в каждой Неестественными нуклеооснованиями предалкильной части, -О-СН2-СН(ОН)-О-алкилом с 12 почтительно являются 5-алкил-урацил с 1 - 6 ато18 атомами углерода в алкильной части Предпочмами углерода в алкильной части, 5-алкенилтительными являются конъюгаты с липофильныурацил с 2 -6 атомами углерода в алкенильной ми молекулами, такими, как алкил с 12 - 20 аточасти, 5-алкинил-урацил с 3 - 6 атомами углерода мами углерода, стероидами, такими, как в алкинильной части, 5-алкил-цитозин с 1 - 6 атохолестерин или тестостерон, поли- или олигоэтимами углерода в алкильной части, 5-алкенилленгликолем, витамином Е, интеркалаторами, цитозин с 2 - 6 атомами углерода в алкенильной такими, как пирен, сложными диалкиловыми эфичасти, 5-алкинил-цитозин с 3 - 6 атомами углерода рами фосфорной кислоты с 14 - 18 атомами углев алкинильной части, 5-фторурацил, 5рода в каждой алкильной части, -О-СН2-СН(ОН) фторцитозин, 5-хлорурацил, 5-хлорцитозин, 5О-алкилом с 12 - 16 атомами углерода в алкильбромурацил, 5-бромцитозин, или 7-деаза-7ной части Получение таких олиго-нуклеотидзамещенные пурины, как, например, 7-деаза-7-алконъюгатов известно специалисту Кроме того, кинилгуанин с 3 - 7 атомами углерода в алкинильолигонуклеотиды могут нести у 3- или 5'-конца 3'ной части, 7-деаза-7-алки-ниладенин с 3 - 7 ато 44253 14 13 мами углерода в алкинильной части, 7-деаза-7карбоновая кислота, тетрагидротиазол-4алкенил-гуанин с 2 - 7 атомами углерода в алкекарбоновая кислота, изоксазолидин-3-карбоновая нильной части, 7-деаза-7-алкениладенин с 2 - 7 кислота, пиразолидин-3-карбоновая кислота, гидатомами углерода в алкенильной части, 7-деазароксипирролидин-2-карбоновая кислота, имеющие 7-алкилгуанин с 1 -7 атомами углерода в алкильследующие формулы ной части, 7-деаза-7-алкиладенин с 1 - 7 атомами углерода в алкильной части, 7-деаза-7бромгуанин и 7-деаза-7-бромаденин, особенно предпочтительно 5-алкил-урацил с 3 - 6 атомами углерода в алкильной части, 5-алкенил-урацил с 2 - 6 атомами углерода в алкенильной части, 5алкинил-урацил с 3 - 6 атомами углерода в алкиN СОN' COнильной части, 5-ал кил-цитозин с 1 - 6 атомами углерода в алкильной части, 5-алкенил-цитозин с 2 - 6 атомами углерода в алкенильной части, 5алкинил-цитозин с 3 - 6 атомами углерода в алкинильной части или 7-деаза-7-замещенные пурины, а в частности предпочитают 5-пентинилцитозин, 5гексинилурацил, 5-гексинил цитозин, 7-деаза-7про-пинил гуанин, 7-деаза-7-пропиниладенин, 7деаза-7-метилгуанин, 7-деаза-7-ме-тиладенин, 7деаза-7-пропиниладенин, 7-деаза-7-бромгуанин, 7-деаза-7-броІ\І-аденин СОсоРепортерными лигандами являются, например, флуоресцеин, биотин, акридин, фенантролин, фенантридин и эозин Если другого не указано, то из числа D- или Lаминокислот можно назвать, в частности, следующие (без указания стереодескриптора кислота имеется в L-форме) Aad, Abu, yAbu, ABz, 2ABz, єАса, Achr Acp, Adpd, Ahb, Aib, pAib, Ala, pAla, ДАІа, Alg, All, Ama, Amt, Ape, Apm, Apr, Arg, Asn, Asp, Asu, Aze, Azi, СОBai, Bph, Can, Cit, Cys, Cyta, Daad, Dab, Dadd, Dap, СОСОDapm, Dasu, Djen, Dpa, Dtc, Fel, Gin, Glu, Gly, Guv, hAla, hArg, hCys, hGIn, hGlu, His, hlle, hLeu, hLys, hMet, hPhe, hPro, hSer, hThr, hTrp, hTyr, Hyl, Hyp, ЗНур, lie, Ise, Iva, Kyn, Lant, Lcn, Leu, Lsg, Lys, СОо СОсоpLys, ULys, Met, Mim, Mm, hArg, Nle, Nva, Oly, Orn, Pan, Pec, Pen, Phe, Phg, Pic, Pro, ДРго, Pse, Pya, Pyr, Pza, Qm, Ros, Sar, Sec, Sem, Ser, Thi, pThi, Thr, Thy, Thx, Tia, Tie, Tly, Trp, Trta, Tyr, Val и т п , или же циклические аминокислоты, как, например, НО пиррол ид ин-2-карбоновая кислота, пиперидин-2СО-карбоновая кислота, 1,2,3,4со со-™ тетрагидроизохинолин-3-карбоновая кислота, декагидрохинолин-3-карбоновая кислота, октагидроиндол-2-карбоновая кислота, декагидрохинолин-2карбоно-вая кислота, октагидроциклопента[б]пиррол-2-карбоновая кислота, 2-азабицикло [2 2 2] октан-3-карбоновая кислота, 2азабицикло[2 2 1]гептан-3-карбоновая кислота, 2азабицикло[3 1 0]гексан-3-карбоновая кислота, 2азаспиро[4 4]нонан-3-карбоновая кислота, 2азаспиро[4 5]декан-3-карбоновая кислота,спиро[(бицикло[2 2 1]гептан)-2,3-пирролидин-5карбоновая кислота], спиро[(бицикло[2 2 2] октан)2,3-пирролидин-5-карбоновая кислота], 2азатрицикло4 3 0 1 6 9 ] декан-3-карбоновая кислота, декагидроциклогепта[б]пиррол-2-карбоновая кислота, декагидроциклоокта[б]пиррол-2карбоновая кислота, октагидроциклогепта[в]пиррол-2-карбоновая кислота, октагидроизоиндол-1 -карбоновая кислота, 2, 3, За, 4, 6а-гексагидроциклопента [б] пиррол-2-карбоновая кислота, 2, 3, За, 4, 5, 7а-гексагидроиндол-2 N при этом указанные кислоты могут быть замещены Алкил и производимые от него остатки, такие, как, например, алкоксил и алкилтио, могут быть разветвленными, неразветвленными или циклическими, насыщенными или по меньшей мере 1кратно ненасыщенными Предпочтительными являются соединения формулы (I), где п - число 0 - 50, радикалы В независимо друг от друга означают неестественное или естественное нуклеооснование, L-N, А - группа формулы (Пб), где г = 1 и s = 0, и R2, R3 = Н и Y' = О и М - простая связь, D и G независимо друг от друга означают CHR5, R5- водород, X -О-, Y- =0, 44253 16 15 Z - гидроксил, метоксил, этоксил, (4г) остатки [3-О-2'-десоксирибозы полностью нитрофенол) этокси, пропокси, изопропокси, буили частично заменены 2'-Р-2'-десоксирибозой, 2'токси, пентокси, фенокси или аллилокси, О-алкил-рибозой с 1 - 4 атомами углерода в алкильной части, 2'-О-алкенил-рибозой с 2 - 4 атоQ и Q' независимо друг от друга означают во8 мами углерода в алкенильной части, 2'-NH2-2'дород, R или немодифицированные или модифидесоксирибозой, цированные олигонуклеотиды, при этом а) 3'- и/или 5'-мостики сложных диэфиров д) естественные нуклеозидные основания фосфорной кислоты полностью или частично заполностью или частично заменены остатком из менены мостиками фосфортиоата, фосфордитиогруппы, включающей 5-алкил-урацил с 3 - 6 ато4 ата, І\^^ '-фосфорамидата, N3'—>Р5'мами углерода в алкильной части, 5-алкенилфосфорамидата, фосфат-О-метилового эфира, урацил с 2 - 6 атомами углерода в алкенильной фосфат-О-этилового эфира, фосфат-Очасти, 5-алкинил-урацил с 2 - 6 атомами углерода изопропилового эфира, метилфосфоната или фев алкинильной части, 5-алкил-цитозин с 1 - 6 атонилфосфоната, мами углерода в алкильной части, 5-алкенилцитозин с 2 - 6 атомами углерода в алкенильной б) 1,2 или 3 3'- или 5'-мостика сложных дичасти, 5-алкинил-цитозин с 2 - 6 атомами углерода эфиров фосфорной кислоты в положениях пирив алкинильной части, 7-деаза-7-алкинил-гуанин с мидина и у 5'-конца и/или у З'-конца заменены 2 - 7 атомами углерода в алкинильной части, 7формацеталами и/или З'-тиоформацеталами, деаза-7-алкинил-аденин с 2 - 7 атомами углерода в) остаток фосфорного сахара полностью или в алкинильной части, 7-деаза-7-алкенил-гуанин с 2 частично заменен ПНК или ПНК-ДНК-гибридами, - 7 атомами углерода в алкенильной части, 7г) остатки [3-О-2'-десоксирибозы полностью деаза-7-алкенил-аденин с 2 - 7 атомами углерода или частично заменены 2'-Р-2'-десоксирибозой, 2'в алкенильной части, 7-деаза-7-ал кил гуанин с 1 О-алкил-рибозой с 1 - 6 атомами углерода в ал7 атомами углерода в алкильной части, 7-деаза-7кильной части, 2'-0-алкенил-рибозой с 2-6 атомаалкиладенин с 1 - 7 атомами углерода в алкильми углерода в алкенильной части, 2'-NH2-2'ной части, 7-деаза-7-бромгуанин и 7-деаза-7десоксирибозой, бромаденин д) естественные нуклеозидные основания полностью или частично заменены остатком из В частности предпочитаются соединения группы, включающей 5-алкил-урацил с 1 - 6 атоформулы (I), где мами углерода в алкильной части, 5-алкенилп - число 0 - 25, урацил с 2 - 6 атомами углерода в алкенильной радикалы В независимо друг от друга означачасти, 5-алкинил-урацил с 2 - 6 атомами углерода ют естественное нуклеооснование, в алкинильной части, 5-алкил-цитозин с 1 - 6 атоZ - гидроксил, этоксил, (4-нитрофенол) этокмами углерода в алкильной части, 5-алкенилсил или феноксил, цитозин с 2 - 6 атомами углерода в алкенильной Q и Q' независимо друг от друга означают вочасти, 5-алкинил-цитозин с 2 - 6 атомами углерода дород, R8, где R8 означает водород, алкил с 1 - 6 в алкинильной части, 5-фторурацил, 5атомами углерода, фенил или 2-(4фторцитозин, 5-хлорурацил, 5-хлорцитозин, 5нитрофенилэтил), или немодифицированные или бромурацил, 5-бром цитозин, 7-деаза-7модифицированные олигонуклеотиды, при этом алкинилгуанин с 2 - 7 атомами углерода в алкиа) 3'- и/или 5'-мостики сложных диэфиров нильной части, 7-деаза-7-алкиниладенин с 2 - 7 фосфорной кислоты полностью или частично заатомами углерода в алкинильной части, 7-деазаменены мостиками фосфортиоата, 7-алкен ил гуанин с 2 - 7 атомами углерода в алкев) остаток фосфорного сахара полностью или нильной части, 7-деаза-7-алкениладенин с 2 - 7 частично заменен ПНК или ПНК-ДНК-гибридами, атомами углерода в алкенильной части, 7-деазаг) остатки [3-О-2'-десоксирибозы полностью 7-алкилгуанин с 1 - 7 атомами углерода в алкильили частично заменены 2'-О-метилрибозой, 2'-Оной части, 7-деаза-7-алкиладенин с 1 - 7 атомами аллилрибозой, 2'-О-бутилрибозой, углерода в алкильной части, 7-деаза-7д) естественные нуклеозидные основания бромгуанин и 7-деаза-7-бромаденин полностью или частично заменены остатком из группы, включающей 5-гексинил-цитозин, 5Особенно предпочтительными являются согексинил-урацил, единения формулы (I), где п - число 0 - 30, 5-гексинил-цитозин, 7-деаза-7Q и Q' независимо друг от друга означают вопропинил гуанин, 7-деаза-7-пропиниладенин, 7дород, R8, где R8 означает водород, алкил с 1 - 6 деаза-7-метилгуанин, 7-деаза-7-метиладенин, 7атомами углерода, фенил или 2-(4деаза-7-бромгуанин и 7-деаза-7-бромаденин нитрофенилэтил), или немодифицированные или Дальнейшим объектом изобретения являются модифицированные олигонуклеотиды, при этом олигонуклеотиды или же модифицированные олигонуклеотиды, например ПНК, в которые встроены а) 3'- и/или 5'-мостики сложных диэфиров соединения формулы (І) у З'-конца или у 5'-конца фосфорной кислоты полностью или частично заили же у 5'-конца и у З'-конца менены мостиками фосфортиоата, фосфордитиоата или метилфосфоната, Связывание олигонуклеотидов с соединениями формулы (I) предпочтительно осуществляется б) 1,2 или 3 З1- или 5'-мостика сложных дичерез 5 - или З'-гидроксильную нуклеотидную эфиров фосфорной кислоты у 5'-конца и/или у З'группу, а также через связь со сложным моноэфиконца заменены, ром фосфоновой кислоты Формулы (XVIII) и (XIX) в) остаток фосфорного сахара полностью или служат в качестве примеров связывания с олигочастично заменен ПНК или ПНК-ДНК-гибридами, 44253 17 нуклеотидами 18 Соединения формулы (I) можно получать, например, путем a-i) взаимодействия соединений формулы (III) V —D. (XVIIi) (XIX! R здесь означает водород, ОН, фтор, 2'-Оалкил с 1 - 6 атомами углерода, 2'-0-алкенил с 2 6 атомами углерода, предпочтительно водород или метоксил или О-аллил, особенно предпочтительно водород Все остальные переменные имеют вышеуказанное значение Формулы (XX) и (XXI), в которых переменные имеют вышеуказанное значение, служат в качестве примеров связывания с ПНК ("О где D, G, L и X имеют вышеуказанные значения и S 1 означает пригодную защитную группу, такую, как, например, диметокситритил, монометокситритил, тритил, пиксил, трет-бутоксикарбонил или флуоренилметилоксикарбонил, предпочтительно монометокситритил или трет бутоксикарбонил, с соединениями формулы (IV) (IV), R (XX) -х-в (XXI) Нижеследующая схема поясняет комбинации предлагаемых соединений формулы (І), у которых Q и Q означают водород (далее используется условное сокращение PMENA), с олигонуклеотидами или модифицированными олигонуклеотидами, такими, как, например, ПНК или другие вышеописанные модификации При этом условное сокращение OLIGO означает немодифицированные или модифицированные олигонуклеотиды 5'-OLIGO-PMENA, 5'-PMENA- OLIGO, 5'-OLIGO- PMENA -OLIGO Кроме того, можно назвать 5'-OLIGO - (PMENA-OLIGO)a (a = 1 - 20) 5'-PMENA - OLIGO - PMENA 5'-PMENA - (OLIGO - PMENA)a (a = 1 - 20) Синтез этих комбинированных соединений осуществляют за счет того, что в зависимости от молекулы начинают с описанного в нижеследующем синтеза звеньев PMENA, которые потом сочетают с олигонуклеотидами При этом связывание олигонуклеотидов осуществляют известным специалисту приемом, например, путем твердофазного синтеза, синтеза в жидкой фазе в качестве мономеров или блок-конденсации Конденсацию по выбору осуществляют либо в присутствии амидита, Н-фосфоната или же сложного триэфира фосфора Если, наоборот, звенья PMENA связывают со звеньями OLIGO, то это предпочтительно осуществляют согласно описанному в пункте е-і) методу Конъюгация со звеньями ПНК происходит тем же самым образом или, если (мономерные или олигомерные) звенья ПНК связывают со звеньями PMENA, известными специалисту методами синтеза пептидов или синтеза сложных эфиров R и R имеют вышеуказанное значение, в среде пригодного органического растворителя, такого, как, например, метанол, этанол, изопропанол, бутанол, ацетонитрил, дихлорметан, хлороформ, бензол, диметилформамид, диметилсульфоксид, простой диэтиловый эфир, этилацетат, тетрагидрофуран, N-метил пиррол идон, петролейный эфир, ксилол или толуол, или смеси пригодных растворителей, предпочтительно в среде метанола или этанола, при температурах от 0 до 100°С, предпочтительно от 10 до 