Спосіб одержання гепаріну

СОЮЗ СОВЕТСКИХ СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ " РЕСПУБЛИН 1375115 A3 ці) 4 A 61 К 31/725 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ (21) (22) (31) (32) (33) 2897802/28-14 , ; ", ,'Д'" ."V S 20.03.80 ",/•'; ' " RI-705 . " ,- Г / , " . "'• '", 21.03.79 ; . • .; : *; HU ' ' • , ' (46) 15.02.88. Бюл. Г 6 (71) Рихтер Гедеон Ведьесети Дьяр РТ (ни) ;'/.; (72) Иштван Такач, Дьердь Керей, Янош Иллеш, Петер Рудольф, Пал Гере, Ласло Цебе и Эржебет Несмельи (ни) (53) 615.45:615.7(088.8) (56) Кожевникова И.В. Способы получения гепарина. М., 1977, с. 11. (54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕПАРИНА путем экстрагирования гепаринсодержащего сырья в щелочных условиях при нагревании, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, гепаринсодержащее сырье с 90-95%-ным содержанием сухого вещества обрабатывают 1,512%-ным раствором поваренной соли при рН 8-12,8 при периодической или непрерывной протнвоточной экстракции при 20-80°С. І СО >;:;.•. с t 1375115 Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, в частности к способам получения фармацевтических препаратов. , Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта. Поставленная цель достигается тем, что гепаринсодержащее сырье с 90-95%-ным содержанием сухого вещест- JO ва обрабатывают 1,5-12%-ным раствором поваренной соли при рН 8-12,8 при периодической или непрерывной противоточной экстракции при 20-80 С. Способ осуществляют следующим 15 образом. Богатое гепарином, аморфное, зернистое, с устойчивой формой сырье с большой удельной поверхностью, содержащее 90-95% сухого вещества, в вод- 20 ной среде при температуре и величине рН, оптимальных для данного способа переработки сырья, подвергают периодической или непрерывной противоточной экстракции солевым раствором. 25 Противоточную экстракцию проводят при 20-80°С, концентрации электролита (концентрации соли 1,5-12,0%) и при ' рН 8-12,8 или в 0,5-1,0 н.щелочном растворе. 30 В ходе всего процесса экстракции 'целесообразно поддерживать постоянство концентрации электролита, температуры и величины рН. Соотношение между экстругирующим солевым раст35 вором и сырьем следует установить таким образом, чтобы образующаяся экстракционная вытяжка содержала 150300 1Е/мл гепарина. Для этого целесообразно поддерживать соотношение 40 сухого вещества и жидкости примерно равным 1:5. Для установления величины рН применяют основания одновалентных или многовалентных металлов, целесообразно едкий натр или другие 45 щелочи, обычно используемые для экстракции гепарина, В качестве электролита применяют любые соли, инертные по отношению к гепарину, предпочтительно хлористый натрий. 50 В качестве сырья, богатого гепарином, берется сырье, которое содержит минимально на 5-35% (в расчете на сухое вещество) больше гепарина, 55 чем любое природное сырье. Противоточную экстракцию проводят в аппарате периодического действия вплоть до полного извлечения или же і непрерывным образом, целесообразно в U-обраэном экстракторе. v Б качестве исходного материала . применяют богатый гепарином сухой концентрат, который является зернистым и аморфным и имеет высокую удельную поверхность. ^ Способ поясняется следующими примерами. П р и м е р 1. Содержащее гепарин сырье аутолизируют и экстрагируют в присутствии толуола растворами электролита. 20 кг этого материала интенсивно перемешивают в реакторе с ру- • башкой вместе со 100 кг тонкоиэмель™ ченных свиных кишок, содержащих 18% сухого вещества и 150 л 10%-ного раствора сульфата аммония. После смешения смесь нагревают до 38°С. Затем при перемешивании устанавливают рК смеси 8,8-9,2 прибавлением 40%-ного раствора едкого натра. Чтобы избежать вредных микробиологических процессов к смеси прибавляют 3 л толуола. После прибавления ферментов при 38 С в течение 36 ч проводят аутолиз, при этом смесь время от времени перемешивают. Контролируют рН среды каждые 6 ч и по мере надобности устанавливают на заданную величину прибавлением 40%-ного раствора едкого натра. После 36 ч аутолиэа рН среды устанавливают равным 7,3-7,7 18%-ной соляной кислотой и смесь кипятят. После 10-минутного кипячения отделяют скоагулировавшиеся части на ситчатом фильтре. Фильтрат при 60 С сепарируют, освободив его от жира. Получают 638 г темно-коричневого экстракционного бульона, концентрация в котором гепарина составляет > 18,1 IE/мл, что соответствует 11,54 М1Е гепарина. Выход составляет ,лишь 7 6%. П р и м е р 2. 