Пристрій для визначення кисневодисоціаційних кривих міоглобіну

Устройство для определения кислороддиссоциационных кривых миоглобина, со держащее сатуратор с двумя отростками, в первом из которых установлен кран с возможностью подсоединения к источнику вакуума, а второй выполнен с возможностью подсоединения к устройству для дозированной подачи воздуха, о т л и ч а ю щ е е с я тем, что оно снабжено средством для перекрытия проходного отверстия отростка для подачи воздуха в виде резиновой мембраны, установленной с возможностью поджатия к торцу отростка посредством муфты с зажимными резьбовыми элементами, при этом мембрана выполнена с возможностью прохождения через нее иглы микрошприца для подачи воздуха. С > Изобретение относится к устройствам для определения кислороддиссоциационных кривых миоглобина и может быть использовано в медицине для определения кислородсвязывающих свойств миоглобина. Известно исследование равновесных реакций кислорода и окиси углерода с миоглобином человека. Однако исследование равновесных реакций миоглобина с кислородом создает некоторые технические трудности, связанные с использованием несовершенных ртутных манометров. В основу изобретения поставлена задача создания такого устройства для определения кислороддисоциационных кривых миоглобина, конструкция которого исключала бы необходимость в использовании ртутного манометра, чем обеспечивала бы быстрое и точное построение кислородди социационных кривых и, следовательно, создала бы возможность оценки функционального состояния кислородтранспортной функции миоглобина. Поставленная задача решается тем, что устройство для определения кислороддиссоциационных кривых миоглобина, содержащее сатуратор с двумя отростками, в первом из которых установлен кран с возможностью подсоединения к источнику вакуума, а второй выполнен с возможностью подсоединения к устройству для дозированной подачи воздуха, согласно изобретению, снабжено средством для перекрытия проходного отростка для подачи воздуха в виде резиновой мембраны, установленной с возможностью поджатия к торцу отростка посредством муфты с зажимными резьбовыми элементами, при этом мембрана выполнена ел со ON о 15866 с возможностью прохождения через нее иглы микрошприца для подачи воздуха. Сущность изобретения поясняется чертежами, где на фиг.1 представлена схема устройства для определения кислороддис- 5 соционных кривых миоглобина в сборе; на фиг.2 - схема соединения муфты и сатуратора при помощи соединительных деталей. Устройство для определения кислороддиссоциационных кривых миоглобина со- 10 держит сатуратор 1 с отростком 2 для закрепления муфты 3, отростком для присоединения вакуумного насоса 4 и краном 5. Муфта 3 состоит из зажимной гайки 6, втулки 7, резиновой мембраны 8, центрирующей 15 шайбы 9, зажимной гайки 10. Для ввода в сатуратор соответствующей порции воздуха используют микрошприц 11. Сборку устройства осуществляют следующим образом: на отросток сатуратора 2 20 надевают зажимную гайку 6, в которую ввинчивают втулку 7, в которой предусмотрен продольный разрез, позволяющий надевать втулку 7 на отросток 2; на торец отростка 2 устанавливают резиновую мемб- 25 рану 8, центрирующую шайбу 9 и завершают сборку муфты 3 путем навинчивания на отросток 2 зажимной гайки 10. После введения в сатуратор 1 раствора миоглобина сатуратор закрывают краном 5. 30 Для проведения измерений параметров кислородсвязывающих свойств миоглобина последний получают предварительно из биологического материала и помещают его в фосфатном буфере рН 7,2 5-Ю"2 М в сату- 35 ратор 1. В исходный образец миоглобина прибавляют НАД Н (1 • 10 М) и флуоресцеин (2-Ю 5 М). К отростку 4 присоединяют вакуумный шланг, соединенный с фор-вакуумным насосом. Закрывают сатуратор краном 40 5 и осуществляют вакуумирование сатуратора 1. При этом, наклоняя сатуратор, раствор постоянно перемешивают. Через 3-4 мин вакуумирования раствор освещают мощным источником видимого света в тече- 45 ние 3-х мин. Помещают сатуратор в кюветный отсек спектрофотометра и проверяют степень деоксигенированности миоглобина, измеряя оптическую плотность раствора при 504 и 560 нм. Расчет полноты перехода оксимиглобина в дезоксимиоглобин осуществляют, используя коэффициент миллимолярной экстинкции при указанных длинах волн. После этого вводят в сатуратор определенную порцию воздуха при помощи микрошприца 11, пробив иглой резиновую мембрану 8, находящуюся в муфте 3. После 5-ти минутного покачивания сатуратора измеряют оптическую плотность раствора при 560 нм. Измерения ведут относительно контрольной пробы, содержащей все компоненты смеси кроме миоглобина. Строят графики зависимости содержания оксиформы миоглобина в процентах от содержания кислорода в сатураторе. Процентное содержание оксимиоглобина (МЬОг), образовавшегося в сатураторе, определяют по формуле где DMb - оптическая гілотность раствора при 560 нм деоксигенированного миоглобина; Dx - оптическая плотность при 560 нм раствора миоглобина при заданном парциальном давлении Ог в сатураторе; DMbO2 - оптическая плотность раствора миоглобина при 560 нм при парциальном давлении кислорода в сатураторе, равном давлению кислорода в воздухе. Парциальное давление кислорода в сатураторе определяют по формуле р _ Ра • Vo ^ F ~ —v— х< где Pt - давление кислорода в сатураторе; Ра - давление кислорода в воздухе; Vo - объем воздуха, поданного в сатуратор; Vt - объем сатуратора минус объем миоглобина; Fx - объем кислорода, находящегося в связанном с белком состоянии, _ [МЬОг] • Vp -RT • 760 Fx ~ Vt ' где R ' 0,082; Т - абсолютная температура раствора в С°; р - объем белка. 15866 ФИГ. I «7 ФИГ. 2 Упорядник Замовлення 4205 Техред М.Моргентал Коректор Л.Лукач Тираж Підписне Державне патентне відомство України, 254655, ГСП, КиТв-53, Львівська пл., 8 » Відкрите акціонерне товариство "Патент", м. Ужгород, вул.Гагаріна, 101