Спосіб одержання екстракту плаценти людини

Реферат: Спосіб одержання екстракту плаценти людини включає її відмивання, подрібнення, гомогенізацію і розведення фізіологічним розчином. Перед гомогенізацією плаценту заморожують шляхом занурення у рідкий азот, а після розведення фізіологічним розчином гомогенат піддають впливу ультразвукових хвиль. UA 107908 U (12) UA 107908 U UA 107908 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до біології і медицини і може бути використана для збереження і наступного застосування біологічних матеріалів з плаценти людини в наукових дослідженнях і клінічній практиці. Відомий спосіб отримання екстракту плаценти людини [1], який полягає у тому, що після збереження шматків плаценти при 2-4 °C протягом 6-7 діб, їх відмивають дистильованою водою, подрібнюють, гомогенізують, до одержаного гомогенату додають фізіологічний розчин, і витримують при температурі 10-15 °C протягом однієї години, після чого занурюють у водяну баню, підтримуючи температуру 70-80 °C протягом 25-30 хв. Далі фільтрують, нагрівають до кипіння, витримують 1-2 хв. і знову фільтрують. Одержаний екстракт розливають в ампули і стерилізують в автоклаві 1 годину при 120 °C. Недоліком цього способу є руйнування значної кількості біологічно важливих речовин в процесі кип'ятіння та автоклавування, а також його довготривалість (6-7 діб). Найбільш близьким до способу, що заявляється, є спосіб одержання екстракту плаценти людини [2], який включає консервацію плаценти протягом 7 діб при температурі 2-4 °C, відмивання, подрібнення, екстракцію дистильованою водою при автоклавуванні (120 °C), повторне автоклавування при 120 °C протягом однієї години, гомогенізацію до розміру часток не більше ніж 0,4 мкм і додавання хлориду натрію до одержання ізотонічного розчину. Недоліками цього способу є низька антиоксидантна і біологічна активність екстракту плаценти внаслідок значного руйнування біологічно важливих молекулярних комплексів після подвійного автоклавування і довготривалість (понад 7 діб), що пов'язано з необхідністю проведення подвійного автоклавування з метою стерилізації екстракту. В основу корисної моделі поставлено задачу створити такий спосіб одержання екстракту плаценти людини, в якому б, за рахунок застосування впливу фізичного фактору, забезпечувалась можливість підвищення антиоксидантної і біологічної активності екстракту, а також скорочення часу його отримання. Ця задача вирішується тим, що в відомому способі одержання екстракту плаценти людини, який включає її відмивання, подрібнення, гомогенізацію і розведення фізіологічним розчином, згідно з корисною моделлю, перед гомогенізацією плаценту заморожують шляхом занурення у рідкий азот, а після розведення фізіологічним розчином гомогенат піддають впливу ультразвукових хвиль. Перевагою заявленого способу є те, що відпадає необхідність проведення окремого етапу стерилізації, оскільки використання ультразвукових хвиль дозволяє не тільки підвищити ефективність екстракції, але й одночасно стерилізувати екстракт плаценти. Використання запропонованого способу забезпечує підвищення біологічної і антиоксидантної активності екстракту плаценти, відповідно, на 60 % і 50 %, при цьому тривалість процесу екстракції скорочується до 20 хв. Приклад здійснення способу. Плаценту людини, отриману від породіль з їх інформованої згоди і яка пройшла тестування на наявність вірусних інфекцій (ВІЛ та RW) і гепатиту, ретельно відмивали фізіологічним розчином від слизу і крові. Відмиту плаценту переносили у обробний лоток, ножицями відділяли плідні оболонки (амніотичну й хоріальну), і подрібнювали на шматки 3×2 см. Одержані шматки плаценти загальною масою 100 мг заморожували шляхом занурення у рідкий азот (Т=-196 °C) на 10 хв., після чого гомогенізували протягом 5 хв. у високошвидкісному гомогенізаторі РТ-1 У4.2 (Україна), і додавали фізіологічний розчин в об'ємному співвідношенні 1:1. Далі із застосуванням диспергатора УЗДН-1-У4.2 (Україна) здійснювали обробку екстракту плаценти ультразвуковими хвилями протягом 4 хв. при частоті 22 кГц і анодному току підсилювача потужності 0.3А. Щоб уникнути руйнівного нагріву гомогенату, обробку здійснювали два рази по 2 хв. з перервою на 1 хв. Далі центрифугували при 1500g протягом 25 хв. Надосадкову рідину відбирали і пропускали через мембранний фільтр 0.45 мкм ("Міllіроrе Corp. Carrigtwohill", Ірландія). Надосад являв собою водно-сольовий екстракт плаценти людини. Бактеріологічні дослідження стерильності екстрактів показали відсутність аеробної і анаеробної мікрофлори та грибів. Вміст білка в екстрактах плаценти людини та їх окремих фракціях вимірювали спектрофотометричним методом за С.L. Banford & D.A. Harris [3], вміст нуклеотидів - методом А.С. Спіріна [4]. Антиоксидантні властивості екстрактів плаценти людини до і після екстракції розраховували за їх здібністю відновлювати трьохвалентне залізо, хелатувати іони металів змінної валентності і відновлювати вільні радикали. Біологічну активність відносно еритроцитів людини оцінювали за впливом експозиції з екстрактами на спонтанний гемоліз, осмотичну і кислотну стійкість 1 UA 107908 U 5 клітин, а також за здібністю мембран еритроцитів зв'язувати аніонний барвник бром тимоловий синій [5]. Результати наведені в Таблиці. З Таблиці видно, що використання запропонованого способу одержання екстракту плаценти людини забезпечує підвищення на 50-60 % біологічної і антиоксидантної активності порівняно з прототипом завдяки збільшенню загального вмісту білків і нуклеотидів на 73 %. Таблиця Показники збереженості екстракту плаценти людини відносно вихідних показників, n=10 Спосіб одержання екстракту прототип заявлений спосіб 10 15 20 25 Загальні білки і нуклеотиди, % 5±1 78±8 Антиоксидантна активність, % 25±5 85±7 Біологічна активність, % 25±5 79±8 Джерела інформації: 1. Машковский М.Д. Лекарственные средства: Медицина, 1994. - Т. 2. - С. 136. 2. Пат. України № 2710, А61K 35/50, публ. 26.12.94. Спосіб одержання препарату суспензії плаценти (прототип). 3. Harris D.A. Spectrophotometric assays in: Spectrophotometry & spectrofluorimetry / D.A. Harris-Washington: IRL Press, 1987. - P. 49-90. 4. Молекулярная биология / Под ред. А.С. Спирина. - М.: Высшая шк., 1990. - С. 150-156. 5. Розанова С.Л., Щетинский М.И., Розанова Е.Д., Нардид О.А. Некоторые свойства и биологическая активность автоклавированных экстрактов плаценты // Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии и медицине // - Сборник трудов под ред. А.П. Кудинова, Б.В. Крылова. - Санкт-Петербург. - 2010. - Т. 2. - С. 90-95. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ Спосіб одержання екстракту плаценти людини, який включає її відмивання, подрібнення, гомогенізацію і розведення фізіологічним розчином, який відрізняється тим, що перед гомогенізацією плаценту заморожують шляхом занурення у рідкий азот, а після розведення фізіологічним розчином гомогенат піддають впливу ультразвукових хвиль. Комп’ютерна верстка А. Крижанівський Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2