50°С, с получением соединений формулы (Va) или (V6) Я" R J (V6). (Va) причем при выборе условий реакции, известных специалисту, необходимо следить за тем, чтобы они были совместимыми с защитной группой S1, т е если, например, выбирают некислотостойкую защитную группу как монометокситритильную защитную группу, то рекомендуется при осуществлении реакции отказаться от добавления кислоты, 6-і) взаимодействия соединений формулы (Va) или (V6) с соединениями формулы (Via) или (VI6), предпочтительно с соединениями формулы (Via) (Via) (VI6), где Y имеет вышеуказанное значение, X и X" независимо друг от друга имеют вышеуказанное для X значение, S 2 и S независимо друг от друга означают защитные группы, такие, как, например, метил, этил, фенил, 2-хлорфенил, 2,5-дихлорфенил, 2,4дихлорфенил, 4-нитрофенил, 4-метоксифенил, 2цианоэтил, 2-(4-нитрофенил)этил, аллил, бензил, 19 44253 20 2,2,2-трихлор-1,1-диметилэтил, 4-метоксибензил, бонил, бензилоксикарбонил и феноксиацетил для 2,2,2-тр и хлор-этил, 8-гидроксихинолин или другие аминогруппы, или же другими защитными группаизвестные защитные группы фосфата, предпочтими, стандартными в области химии олигонуклеотельно, однако, метил, этил, фенил, 2-(4тидов для нуклеоосновании, при этом для B P R нитрофенил)этил, аллил, 2,2,2-трихлорэтил, и можно предпочтительно назвать группы, имеющие следующие формулы L1 - удаляемая группа, предпочтительно алкил с 1 - 4 атомами углерода, в среде пригодного органического растворителя, такого, как, например, метанол, этанол, изопропанол, бутанол, ацетонитрил, бензол, диметилформамид, диметилсульфоксид, дихлорметан, этилацетат, хлоро•ни форм, простой диэтиловый эфир, тетрагидрофуран, N-метилпирролидон, петролейный эфир, ксилол или толуол или смеси пригодных растворителей, предпочтительно в среде тетрагидрофурана, при температурах от 0до 100°С, предпочтительно от 50 до 80°С, в случае необходимости при добавлении оснований, таких, как, например, три-алкиламин с 1 - 6 атомами углероR - водород, 1-пропинил, 1-бутинил, 1да в алкильной части, N-алкилморфолин, пирипентинил или 1-гексинил, в частности водород, 1дин, N.N-диметиламинопиридин, бутиллитий, диипропинил или 1-гексинил, зопропиламид лития, гидрид натрия, амид натрия, R13 - водород, дифенилкарбамоил или 2-(4карбонат калия, карбонат цезия, трет -бутилат нитрофенил)этил, калия, или комплексных оснований, таких, как 1 R ацетил, бензоил, парасмесь амида натрия и остатка формулы R11ONa, 1 (трет бутил)бензоил, пара-(метокси)бензоил, папри этом R означает алкил с 2 - 6 атомами углера-нитрофенилэтилоксикарбонил, изобутирил, рода или группу СН3СН2-О-СН2СН3, или незаряпара-(трет бутил)фен ил ацетил, бензилоксикарбоженных пералкилированных полиаминонил или феноксиацетил, фосфазеновых оснований, предпочтительно, однако, без добавления основания, с получением L2 - известная специалисту удаляемая группа, соединений формулы (VII) например хлор, бром, О-БОгметил, ОЗОгТрифторметил, О-тозилат, группа O-CeFs, или же ОН, если А имеет вышеуказанное значение формулы (N6), в среде пригодного органического растворителя, такого, как, например, ацето-нитрил, бензол, N.N-диметилформамид, диметилсульфоксид, ди{VI!) хлорметан, этилацетат, хлороформ, простой диэтиловый эфир, тетраметил мочевина, тетрагде гидрофуран, N-метилпирролидон, петролейный 5 6 1 2 3 D, G, L, R , R , S , S , S , X, X, X" и Y имеют эфир, ксилол или толуол, или смеси пригодных вышеуказанное значение, растворителей, предпочтительно в среде N,Nдиметилфор-Ы-амида, при температурах от -20 до ві) взаимодействия соединений формулы (VII) +100°С, предпочтительно от 0 до 50°С, в случае с соединениями формулы (VIII) необходимости при добавлении оснований, таких, как, например, триалкиламин с 1 - 6 атомами угPR лерода в алкильной части, N-алкилморфолин, пиридин, N.N-диметиламинопиридин, бутиллитий, А диизопропиламид лития, гидрид натрия, амид на(VIII), трия, карбонат калия, карбонат цезия, трет L2 бутилат калия, или комплексных оснований, таких, где как смесь амида натрия и остатка формулы А имеет вышеуказанное значение, R11ONa, при этом R11 означает алкил с 2 - 6 атоPR B имеет вышеуказанное для В значение, в мами углерода или группу СНзСЬЬ-О-СЬЬСНз, или случае необходимости, однако, имеется в защинезаряженных пералкилированных полиаминощенной форме, т е если В означает естественное фосфазеновых оснований, если А означает форили неестественное нуклеооснование, то B P R озмулу (N6) и L2 означает ОН, предпочтительно с начает нуклеооснования, амино группы или же добавлением триэтиламина, диизопропилэтилагидроксильные группы которых защищены пригодмина или N-этилмор-фолина или без добавления ными из вестными защитными группами, такими, основания и с добавкой стандартного для образокак, например, пара-нитрофенил-этил, бензоил, вания пептидных связей агента сочетания, с полуаллил и пара-(трет бутил)бензоил для гидрочением соединений формулы (IX) ксильной группы, а ацетил, бензоил, пара(трет бутил)бензоил, пара-(метокси)-бензоил, пара-нитрофенилэтилоксикарбонил, изобутирил, пара-(трет бутил)фен ил ацетил, N Nдиметилформамидино, флуоренилметилоксикар в 44253 22 хлороформ, простой диэтиловый эфир, тетраметил-мочевина, тетрагидрофуран, Nметилпирролидон, петролейный эфир, ксилол или толуол, или смеси пригодных растворителей, SIX), предпочтительно в среде пиридина, при темпера-X" турах от -20 до +100°С, предпочтительно от 0 до 50°С, с добавкой стандартного агента сочетания, где A, B PR , D, G, L, R5, R6, S1, S2, S3, X, X, X" и такого, как, например, гексафторфосфат 6Y имеют вышеуказанное значение, нитробензотриазол-1-ил-окситрис (диметиламино) Гі) снятия по известным приемам защитной - фосфония, гекса-фторфосфат бензотриазол-1 3 группы S из соединений формулы (IX), например ил-окситрис (диметиламино) - фосфония, гексаиз соединений формулы (IX), в которых S 2 и S фторфосфат бензотриазол-1 -ил-оксиозначают 2-(4-нитрофенил) этил, путем обработки трипирролидино-фосфония, гексафтор-фосфат О0,1 м 1,8-диазабицикло[5 4 0]ундец-7-еном в сре(7-аза) бензотриазол-1-ил-тетраметилурония, N,Nде пиридина или ацетонитрила при комнатной бис[2-оксо-3-окса-золидинил] фосфордиамидхлотемпературе, или же соединений формулы (IX), в рид, 2-хлор-5,5-диметил-2-оксо-1,3,2-диоксафоскоторых S и S 3 означают фенил или этил, путем форинан, или же соединением формулы (XII) обработки водным аммиаком, или из соединений формулы (IX), в которых S 2 означает 2-(4нитрофенил)этил и S 3 означает аллил, путем об1* 15 (XII), работки группой Рсі[Р(СбН5)з]4 и трифенилфосфином в среде дихлорметана, или из соединений формулы (IX), в которых S 2 означает 2-(4нитрофенил)этил и S 3 означает аллил, путем обработки 0,5 м 1,8-диазабицикло[5 4 0]ундец-7где R - арил с 6 - 12 атомами углерода, нееном в среде пиридина или ацетонитрила, или изе замещенный или замещенный 1 -4 остатками из 2 соединений формулы (IX), в которых S означает группы, включающей алкил с 1 - 6 атомами угле2-цианоэтил и S 3 означает аллил, путем обработрода, алк-оксил с 1 - 6 атомами углерода, нитроки триэтиламином в среде пиридина, или из согруппа, хлор и бром, при этом, в случае необхо2 единений формулы (IX), в которых S означает 2димости, 1 - 3 атома углерода замещены гетероа3 (4-нитрофе-нил) этил и S означает 2,2,2-трихлортомами, предпочтительно азотом, например, фе1,1-диметилэтил, путем обработки трибутилфоснил, тол ил, 2,4,6-триметилфенил, 2,4,6фином, с получением соединений формулы (X) триизопропилфенил, 2,3,5,6-тетраметилбензол, 4бромбензол, 2-нитробензол, 4-нитробензол, 8вг хинолил, предпочтительно 2,4,6-триметилфенил У .2 ._ ІГ А' или 2,4,6-триизопропилфенил, и R 6 - удаляемая е группа, например, хлор, бром, имидазол, триазол, (X), 4-нитроимидазол, 1,2,3,4-тетразол, З-нитро-1,2,4триазол, предпочтительно с добавкой агента сочетания соединения формулы (XII) или гексафPR 5 6 1 2 где A, B , D, G, L, R , R , S , S , X, X , X" и Y торфосфата бензотриазол-1-ил-окситрис (димеимеют вышеуказанное значение, тиламино) - фосфония, гексафторфосфата Ді) снятия по известным приемам защитной бензотриазол-1 -ил-окси-трипирролидино1 21 группы S из соединений формулы (IX) Так, например, монометокситритил снимают путем обработки кислотой, например, путем обработки 80 %ной уксусной кислотой, 1-4%-ной дихлоруксусной кислотой в среде хлористого метилена или хлороформа, 2%-ной п-толуолсульфокислотой в среде смеси дихлорметана и метанола или же обработки 1%-ной трифторуксусной кислотой в среде хлороформа, с получением соединений формулы (XI) ОС" (XI), где A, B PR , D, G, L, R5, R6, S2, S3, X, X, Хм и Y имеют вышеуказанное значение, ei) взаимодействия соединений формулы (XI) с соединениями формулы (X) в присутствии сложного фосфортриэфира (такая реакция известна из химии олигонуклеотидов) в среде пригодного органического растворителя, такого, как, например, ацетонитрил, бензол, N.N-диметилформамид, д и мети л сульфоксид дихлорметан, этилацетат, фосфония или гексафторфосфат О-(7-аза) бензотриазол-1 -ил-тетраметилурония, в случае необходимости с добавкой катализатора, такого, как, например, N-ме-тилимидазол, пиридин-Ы-оксидов, таких, как, например, 4-метокси-пиридин-І\І-оксид или 4-этокси-пиридин-1\1-оксид, 4,6-динитро-1гидроксибензотриазол, 1-гидрокси-5фенилтетразол, 1 -гидрокси-(5-(4нитрофенил)тетразол, З-нитро-1 Н-1,2,4-триазол, 5-(3-нитрофенил) 1Н-тетразол, 5-(3,5динитрофенил) 1Н-тетра-зол, 5-(1метилимидазол-2-ил) 1Н-тетразол, 5(1метилимидазол-2-ил)метил]-1Н-тетразол или 1гидрокси-4-нитро-6-(трифторметил)бензотриазол, предпочтительно в присутствии 4-этоксипиридинN-оксида или 4-метоксипиридин-І\І-оксида в качестве катализатора, при этом получение агентов сочетания может осуществляться in situ, или же в отдельности и раствор активированных соединений (соединение формулы (X) и агент сочетания, далее используется условный термин "активированный раствор") может добавляться в среде пригодного растворителя, с получением соединений формулы (XIII) 44253 23 PR 5 6 1 2 3 где A, B , D, G, L, R , R , S , S , S , X, X, X" и Y имеют вышеуказанное значение, жі) исходя из соединений формулы (XIII) повторения операций по пунктам ді) и Єї) до достижения желаемой длины цепи с получением соединений формулы (XIV) "К п 1 (XIV), я' где A, B PR , D, G, L, R5, R6, S1, S2, S3, X, X, X", Y и п имеют вышеуказанное значение, 3-і) СНЯТИЯ известными приемами защитных групп S1, S 2 и S 3 и защитных групп у B PR , например, защитной группы S 1 описанным в пункте ді) образом, защитных групп S 2 и S3, если они означают 2-(4-нитрофенил)этил, путем обработки 0,5м 1,8-диазабицикло[5 4 0]ундец-7-еном в среде пиридина или ацетонитрила при комнатной температуре, если S 2 и S означают фенил, путем обработки водным аммиаком, если S 2 и S 3 означают аллил, путем обработки группой Рсі[Р]СбН5)з)4 и трифенилфосфином в среде дихлорметана (см Hayakawa и др , J Org Chem 58 (1993) 5551), если S 2 и S 3 означают 2-цианоэтил, путем обработки триэтиламином в среде пиридина, или, если S 2 или S 3 означают 2,2,2-трихлор1,1-диметилэтил, путем обработки трибутилфосфином, а защитных групп у B PR , например, если R14 означает паранитрофенилэтилоксикарбонил, путем обработки 0,5-м 1,5диазабицикло[3 4 0]ундец-5-еном в среде пиридина, если R14 означает изобутирил или бензоил или пара-(метокси)бензоил, путем обработки конц гидроокисью аммония при температуре 20 - 60°С или, если R13 означает 2-(4-нитрофенил) этил, путем обработки 0,5-м 1,5-диазабицикло[3 4 0]ундец-5-еном в среде пиридина или 1 ацетонитрила, если S означает монометокситритил и S 2 означает 2-(пара-нитрофенил)этил, предпочтительно сначала снимают монометокситритил описанным в пункте ді) образом, потом описанным выше образом S , а затем остальные защитные группы, например у нуклееоснований, и, в случае необходимости, введения известным специалисту приемом групп Q и Q1 и, в случае необходимости, циклизации полученных соединений, в результате чего получают соединения формулы (I) В качестве альтернативы конъюгаты Q' можно встроить известным специалисту приемом в мономерные звенья формулы (XXII), которые потом встроятся в соединения формулы (I) согласно приведенным приемам х- V D х—а* {XXII} R 5 R6 Соединения формулы (XXII) можно получать, 24 например, в случае Q' = алкил путем взаимодействия соединений формулы (XXIII) с соединениями формулы (Via) или (VI6) и проведения дополнительных реакций аналогично описанным для формулы (Va) или же (V6) образом (XXIII) Соединения формулы (XXII) можно также получать из соединений формулы (IX) путем снятия 1 защитной группы S и введения группы Q' по известным приемам В качестве альтернативы конъюгаты Q и Q" можно также встроить известным специалисту приемом в мономерные звенья формулы (XXIV), которые потом встроятся в соединения формулы (I) согласно приведенным приемам Y (Г-XV (XXIV) 5 R R 6 агенты сочетания для образования пептидных связей (см пункт в-і) общеизвестны В качестве примеров можно назвать гексафторфосфат бензотриазол-1-ил-окситрис (диметиламино) - фосфония, гексафторфосфат бензотриазол-1-ил-окситрипирролидино-фосфония, урониевые реагенты, хлорангидриды кислоты или фторангидриды кислоты, 2,4,6-мезитиленсульфонил-3-нитро-1,2,4триазо-лид, 2,5-дифенил-2,3-дигидро-3-оксо-4гидрокситиофендиоксид, активированные сложные эфиры, карбодиимиды, например, дициклогексилкарбодиимид или диизопропилкарбодиимид При этом связывание может осуществляться непосредственно путем присоединения соединений формулы (VIII) вместе с реагентом активации и, в случае необходимости, в присутствии вспомогательных веществ, таких, как, например, 1гидроксибензотриазол или 3-гидрокси-4-оксо-3,4дигидробензотразин, или же предварительная активация звенья в качестве активированного сложного эфира может осуществляться в отдельности и активированный раствор можно добавлять в среде пригодного растворителя Соединения формулы (I), где п = 1 - 100, можно получать и за счет того, что в соединениях формул (XV) и (XVI) (XV}. 