Спосіб одержання полімерзв’язаних циклічних пептидів

1. Спосіб одержання

, ІІ

в якій J, L і М представляють лінійні пептидні фрагменти;

К1 відсутній або представляє циклічний пептидний фрагмент

і

К2 представляє циклічний пептидний фрагмент,

який включає:

(1) одержання  послідовним приєднанням придатним чином заміщених амінокислотних залишків до полімеру з одержанням:

, ІІІ

де  представляє придатний синтетичний полімер для пептиду, і М представляє поліпептидний фрагмент;

(2) одержання, окремо, звичайним пептидним синтезом фрагмента захищеного за N-кінцем циклічного поліпептиду формули IV

, IV,

у якій Р представляє придатну захисну групу для аміногрупи, (3) сполучення III з IV з одержанням пептиду формули V

, V

(4) коли циклічний пептид К1 відсутній, тоді (а) одержання поліпептидних фрагментів J і L у вигляді окремого поліпептиду формули VI

 VI

і сполучення поліпептиду VI з пептидом V з одержанням пептиду формули VII

 VII

або необов'язково (b) приєднання захищених індивідуальних амінокислотних елементів поліпептидів J і L послідовно до пептидного фрагмента формули V, або, необов'язково, (с) окреме одержання фрагментів будь-якого або обох J і L у вигляді поліпептидних фрагментів і сполучення цих фрагментів для нарощування пептиду, починаючи з фрагмента формули V;

(5) коли циклічний пептид К1 є присутнім, тоді (а) окреме одержання захищеного за N-кінцем циклічного поліпептидного фрагмента формули VIII

, VIII

у якій

Р представляє придатну захисну групу для аміногрупи,

звичайними методиками пептидного синтезу;

(b) одержання пептидного фрагмент формули IX

 IX

і сполучення пептидного фрагмента IX з пептидним фрагментом V з одержанням пептидного фрагмента формули Х

 X

і (с) сполучення циклічного пептидного фрагмента VIII з пептидним фрагментом формули Х з одержанням пептидного фрагмента формули XI

 XI

(d) одержання пептидного фрагмента формули XII

 XII

і сполучення фрагмента XII з фрагментом XI; і

(6) відщіплення полімеру і видалення захисної групи.

2. Спосіб за п. 1, у якому пептид формули І представляє циклічний пептид формули

,

у якій X вибирають із групи, що включає

Y вибирають із групи, що включає

R1a представляє Н, алкіл, аралкіл або -СОR2;

R1b представляє R1a або групу формули

 або ;

R2 представляє алкіл, алкеніл, алкініл, арил або аралкіл;

R3 представляє групу формули А35-ОR4 або A35-NR4R5;

R4 і R5 незалежно представляють Н або нижчий алкіл;

R6 і R9 незалежно представляють Н або алкіл;

R7 представляє алкіл;

R8 представляє Н, алкіл або СОR2;

R10 представляє Н або галоген:

R11 представляє або алкіл аралкіл;

m дорівнює 1, 2 або 3;

n дорівнює 3 або 4;

A0 відсутній або представляє пептид, що включає від одного до шести амінокислотних залишків;

A1 представляє Ser, Ala, Gly або D-Pro, або еквівалентну амінокислоту;

А2 представляє Ala, Val або Gly, або еквівалентну амінокислоту;

А3 представляє Ala, Ser, Gly або D-Pro, або еквівалентну амінокислоту;

А4 представляє Glu, Ala або Gly, або еквівалентну амінокислоту;

А5 представляє Ilе, His, Ala або Gly, або їх еквівалентну амінокислоту;

А6 представляє Ala, Gln, Gly або D-Pro, або їх еквівалентну амінокислоту;

А7 представляє Ala, Leu, Gly, або їх еквівалентну амінокислоту;

A8 представляє Leu, Nle, Gly або D-Pro, або їх еквівалентну амінокислоту;

А9 представляє His, Ala, D-Pro або Gly, або їх еквівалентну амінокислоту;

A10 представляє Ala, Asn, Asp, Cys, гомо-Cys, Glu, Gly, Lys, Orn, Ser, Thr, D-Pro, -NHCH (CH2)mNH2)CO- або -NHCH[(СH2)nСО2H]СО-;

А11 представляє Ala, Gly, Leu або Lys, або їх еквівалентну амінокислоту;

А12 представляє Ala або Gly, або їх еквівалентну амінокислоту;

A13 представляє Ala, Asn, Asp, Cys, гомо-Cys, Glu, Gly, Lys, Orn, Ser, Thr, -NHCH (СН2)mNH2)СО- або -NHCH[(СН2)nСО2H]СО-;

А14 представляє Ala, Asn, Asp, Cys, гомо-cys, Glu, Gly, His, Lys, Orn, Ser, Thr, D-Pro, -NHCH (CH2)mNH2)CO- або -NHCH[(CH2)nCO2H]CO-;