5,0 кг содержащего гепарин сухого концентрата разделяют на 10 равных частей. Эти порции, по 0,5 кг каждая, обрабатывают способом периодической пятиступенчатой противоточной экстракции. Отдельные с т а дии проводят следующим образом. Пер- ,_ вую порцию высушенного концентрата органа и подогретого до 40 С 0,25 н.раствора едкого натра, содержащего 6% поваренной соли, прибавляют к 3,2 л экстракционной смеси. Через 20 мин экстракт отфильтровыва 1375115 ют под разрежением через воронку Бюхнера. Поверхность фильтра образуется металлической сеткой с диаметром отверстий 0>6 ММ. Первый экстракционный раствор собирают, определяют его объем и замеряют его гепариновую активность. Влажный остаток органа, оставшийся на проволочном сите, снова смешивают с подогретым до 40°С 0,25 н . р а с т в о ром едкого натра, содержащим 6% поваренной соли, при этом снова устанавливают объем экстракционной смеси 3,2 л . Вторую экстракцию уже однажды проэкстрагированной массы органа проводят таким же способом. Фильтрат, образующийся при второй экстракции первой порции концентрата органа, смешивают со второй порцией высу20 шенного концентрата. Снова устанавливают объем экстракционной смеси 3,2 л . Последующие стадии соответственно проводят аналогично. В конечном р е - 25 зультате проводят периодическую противоточную экстракцию в 5 стадий. Экстракционный объем всегда составляет 3,2 л , температура 40°С. Из 5 к г исходного материала, с о - 30 держащего 90,4% сухого вещества, пятиступенчатой периодической э к с т ракцией получают 2,599 М1Е гепарина. П р и м е р 3. Содержащий гепарин сухой концентрат экстрагируют. 35 40 кг сырого материала хорошо перемешивают с 400 л воды. Устанавливают рН 2,7 соляной кислотой и смесь нагревают до 38 С. Прибавляют пепсин в количестве, соответствующем 10 кг слизистой оболочки свиного желудка, затем снова устанавливают рН 2 , 7 . При постоянном перемешивании в течение 20 ч проводят протеолиз, поддерживают температуру 37-39°С. *с После 20-часового протеолиза устанавливают рН среды 8,0 40%-ным раствором едкого натра и к смеси прибавляют при 37 С 20 л активированной смеси поджелудочной железы. Второй протеолиз продолжается 10 ч . Каждые 2 ч контролируют величину рН и по мере необходимости снова устанавливают ее 8,0 при помощи раствора едкого нат ра. Температуру поддерживают 37°С. После второго протеолиза смесь кипятят и затем фильтруют через ситчатый фильтр. Получают 417 л фильтрата к о ричневого цвета, концентрация гепарина в котором составляет 32,0 1Е/мл, т . е . общее содержание гепарина равно 13,32 М1Е. П р и м е р 4. Богатый гепарином сухой концентрат экстрагируют непрерывным противоточным способом в U -образном экстракторе.Высушенный исходный материал непрерывно подают в аппарат при помощи шнекового д о з а тора. Из распылительной головки, расположенной над дозатором, прибавляют двойной объем подогретого до 70 С 0,55 н.раствора едкого натра, содержащего 6% поваренной соли. Время пребывания материала в шнековом д о заторе составляет 10 мин. Противотоком к набухшему материалу, находящемуся в отдельных камерах U-образного экстрактора, подают 0,1 н.раствора едкого натра, содержащего 6% поваренной соли. В ходе непрерывной противоточной экстракции поддерживают постоянную температуру 50 С, с целью улучшения массообмена включают вибратор, р а с положенный у днища Ц-образного э к с т рактора.. Объем непрерывно образующегося почти совершенно прозрачного экстракта светло-соломенно-желтого цвета замеряют при помощи ротаметра. Концентрацию гепарина определяют в пробах, отбираемых каждые 0,5 ч . Гепарин, содержащийся в э к с т р а к т е , высаждают также непрерывно, образующийся осадок отделяют на фильтре бараб анного типа. Применяемая аппаратура имеет производительность 10 кг сухого концепт-р а т а / ч , время пребывания составляет 35 мин. При 10-часовой работе получают 210 л экстракта, средняя активность которого по гепарину с о с т а в л я ет 252 IE/мл. Выход составляет 52,9 М1Е в расчете на 100 кг исходного материала, содержащего 90,4% сухого вещества. Тираж 655 ВНИИПИ Заказ 622/57 Подписное Произв.-полигр. п р - т и е , г. Ужгород, ул. Проектная, 4