25 44253 26 носителем через остаток янтарной кислоты, бз) из соединений формулы (XVII) (XVil), (XV!!, где A, B PR , D, G, L, R5, R6, S1, S2, S3, X, X , X" и Y имеют вышеуказанное значение, о и р независимо друг от друга означают 0 - 50, предпочтительно 0 - 20, и о + р + 1 = п, аг) в соединениях формулы (XV) снимают защитную группу S 1 описанным в пункте ді) образом, 62) в соединениях формулы (XVI) снимают защитную группу S 3 описанным в пункте уі) образом и вг) получаемые соединения связывают описанным в пункте е-і) образом с получением соединений формулы (XIV) где A, B PR , D, G, L, R5, R6, S1, S2, SS, W, X, X, X" и Y имеют вышеуказанное значение, снимают защитную группу S 1 описанным в пункте ді) образом, вз) получаемое соединение описанным в пункте е-і) образом подвергают взаимодействию с соединениями формулы (X) V где A, B PR , D, G, L, R5, R6, S1, S 2 X, X , X" и Y имеют вышеуказанное значение, (XIV), X, Xі, X", У и п имеют вышеуказанное значение, гг) которые подвергают описанной в пункте 3-і) реакции с получением соединений формулы (I) Кроме того, соединения формулы (I) можно получать за счет того, что аз) соединения формулы (X) A, B P R , D, G, L, R5, (X), где A, B PR , D, G, L, R5, R6, S1, S2, S3, X, X, X" и Y имеют вышеуказанное значение, по известным приемам через промежуточную группу связывают с твердым носителем с получением соединений формулы (XVII) я SS W R (XVH), где A, B PR , D, G, L, R5, R6, S1, S2, X, X, X" и Y имеют вышеуказанное значение, SS - пригодный для осуществления твердофазного синтеза твердый носитель, например, имеющее аминопропильные группы пористое стекло, и W - группа, отщепляемая от носителя после осуществления синтеза, например бис (гидроксиэтил) сульфонил, или бифункциональные конъюгатные молекулы Q, которые связываются с твердым носителем через известные снимаемые группы, например, нуклеотиды или олигонуклеотиды, которые связываются с твердым носителем через остаток янтарной кислоты, или же поли- или олигоэтиленгликоли, которые связываются с твердым носителем через остаток янтарной кислоты, или же производные холестерина, которые связываются с твердым гз) повторяют операции по пунктам бз) и вз) до достижения желаемой длины цепи, дз) по известным приемам сочетают, в случае необходимости, конъюгаты Q', ез) по известным приемам отщепляют полученные таким образом соединения от твердого носителя, например, бис (гидроксиэтил)сульфонильный остаток путем обработки 1,5диазабицикло[3 4 0]ундец-5-еном, остаток янтарной кислоты - путем обработки водным аммиаком и защитные группы - описанным в пункте 3-і) образом, причем отщепление защитных групп может осуществляться также перед отщеплением от носителя, и, в случае необходимости, связывания по известным приемам конъюгатов Q, при этом последовательность связывания Q или же Q (зз), ез)) можно также изменять, и, в случае необходимости, циклизации полученных соединений Соединения формулы (I) применяются в качестве ингибиторов экспрессии генов Поэтому предлагаемые соединения с терапевтическим эффектом можно использовать для получения лекарственного средства Под термином «соединения с терапевтическим эффектом» в общем подразумевают соединения, которые из-за последовательности звеньев В, соответствующих нуклеооснованиям, имеют функцию аналогов антисмысловых олигонуклеотидов, триплекс-образующих олигонуклеотидов, аптамеров (молекулы РНК или ДНК, способные к связыванию со специфическими целевыми молекулами, такими, как, например, протеины или рецепторы), или рибозимов (каталитических РНК), в частности аналогов антисмысловых олигонуклеотидов и триплекс-образующих олигонуклеотидов Предлагаемые соединения можно также применять в качестве диагностического средства, например в целях обнаружения наличия или отсутствия или же количества специфической двунитевой или однонитевой молекулы нуклеиновой кислоты в биологической пробе Для применения в вышеуказанной области предлагаемые соединения имеют длину (п-1) око 27 44253 28 ло 6 - 100, предпочтительно около 10 - 40, осов) в отношении c-myb, например бенно предпочтительно около 12-31 нуклеотидов GTGCCGGGGTCTTCGGGC SEQ ID NO 11 В прочем и здесь действительны описанные выше GTGCCGGGGTCTTCGGG SEQ ID NO 27 предпочтительные области, модификации и конъг) в отношении c-fos, например югации GGAGAACATCATGGTCGAMG SEQ ГО NO 12 Лекарственные средства, содержащие предлагаемые соединения, можно применять, наприCCCGAGMCATCATGGTCGAAG SEQ ID NO 13 мер, для лечения заболеваний, вызванных вируGGGGAAAGCCCGGCAAGGGG SEQ ID NO 14 сами, например, ВИЧ, вирусами простого герпеса д) в отношении р120, например типа I и II (HSV-1, HSV-2), инфлюензы, вирусом CACCCGCCTTGGCGTCO3AG SEQ ID NO 1S везикулярного стоматита (VSV), гепатита Б или вирусами папилломы е) в отношении рецептора эпидермального В качестве примеров предлагаемых последофактора роста, например вательностей оснований, обладающих активноGGGACTCCGGCGCAGCGG SEQ ID NO 16 стью в отношении вышеприведенных вирусов, GGCAAACTTTCTTTTCCTCC SEQ ID NO 17 можно назвать следующие (условное сокращение ж) в отношении супрессора р53 опухоли, на"SEQ Ю" означает последовательность) пример а) в отношении ВИЧ, например GGGAAGGAGGAGGATGAGG ACACCCAATTCTGAAAATGG SEQ Ю NO 1 AGGTCCCTGTTCGGGCGCCA SEQ iD NO 2 GGTCCCTGTTCGGGCGCCA SEQ ID NO 26 GTCGACACCCMTTCTGAAAATGGATAA SEQ ID NO 3 GCTATGTCGACACCCAATTCTGAAA SEQ ІО NO 4 GTCGCTGTCTGCGCTTCTTCTTCCTG SEG iD NO 5 GTCTCCGCTTCTTCTTCCTGCCATAGG SEQ iD NO 6 б) в отношении HSV-1, например GCGGGGCTCCATGGGGGTCG SEQ ID NO 7 GGAGGATGCTGAGGAGG SEQ ID NO 2в GGAGGATGCTGAGG SEQ ID NO 2S CAGGAGGATGCTGAGGAGG SEQ ID NO 30 Лекарственные средства, содержащие предлагаемые соединения, можно также применять, например, для лечения рака или рестеноза При этом можно применять, например, последовательности оснований, направляемые против мишеней, отвечающих за возникновение или рост рака Такими мишенями являются, например, 1) ядерные онкопротеины как, например, сmyc, N-myc, c-myb, c-fos, c-fos/jun, PCNA, p120, 2) цито плаз мати чес кие/ ассоциированные с мембраной онкопротеины как, например, EJ-ras, cHa-ras, N-ras, rrg, bcl-2, cdc-2, c-raf-1, c-mos, c-src, c-abl, 3) клеточные рецепторы как, например, рецептор эпидермального фактора роста, c-erbA, ретиноидные рецепторы, регулятор протеинкиназы, c-fms, 4) цитокины, факторы роста, внеклеточная матрица как, например, CSF-1, IL-6, IL-1 a, ll_-1b, IL2, IL-4, bFGF, миелобластин, фибронектин В качестве примеров предлагаемых последовательностей оснований, обладающих активностью в отношении вышеприведенных мишеней, можно назвать следующие а) в отношении c-Ha-ras, например CAGCTGCAACCCAGC SEQ ID NO В б) в отношении с-тус, например GGCTGCTGGAGCGGGGCACAC SEQ !D NO Э AACGTTGAGGGGCAT SEQ ID NO 10 SEQ ID NO 18 GGCAGTCATCCAGCTTCGGAG SEQ ID NO 19 з) в отношении bFGF, например GGCTGCCATGGTCCC SEQ iD NO 31 Кроме того, лекарственные средства, содержащие предлагаемые соединения, можно применять, например, для лечения заболеваний, на которые влияют интегрины или рецепторы межклеточной адгезии, например VLA-4, VLA-2, ICAM или ELAM В качестве примеров предлагаемых последовательностей оснований, обладающих активностью в отношении вышеприведенных мишеней, можноназвать следующие а) в отношении VLA-4, например GCAGTAAGCATCGATATC SEQ ID NO 20 б) в отношении ICAM, например СССССАССАСТТССССТСТС SEQ ID NO 21 CTCCCCCACCACTTCCCCTC SEQ ID NO 22 GCTGGGAGCCATAGCGAGG SEQ ID NO 23 в) в отношении ELAM-1, например ACTGCTGCGTCTTGTCTCAGG SEQ ID NO 2 4 CMTCAATGACTTCAAGAGTTC SEQ ID NO 25 Кроме того, лекарственные средства, содержащие предлагаемые соединения, можно применять, например, для лечения заболеваний, вызываемых факторами как TNF alpha В качестве примеров предлагаемых последовательностей оснований, обладающих активностью в отношении вышеприведенных мишеней, можно назвать следующие а) в отношении TNF-alpha, например TCATGGTGTCCTTTGCAGCC SEQ ID NO 32 TCATGGTGTCCTTTGCAG SEQ ID NO 33 Дополнительные данные по вышеуказанным последовательностям приведены в качестве приложения к настоящему описанию Лекарственные средства можно применять, например, в виде фармацевтических препаратов, которые можно давать, например, локально или орально, например в виде таблеток, драже, твердых или мягких желатиновых капсул, растворов, эмульсий или суспензий Их можно также давать 29 44253 зо реісгально, например в виде суппозиториев, или МГц, ДМСО, ТМС) 5 = 3,05 (дд, 2Н, СН2ОН), 3,39 парентерально, например в виде растворов для (дд, 2Н, N-CH2), 4,25 (м, ЗН, Аг-СН-СН2), 4,61 (т, инъекции Для получения фармацевтических пре1Н, ОН), 7,14-7,98(м, 15Н, Аг-Н, NH) паратов данные соединения можно перерабаты16) І\І-флуоренилметилоксикарбонил-2-аминовать в терапевтически инертных органических и 1-(4-метокситрифенилметокси)этан продукта принеорганических носителях Примерами таких номера 1а), І\І-флуоренилметилоксикарбонил-2сителей для таблеток, драже и твердых желатиаминоэтанола, растворенного в 100мл абсол N,Nновых капсул являются лактоза, кукурузный крахдиметилформамида, смешивают при 0°С с 5,93г мал или их производные, тальк и стеариновая (45,93ммоль) диизопропилэтиламина и 10,91 г кислота или их соли Пригодными носителями для (35,3ммоль) 4-метокси-трифенилметилхлорида, получения растворов являются вода, пол иолы, после чего перемешивают сначала 1 час при 0°С, сахароза, инвертный сахар и глюкоза Пригодныа затем 1 час при комнатной температуре Реакми носителями для растворов для инъекции явционную смесь упаривают и распределяют между ляются вода, спирты, полиолы, глицерол и растидихлорметаном и насыщенным водным раствором тельные масла Пригодными носителями для бикарбоната натрия Органическую фазу промысуппозиториев являются растительные и отвервают водой, сушат над сульфатом натрия и расжденные масла, воски, жиры и полужидкие полиотворитель упаривают в вакууме Остаток очищают лы Фармацевтические препараты могут также хроматографией на силикагеле с применением в содержать консерванты, растворители, стабиликачестве элюента сначала смеси н-гептана, этилзаторы, смачиватели, эмульгаторы, сладкие веацетата и триэтиламина в соотношении 70 29 1, а щества, красители, вкусовые вещества, соли для затем смеси этилацетата и триэтиламина в соотизменения осмотического давления, буферы, поношении 99 1 Выход 14,4г (73%) крывные средства, антиокислители и, в случае Масс-спектр (ББА) 562,3 (М + Li)+, 1Н-ЯМР необходимости, другие терапевтические активные (200МГц, ДМСО, ТМС) 5 = 2,95 (т, 2Н, СН2Оначала ММТг), 3,21 (дд, 2Н, N-CH2), 3,75 (с, ЗН, ОСН3), 4,25 (м, ЗН, Аг-СН-СН2), 4,61 (т, 1Н, ОН), 6,80 Предпочтительным видом дачи являются 7,96 (м, 23Н, Ar-H, NH) оральная дача и инъекция Для этого антисмысловые олигонуклеотиды перерабатывают в жид1в) 2-амино-1-(4-метокситрифенилметокси) ком растворе, предпочтительно в физиологически этан 5,0г (Эммоль) продукта примера 16), Nприемлемом буфере, таком, как, например, расфлуоренилметилоксикарбонил-2-амино-1-(4твор Хэнка или раствор Рингера Предлагаемые метокситрифенилметоксиэтана, растворенного в терапевтически эффективные соединения можно, 5омл абсол N.N-диметилформамида, смешивают однако, также перерабатывать в твердой форме и при комнатной температуре с 6,55г (90 ммоль) растворять или суспендировать перед использодиэтиламина, после чего перемешивают в течеванием Предпочтительные дозировки для систение 2 часов Остаток очищают хроматографией на матической дачи составляют около 0,01 до 50 силикагеле с применением в качестве элюента мг/кг веса тела в сутки сначала смеси н-гептана, этилацетата и триэтиламина в соотношении 50 49 1, а затем смеси Примеры этилацетата, метанола и триэтиламина в соотноВ нижеследующем используются следующие шении 79 20 1 Выход 2,96г (98,7%) условные сокращения ES = ударная ионизация Масс-спектр (ES+) 340,3 (М + Li)+, 1Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО, ТМС) 5 = 2,75 (т, 2Н, СНзОДМСО = диметилсульфоксид ММТг), 2,93 (дд, 2Н, N-CH2), 3,75 (с, ЗН, ОСН3), ТМС = тетраметилсилан 6,83-7,47 (м, 14Н, Аг-Н) Et = этил Аг = арил 1г) 2-метилимино-1-(4tBu = третбутил метокситрифенилметокси)этан (в виде тримера) 2,96г (8,9 ммоль) продукта примера 1в), 2-амино1) Сложный ди (2-(п-нитрофенил) этил) эфир 1-(4-метокситрифенилметок-си)этана, растворен|\|-(4-метокситрифенилметокного в 10 мл метанола, при охлаждении льдом си)этиламинометанфосфоновой кислоты смешивают с 1,08 г (13,22ммоль) 37 %-ного фор1а) І\І-флуоренилметилоксикарбонил-2мальдегида, после чего перемешивают при комаминоэтанол натной температуре в течение 4 часов При этом 8,61г (0,141 моль) 2-аминоэтанола растворяют образуется вязкий осадок Реакционную смесь в 250мл диоксана и 150мл воды При температуре упаривают и очищают хроматографией