A15 представляє Ala, Gly, Ile, D-Pro або Leu, або їх еквівалентну амінокислоту;

А16 представляє Asn, Ala, Gly, D-Pro або Gln, або їх еквівалентну амінокислоту;

А17 представляє Ala, Asn, Asp, Cys, гомо-cys, Glu, Gly, Lys, Orn, Ser, Thr, D-Pro, -NHCH (CH2)mNH2)CO- або -NHCH[(CH2)nCO2H]CO-;

A18 представляє Asp, Cys, гомо-cys, Glu, His, Leu, Lys, Orn, Nle, Ser, Thr, -NHCH (CH2)mNH2)CO- або -NHCH[(CH2)nCO2H]CO-;

A19 представляє Arg або Glu, або їх еквівалентну амінокислоту;

А20 представляє Arg або її еквівалентну амінокислоту;

А21 представляє Arg, Asp, Cys, гомо-Cys, Glu, Lys, Orn, Ser, Thr, Val, -NHCH (CH2)mNH2)CO- або -NHCH [(СН2)nСО2Н]СО-;

A22 представляє Asp, Cys, гомо-cys, Glu, His, Lys, Orn, Phe, Ser, Thr, -NHCH(CH2)mNH2)CO- або -NHCH [(CH2)nCO2H]CO-;

A23 представляє Leu, Phe або Тrр, або їх еквівалентну амінокислоту;

А24 представляє Leu або її еквівалентну амінокислоту;

А25 представляє Arg, Asp, Cys, гомо-Cys, Glu, His, Lys, Orn, D-Pro, Ser, Thr, -NHCH (СН2)nNH2)СО- або -NHCH [(СН2)nСО2H]СО-;

А26 представляє Asp, Cys, гомо-cys, Glu, His, Lys, Orn, Ser, Thr, -NHCH (CH2)mNH2)CO- або -NHCH [(СН2)nСO2Н]СО-;

A27 представляє Leu або Lys, або їх еквівалентну амінокислоту;

А28 представляє або Ile Leu, або їх еквівалентну амінокислоту;

А29 представляє Ala, Asp, Cys, гомо-Cys, Glu, Gln, Lys, Orn, Ser, Thr, -NHCH (CH2)mNH2)CO- або -NHCH [(CH2)nCO2H]CO-;

A30 представляє Asp, Cys, гомо-Cys, Glu, Gly, Lys, Orn, Ser, Thr, -NHCH (CH2)mNH2)CO- або -NHCH [(CH2)nCO2H]CO-;

A31 представляє Ile, Leu або Val, або їх еквівалентну амінокислоту;

А32 представляє His, або її еквівалентну амінокислоту;

A33 представляє Asn або Thr, або їх еквівалентну амінокислоту і

А34 представляє Ala або Phe, або їх еквівалентну амінокислоту;

А35 відсутній або представляє пептид, що містить від 1 до 4 амінокислот і

бічні ланцюги, принаймні, однієї з наступних пар амінокислотних залишків А10 і А14, А13 і А17, А14 і A18, А17 і А21, A18 і А22, А21 і А25, А25 і А29, і А26 і A30 зв'язані за допомогою амідного, складноефірного, дисульфідного або лантіонінового зв'язку з утворенням містка, і бічний ланцюг кожного з наступних амінокислотних залишків: А10, А13, А14, A17, A18, A21, A22, А25, А26, А29 і А30 вносить вклад, якнайбільше, в утворення одиничного містка; за умови, що, коли бічні ланцюги наступних пар амінокислотних залишків: А13 і А17 або А26 і А30 зв'язані за допомогою амідного, дисульфідного або лантіонінового зв'язку з утворенням містка, то бічні ланцюги, принаймні, однієї з наступних пар амінокислотних залишків: А10 і А14, А14 і A18, A17 і A21, A18 і A22, A21 і А25 і А25 і А29 також зв'язані за допомогою амідного, складноефірного дисульфідного або лантіонінового зв'язку.

3. Спосіб за п. 1 одержання

цикло(Lys18-Asp22)[Ala1,Nle8,Lys18,Asp22,Leu27]hPTH(1-31)NH2,

який включає

(а) одержання полімер-зв'язаного пептидного фрагмента А:

 (A);

(b) одержання циклічного пептидного фрагмента

 (B);

(с) сполучення пептидного фрагмента А стадії (а) з пептидним фрагментом В зі стадії (b) з

одержанням проміжного пептиду АВ

 (AB);

(d) послідовне приєднання до пептиду АВ Ser (OtBu), Asn (Trt), Leu, His (Trt) і Lys (Boc) з одержанням проміжного пептиду:

 (C);

(е) одержання пептидного фрагмента D:

(f) сполучення фрагментів С і D з одержанням полімер-зв'язаного пептиду Е:

 (E);

і

(g) відщеплення полімеру і видалення захисної групи.

4. Пептид, придатний як проміжна сполука для здійснення способу за п. 3, вибраний із групи, що включає: