Спосіб виготовлення вакцини живої ліофілізованої проти бешихи свиней

Реферат: Спосіб виготовлення вакцини живої ліофілізованої проти бешихи свиней, при якому культивують вакцинний штам Erysipelothrix rhusiopathiae BP-2/SS на поживному середовищі на основі перевару Хоттінгера. В процесі змішування бактерійної маси із захисним стабілізуючим середовищем вводять 0,1-0,25 % сукцинату хітозану. UA 101320 U (12) UA 101320 U UA 101320 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Корисна модель належить до загальної біотехнології та ветеринарної мікробіології і представляє собою спосіб виготовлення вакцини живої ліофілізованої проти бешихи свиней. Корисна модель може бути використана для виготовлення вакцини живої ліофілізованої проти бешихи свиней, а також для розробки та впровадження у виробництво інших засобів, що можуть бути використані з цією метою. Відомим аналогом є патент на корисну модель [Заявка России № 5007591/13. ВАКЦИНА ПРОТИВ РОЖИ СВИНЕЙ. МПК 5 А61К 39/02, С1. Опубл. 1994.08.30.]. Недоліком аналога є 9 3 низький вихід мікробних клітин культур клітин штамів ВР-2 та ВГНКІ 624 (0,18-1,0)10 /см вакцини. Відомим аналогом є патент на корисну модель [Заявка России № 96116721. СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ЖИВОЙ СУХОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ РОЖИ СВИНЕЙ ИЗ ШТАММА ВР-2. МПК А61К 39/02, C12N 1/20. C12N1/04. Опубл. 1998.09.20]. Недоліком аналога є низька мікробіологічна продуктивність. Відомим аналогом є живильне середовище [Патент України № 6054. СИНТЕТИЧНЕ ЖИВИЛЬНЕ СЕРЕДОВИЩЕ ДЛЯ КУЛЬТИВУВАННЯ ЗБУДНИКА БЕШИХИ СВИНКИ. МПК А61К 39/00, C12N 1/20, C12N 1/04. Опубл. 15.04.2005.], яке використовують для культивування збудника бешихи. До його складу входять калій фосфорнокислий двозамінений, магній сірчанокислий семиводний, лимонна кислота, залізо лимоннокисле аміачне, гліцерин, вода дистильована, аспарагін, глюкоза, середовища Ігла MEM при наступному співвідношенні компонентів, мас. %: L-аспарагін 0,4-0,5, калій фосфорнокислий двозаміщений 0,035-0,05, лимонна кислота 0,18-0,2, залізо лимонно-аміачне 0,004-0,005, гліцерин 2,5-3,0, глюкоза 1,2-1,5, магній сірчанокислий семиводний 0,04-0,05, Ігла-MEM 20-50, вода дистильована до 100. Недоліком аналога є низька чутливість і низька мікробіологічна продуктивність. В основу корисної моделі поставлена задача розробити спосіб виготовлення вакцини живої ліофілізованої проти бешихи свиней, який би забезпечував отримання високоімуногенної вакцини проти бешихи свиней з максимальним накопиченням бактерійної маси в процесі виготовлення вакцини. Поставлена задача вирішується тим, що спосіб передбачає культивування вакцинного штаму Erysipelothrix rhusiopathiae BP-2/SS на поживному середовищі на основі перевару Хоттінгера: перевар Хоттінгера - 30 %; печінковий екстракт - 5 %; пептон - 5 %; сухий дріжджовий екстракт - 0,5-1,0 %; NaCl - 0,2 %; KН2РО4 - 0,3 %; Na2HPO4 - 2 %; Tween-80 0,05 %; залізо лимоннокисле - 0,01-0,03 %; L-аргінін - 0,1-0,3 %; нормальна сироватка крові коня (ВРХ) - 10-15 %; 40 % розчин глюкози - 1 %; дистильована вода до 100 %. Амінний азот - 200220 мг%; рН 7,4-7,6. Це збільшує чутливість середовища, вихід життєздатних бактерій, прискорює їх ріст і підвищує інтенсивність накопичення бактерійної маси в процесі виготовлення вакцини живої ліофілізованої проти бешихи свиней. Іони заліза, введені в поживне середовище значно