на силика15 - 20°С к раствору сначала добавляют 17,79г геле с применением в качестве элюента смеси н(0,212моль) бикарбоната натрия, потом порциями гептана, этилацетата и триэтиламина в соотношедобавляют 50г (0,148моль) флуоренилметилоксинии 50 49 1 Выход 1,7 г (55%) карбонил-Ы-сукцинимида Перемешивают при комнатной температуре в течение часа и упариМасс-спектр (ББА) 1042,8 (М + Li)+, 1034,8 (Nвают досуха Остаток распределяют между диН)+ 1Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО, ТМС) 5 = 2,60 (т, хлорметаном и водой, органическую фазу сушат 6Н, О-СН2), 2,99 (т, 6Н, N-CH2), 3,69 (с, 9Н, ОСН3), над сульфатом натрия и растворитель упаривают 6,78-7,42 (м, 42Н, Аг-Н) в вакууме Остаток перемешивают с 100мл про1д) Ди (2-(4-нитрофенил)этил)фосфит 23,42 г стого ди-этилового эфира, продукт отсасывают и (0,1 моль) дифенилфосфита вместе с 33,43 г (0,2 интенсивно промывают простым ди-этиловым моль) п-нитрофенил-этанола в атмосфере аргона эфиром Выход 38,77г (97%) нагревают до 100°С в течение 14 часов Продукт очищают хроматографией на силикагеле с примеМасс-спектр (ES+) 284,2 (М + Н)+, 1Н-ЯМР (200 31 32 Выход 57% Спектроскопические данные см пример 2а) 3) Сложный (2-(п-нитрофенил)этил) моноэфир І\І-(г\І6-анизоил) цитозин-1-ил-ацетил-І\І-(4метокситрифенилметокси)этиламинометанфосфоновой кислоты 1г (0,99 ммоль) продукта примера 2 сложного ди(2-(пнитрофенил)этил)эфира N-(N -анизоил)цитозин-1ил-ацетил-ІЧ-(4метокситрифенилметокси)этиламинометанфосфоновой кислоты, растворяют в 2омл 0,1-м раствора 1,8-диазабицикло[5 4 0]ундец-7ена в абсол ацетонитриле и перемешивают в течение 4 часов при комнатной температуре Реакционную смесь распределяют между дихлорметаном и водным раствором первичного фосфата калия (рН 7), органическую фазу сушат над сульфатом натрия и растворитель упаривают в вакууме Остаток очищают хроматографией на силикагеле с применением в качестве элюента смеси этилацетата, метанола и триэтиламина в соотношении 70 29 1 44253 нением в качестве элюента сначала смеси нгептана и этилацетата в соотношении 50 50, а затем смеси этилацетата и метанола в соотношении 80 20 Выход 55 % Масс-спектр (ББА) 403,1 (М + Na)+, 381,1 (М + Н)+ 1Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО, ТМС) 5 = 3,03 (т, 4Н, Аг-СН2), 4,20 (дт, 4Н, О-СН2), 6,71 (д, J = 140 Гц, 1Н, РН), 7,52 (д, 4Н, Аг-Н), 8,17 (д, 4Н, АгН) 1е) Сложный ди (2-(п-нитрофенил) этил) эфир |\|-(4-метокситрифенилметокси) этиламинометанфосфоновой кислоты К 500мг (1,32ммоль) продукта примера д), ди(2-(4нитрофенил)этил)фосфита, растворенного в 2мл абсол тетрагидрофурана, добавляют 341мг (0,329ммоль) продукта примера г) 2-метилимино1-(4-метокситрифенилметокси) этана в виде тримера Смесь перемешивают при 80°С в течение 3 часов Растворитель упаривают и еще раз перемешивают в течение 30 минут при 100°С Продукт очищают хроматографией на силикагеле с применением в качестве элюента сначала смеси этилацетата и триэтиламина в соотношении 99 1, а затем смеси этилацетата, метанола и триэтиламина в соотношении 90 9 1 Выход 83% Масс-спектр (ББА) 732,3 (М + Li)+ 1Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО, ТМС) 5 = 2,64 -3,06 (м, ЮН, АгСН 2 + Р-СН2 + СН2-ОММТг + N-CH2), 3,73 (с, ЗН, ОСНз), 4,16 (дт, 4Н, РО-СН2), 6,78 - 8,08 (м, 22Н, Аг-Н) 2) Сложный ди(2-(п-нитрофенил)этил) эфир N(|\|6-анизоил)цитозин-1-ил-ацетил-г\1-(4метокситрифенилметокси)этиламинометанфосфоновой кислоты 2а) К 2,00г (2,76ммоль) продукта примера 1е), сложного ди(2-(п-нитрофенил) этил) эфира N-(4метокситрифенилметокси)этиламинометанфосфоновой кислоты, растворенного в 60 мл абсол N.N-диметилформамида, добавляют 0,952г (8,27ммоль) N-этилморфолина, 0,834г (2,76ммоль) (1\16-анизоил)цитозин-1 -илуксусной кислоты и 1,153г (З.ОЗммоль) гексафторфосфата 0-(7-аза)бензотриазол-1илтетраметилурония (см L Carpmo, J Am Chem Soc 1993, 115, 4397) и перемешивают 12 часов при комнатной температуре Затем добавляют еще раз то же самое количество гексафторфосфата О-(7-аза)бензотриазол-1-ил тетраметилурония и перемешивают еще 3 часа при комнатной температуре Продукт очищают хроматографией на силикагеле с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и триэтиламина в соотношении 95 4 1 Выход 2,7 г (97 %) Масс-спектр (ES+) 1012,0 (М + Н)+ 1Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО, ТМС) 5 = 2,94 (т, 4Н, Р-О-СН2СН2-Аг), 3,06 (т, 2Н, ММТг-О-СН2), 3,23- 3,63 (м, 4Н, Р-СН2 + N-CH2), 3,75 (с, ЗН, ОСН3), 3,83 (С, ЗН, ОСНз), 4,10 (дт, 4Н, Р-О-СН2), 4,79 (с, шир, 2Н, СО-СН2), 6,80 - 8,18 (м, 28Н, Аг-Н, цитозинилН), 11,03 (с, шир, 1Н, NH) 26) Применяют исходную смесь примера 2а), однако при использовании тетрафторбората 0(циан (этоксикарбонил) метиленамино) - 1,1,3,3тетраметилурония (см заявку ЕР № 0460446) вместо гексафторфосфата О-(7-аза)бензотриазол1-илтетраметилурония Выход 540 мг (57 %) Масс-спектр (ББА) 906,5 (N-H + 2Na)+, 884,6 (М + Na)+, 862,5 (М + Н)+ 1Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО, ТМС) 5 = 3,00 (м, 4Н, Р-О-СН2-СН2-Аг + ММТг-О-СН2), 3,38 - 3,60 (м, 4Н, Р-СН2 + N-CH2), 3,73 (с, ЗН, ОСНз), 3,82 (с, ЗН, ОСН3), 4,01 (дт, 2Н, Р-О-СН2), 4,79 & 5,03 (каждый с, шир , 2Н, СОСН2), 6,78 - 8,20 (м, 24Н, Аг-Н, цитозинил-Н), 11,00 (с, шир, 1Н, NH) 4) Сложный (2-(п-нитрофенил) этил) диэфир |\|-(г\16-анизоил) цитозин-1-ил-ацетил-І\І-(2гидрокси) этиламинометанфосфоновой кислоты 1,00 г (0,99 ммоль) продукта примера 2), сложного ди (2-(п-нитрофе-нил)этил)эфира г\І-(г\І6-анизоил) цитозин-1 -ил-ацетил-І\І-(4метокситрифенилметокси) этиламинометанфосфоновой кислоты, растворяют в 80 мл 80 %-ной водной уксусной кислоты и перемешивают в течение 4 часов при комнатной температуре Растворитель упаривают и два раза упаривают вместе с толуолом Остаток очищают хроматографией на силикагеле с применением в качестве элюента смеси этилацетата, метанола и триэтиламина в соотношении 85 14 1 Выход 522 мг (71 %) Масс-спектр (ББА) 761,2 (М + Na)+, 739,3 (М + Н)+ 1Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО, ТМС) 5 = 2,98 (т, 4Н, Р-О-СН2-СН2-Аг), 3,38 - 3,67 (м, 4Н, N-CH2СН2-ОН), 3,80 -3,89 (м, 2Н, Р-СН2) 3,91 (с, ЗН, ОСНз), 4,12 (дт, 4Н, Р-О-СН2), 4,78 & 4,87 (каждый с, шир , 2Н, СО-СН2), 6,98 - 8,19 (м, 14Н, Аг-Н, цитозинил-Н), 11,02 (с, шир , 1Н, NH) 5) 5'-MMTr-CAn-P(ONPE) - CAn-P(ONPE)2 Синтез осущестляют аналогично примеру 17 из продукта примера 3, сложного (2-(пнитрофенил)этил)моноэфираг\1-(1\16анизоил)цитозин-1 ил-ацетил-ІЧ-(4метокситрифенилметокси)этиламинометанфосфоновой кислоты (триэтиламмониевой соли), и продукта примера 4, сложного ди(2-(п-нитрофенил)этил)эфира N-(N6анизоил) цитозин-1 -ил-ацетил-1\1-(2гидрокси)этиламинометанфосфоновой кислоты Остаток очищают хроматографией на силикагеле 33 44253 34 с применением в качестве элюента смеси этилного диэтилового эфира г\1-тимин-1-ил-ацетил-1\1ацетата, метанола и триэтиламина в соотношении (485 14 1 Выход 73% метокситрифенилметокМасс-спектр (ББА) 1605 (М + Na)+, 1583 (М + си)этиламинометанфосфоновой кислоты, суспен+ 1 Н) Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО, ТМС) 5 = 2,94 - 3 18 дируют в 3,75мл 1н гидроокиси натрия Суспен(м, 6Н, Р-0-CHjrCJdb-Ar), 3,26 - 3,95 (м, ЮН), 3,75 зию перемешивают 3 часа при комнатной (с, ЗН, ОСНз), 3,85 (с, 6Н, ОСН3), 3,99 - 4,36 (м, 8Н, температуре, а затем 6 часов при 50°С РеакционР-О-СН2), 4,75 - 4,92 (м, шир , 4Н, СО-СН2), 6,83 ную смесь сгущают в вакууме и остаток очищают 8,18 (м, 38Н, Аг-Н, цитозинил-Н), 10,98 & 11,03 хроматографией на силикагеле с применением в (каждый с, шир , 2Н, NH) качестве элюента смеси этилацетата, метанола и триэтиламина сначала в соотношении 100 10 10, а 6)5'-HO-C An -P(ONPE) 2 затем 100 40 10 Выход 897мг (99,5%) Синтез осуществляют аналогично примеру 4 из продукта примера 5 5'-MMTr- CAn-P(ONPE) Масс-спектр (ES-) 620,4 (М - Н) 1Н-ЯМР (200 An C -P(ONPE)2 Остаток очищают хроматографией МГц, ДМСО, ТМС) 5 = 1,18 (т, 9Н, Ы-СН2-СНз), на силикагеле с применением в качестве элюента 1,68 & 1,74 (каждый с, ЗН, Т-СН3), 2,96 - 3,08 (kb, смеси этилацетата, метанола и триэтиламина в 6Н, N-CH2CH3), 3,35 (м, 2Н, N-CH2), 3,43 - 3,70 (д, соотношении 85 14 1 Выход 7 4 % J = 11 Гц, 2Н, Р-СН2), 3,63 (т, 2Н, СН2-ОММТг), 3,75 (с, ЗН, ОСН3), 3,78 (дкв, 2Н, РО-СН2), 4,60 & Масс-спектр (ББА) 1332,4 (М + Na)+, 1310,3 (М 4,86 (каждый с, 2Н, СО-СН2), 6,82 - 7,41 (м, 15Н, + Н)+ Аг-Н, Т-Н), 11,24 (с, 1Н, NH) 7) Сложный диэтиловый эфир N-(4метокситрифенилметокси)этиламино10) Сложный диэтиловый эфир N-тимин-і-илметанфосфоновой кислоты ацетил-1\1-(2-гидрокси)этиламинометанфосфоновой кислоты Синтез осуществляют аналогично примеру 1е), однако с применением диэтилфосфита Синтез осуществляют аналогично примеру 4 из продукта примера 8, сложного диэтилового Выход 87,5% эфира 1Ч-тимин-1 -ил-ацетил-І\І-(4Масс-спектр (ББА) 490,2 (М + Li) 1Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО, ТМС) 5 = 1,22 (т, 6Н, СН2-СНз), 2,80 метокситрифенилметок(т, 2Н, N-CH2), 2,91 (д, J = 12,5 Гц, 2Н, Р-СН2), 3,02 си)этиламинометанфосфоновой кислоты Остаток (т, 2Н,СН2-ОММТг), 3,75 (с, ЗН, ОСН3), 4,01 (дкв, очищают хроматографией на силикагеле с приме4Н, РО-СН2), 6,84 - 7,45 (м, 14Н, Аг-Н) нением в качестве элюента смеси этилацетата и метанола в соотношении 90 10 Выход 80% 8) Сложный диэтиловый эфир N-тимин-і-илацетил-1\1-(4-метокситрифенилМасс-спектр (ББА) 400,1 (М + Na)+, 378,1 (М + 1 метокси)этиламинометанфосфоновой кислоты Н) Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО, ТМС) 5 = 1,17 - 1,32 (м, 6Н, СН2-СНз), 1,78 (с, ЗН, Т-СН3), 3,40 - 3,69 (м, К 2,04г (4,22ммоль) продукта примере 7, 4Н, СН2-ОН + N-CH2), 3,89 (д, J = 11 Гц, 2Н, Рсложного диэтилового эфира N-(4СН2), 3,92 - 4,19 (м, 4Н, РО-СН2), 4,70 (с, 2Н, СОметокситрифенилметокСН2), 4,98 (т, 1Н, ОН), 7,22 & 7,30 (каждый с, 1Н, Тси)этиламинометанфосфоновой кислоты, раствоН), 11,25 (с, 1Н, NH) ренного в 50мл абсол N.N-диметилформамида, добавляют 570,3мг (4,22ммоль) гидроксибензот11) Сложный дифениловый эфир N-(4риазола, 972,1мг (8,44ммоль) N-этилморфолина, метокситрифенилметокси)этиламино777мг (4,22ммоль) тимидин-1-ил-уксусной кислоты метанфосфоновой кислоты и 639мг (5,06ммоль) диизопропилкарбодиимида Синтез осуществляют аналогично примеру Смесь перемешивают в течение 16 часов при 1е), однако с применением диэтилфосфита Выкомнатной температуре, растворитель упаривают, ход 100% остаток растворяют в дихлорметане, после чего Масс-спектр (ББА) 58,2 (М + Li)+ экстрагируют насыщенным водным раствором 12) Сложный монофениловый эфир N-тиминбикарбоната натрия, а затем насыщенным вод1-ил-ацетил-1\1-(4-метокситрифеным раствором хлористого натрия Сушат над нилметокси)этиламинометанфосфоновой кислоты сульфатом натрия и растворитель упаривают (триэтиламмониевая соль) Остаток очищают хроматографией на силикагеле Синтез осуществляют аналогично примеру 8) с применением в качестве элюента смеси этилпутем взаимодействия продукта примера 11, ацетата, метанола и триэтиламина в соотношении сложного дифенилового эфира N-(498 2 1 Выход 2,47г (90%) метокситрифенилметокМасс-спектр (ББА) 662,3 (М + Na)+, 656,3 (М + си)этиламинометанфосфоновой кислоты, с тими+ 1 Li) Н-ЯМР(200МГц, ДМСО, ТМС) 5=1,12-1,32 дин-1-ил-уксусной кислотой Остаток очищают (м, 6Н, СН2-СНз), 1,68 & 1,75 (каждый с, ЗН, Тхроматографией на силикагеле с применением в СНз), 3,10 -3,40 (м, 2Н, СН2-ОММТг), 3,53 - 3,70 (м, качестве элюента смеси этилацетата, метанола, 4Н, Р-СН2 + N-CH2), 3,75 (с, ЗН, ОСН3), 3,83 - 4,16 триэтиламина и воды в соотношении 90 10 5 0,5 (м, 4Н, РО-СН2), 4,62 & 4,72 (каждый с, 2Н, СОВыход 47% СН2), 6,83 - 7,42 (м, 15Н, Аг-Н, Т-Н), 11,28 (с, 1Н, Масс-спектр (ББА) 682,3 (М + 2L-H) 1Н-ЯМР NH) (200 МГц, ДМСО, ТМС) 5 = 1,16 (т, 9Н, N-CH2СНз), 1,67 & 1,72 (каждый с, ЗН, Т-СН3), 2,96 - 3,70 9) Сложный моноэтиловый эфир N-тимин-і(м, 12Н, N-CH2-CH3 + N-CH2 + Р-СН2 + СН2ил-ацетил-1\1-(4-метокситрифеОММТг), 3,75 (с, ЗН, ОСН3), 4,58 & 4,88 (каждый с, нилметокси)этиламинометанфосфоновой кислоты 2Н, СО-СН2), 6,74 - 7,46 (м, 20Н, Аг-Н, Т-Н), 11,23 (триэтиламмониевая соль) (с, 1Н, NH) 811мг (1,25ммоль) продукта примера 8, слож 36 35 44253 13) Сложный фенил-(4-нитрофенилэтил) ди(200 МГц, ДМСО, ТМС) 5 = 1,15 (т, 9Н, N-CH2эфир г\1-тимин-1-ил-ацетил-1\1-(4СНз), 1,60 & 1,79 (м, ЗН, Т-СНз), 2,80 - 3,60 (м, метокситрифенилметокси) этиламинометанфос14Н, N-CH2-CH3 + N-CH2 + Р-СН2 + СН2-ОММТг + фоновой кислоты Аг-СН2), 3,73 (с, ЗН, ОСНз), 4,01 (дт, 2Н, Р-О-СН2), 4,58 - 4,92 (м, 2Н, СО-СН2), 6,82 - 8,18 (м, 19Н, Аг385,4мг (0,5ммоль) продукта примера 12, Н, Т-Н), 11,30 (с, 1Н, NH) сложного монофенилового эфира N-тимин-і-илацетил-1Ч-(4156) Из полученного в примере 14 сложного метокситрифенилметокди(2-(п-нитрофенил) этил) эфира N-тимин-і-илацетил-1\1-(4-метокситрифенилметокси) этиламиси)этиламинометанфосфоновой кислоты (триэтинометанфосфоновой кислоты ламмониевой соли), и 92мг (0,55ммоль) 4нитрофенилэтанола три раза упаривают вместе с Синтез осуществляют аналогично примеру 3 абсол пиридином, после чего продукт растворяют из продукта примера 14, сложного ди(2-(пв 15мл абсол пиридина При температуре 0°С к нитрофенил)этил)эфира г\1-тимин-1-ил-ацетил-1\1раствору добавляют 403,4мг (0,15ммоль) 3-нитро(4-метокситрифенилметокси) 1-(п-толуолсульфонил) - 1Н-1,2,4-триазола и пеэтиламинометанфосфоновой кислоты, однако ремешивают 16 часов при 0 - 5°С Пиридин отгос применением пиридина в качестве растворитеняют в вакууме, остаток подают в этил-ацетат и ля Выход 82% Спектроскопические данные см последовательно промывают насыщенным водпример 15а) ным раствором бикарбоната натрия, а затем рас16) г\1-тимин-1-ил-ацетил-1\1-(4твором хлористого натрия Остаток очищают хрометокситрифенилметокси) этиламинометанматографией на силикагеле с применением в фосфоновая кислота качестве элюента смеси этилацетата и триэтилаСинтез осуществляют аналогично примеру мина в соотношении 100 2 Выход 162мг Масс156) В качестве побочного продукта получают + + спектр (ББА) 831,3 (М + 2І_і-Н) , (М + Li) 18% г\1-тимин-1-илацетил-1\1-(414) Сложный ди (2-(п-нитрофенил)этил) эфир метокситрифенилметокси)этил|\|-тимин-1-ил-ацетил-г\1-(4-метаминометанфосфоновой кислоты Масс-спектр окситрифенилметокси) этиламинометанфосфоно(ES-) 592,2 (М - Н) вой кислоты 17) -ММТг-Т-Р(Оэтил) - Т-Р(Оэтил)2 Синтез осуществляют аналогично примеру 8 Смесь 361мг (0,5ммоль) сложного моноэтилопутем взаимодействия продукта примера 1 е), вого эфира г\1-тимин-1-ил-ацетил-1\1-(4сложного ди (2-(п-нитрофенил)этил) эфира N-(4метокситрифенилметокметокситрифенилметокси) этиламинометанфосси)этиламинометанфосфоновой кислоты (трифоновой кислоты, с тимидин-1 -ил-уксусной киэтиламмониевой соли) формулы (IX) и 188,7мг слотой Выход 63% (0,5ммоль) сложного диэтилового эфира N-тимин1-ил-ацетил-1\1-(2-гидрокси)этиламинометанфосМасс-спектр (ES+) 898,4 (М + Li)+ 1Н-ЯМР фоновой кислоты формулы (X) два раза упарива(200 МГц, ДМСО, ТМС) 6 = 1,65 & 1,72 (каждый с, ют вместе с абсол пиридином, после чего раствоЗН, Т-СНз), 2,96 (т, 4Н, Р-О-СН2-СН2-Аг), 3,06 (т, ряют в 10мл абсол пиридина При температуре 5 2Н, N-CH2) 3,67 (д, J = 11 Гц, 2Н, Р-СН2), 3,70 (м, 2Н, ММТг-О-СН2), 3,75 (с, ЗН, ОСН3), 3,83 (с, ЗН, 10°С добавляют 1,5ммоль З-нитро-1 -(пОСНз), 4,10 (дт, 4Н, Р-О-СН2), 4,59 & 4,62 (каждый толуолсульфонил) - 1Н-1,2,4-триазола и перемес, шир , 2Н, СО-СН2), 6,83 - 8,18 (м, 23Н, Ar-Н, Тшивают 16 часов при комнатной температуре ПиН), 11,30 (с шир, 1Н, NH) ридин упаривают в вакууме, остаток растворяют в этилацетате и последовательно промывают на15) Сложный (4-нитрофенилэтил) моноэфир сыщенным водным раствором бикарбоната на|\|-тимин-1-ил-ацетил-г\1-(4-метоктрия, а затем раствором хлористого натрия Суситрифенилметокси) этиламинометанфосфоновой шат над сульфатом натрия, сгущают и очищают кислоты (триэтиламмониевая соль) хроматографией на силикагеле с применением в 15а) Из продукта примера 13 сложного фенилкачестве элюента смеси этил-ацетата, метанола и (4-нитрофенилэтил)диэфира N-тимин-і-илтриэтиламина в соотношении 92 8 2 Выход ацетил-1Ч-(4223мг (46 %) метокситрифенилметокси)этиламинометанфосфоновой кислоты 30 мг полученного в примере 13 Масс-спектр (ББА) 987,5 (М + Li)+ 1Н-ЯМР сложного (4-нитрофенилэтил) диэфира N-тимин-і(200 МГц, ДМСО, ТМС) Характерными сигналами илацетил-ІЧ-(4являются Ar-Н &ТИМИН-Н 6,82 - 7,43 (м, 16Н), СОметокситрифенилметокСН 2 4,59 -4,78 (м, 4Н), тимин-СН3 1,63 - 1,80 (м, 6Н) си)этиламинометанфосфоновой кислоты растворяют в смеси 1мл триэтиламина, 1мл диоксана и 18) 5'-НО-Т-Р(Оэтил) - Т-Р(Оэтил)2 80мг п-нитробензальдоксима и перемешивают 3 Синтез осуществляют аналогично примеру 4 часа при комнатной температуре Растворитель из продукта примера 17 5'-ММТг-Т-Р(Оэтил) - Тупаривают в вакууме, остаток три раза упаривают Р(Оэтил)2 - Очищают хроматографией на силикавместе с пиридином и дважды -толуолом Остаток геле с применением в качестве элюента сначала очищают хроматографией на силикагеле с примесмеси этилацетата, метанола и триэтиламина в нением в качестве элюента сначала смеси этилсоотношении 85 15 2, а затем 100 50 1,5 ацетата и триэтиламина в соотношении 100 2, а Выход 95 % затем смеси этилацетата, метанола и триэтилаМасс-спектр (ББА) 731,2 (М + Na)+, 709,1 (М + + 1 мина в соотношении 60 40 2 Выход 23мг Н) Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО, ТМС) Характерными сигналами являются тимин-Н 7,21 - 7,36 (м, Масс-спектр (ББА) 755,3 (М + 2Li-H)+ 1Н-ЯМР 37 44253 38 2Н), СО-СН2 4,60 - 4,76 (м, 4Н), тимин-СН3 1,63 минометанфосфоновой кислоты и продукта при1,79 (м, 6Н) мера 15 сложного (4-нитрофенилэтил) моноэфира |\|-тимин-1-ил-ацетил-г\1-(419) 5'-ММТг-Т-Р(Офенил) - Т-Р(Оэтил)2 метокситрифенилметокСинтез осуществляют аналогично примеру 17 путем взаимодействия продукта примера 10, си)этиламинометанфосфоновой кислоты (триэтисложного диэтилового эфира N-тимин-і-илламмониевой соли) Вместо З-нитро-1 -(пацетил-1Ч-(2толуолсульфонил)-1 Н-1,2,4-триазола для связывания применяют З-нитро-1-(2,4,6гидрокси)этиламинометанфосфоновой кислоты, с триизопропилфенил-сульфонил)-1 Н-1,2,4-триазол продуктом примера 12, сложным монофениловым эфиром г\1-тимин-1-ил-ацетил-1\1-(4Выход > 90% метокситрифенилметокСпектроскопические данные см пример 21 си)этиламинометанфосфоновой кислоты (триэти23) 5'-HO-T-P(ONPE)-T-P(OEt)2 ламмониевой солью) Очищают хроматографией Синтез осуществляют аналогично примеру 4 на силикагеле с применением в качестве элюента из продукта примера 22 5'-MMTr-T-P(ONPE)-Tсмеси этилацетата, метанола и триэтиламина в P(0Et)2 Продукт очищают хроматографией на соотношении 93 7 2 Выход 58% силикагеле с применением в качестве элюента смеси этилацетата, метанола и триэтиламина Масс-спектр (ББА) 1051,4 (М + Na)+, 1029,5 (М сначала в соотношении 90 10 2, а затем 80 20 2 + Н)+ 1Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО, ТМС) ХарактерВыход 75% ными сигналами являются Аг-Н & тимин-Н 6,82 7,53 (м, 21Н), СО-СН2 4,52 - 4,82 (м, 4Н), тиминМасс-спектр (ES+) 836,3 (М + Li)+ 1Н-ЯМР СН 3 1,62-1,80 (м, 6Н) (200 МГц, ДМСО, ТМС) Характерными сигналами являются Аг-Н & тимин-Н 7,11 - 8,22 (м, 6Н), СО20) Сложный ди (4-нитрофенилэтил) эфир NСН 2 4,55 - 4,77 (м, 4Н), тимин-СН3 1,71 (с, шир , тимин-1-ил-ацетил-1\1-(2-гидрокси6Н) этил)аминометанфосфоновой кислоты Синтез осуществляют аналогично примеру 4 24) 51-НО-Т-Р(ОН)-Т-Р(Оэтил)2 10 мг (0,012 из продукта примера 14 сложного ди(2-(пммоль) продукта примера 23 5'-HO-T-P(ONPE)-Tнитрофенил) этил) эфира г\1-тимин-1-ил-ацетил-1\1P(OEt)2 растворяют в 1 мл 0,5-м, раствора 1,8(4-метокситрифенилметокси) этиламинометандиазабицикло[5 4 0]ундец-7-ена в пиридине и пефосфоновой кислоты Очищают хроматографией ремешивают сначала 24 часа при температуре на силикагеле с применением в качестве элюента 4°С, а затем 24 часа при комнатной температуре смеси этилацетата и метанола в соотношении 90 Растворитель упаривают в вакууме, остаток два 10 Выход 85% раза дигерируют вместе с пентаном, потом два раза - простым диэтиловым эфиром Продукт Масс-спектр (ES+) 620,3 (М + Н)+ 1Н-ЯМР очищают хроматографией на силикагеле с приме(200 МГц, ДМСО, ТМС) 5 = 1,73 (с, ЗН, Т-СНз), нением в качестве элюента смеси этилацетата, 2,97 (т, 4Н, Р-О-СН2-СН2-Аг), 3,41 (м, 2Н, N-CH2), метанола и триэтиламина сначала в соотношении 3,59 (м, 2Н, СН 2 - ОН), 3,83 (д, 2Н, J = 11 Гц, Р9 1 0,2, затем 70 30 2, а потом 60 40 2 Выход 10,2 СН2), 4,08 - 4,30 (м, 4Н, Р-О-СН2), 4,54 & 4,78 (камг ждый с, шир , 2Н, СО-СН2), 4,99 (т, 1Н, ОН), 7,148,19 (м, 9Н, Аг-Н, тимидинил-Н), 11,30 (с, шир , 1Н, Масс-спектр (ББА) 725,3 (М + 2Na-H)+, 703,3 NH) (М + Na)+ 1Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО, ТМС) Характерными сигналами являются тимин-Н 7,15-7,70 21)5'-ММТг-Т-Р(ОМРЕ)-Т-Р(Оэтил)2 (м, 2Н), СО-СН2 4,67 - 4,92 (м, 4Н), тимин-СН3 Синтез осуществляют аналогично примеру 17 1,67-1,81 (м, 6Н) из продукта примера 10 сложного диэтилового эфира г\1-тимин-1-ил-ацетил-1\1-(225)5'-MMTr-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(OEt)2 Синтез осуществляют аналогично примеру 17 гидрокси)этиламинометан-фосфоновой кислоты и из продукта примера 22 5'-HO-T-P(ONPE)-Tпродукта примера 15 сложного (4-нитрофенилP(OEt)2 и продукта примера 15 сложного (4этил)моноэфира г\1-тимин-1-ил-ацетил-1\1-(4нитрофенилэтил)моноэфира N-тимин-і-илметокситрифенилметокси)этиламинометанфосфоновой кислоты (триэтиламмониеацетил-1Ч-(4вой соли) Вместо З-нитро-1 -(пметокситрифенилметоктолуолсульфонил)Н-1,2,4-триазола для связываси)этиламинометанфосфоновой кислоты (триэтиния применяют З-нитро-1 -(2,4,6ламмониевой соли) с добавкой 1,5 экв (в перетриизопропилфенил-сульфонил)-1 Н-1,2,4-триазол счете на пример 23) 4-метоксипиридин-І\І-оксида Очищают хромато-графией на силикагеле с приПродукт очищают хроматографией на силикагеле менением в качестве элюента смеси этилацетата, с применением в качестве элюента смеси этилметанола и триэтиламина сначала в соотношении ацетата, метанола и триэтиламина сначала в со95 5 2, а затем 90 10 2 Выход > 90% отношении 90 10 2, а затем 85 15 2 Выход 6 1 % Масс-спектр (ES+) 1109,0 (М + Li)+ 1Н-ЯМР Масс-спектр (ES+) 1555,8 (М + Н)+ 1Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО, ТМС) Характерными сигналами (200 МГц, ДМСО, ТМС) Характерными сигналами являются Аг-Н & тимин-Н 6,82 - 8,18 (м, 20Н), СОявляются Аг-Н & тимин-Н 6,83 - 8,20 (м, 25Н), СОСН 2 4,51 -4,76 (м, 4Н), тимин-СН3 1,61 - 1,78 (м, СН 2 4,52 - 4,75 (м, 6Н), тимин-СН3 1,61 - 1,78 (м, 6Н) 9Н) 22) 5'-MMTr-T-P(ONPE)-T-P(OEt)2 26)5'-HO-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(OEt)2 Синтез осуществляют аналогично примеру 21 Синтез осуществляют аналогично примеру 4 из продукта примера 10 сложного диэтилового из продукта примера 25 5'-MMTr-T-P(ONPE)-Tэфира г\1-тимин-1-ил-ацетил-1\1-(2-гидрокси) этилаP(ONPE)-T-P(OEt)2 Продукт очищают хромато 39 44253 40 графией на силикагеле с применением в качестве P(ONPE)2 элюента смеси этилацетата, метанола и триэтиСинтез осуществляют аналогично примеру 17 ламина в соотношении 70 30 2 Выход 89% из продукта примера 3 сложного (2-(пнитрофенил) этил) моноэфира І\І-(г\І6-анизоил) Масс-спектр (ES+) 1283,1 (М + Н)+, 1305,0 (М цитозин-1 -ил-ацетил-І\І-(4+ Na+) 27) 5'-MMTr-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-Tметокситрифенилметокси) этиламинометанфосP(ONPE)-T-P(OEt)2 фоновой кислоты (триэтиламмониевой соли) и продукта примера 6 5'-HO-CAn-P(ONPE)-CAnСинтез осуществляют аналогично примеру 17 P(ONPE)2 Очищают хроматографией на силикаиз продукта примера 26 5'-HO-T-P(ONPE)-Tгеле с применением в качестве элюента смеси P(ONPE)-T-P(OEt)2 и продукта примера 15 сложноэтилацетата, метанола и триэтиламина в соотного (4-нитрофенил-этил)моноэфира N-тимин-і-илшении 80 191 Выход 66% ацетил-1\1-(4-метокситрифенилметокси)этиламинометанфосфоновой кислоты (триэтиламмониеМасс-спектр (ББА) 2155 (М + Н)+, 2161 (М + + вой соли) с добавкой 1,5 экв (в пересчете на приLi) , 2177 (М + Na)+ мер 23) 4-метоксипиридин-І\І-оксида Очищают 32) 5'-HO-CAn-P(ONPE)-CAn-P(ONPE)-CAnхромато-графией на силикагеле с применением в P(ONPE)2 качестве элюента смеси этилацетата, метанола и Синтез осуществляют аналогично примеру 4 триэтиламина сначала в соотношении 90 102, а из продукта примера 31 5'-MMTr-CAn-P(ONPE)затем 80 20 2 Выход 15% C An -P(ONPE)-C-P(ONPE) 2 Очищают хроматографией на силикагеле с применением в качестве Масс-спектр (ES+) 2007 (М + Н)+, 2029 (М + элюента смеси этилацетата, метанола и триэтиNa+) 1Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО, ТМС) Характерламина сначала в соотношении 85 15 1, а затем ными сигналами являются Аг-Н & тимин-Н 6,79 80 20 1 Выход 70% 8,21 (м, ЗОН), СО-СН2 4,53 - 4,87 (м, 8Н), тиминСНз 1,58-1,89 (м, 12Н) Масс-спектр (ББА) 1882 (М + Н)+, 1904 (М + Na)+ 28) 5'-НО-Т-Р(ОМРЕ)-Т-Р(ОМРЕ)-Т-Р(ОМРЕ)T-P(OEt)2 33) Сложный аллил-(2-(пнитрофенил)этил)диэфир г\І-(І\І6-анизоил)цитозинСинтез осуществляют аналогично примеру 4 1-ил-ацетил-ІЧ-(4из продукта примера 27 5'-MMTr-T-P(ONPE)-TметокситрифенилметокP(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(OEt)2 Продукт очищают си)этиламинометанфосфоновой кислоты хроматографией на силикагеле с применением в качестве элюента смеси этилацетата, метанола и Синтез осуществляют аналогично примеру 17 триэтиламина в соотношении 70 30 2 Выход 5 5 % из продукта примера 3 сложного (2-(пнитрофенил)этил)моноэфира І\І-(г\І6-анизоил) циМасс-спектр (ББА) 1735 (М + Н)+, 1757 (М + тозин-1-ил-ацетил-М-(4-метокситрифенилметокси) Na+) этиламинометанфосфоновой кислоты (триэти29) 5'-MMTr-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)2 ламмониевой соли) и аллилового спирта Продукт Синтез осуществляют аналогично примеру 17 очищают хроматографией на силикагеле с примеиз продукта примера 20 сложного ди(4нением в качестве элюента смеси этилацетата, нитрофенилэтил)эфира г\1-тимин-1-ил-ацетил-1\1метанола и триэтиламина в соотношении 95 5 1 (2-гидроксиэтил)аминометанфосфоновой кислоты и продукта примера 15 сложного (4Масс-спектр (ES+) 902,1 (М + Н)+, 924,1 (М + + нитрофенилэтил)моноэфира N-тимин-і-илNa) 1Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО, ТМС) 5 = 2,94 3,70 (м, 8Н, P-O-CH2-CH2-Ar + MMTr-O-CH2 + Nацетил-1\1-(4-метокситрифенилметокси) этиламиСН 2 + Р-СН2), 3,75 (с, ЗН, ОСНз), 3,86 (с, ЗН, нометанфосфоновой кислоты (триэтиламмониеОСНз), 4,10 - 4,60 (м, 4Н, Р-О-СН2), 4,79 & 4,84 вой соли) Очищают хроматографией на силика(каждый с, шир , 2Н, СО-СН2), 5,09 - 5,39 (м, 2Н, геле с применением в качестве элюента смеси Н2С=СН-), 5,71 - 6,00 (м, 1Н, Н2С=СН-), 6,83 - 8,19 этил-ацетата, метанола и триэтиламина сначала в (м, 24Н, Аг-Н, цитозинил-Н), 11,03 (с, шир, 1Н, соотношении 100 0 1, а затем 90 10 1 Выход 87% NH) Масс-спектр (ББА) 1356,2 (М + 2Li-H)+ 1 HЯМР (200МГц, ДМСО, ТМС) Характерными сигна34) Сложный аллил-(2-(плами являются Аг-Н & тимин-Н 6,82 - 8,18 (м, нитрофенил)этил)диэфир г\І-(І\І6-анизоил)цитозин28Н), СО-СН2 4,50-4,71 (м, 4Н), тимин-СН3 1,591-ил-ацетил-ІЧ-(21,78 (м, 6Н) гидрокси)этиламинометанфосфоновой кислоты 30) 5'-HO-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)2 Синтез осуществляют аналогично примеру 4 из продукта примера 33 сложного аллил-(2-(пСинтез осуществляют аналогично примеру 4 нитрофенил)этил)диэфира І\І-(г\І6-анизоил) цитоиз продукта примера 29 5'-MMTr-T-P(ONPE)-Tзин-1-ил-ацетил-ІЧ-(4-метокситрифенилметокси) P(ONPE)2 Продукт очищают хроматографией на этиламинометанфосфоновой кислоты Продукт силикагеле с применением в качестве элюента очищают хроматографией на силикагеле с примесмеси этилацетата, метанола и триэтиламина нением в качестве элюента смеси этилацетата, сначала в соотношении 85 15 1, а затем 80 20 1 метанола и триэтиламина в соотношении 94 5 1 Выход 78 % Выход 83% Масс-спектр (ES+) 1072,7 (М + Н)+ 1Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО, ТМС) Характерными сигналами Масс-спектр (ES+) 630,2 (М + Н)+, 1Н-ЯМР являются Аг-Н & тимин-Н 7,08 - 8,20 (м, 14Н), СО(200МГц, ДМСО, ТМС) 5 = 3,02 (т, 2Н, Р-О-СН2СН 2 4,52 - 4,80 (м, 4Н), тимин-СН3 1,70 (с, шир , СН2-Аг), 3,37 - 3,72 (м, 4Н, НО-СН2-СН2), 3,86 (с, 6Н) ЗН, ОСНз), 3,91 (д, J = 11 Гц, 2Н, Р-СН2) 4,22 (дт, 2Н, Р-О-СН2-СН2-Аг), 4,40 (дд, 2Н, О-СН231) 5'-MMTr-CAn-P(ONPE)-CAn-P(ONPE)-CAn 42 41 44253 CH=CH2), 4,78 & 5,01 (м, 2Н, СО-СН2), 5,11 - 5,33 танола и триэтиламина в соотношении 70 30 2 (м, 2Н, Н2С=СН-), 5,71 - 6,00 (м, 1Н, Н2С=СН-), Выход 55% + 6,99 - 8,21 (м, 14Н, Аг-Н, цитозинил-Н), 11,03 (с, Масс-спектр (ББА) 2209 (М + Na) шир, 1Н, NH) 40) 5'-НО-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-ТP(OEt)2 35) Сложный аллил-(2-(пнитрофенил)этил)диэфир г\1-тимин-1-ил-ацетил-1\14,0 мг (0,00183 ммоль) продукта примера 39 (4-метокситрифенилметокси) этиламинометан5'-HO-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-Tфосфоновой кислоты P(ONPE) -T-P(OEt)2 растворяют в 1,1 мл 0,5молярного раствора 1,8-диазабицикло[5 4 0]ундецСинтез осуществляют аналогично примеру 17 7-ена в пиридине и перемешивают в течение 24 из продукта примера 15 сложного 4часов при комнатной температуре Реакционную (нитрофенилэтил)моноэфира N-тимин-і-илсмесь упаривают в вакууме и остаток несколько ацетил-1\1-(4-метокситрифенилметокси) этиламираз перемешивают с толуолом Растворитель нометанфосфоновой кислоты (триэтиламмониеудаляют с помощью шприца, остаток еще раз певой соли) и аллилового спирта Продукт очищают ремешивают с пентаном и растворитель еще раз хроматографией на силикагеле с применением в удаляют шприцем Продукт сушат в вакууме Выкачестве элюента смеси этилацетата, метанола и ход 4 мг сильно гигроскопического порошка триэтиламина в соотношении 97 3 2 Выход 100% Масс-спектр (ББА) 805,3 (М + Na)+ Масс-спектр (ES-) 1589,7 (N-H), 1611,8 (М + Na-2H) 36) Сложный аллил-(2-(пнитрофенил)этил)диэфир г\1-тимин-1-ил-ацетил-г\141) 5'-MMTr-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-T(2-гидрокси) этиламинометанфосфоновой кислоты P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(OEt)2 Синтез осуществляют аналогично примеру 4 а) Синтез осуществляют аналогично примеру из продукта примера 35 сложного аллил-(2-(п17 из продукта примера 39 5'-HO-T-P(ONPE)-Tнитрофенил)этил) диэфира N-тимин-і-ил-ацетилP(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(OEt)2 и про|\|-(4-метокситрифенилметокси) этиламинометандукта примера 15 сложного 4фосфоновой кислоты Продукт очищают хромато(нитрофенилэтил)моноэфира N-тимин-і-илграфией на силикагеле с применением в качестве ацетил-1\1-(4-метокситрифенилметокси) этиламиэлюента смеси этилацетата, метанола и триэтинометанфосфоновой кислоты (триэтиламмониеламина в соотношении 90 10 2 Выход 86% вой соли) Очищают хроматографией на силикагеле с применением в качестве элюента смеси Масс-спектр (ES+) 511,1 (М + Н)+этилацетата, метанола и триэтиламина сначала в 37) 5'-ММТг-Т-Р(ОМРЕ)-Т-Р(ОМРЕ) (Оаллил) соотношении 80 20 2, а затем 70 30 2 Синтез осуществляют аналогично примеру 17 из продукта примера 36 сложного аллил-(2-(пМасс-спектр (ББА) 2934 (М + Na)+, 2957 (М + нитрофенил)этил)диэфира N-тимин-і-ил-ацетил2Na-H)+, 2978 (М + 3Na-2H)+ |\|-(2-гидрокси)этиламинометанфосфоновой киб) Синтез осуществляют аналогично примеру слоты и продукта примера 15 сложного 417 из продукта примера 28 5'-HO-T-P(ONPE)-T(нитрофенилэтил) моноэфира N-тимин-і-илP(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(OEt)2 и продукта примера ацетил-1Ч-(442 5'-MMTr-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-OH Очищают метокситрифенилметокхроматографией на силикагеле с применением в качестве элюента смеси этилацетата, метанола и си)этиламинометанфосфоновой кислоты (триэтитриэтиламина сначала в соотношении 80 20 2, а ламмониевой соли) Очищают хроматографией на затем 70 30 2 Целевую фракцию упаривают в силикагеле с применением в качестве элюента вакууме, после чего растирают вместе с пентаном смеси этилацетата, метанола и триэтиламина в и простым диэтиловым эфиром Масс-спектр см соотношении 90 10 2 Выход 90% пункт а) Масс-спектр (ББА) 1257,3 (М + Na)+ 38) 5'-MMTr-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-T42) 5'-MMTr-T-P(ONPE)-T-P(ONPE) (ОН) P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(OEt)2 24,7 мг (0,02 ммоль) продукта примера 37 5'Синтез осуществляют аналогично примеру 17 ММТг-Т-Р(ОЫРЕ)-Т-Р(ОМРЕ)(Оаллил) растворяют из продукта примера 28 5'-HO-T-P(ONPE)-Tвместе с 16,2 мг (0,12 ммоль) гидрокарбоната диP(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(OEt)2 и продукта примера этиламмония в 2 мл абсол дихлорметана При 15 сложного 4-(нитрофенилэтил) моноэфира Nтемпературе 15 - 20°С в течение 2 минут прикатимин-1-ил-ацетил-1\1-(4-метокситрифенилметокси) лывают раствор 13,3мг (0,012 ммоль) тетракис этиламинометанфосфоновой кислоты (триэти(трифенилфосфин)-палладия (0) и 2,1 мг (0,008 ламмониевой соли) Очищают хроматографией на ммоль) трифенилфосфина в 2 мл абсол дихлорсиликагеле с применением в качестве элюента метана Смесь перемешивают в течение 30 минут смеси этилацетата, метанола и триэтиламина в при комнатной температуре Очищают хроматосоотношении 80 20 2 Выход 57% графией на силикагеле с применением в качестве элюента смеси этилацетата, метанола и триэтиМасс-спектр (ББА) 2460 (М + Н)+, 2482 (М + ламина сначала в соотношении 80 20 1, а затем Na)+ 60 40 1 Продукт упаривают в вакууме, остаток 39) 5'-HO-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-Tрастирают вместе с пентаном, затом смесью P(ONPE)-T-P(OEt)2 этилацетата и простого диэтилового эфира, потом Синтез осуществляют аналогично примеру 4 еще раз пентаном, после чего сушат в вакууме из продукта примера 38 5'-MMTr-T-P(ONPE)-TВыход 57 % P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(OEt)2 Очищают хроматографией на силикагеле с применеМасс-спектр (ES-) 1193,6 (N-H)1 1Н-ЯМР (200 нием в качестве элюента смеси этилацетата, меМГц, ДМСО, ТМС) Характерными сигналами яв 43 44253 44 ляются 6 = 1,67 & 1,72 (каждый с, ЗН, Т-СН3), 4,60 затем 80 20 2 Переработка, очистка и характери& 4,82 (каждый с, 2Н, СО-Ш2), 6,83-8,19 (м, 24Н, зация осуществляются согласно примеру 27 Ar-H, T-H) 47) 5'-MMTr-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-T43) 5'-HO-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-TP(ONPE)T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(OEt)2 P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(OEt)2 Синтез осуществляют аналогично примеру 17 из продукта примера 26 5'-HO-T-P(ONPE)-TСинтез осуществляют аналогично примеру 4 P(ONPE)-T-P(OEt)2 и продукта примера 456) 51из продукта примера 41 5'-MMTr-T-P(ONPE)-TMMTr-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)(OH) P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-TПродукт очищают хроматографией на силикагеле P(0Et)2 Потом реакционную смесь сгущают, остас применением в качестве элюента смеси этилток три раза упаривают вместе с толуолом и пеацетата, метанола и триэтиламина в соотношении ремешивают сначала со смесью этилацетата и 80 20 2 Продукт упаривают в вакууме, упаривают простого диэтилового эфира, а затем пентаном вместе с толуолом и очищают препаративной Остаток сушат в вакууме Масс-спектр (ББА) 2662 жидкостной хроматографией под давлением на (М + Na)+ силикагеле марки RP8 LiChrospher60 с примене44) 5'-НО-Т-Р(ОМРЕ)-Т-Р(ОМРЕ) (Оаллил) нием в качестве элюента Синтез осуществляют аналогично примеру 4 из продукта примера 37 5'-ММТгсмеси воды и ацетонитрила в соотношении 1 1 с добавкой 0,1% ацетата аммония При этом Т-Р(ОМРЕ)-Т-Р(ОМРЕ) (Оаллил) Продукт скорость подачи элюента составляет 1 мл/мин Rf очищают хроматографией на силикагеле с приме= 12,97 мин нением в качестве элюента смеси этилацетата, метанола и триэтиламина сначала в соотношении 48) 5'-НО-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т90 10 1, а затем 80 20 1 P(OH)-T-P(OEt)2 Выход 87 % а) 5'-HO-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-TМасс-спектр (ББА) 963,0 (М + Н)+, 985,1 (М + P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(OEt)2 Na)+ Синтез осуществляют аналогично примеру 4 из продукта примера 47 5'-MMTr-T-P(ONPE)-T45) 5'-ММТг-Т-Р(ОМРЕ)-Т-Р(ОМРЕ)-ТP(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-TР(ОМРЕ) (ОН) P(OEt)2 Продукт очищают хроматографией на а) 5'-ММТг-Т-Р(ОМРЕ)-Т-Р(ОМРЕ)-Т-Р(ОМРЕ) силикагеле с применением в качестве элюента (Оаллил) смеси этилацетата, метанола и триэтиламина Синтез осуществляют аналогично примеру 17 сначала в соотношении 70 30 2, а потом 60 40 2 из продукта примера 44 5'-НО-Т-Р(ОМРЕ)-ТПродукт упаривают в вакууме, остаток перемешиР(ОМРЕ) (Оаллил) и продукта примера 15 сложновают сначала с пентаном, потом с простым диэтиго (4-нитрофенил-этил)моноэфира N-тимин-і-илловым эфиром и сушат в вакууме Выход 100% ацетил-1\1-(4-метокситрифенилметокси)этилМасс-спектр (ББА) 2662 (М + Na)+, 2684 (М + 2Naаминометанфосфоновой кислоты (триэтиламмоН)+, 2706 (М + 3N3-2H)+ ниевой соли) Очищают хроматографией на силикагеле с применением в качестве элюента смеси б) 5'-НО-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Тэтил-ацетата, метанола и триэтиламина сначала в P(OH)-T-P(OEt)2 соотношении 9010 1, а затем 85 15 1 Выход 55 Продукт примера 48а) 5'-HO-T-P(ONPE)-T% P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-TP(OEt)2 аналогично примеру 40 подвергают взаиб) 5'-MMTr-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-Tмодействию с 1,8-диазабицикло[5 4 0]ундец-7P(ONPE)(OH) еном и перерабатывают Масс-спектр (ES-) 1892 5'-MMTr-T-P(OMPE)-T-P(OMPE)-T(N-HT, 1915 (М + Na-2H)' Р(ОМРЕ)(Оаллил) (продукт примера 45а)) описанным в примере 42 образом подвергают взаимо49) 5'-MMTr-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-Tдействию с тетракис (трифенилфосфин) палладиP(ONPE)T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-Tем (0) Продукт очищают хроматографией на P(OEt)2 силикагеле с применением в качестве элюента Синтез осуществляют аналогично примеру 17 смеси этилацетата, метанола и триэтиламина из продукта примера 28 5'-HO-T-P(ONPE)-Tсначала в соотношении 80 20 2, а затем 70 30 2 P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(OEt)2 и продукта примера Продукт упаривают в вакууме и остаток растирают 456) S'-MMTr-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-Tвместе с пентаном и простым диэтиловым эфиP(ONPE)(OH) Продукт очищают хроматографией ром на силикагеле с применением в качестве элюента смеси этилацетата, метанола и три-этиламина Выход 98 % сначала в соотношении 80 20 2, а затем 70 30 2 Масс-спектр (ES+, LiCI) 1654,1 (М + Li+) Продукт упаривают в вакууме, упаривают вместе с 46) 5'-ММТг-Т-Р(ОМРЕ)-Т-Р(ОМРЕ)-Ттолуолом и очищают препаративной жидкостной Р(ОМРЕ)-Т-Р(ОЕ1)2 хроматографией под давлением на силикагеле Синтез осуществляют аналогично примеру 1 марки RP8 LiChrospher60 с применением в качестиз продукта примера 10 сложного диэтилового ве элюента смеси воды и ацетонитрила в соотноэфира г\1-тимин-1-ил-ацетил-1\1-(2шении 1 1 с добавкой 0,1% ацетата аммония При гидрокси)этиламинометан-фосфоновой кислоты и этом скорость подачи элюента составляет 1 продукта примера 456) 5'-MMTr-T-P(ONPE)-Tмл/мин Rf = 15,24 мин Масс-спектр (ББА) 3386 P(ONPE)-T-P(ONPE)(OH) Продукт очищают хро(М + Na)+, 3409 (М + 2Na-H)+ матографией на силикагеле с применением в качестве элюента смеси этилацетата, метанола и 50) 5'-НО-Т-Р(ОМРЕ)-Т-Р(ОМРЕ)-Т-Р(ОМРЕ)триэтиламина сначала в соотношении 90 102, а T-P(OMPE)-T-P(OMPE)-T-P(OMPE)-T-P(OEt)2 45 44253 46 Синтез осуществляют аналогично примеру 4 ной температуры Остаток подают в этилацетат, из продукта примера 49 5'-MMTr-T-P(ONPE)-Tдважды промывают насыщенным раствором биP(ONPE)-T-P(ONPE)T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-Tкарбоната натрия, а потом-раствором хлористого P(ONPE)-T-P(OEt)2 Для очистки упаривают в ванатрия, сушат, фильтруют и упаривают в вакууме кууме, три раза упаривают вместе с толуолом, Продукт очищают хроматографией на силикагеле остаток перемешивают сначала с пентаном, потом с применением в качестве элюента сначала смеси с простым диэтиловым эфиром и сушат в вакууме этил-ацетата и триэтиламина в соотношении 100 Выход > 90% Масс-спектр (ББА) 3114 (М + Na)+ 0,2, а затем смеси этилацетата, метанола и триэтиламина 90 10 2 Выход 0,8 г 51) 5'-НО-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-ТP(OH)-T-P(OH)-T-P(OEt)2 Масс-спектр (ББА/LiCI) 523,4 (М + 2Li-H)+ 1 HЯМР (200 МГц, ДМСО, ТМС) 5 = 1,38 (с, 27Н, tBuПродукт примера 50 5'-НО-Т-Р(ОМРЕ)-ТН), 2,40 (т, 6Н, N-CH2), 2,99 (т, 6Н, N-CH2), 3,25 (т, P(OMPE)-T-P(OMPE)T-P(OMPE)-T-P(ONPE)-T6Н, N-CH2), 6,81 (т, шир , ЗН, NH) P(ONPE)-T-P(OEt)2 аналогично примеру 40 подвергают взаимодействию с 1,8б) Сложный ди (2-(п-нитрофенил) этил) эфир диазабицикло[5 4 0]ундец-7-еном и перерабаты2-(І\Г-трет -бутилоксикарбонил-амино) этиламиновают Масс-спектр (ES-) 2196 (N-HT, 2218 (М + метанфосфоновой кислоты Na-2H)' Продукт примера 54а), 1 -метилимино-2-(І\Гтрет-бутилоксикарбониламино) этан в виде три52) 5'-MMTr-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-Tмера, аналогично примеру 1е) подвергают взаиP(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-Tмодействию с продуктом примера 1д) ди (2-(4P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(OEt)2 нитрофенил)этил)фосфитом Продукт очищают Синтез осуществляют аналогично примеру 17 хроматографией на силикагеле с применением в из продукта примера 48а) 5'-HO-T-P(ONPE)-Tкачестве элюента сначала смеси толуола, этилP(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-Tацетата и триэтиламина в соотношении 20 80 0,2, P(OEt)2 и продукта примера 456) 5f-MMTr-Tзатем смеси этилацетата и триэтиламина в соотP(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)(OH) Продукт ношении 100 0,2, а потом смеси этилацетата, очищают хроматографией на силикагеле с примеметанола и триэтиламина в соотношении нением в качестве элюента смеси этил-ацетата, 0,5 5 0,2 Выход 25 % метанола и триэтиламина сначала в соотношении 70 30 2, азатем 60 40 2 Продукт упаривают в ваМасс-спектр (ES+/LCI) 553,3 (М + Н)+, 559,3 кууме, упаривают вместе с толуолом и очищают (М + Li)+ 1Н-ЯМР (200 МГц, ДМСО, ТМС) 5 = 1,37 препаративной жидкостной хроматографией под (с, 9Н, tBu-H), 2,83 (д, J = 12 Гц, 2Н, Р-СН2), 2,55 (т, давлением на силикагеле марки RP8 4Н, Аг-СН2), 2,90-3,09 (м, 4Н, N-CH2-CH2-N), 4,16 LiChrospher60 с применением в качестве элюента (дт, 4Н, РО-СН2), 7,52 & 8,15 (каждый д, 8Н, Аг-Н) смеси воды и ацетонитрила в соотношении 1 1 с 55) Сложный ди (2-(п-нитрофенил)этил)эфир добавкой 0,1% ацетата аммония При этом ског\|-тимин-1-ил-ацетил-г\1-(2-г\Г-трет рость подачи элюента составляет 1 мл/мин Rf = бутилоксикарбонилами23,95 мин но)этиламинометанфосфоновой кислоты 53) 5'-НО-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)Продукт примера 546), сложный ди (2-пT-P(OH)-T-P(OH)-T-P(OH)-T-P(OH)-T-P(OEt)2 нитрофенил)этил)эфир 2-(І\Г-трет -буСинтез осуществляют аналогично примеру 4 тилоксикарбониламииз продукта примера 52 5'-MMTr-T-P(ONPE)-Tно)этиламинометанфосфоновой кислоты, аналоP(ONPE)-T-P(ONPE)T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-Tгично примеру 8 подвергают взаимодействию с P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(OEt)2 Для тимидин-1-ил-уксусной кислотой Выход 8 6 % очистки упаривают в вакууме, три раза упаривают Масс-спектр (ББА/LiCI) 725,3 (М + Li)+ 1 Hвместе с толуолом, остаток перемешивают сначаЯМР (200 МГц, ДМСО, ТМС) 5 = 1,42 (с, 9Н, tBuла с пентаном, потом с простым диэтиловым эфиН), 1,91 (с, ЗН, Т-СНз), 2,99-3,58 (м, 8Н, Р-0-СН2ром и сушат в вакууме Выход > 90 % СН2-Аг & N-CH2-CH2-N), 3,75 (д, J = 12 Гц, 2Н, РСН2), 4,06-4,38 (м, 4Н, РО-СН2), 7,37 & 8,15 (кажб) 5'-НО-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Тдый д, 8Н, Аг-Н) P(OH)-T-P(OH)-T-P(OH)-T-P(OH)-T-P(OEt)2 Аналогично примеру 40 продукт примера 53а) 56) Взаимодействие с ДНК УФ-кривая плав5'-HO-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-Tления P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-TВзаимодействие предлагаемых соединений с P(ONPE)-T-P(OEt)2 подвергают взаимодействию с комплементарными нуклеиновыми кислотами по1,8-диазабицикло[5 4 0]ундец-7-еном и перерабаясняют на примере УФ-кривой плавления продуктывают Масс-спектр (ES-) 2802 (N-HT, 2825 (М + та примера 536) 5'-НО-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)ТNa-2H) Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-ТP(OEt)2 в присутствии (dA)9 5*-НО-Т-Р(ОН)-Т54) Сложный ди (2-(п-нитрофенил)этил)эфир Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)2-(І\Г-трет -бутилоксикарбонил-амино) этиламиноT-P(OH)-T-P(OEt)2 и (dA)9 подают в 1 мл буфера метанфосфоновой кислоты (1-м хлористого натрия, 20 ммоль хлористого а) 1-метилимино-2-(1\Г-трет магния, 10 ммоль буфера HEPES, рН 7,5) с полубутилоксикарбониламино)этан в виде тримера 2,0 чением оптической плотностью 0 3 Изменение г (12,5 ммоль) 2-амино-1-(1\Г-трет экстинкции при 260 нм регистрируется в зависибутилоксикарбониламино)этана, растворенного в мости от температуры Результаты приведены на 8 мл метанола, при охлаждении льдом смешиварис 1 На основе полученной кривой плавления ют с 1,52 мл (18,72 ммоль) 37 %-ного формальдеопределяют значение Тт = около 23°С гида и перемешивают в течение часа при комнат 47 44253 48 57) Взаимодействие с ДНК Опыт с применеПродукт очищают хроматографией на силикагеле нием геля с применением в качестве элюента смеси дихлорметана, метанола и триэтиламина в соотноВзаимодействие предлагаемых соединений с шении 98 2 0,25 Выход 46% Масс-спектр комплементарными нуклеиновыми кислотами по(ББА/LiCI) 1071,4 (М + Li)+ ясняют путем гибридизации продукта примера 536) 5'-НО-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т60) Сложный [2-(п-нитрофенил)этил]5'P(OH)-T-P(OH)-T-P(OH)-T-P(OH)-T-P(OEt)2 в притимидин] диэфир г\1-тимин-1-ил-ацетил-г\1-(4сутствии (dA)g в опыте с применением геля Для метокситрифенилметокси) этиламинометанфосэтого 5'-НО-Т-Р(ОН)-Тфоновой кислоты 64 мг (0,06 ммоль) продукта примера 59, сложного [2-(п-нитрофенил)этил]5'-(3'Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Тлевулоил-тимидин] диэфира N-тимин-і-ил-ацетилP(OH)-T-P(OH)-T-P(OEt)2 и (dA)9, каждый в от|\|-(4-метокситрифенил-метокси) этиламиномедельности или в виде смеси в соотношении 1 1,1 танфосфоновой кислоты, растворяют в 0,5 мл 2, 1 5 и 1 10 наносят на неденатурирующий подиоксана К раствору добавляют 9 мг (0,23 ммоль) лиакриламидный гель (20%, рабочий буфер боргидрида натрия в 0,12 мл воды и перемеши1хТВЕ, 10 ммоль хлористого магния) и определявают 20 минут при комнатной температуре Расют характеристику веществ Результаты приведетворитель упаривают в вакууме, остаток подают в ны на Рис 2 (dA)g протекает быстрее, чем 5'-НОдихлорметан, экстрагируют водой и сушат ПроТ-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Тдукт очищают хроматографией на силикагеле с P(OH)-T-P(OH)-T-P(OH)-T-P(OEt)2, в смеси в соотприменением в качестве элюента смеси дихлорношении 1 1 оба компонента почти не видны, зато метана, метанола и триэтиламина в соотношении образовалась более медленная полоса, соответ92 8 0,5 Выход 72% Масс-спектр (ББА/LiCI) 973,4 ствующая комплексу двух компонентов В смеси в (М + Li)+, 979,4 (М + 2Li-H)+, 985,4 (М + 3Li-2H)+ соотношении 1 2 (dA)g больше не видно, зато новая полоса вырисовывается тем более четко То 61) Сложный [2-(п-нитрофенил)этил]-[5'же самое относится к смесям в соотношении 5 1 тимидин-(3'-(цианоэтил-1\1, Nили же 10 1, в которых дополнительно виден знадиизопропилфосфорамидит] диэфир N-тимин-ічительный избыток S'-HO-T-PiOH)-P(OH)-T-P(OH)ил-ацетил-1\1-(4-метокситрифеТ-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Тнилметокси)этиламинометанфосфоновой кислоты P(OEt)2 31 мг (0,032 ммоль) продукта примера 60, сложного [2-(п-нитрофенил)этил]-[5'тими58) 5'-ММТг-Т-Р(ОМРЕ)-Т-Р(Оэтил)2 [см также дин]диэфира г\1-тимин-1-ил-ацетил-г\1-(4пример 21, альтернативные синтезы] а) 8,44 мг (10 мкмоль) продукта примера 15, метокситрифенилметоксложного (4-нитрофенил- этил) моноэфира Nси)этиламинометанфосфоновой кислоты, дважды тимин-1-ил-ацетил-1\1-(4-метокситрифенилметокси) упаривают вместе с абсол ацетонитрила и расэтиламинометанфосфоновой кислоты (триэтитворяют в 0,4 мл абсол тетраги дрофу рана Для ламмониевой соли), 3,77 мг (10 мкмоль) продукта этого сна чала добавляют 12,4 мг (0,096 ммоль) примера 10, сложного диэтилового эфира Nдиизопропилэтиламина, а затем 9,8 мг (0,045 тимин-1-ил-ацетил-1\1-(2-гидрокси) этиламиномеммоль) цианоэтил-хлортанфосфоновой кислоты, и 64,6 мг (500 мкмоль) диизопропилфосфорамидита Перемешивают в N-этилдиизопропиламина растворяют в 0,3 мл течение 3 часов, фильтруют и упаривают в вакууабсол N.N-диметилфорамида К раствору добавме Выход 63% ляют 44,2 мг (100 мкмоль) гексафторфосфата Масс-спектр (ББА/LiCI) 1173,3 (М + Li)+, бензотриазол-илокси)трис (диметиламино) фос1180,4 (М + 2Li-H)+, 1186,4 (М + 3Li-2H)+ фония и перемешивают 24 часа при комнатной 62) Сложный ди[2-(п-нитрофенил)этил)эфир температуре В результате тонкослойной хроматоММ9-(О6-дифенилкарбамоил-М2-ацетилгуанин]графии с применением в качестве элюента смеси ацетил-ІЧ-(4этилацетата, метанола и триэтиламина в соотнометокситрифенилметокси)этиламинометаншении 100 20 2, Rf = 0,5, выход составляет около фосфоновой кислоты 70% Синтез осуществляют аналогично примеру 2 путем взаимодействия продукта примера 1 е), б) Аналогично примеру 58а), однако с примесложного ди (2-(п-нитрофенил)этил)эфира N-(4нением 30 мкмоль гексафторфосфата (О-(7метокситрифенилметокси) этиламинометанфосазабензотриазол-1 -ил)-І\І, N, N', N'фоновой кислоты, с О6-дифенилкарбамоил-М2тетраметилурония вместо 100 мкмоль гексафторацетилгуанин-уксусной кислотой Продукт очищафосфата бензотриазол-илокси)трис (диметиламиют хроматографией на силикагеле с применением но)-фосфония В результате тонкослойной хромав качестве элюента смеси этилацетата и триэтитографии выход составляет около 65% ламина в соотношении 98 2 59) Сложный [2-(п-нитрофенил) этил]5'-(3'левулоил-тимидин]диэфир N-тимин-і-ил-ацетилВыход 87% |\|-(4-метокситрифенилметокси) этиламинометанМасс-спектр (ББА/LiCI) 1154,8 (М + Н)+, 1160,7 фосфоновой кислоты (М + Li)+ Синтез осуществляют аналогично примеру 17 63) Сложный ди[2-(п-нитрофенил)этил)эфир путем взаимодействия продукта примера 15, |\|-[М9-(М4-анизоиладенин]ацетил-г\1-(4сложного (4-нитрофенилэтил) моноэфира Nметокситрифенилметоктимин-1-ил-ацетил-1\1-(4-метокситрифенилметокси) си)этиламинометанфосфоновой кислоты этиламинометанфосфоновой кислоты (триэтиСинтез осуществляют аналогично примеру 2 ламмониевой соли), с З'-левулоил-тимидином путем взаимодействия продукта примера 1 е), 49 44253 50 сложного ди (2-(п-нитрофенил)этил)эфира N-(4из продукта примера 66 5'-ММТг-САп-Р(ОМРЕ)-САпмето кс итр и феР(ОМРЕ)(Оаллил) Продукт очищают хроматогранил метокси)этиламинометанфосфоновой кислофией на силикагеле с применением в качестве ты, с М4-анизоиладенин-уксусной кислотой Проэлюента смеси этилацетата, метанола и триэтидукт очищают хроматографией на силикагеле с ламина в соотношении 80 19 1 Выход 55% Массприменением в качестве элюента смеси дихлорспектр (ББА) 1201,3 (М + Н)+, 1223,3 (М + Na)+ метана, метанола и триэтиламина в соотношении 68) 5'-ММТг-САп-Р(ОМРЕ)-САп-Р(ОМРЕ)-САп95 4 1 Выход 82% Р(ОМРЕ)(Оаллил) Масс-спектр (ES+) 1035,7 (М + Н)+ 1Н-ЯМР Синтез осуществляют аналогично примеру 17 (200 МГц, ДМСО, ТМС) 5 = 2,93 (т, 4Н, Р-0-СН2путем взаимодействия продукта примера 3, сложСН2-Аг), 3,09 (т, 2Н, ММТг-О-СН2), 3,23-3,75 (м, 4Н, ного (2-(п-нитрофенил)этил)моноэфира N-(M6Р- СН 2 + N-CH2), 3,75 (с, ЗН, ОСН3), 3,87 (с, ЗН, анизо-ил)цитозин-1-ил-ацетил-1\1-(4ОСНз), 4,08 (дт, 4Н, Р-0-СН2), 5,28-5,42 (м, 2Н, СОметокситрифенилметокси)этиламинометанСН2), 6,81-8,20 (м, 28Н, Ar-H, A-H), 11,00 (с, шир, фосфоновой кислоты (триэтиламмониевой соли) и 1Н, NH) продукта примера 67, 5'-НО-САп-Р(ОМРЕ)-САпР(ОМРЕ)(Оаллил) Очищают хроматографией на 64) Сложный моно (2-(псиликагеле с применением в качестве элюента нитрофенил)этил)эфир N-[N9-(N4смеси этилацетата, метанола и триэтиламина в анизоиладенин]ацетил-І\І-(4соотношении 80 201 Выход 58% Масс-спектр метокситрифенилметок(ББА) 2046 (М + Н)+, 2068 (М + Na)+ си)этиламинометанфосфоновой кислоты Синтез осуществляют аналогично примеру 3 69) 5'-MMTr-CAn-P(ONPE)-CAn-P(ONPE)-CAnиз продукта примера 63, сложного ди (2-(пP(ONPE)(OH) нитрофенил)этил)эфира N-[N9-(N4Синтез осуществляют аналогично примеру 42 анизоиладенин]ацетил-І\І-(4-метокиз продукта примера 68 5'-ММТг-САп-Р(ОМРЕ)-САпситрифенилметокси) этиламинометанфосфоновой Р(ОМРЕ)-САп-Р(ОМРЕ)(Оаллил) Очищают хромакислоты Продукт очищают хроматографией на тографией на силикагеле с применением в качесиликагеле с применением в качестве элюента стве элюента смеси этилацетата, метанола и трисмеси этил-ацетата, метанола и триэтиламина в этиламина в соотношении 60 38 2 соотношении 65 35 2 Выход 52% Масс-спектр Выход 66 % (ББА/LiCI) 874,3 (М + 2Li-H)+ Масс-спектр (ББА) 2027 (М + Na)+, 2049 (М + 2Na-H)+ 65) Сложный ди (2-(п-нитрофенил)этил) эфир |\|-тимин-1-ил-ацетил-г\1-(2-метокси) этиламиноме70) 5'+MMTr-CAn-P(ONPE)-CAn-P(ONPE)- C An танфосфоновой кислоты P(ONPE)CAn-P(ONPE)CAn-P(ONPE)CAnP(ONPE)2 Синтез осуществляют аналогично примеру 2 путем взаимодействия сложного ди (2-(пСинтез осуществляют аналогично примеру 17 нитрофенил)этил)эфира N-(2путем взаимодействия продукта примера 69 5'MMTr-CAn-P(ONPE)-CAn-P(ONPE)-CAn-P(ONPE)(OH) метокси)этиламинометанфосфоновой кислоты и