Спосіб виготовлення лістеріозної сироватки іеквм для реакції зв’язування комплементу (рзк)

Реферат: Спосіб виготовлення лістеріозної сироватки ІЕКВМ для реакції зв'язування комплементу (РЗК) включає вирощування бактерійної маси на живильному середовищі з використанням штамів лістерій, "Буринь", "Тернопіль", "Кріль № 17" та "№ 1", виготовлення антигену, гіперімунізацію продуцентів одержаним антигеном з наступним відбором крові та відокремленням цільного продукту. Інактивацію бактерійної маси проводять розчином формальдегіду в концентрації (0,30,5) %. UA 117574 U (12) UA 117574 U UA 117574 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до ветеринарної медицини, а саме до прижиттєвої діагностики лістеріозу сільськогосподарських тварин в реакції зв'язування комплементу (РЗК). Лістеріозну сироватку ІЕКВМ для РЗК одержують від кролів масою 2-3 кг, що імунізовані антигеном, який виготовлений з 4-х штамів лістерій (Listeria monocytogenes), що виділені від овець, великої рогатої худоби, кролів і свиней, які належать до 1-ї та 2-ї серогруп ["Буринь", "Тернопіль", "Кріль № 17" та «№ 1"]. Існує спосіб одержання лістеріозної сироватки, яка одержана від кролів, імунізованих різними антигенами, що отримані із суміші виробничих штамів Listeria monocytogenes [Патент KZ № 16791 від 16.01.2006, кл. А61K39/40 "Способ получения сывороток для индикации и типизации листерий]. Недоліком способу є те, що він трудомісткий та потребує високовартісного обладнання. Існує спосіб одержання лістеріозної сироватки ІЕКВМ для реакції зв'язування комплементу (РЗК) [Патент UA № 8749 від 15.08.2005, кл. А61K39/02 "Спосіб одержання лістеріозної сироватки ІЕКВМ для реакції зв'язування комплементу (РЗК)»]. Це рішення може бути прототипом. В основу корисної моделі поставлена задача як бактерійну масу використовувати штами лістерій "Буринь", "Тернопіль", "Кріль № 17", «№ 1". Недоліком рішення є те, що бактерійну масу знешкоджують без зазначення інактиванту. Поставлена задача вирішується тим, що розробка способу виготовлення лістеріозної сироватки ІЕКВМ для реакції зв'язування комплементу (РЗК) включає вирощування бактерійної маси на живильному середовищі з використанням штамів лістерій "Буринь", "Тернопіль", "Кріль № 17" та «№ 1", виготовлення антигену, гіперімунізацію продуцентів одержаним антигеном з наступним відбором крові та відокремленням цільного продукту шляхом інактивації бактерійної маси розчином формальдегіду в концентрації (0,3-0,5) %, щоб забезпечити спосіб одержання лістеріозної сироватки ІЕКВМ для реакції зв'язування комплементу (РЗК). Спосіб виконується таким чином. Вирощують бактерійну масу бульйонною культурою кожного з 4-х штамів лістерій, засівають колби об'ємом 1,5 л з мартенівським агаром. Одержану суспензію мікробів фільтрують, встановлюють концентрацію мікробних клітин та доводять її за допомогою фізіологічногог 3 розчину до 2 млрд. КУО/см . Додають розчин формальдегіду до кінцевої концентрації (0,30,5) % та розмішують для знешкодження у термостаті за температури 37 °C протягом (24-48) годин. Суспензію лістерій (антиген) перевіряють на повноту інактивації та стерильність. Антиген повинен бути інактивованим та стерильним. Після чого антиген застосовують для гіперімунізації кролів. Проводять пробне кровопускання для попереднього визначення титру сироватки. У кролів з вушної вени беруть кров. Відстояну сироватку титрують в РЗК з лістеріозним антигеном. Якщо титр сироватки імунізованого кроля відповідає її розведенню не менше 1:40, то в той же день кроля знекровлюють. Кров обробляють для одержання сироватки. Після чого сироватку зливають і консервують. Готова лістеріозна сироватка являє собою прозору рідину жовтувато-солом'яного кольору. Сироватка використовується як позитивний контрольний препарат при титрації лістеріозного антигену ІЕКВМ, а також при дослідженні на лістеріоз в РЗК усіх видів тварин. При наявності в сироватці плісняви, механічних забруднень вона вибраковується. Термін зберігання сироватки становить 2 роки за умови зберігання її за температури плюс (4-8)°С в захищеному від світла приміщенні. Приклад 1 Перевірка суспензії лістерій (антигену) на повноту інактивації та сироватки на стерильність. Повноту інактивації суспензії лістерій (антигену) визначали висівом на МПА, МПБ в пробірках. Висіви витримували у термостаті за температури (37-38)°С протягом 5 діб. Суспензія лістерій (антиген) була інактивованою. Стерильність готової сироватки визначали висівом її на тіогліколеве середовище в пробірках. Для контролю відсутності бактеріальної та грибної контамінації, відповідно, висіви витримували у термостаті за температури (30-35)°С та (20-25)°С протягом 14 діб. Сироватка була стерильною. Приклад 2 Проведення випробування активності (титру) і специфічності сироватки. 3 Кожне розведення сироватки розливали в два ряди пробірок в дозі 0,5 см . В кожну пробірку 3 першого ряду додавали по 0,5 см лістеріозного антигену ІЕКВМ для РЗК в робочому титрі. В 3 пробірки другого ряду замість антигену додавали по 0,5 см фізіологічного розчину. Обидві фази реакції (зв'язування комплементу і головний дослід) проводили у водяній бані за 1 UA 117574 U 5 10 температури 37-38 °C (кожна протягом 20 хвилин). Комплемент, гемолізин і еритроцити брали в робочих титрах. Титром лістеріозної сироватки вважали найбільше розведення сироватки, при якому відбувалась повна затримка гемолізу еритроцитів з лістеріозним антигеном, за наявності повного гемолізу в безантигенному ряді. В пробірках з нормальною сироваткою усіх розведень був гемоліз еритроцитів. В нашому прикладі титр лістеріозної сироватки становив 1:160. Таким чином використання лістеріозної сироватки ІЕКВМ для реакції зв'язування комплементу (РЗК) дозволить підвищити ефективність виявлення серопозитивних щодо лістеріозу тварин різних видів. Основними споживачами лістеріозної сироватки є державні лабораторії ветеринарної медицини. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 15 20 Спосіб виготовлення лістеріозної сироватки ІЕКВМ для реакції зв'язування комплементу (РЗК), що включає вирощування бактерійної маси на живильному середовищі з використанням штамів лістерій, "Буринь", "Тернопіль", "Кріль № 17" та "№ 1", виготовлення антигену, гіперімунізацію продуцентів одержаним антигеном з наступним відбором крові та відокремленням цільного продукту, який відрізняється тим, що інактивацію бактерійної маси проводять розчином формальдегіду в концентрації (0,3-0,5) %. Комп’ютерна верстка Г. Паяльніков Міністерство економічного розвитку і торгівлі України, вул. М. Грушевського, 12/2, м. Київ, 01008, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2