стимулювали ріст вакцинного штаму Erysipelothrix rhusiopathiae BP-2/SS (максимальний приріст біомаси складав 278 % від накопичення в контролі). Концентрація пептону в запропонованому середовищі складає 5 %, що дозволяє забезпечити бактерії бешихи свиней джерелом азоту, який необхідний для синтезу білкових з'єднань і формування протоплазми. У склад середовища в якості джерела вуглеводу введено глюкозу, яка при розщепленні у формі АТФ - використовується мікроорганізмами як джерело енергії. Крім того, для покращення ростових властивостей поживного середовища додається амінокислота L-аргінін і нормальна сироватка крові коня (ВРХ). В процесі змішування бактерійної маси із захисним стабілізуючим середовищем із розрахунку 1:4 додатково вводиться 0,1-0,25 % сукцинат хітозану для посилення здатності антигену викликати імунну відповідь. 1 UA 101320 U 5 10 15 20 25 30 Приклад конкретного виконання Для отримання вакцини живої ліофілізованої проти бешихи свиней використовують вакцинний штам Erysipelothrix rhusiopathiae BP-2/SS, задепонований в Національному центрі штамів мікроорганізмів Державного науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів. Культивування матрової розплодки проводиться на м'ясопептонному бульйоні Хоттінгера з додаванням нормальної сироватки крові коня (ВРХ) - 10-15 %; 40 % розчину глюкози - 1 %, потім пересівають у флакони з напіврідким м'ясопептонним бульйоном Хоттінгера. Посівну культуру вакцинного штаму Erysipelothrix rhusiopathiae BP-2/SS засівають в поживне середовище на основі перевару Хоттінгера: перевар Хоттінгера - 30 %; печінковий екстракт 5 %; пептон - 5 %; сухий дріжджовий екстракт - 0,5-1,0 %; NaCl - 0,2 %; KН2РО4 - 0,3 %; Na2HPO4 - 2 %; Tween-80 - 0,05 %; залізо лимоннокисле - 0,01-0,03 %; L-аргінін - 0,1-0,3 %; нормальна сироватка крові коня (ВРХ) - 10-15 %; 40 % розчин глюкози - 1 %; дистильована вода до 100 %. Амінний азот 200-220 мг%. Живильне середовище мало рН 7,4-7,6. Засівна доза складає 5 % від об'єму поживного середовища. Культивування проводять при температурі (36,5±0,5) °С впродовж 20-22 годин при постійному перемішуванні. Після закінчення культивування в окремо взятій пробі визначають оптичну концентрацію культури, яка повинна знаходитися в межах 9 3 (10,0±2,0)10 КУО/см . Потім до культуральної рідини додають захисне стабілізуюче середовище із розрахунку 1:4 та 0,1-0,25 % сукцинат хітозану. Корисна модель знайде широке використання при виготовленні вакцини живої ліофілізованої проти бешихи свиней, а також для розробки та впровадження у виробництво інших засобів, що можуть бути використані для цього. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ Спосіб виготовлення вакцини живої ліофілізованої проти бешихи свиней, який відрізняється тим, що культивують вакцинний штам Erysipelothrix rhusiopathiae BP-2/SS на поживному середовищі на основі перевару Хоттінгера: перевар Хоттінгера - 30 %; печінковий екстракт 5 %; пептон - 5 %; сухий дріжджовий екстракт - 0,5-1,0 %; NaCl - 0,2 %; KН2РО4 - 0,3 %; Na2HPO4 - 2 %; Tween-80 - 0,05 %; залізо лимоннокисле - 0,01-0,03 %; L-аргінін - 0,1-0,3 %; нормальна сироватка крові коня (ВРХ) - 10-15 %; 40 % розчин глюкози - 1 %; дистильована вода до 100 % та в процесі змішування бактерійної маси із захисним стабілізуючим середовищем вводять 0,10,25 % сукцинату хітозану. 35 Комп’ютерна верстка М. Шамоніна Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2