продукта примера 32 5'-НО- CAn-P(ONPE)- САп(полученного аналогично примеру 1 исходя из 2P(ONPE)- CAn-P(ONPE)2 Очищают хроматографиметоксиэтиламина), с формальдегидом, ди (2-(4ей на силикагеле с применением в качестве элюнитрофенил)этил)фосфит) и тимидин-1-илента смеси этилацетата, метанола и триэтиламиуксусной кислотой Продукт очищают хроматограна в соотношении 70 30 2 фией на силикагеле с применением в качестве элюента смеси этилацетата и метанола в соотноВыход 58 % шении 90 10 Выход 64% Масс-спектр (ББА/LiCI) Масс-спектр (ББА) 3892 (М + Na)+, 3914 (М + + 640,3 (М + Li) 2Na-H)+ Ап Ап 66) 5'-ММТг-С -Р(ОМРЕ)-С -Р(ОМРЕ) (Оал71) 5'-MMTr-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-TP(ONPE)-CAn-P(ONPE)-CAn-P(ONPE)-CAn-P(ONPE)2 лил) Синтез осуществляют аналогично примеру 17 Синтез осуществляют аналогично примеру 17 путем взаимодействия продукта примера 45 5'путем взаимодействия продукта примера 3, сложMMTr-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)(OH) и ного (2-(п-нитрофенил)этил)моноэфира N-(N6продукта примера 32 5'-HO-CAn-P(ONPE)-CAnанизо-ил)цитозин-1-ил-ацетил-1\1-(4P(ONPE)-CAn-P(ONPE)2 Очищают хроматографиметокситрифенилметокей на силикагеле с применением в качестве элюси)этиламинометанфосфоновой кислоты (триэтиента смеси этилацетата, метанола и триэтиламиламмониевой соли) и продукта примера 34, сложна в соотношении 60 40 2 Продукт упаривают в ного аллил-(2-(п-нитрофенил)этил)диэфира N-(M6вакууме и очищают препаративной жидкостной анизоил)цитозин-1-ил-ацетил-1\1-(2хроматографией под давлением на силикагеле гидрокси)этиламинометанфосфоновой кислоты марки RP8 LiChrpspher60 с применением в качестПродукт очищают хроматографией на силикагеле ве элюента смеси воды и ацетонитрила в соотнос применением в качестве элюента смеси этилшении 1 1 с добавкой 0,1% ацетата аммония При ацетата, метанола и триэтиламина в соотношении этом скорость подачи элюента составляет 1 85 14 1 мл/мин R f = 16,6 мин Масс-спектр (ББА) 3534 (М Выход 36% + + Na)+, 3556 (М + 2Na-H)+ Масс-спектр (ББА) 1474 (М + Н) , 1496 (М + Na)+ 67)5'-НО-САп-Р(ОМРЕ)-САп-Р(ОЫРЕ)(Оаллил) Синтез осуществляют аналогично примеру 4 72) 5'-ММТг-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-С Н)-САп-Р(ОН)-САп-Р(ОН)2 Синтез осуществляют аналогично примеру 40 44253 51 из 2 мг продукта примера 71 5'-MMTr-T-P(ONPE)T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-CAn-P(ONPE)-CAn-P(ONPE)CAn-P(ONPE)2 Масс-спектр (ES-) 2466,4 (N-H) 73) 5'-MMTr-T-P(OH)-T-P(OH)-T-P(OH)-CP(OH)-C-P(OH)-C-P(OH)2 Приблизительно 1 мг продукта примера 72, 5'ММТг-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)-САп-Р(ОН)-САпР(ОН)-САп-Р(ОН)2 смешивают с 3 мл 33%-ной гидроокиси аммония и перемешивают в течение 24 часов при комнатной температуре Реакционную смесь упаривают в вакууме Выход около 0,6мг (оптическая плотность 19) Масс-спектр (ES-) 2064,5 (N-H)" 74) 5f-HO-T-P(OH)-T-P(OH)-T-P(OH)-C-P(OH)С-Р(ОН)-С-Р(ОН)2 Продукт примера 73 5'-ММТг-Т-Р(ОН)-Т-Р(ОН)Т-Р(ОН)-С-Р(ОН)-С-Р(ОН)-С-Р(ОН)2 растворяют в 0,5 мл воды и подают на колонку, заполненную адсорбентом марки Polypak фирмы Glen Research, с размером частиц № 60-1100-10 Группу ММТг отщепляют в соответствии с инструкциями изготовителя (см руководство "Glen Research User Guide") Выход 0,35 мг (оптическая плотность 11) Масс-спектр (ES-) 1792,6 (N-H)" 75) 5'-MMTr-CAn-P(ONPE)-CAn-P(ONPE)-CAnP(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)-T-P(ONPE)2 Синтез осуществляют аналогично примеру 17 путем взаимодействия продукта примера 69 5'MMTr-CAn-P(ONPE)-CAn-P(ONPE)-CAn-P(ONPE)(OH) и продукта примера 26 5'-HO-T-P(ONPE)-TP(ONPE)-T-P(OEt)2 Очищают хроматографией на силикагеле с применением в качестве элюента смеси этилацетата, метанола и триэтиламина сначала в соотношении 80 20 2, а затем 70 30 2 Продукт упаривают вместе с толуолом, упаривают в вакууме и растирают вместе с пентаном Выход 48% Масс-спектр (ББА) 3744 (М + Na)+, 3766 (М + 2Na-H)+ Данные по последовательностям № 1-33 SEQIDNO 1 (I) Характеристика последовательности (A) Длина 20 пар оснований (Б) Вид нуклеиновая кислота (B) Форма нити отдельная (Г) Топология линейная (II) Вид молекулы ДНК (геномная) (III) антисмысловая да (IV) Признаки (А) Название/ключ экзон (V) Описание последовательности АСАСССААТТ CTGAAAATGG SEQ ID NO 2 (I) Характеристика последовательности (A) Длина 20 пар оснований (Б) Вид нуклеиновая кислота (B) Форма нити отдельная (Г) Топология линейная (II) Вид молекулы ДНК (геномная) (III) антисмысловая да (IV) Признаки (А) Название/ключ экзон (V) Описание последовательности AGGTCCCTGT TCGGGCGCCA 52 SEQ ID NO 3 (I) Характеристика последовательности (A) Длина 28 пар оснований (Б) Вид нуклеиновая кислота (B) Форма нити отдельная (Г) Топология линейная (II) Вид молекулы ДНК (геномная) (III) антисмысловая да (IV) Признаки (А) Название/ключ экзон (V) Описание последовательности GTCGACACCC AATTCTGAAA ATGGATAA SEQ ID NO 4 (I) Характеристика последовательности (A) Длина 25 пар оснований (Б) Вид нуклеиновая кислота (B) Форма нити отдельная (Г) Топология линейная (II) Вид молекулы ДНК (геномная) (III) антисмысловая да (IV) Признаки (А) Название/ключ экзон (V) Описание последовательности GCTATGTCGA CACCCAATTC TGAAA SEQ ID NO 5 (I) Характеристика последовательности (A) Длина 26 пар оснований (Б) Вид нуклеиновая кислота (B) Форма нити отдельная (Г) Топология линейная (II) Вид молекулы ДНК (геномная) (III) антисмысловая да (IV) Признаки (А) Название/ключ экзон (V) Описание последовательности GTCGCTGTCT CCGCTTCTTC TTCCTG SEQ ID NO 6 (I) Характеристика последовательности (A) Длина 27 пар оснований (Б) Вид нуклеиновая кислота (B) Форма нити отдельная (Г) Топология линейная (II) Вид молекулы ДНК (геномная) (III) антисмысловая да (IV) Признаки (А) Название/ключ экзон (V) Описание последовательности GTCTCCGCTT CTTCTTCCTG CCATAGG SEQ ID NO 7 (I) Характеристика последовательности (A) Длина 20 пар оснований (Б) Вид нуклеиновая кислота (B) Форма нити отдельная (Г) Топология линейная (II) Вид молекулы ДНК (геномная) (III) антисмысловая да (IV) Признаки (А) Название/ключ экзон (V) Описание последовательности GCGGGGCTCC ATGGGGGTCG SEQ ID NO 8 53 (I) Хараісгеристика последовательности (A) Длина 15 пар оснований (Б) Вид нуклеиновая кислота (B) Форма нити отдельная (Г) Топология линейная (II) Вид молекулы ДНК (геномная) (III) антисмысловая да (IV) Признаки (А) Название/ключ экзон (V) Описание последовательности CAGCTGCAAC CCAGC SEQ ID NO 9 (I) Характеристика последовательности (A) Длина 21 пара оснований (Б) Вид нуклеиновая кислота (B) Форма нити отдельная (Г) Топология линейная (II) Вид молекулы ДНК (геномная) (III) антисмысловая да (IV) Признаки (А) Название/ключ экзон (V) Описание последовательности GGCTGCTGGA GCGGGGCACA С SEQIDNO 10 (I) Характеристика последовательности (A) Длина 15 пар оснований (Б) Вид нуклеиновая кислота (B) Форма нити отдельная (Г) Топология линейная (II) Вид молекулы ДНК (геномная) (III) антисмысловая да (IV) Признаки (А) Название/ключ экзон (V) Описание последовательности AACGTTGAGG GGCAT SEQIDNO 11 (I) Характеристика последовательности (A) Длина 18 пар оснований (Б) Вид нуклеиновая кислота (B) Форма нити отдельная (Г) Топология линейная (II) Вид молекулы ДНК (геномная) (III) антисмысловая да (IV) Признаки (А) Название/ключ экзон (V) Описание последовательности GTGCCGGGGT CTTCGGGC SEQIDNO 12 (I) Характеристика последовательности (A) Длина 21 пара оснований (Б) Вид нуклеиновая кислота (B) Форма нити отдельная (Г) Топология линейная (II) Вид молекулы ДНК (геномная) (III) антисмысловая да (IV) Признаки (А) Название/ключ экзон (V) Описание последовательности GGAGAACATC ATGGTCGAAA G SEQIDNO 13 (I) Характеристика последовательности 44253 54 (A) Длина 22 пары оснований (Б) Вид нуклеиновая кислота (B) Форма нити отдельная (Г) Топология линейная (II) Вид молекулы ДНК (геномная) (III) антисмысловая да (IV) Признаки (А) Название/ключ экзон (V) Описание последовательности CCCGAGAACA TCATGGTCGA AG SEQIDNO 14 (I) Характеристика последовательности (A) Длина 20 пар оснований (Б) Вид нуклеиновая кислота (B) Форма нити отдельная (Г) Топология линейная (II) Вид молекулы ДНК (геномная) (III) антисмысловая да (IV) Признаки (А) Название/ключ экзон (V) Описание последовательности GGGGAAAGCC CGGCAAGGGG SEQIDNO 15 (I) Характеристика последовательности (A) Длина 20 пар оснований (Б) Вид нуклеиновая кислота (B) Форма нити отдельная (Г) Топология линейная (II) Вид молекулы ДНК (геномная) (III) антисмысловая да (IV) Признаки (А) Название/ключ экзон (V) Описание последовательности CACCCGCCTT GGCCTCCCAC SEQIDNO 16 (I) Характеристика последовательности (A) Длина 18 пар оснований (Б) Вид нуклеиновая кислота (B) Форма нити отдельная (Г) Топология линейная (II) Вид молекулы ДНК (геномная) (III) антисмысловая да (IV) Признаки (А) Название/ключ экзон (V) Описание последовательности GGGACTCCGG CGCAGCGC SEQIDNO 17 (I) Характеристика последовательности (A) Длина 20 пар оснований (Б) Вид нуклеиновая кислота (B) Форма нити отдельная (Г) Топология линейная (II) Вид молекулы ДНК (геномная) (III) антисмысловая да (IV) Признаки (А) Название/ключ экзон (V) Описание последовательности GGCAAACTTT СТТТТССТСС SEQIDNO 18 (I) Характеристика последовательности (А) Длина 19 пар оснований 55 (Б) Вид нуклеиновая кислота (В) Форма нити отдельная (Г) Топология линейная (II) Вид молекулы ДНК (геномная) (III) антисмысловая да (IV) Признаки (А) Название/ключ экзон (V) Описание последовательности GGGAAGGAGG AGGATGAGG SEQIDNO 19 (I) Характеристика последовательности (A) Длина 21 пара оснований (Б) Вид нуклеиновая кислота (B) Форма нити отдельная (Г) Топология линейная (II) Вид молекулы ДНК (геномная) (III) антисмысловая да (IV) Признаки (А) Название/ключ экзон (V) Описание последовательности GGCAGTCATC CAGCTTCGGA G SEQ ID NO 20 (I) Характеристика последовательности (A) Длина 18 пар оснований (Б) Вид нуклеиновая кислота (B) Форма нити отдельная (Г) Топология линейная (II) Вид молекулы ДНК (геномная) (III) антисмысловая да (IV) Признаки (А) Название/ключ экзон (V) Описание последовательности GCAGTAAGCA ТССАТАТС SEQ ID NO 21 (I) Характеристика последовательности (A) Длина 20 пар оснований (Б) Вид нуклеиновая кислота (B) Форма нити отдельная (Г) Топология линейная (II) Вид молекулы ДНК (геномная) (III) антисмысловая да (IV) Признаки (А) Название/ключ экзон (V) Описание последовательности СССССАССАС ТТССССТСТС SEQ ID NO 22 (I) Характеристика последовательности (A) Длина 20 пар оснований (Б) Вид нуклеиновая кислота (B) Форма нити отдельная (Г) Топология линейная (II) Вид молекулы ДНК (геномная) (III) антисмысловая да (IV) Признаки (А) Название/ключ экзон (V) Описание последовательности СТСССССАСС АСТТССССТС SEQ ID NO 23 (I) Характеристика последовательности (А) Длина 19 пар оснований (Б) Вид нуклеиновая кислота 44253 56 (В) Форма нити отдельная (Г) Топология линейная (II) Вид молекулы ДНК (геномная) (III) антисмысловая да (IV) Признаки (А) Название/ключ экзон (V) Описание последовательности GCTGGGAGCC ATAGCGAGG SEQ ID NO 24 (I) Характеристика последовательности (A) Длина 21 пара оснований (Б) Вид нуклеиновая кислота (B) Форма нити отдельная (Г) Топология линейная (II) Вид молекулы ДНК (геномная) (III) антисмысловая да (IV) Признаки (А) Название/ключ экзон (V) Описание последовательности ACTGCTGCCT CTTGTCTCAG G SEQ ID NO 25 (I) Характеристика последовательности (A) Длина 22 пары оснований (Б) Вид нуклеиновая кислота (B) Форма нити отдельная (Г) Топология линейная (II) Вид молекулы ДНК (геномная) (III) антисмысловая да (IV) Признаки (А) Название/ключ экзон (V) Описание последовательности CAATCAATGA CTTCAAGAGT ТС SEQ ID NO 26 (I) Характеристика последовательности (A) Длина 19 пар оснований (Б) Вид нуклеиновая кислота (B) Форма нити отдельная (Г) Топология линейная (II) Вид молекулы ДНК (геномная) (III) антисмысловая да (IV) Признаки (А) Название/ключ экзон (V) Описание последовательности GGTCCCTGTT CGGGCGCCA SEQ ID NO 27 (I) Характеристика последовательности (A) Длина 17 пар оснований (Б) Вид нуклеиновая кислота (B) Форма нити отдельная (Г) Топология линейная (II) Вид молекулы ДНК (геномная) (III) антисмысловая да (IV) Признаки (А) Название/ключ экзон (V) Описание последовательности GTGCCGGGGT CTTCGGG SEQ ID NO 29 (I) Характеристика последовательности (A) Длина 14 пар оснований (Б) Вид нуклеиновая кислота (B) Форма нити отдельная 44253 57 (Г) Топология линейная (II) Вид молекулы ДНК (геномная) (III) антисмысловая да (IV) Признаки (А) Название/ключ экзон (V) Описание последовательности GGAGGATGCT GAGG 58 (А) Название/ключ экзон (V) Описание последовательности GGCTGCCATG GTCCC SEQ ID NO 33 (I) Характеристика последовательности (A) Длина 18 пар оснований (Б) Вид нуклеиновая кислота (B) Форма нити отдельная (Г) Топология линейная (II) Вид молекулы ДНК (геномная) (III) антисмысловая да (IV) Признаки (А) Название/ключ экзон (V) Описание последовательности TCATGGTGTC CTTTGCAG SEQ ID NO 31 (I) Характеристика последовательности (A) Длина 15 пар оснований (Б) Вид нуклеиновая кислота (B) Форма нити отдельная (Г) Топология линейная (II) Вид молекулы ДНК (геномная) (III) антисмысловая да (IV) Признаки 0 47 0.4fc 014 Л* * > • 0 ІЗ • •* 0 12 as»'** ! 1 1 -1 1 1 7!) 20 Фиг. 1 ур. СсІД Фиг. 2 1 59 44253 60 ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044) 456 - 20 - 90