Спосіб оцінки кислотності шлункового соку

Спосіб оцінки кислотності шлункового соку, який включає відбір та підготовку проби досліджуваної рідини, підготовку капіляра приладу до роботи, введення досліджуваної рідини в капіляр, розподіл компонентів проби, виявлення і реєстрацію процесу на електрофореграмі, обробку результатів дослідження та визначення аніонів хлору, який відрізняється тим, що додатково визначають концентрацію катіонів натрію та одночасно аналізують дані щодо вмісту їх в слині. (19) (21) u200814706 (22) 22.12.2008 (24) 25.05.2009 (46) 25.05.2009, Бюл.№ 10, 2009 р. (72) МАРКІНА МАРИНА ВОЛОДИМИРІВНА, UA, КАЧАНОВ СЕРГІЙ ОЛЕКСАНДРОВИЧ, UA, ВЯТКІН ОЛЕКСАНДР КОСТЯНТИНОВИЧ, UA, ЛЯШЕНКО ВАЛЕНТИНА ПЕТРІВНА, UA, РУДЕНКО АНАТОЛІЙ ІВАНОВИЧ, UA, ЧЕЛКАН ВІРА ВОЛОДИМИРІВНА, UA (73) ДЕРЖАВНА УСТАНОВА ІНСТИТУТ ГАСТРОЕНТЕРОЛОГІЇ АМН УКРАЇНИ, UA 3 41512 4 На основі отриманих даних пропонуємо новий влюють на вході капіляру, другу пробірку з буферспосіб визначення стану кислотоутворюючої фунним розчином (1) встановлюють на виході капілякції шлунку за електролітним складом слини, а ру. Перемикач приладу встановлюють в режим саме за рівнем катіонів натрію та аніонів хлору. "Введення проби". Введення проби виконують під Відомі способи оцінки стану організму людини тиском 30 мБар, протягом 10 с (при ефективній за вмістом хімічних речовин в біологічних матеріадовжині капіляра - 50 см). По закінченню введення лах. Так відомий спосіб кількісного визначення проби перемикач приладу встановлюють в режимі нітрит аніону в біологічній рідині [див. Green L.C., "Аналіз". До вхідного кінця капіляру підводять проWag-ner D.A., Glogowski J. [et al.] Skipper P.L., бірку з буферним розчином і джерело електричноWishnok J.S., Tannenbaum S.R., Analysis of nitrate, го струму напругою 17 кВ негативної полярності та nitrite and [15N] nitrate in biological fluids. Analytical проводять аналіз протягом 10 хвилин. Розділення Biochemistry, 1982, 126, №1, p. 131-138], що полякомпонентів суміші рідини відбувається за рахунок гає в розведенні зразків досліджуваних біологічних розходження швидкостей їх міграції в капілярі, що рідин (наприклад, слина в 20 разів, сеча в 20 разів, знаходяться під впливом електричного поля. Комшлунковий сік в 3 рази і т.д.) до певної концентрапоненти, що розділяються, виходять з різними ції, додаванні до 0,5 мл розведеної біологічної швидкостями і фіксуються автоматично за допоморідини 0,1 мл 35 % сульфасаліцилової кислоти, з гою фотометричного детектора на довжині хвилі наступним перемішуванням суміші протягом 30 хв 254 нм на електрофореграмі, яка уявляє собою при кімнатній температурі до повного осадження набір добре виражених позитивних піків, що піднібілків, після чого суміш центрифугують 15 хв при маються над базовою лінією. Отримані аналітичні 3500 об/хв. Надосадову рідину відділяють і додасигнали у вигляді позитивних піків на електрофоють до неї розчин лугу (NaOH) до нейтрального реграмі використовують для ідентифікації та кільрН. Отриману рідину пропускають через кадмієві кісного визначення. Ідентифікацію проводять шляколонки. Після цього рідину змішують з реактивом хом порівняння отриманих та табличних даних. Гріса у співвідношенні 1:1 і нагрівають 30 хв при Концентрацію аніона в пробі визначають за вели60°С з наступним охолодженням в льодяній бані чиною площини піків цього аніона і калібрувальної при 0°С протягом 20 хв. Охолоджену рідину наликривої. Після завершення аналізу прибор перевовають в кювету і поміщають в спектрофотометр дять у режим "Промивання капіляру". для визначення величини оптичної густини рідини Як найближчий за технічною суттю до способу при довжині хвилі 546 нм. Паралельно визначають який заявляється цей спосіб обраний за прототип. оптичну густину стандартного розчину нітриту наНедоліками способу є його неефективність трію (Na). Після цього будують калібровочну криву при комплексному дослідженні біологічної рідини, і визначають на її основі кількість в досліджуваній а також його результати не відображають повною рідині. мірою стан організму пацієнта що не дає змоги Також відомий спосіб визначення аніонів хлодосить точно підтвердити чи спростувати діагноз. ру в слині та шлунковому соку (пат. № 19721 В основу рішення, що заявляється, поставлеG01N33/50, G01N21/79, 2006) який здійснюється на задача розробити спосіб визначення стану кисшляхом капілярного електрофорезу за допомогою лотоутворюючої функції шлунку за електролітним прибору типу "Капель 103Р", що випускає фірма складом слини, який забезпечував би простоту і "Люмекс" м. Санкт-Петербург. Спосіб вбирає низку точність визначення за допомогою доступних припослідовних етапів: відбір і підготовка проби доладів.сліджуваної рідини, підготовку прибору, введення Поставлена мета досягається за допомогою досліджуваної рідини в капіляр, розділення компододаткового визначення концентрації катіонів нанентів проби, виявлення та реєстрацію процесу на трію та одночасного аналізу даних щодо вмісту їх електрофореграмі, обробку результатів дослів слині. дження. Пробу досліджуваної рідини в об'ємі 5 мл Спосіб визначення катіонів натрію та аніонів розміщують в пробірку Епендорфа, центрифугухлору в слині та шлунковому соку виконують шляють протягом 5 хвилин зі швидкістю 6000 оберхом капілярного електрофорезу за допомогою тів/хв, а потім фільтрують через целюлозноприбору "Капель 103Р" російської фірми "Люмекс", ацетатний фільтр. Капіляр прибору перед досліваг лабораторних, дозаторів пипеточних змінних дженням промивають протягом 5 хвилин розчинаобсягів, рН-метру, програмного забезпечення "Муми: хлороводневої кислоти, дистильованої води, льтихром". розчином натрію гідроксиду, робочим буферним Сутність методу капілярного електрофорезу розчином. Для ідентифікації аніонів використовузаснована на міграції та розподіленні компонентів ють буферні розчини: перший складається із сумірідинної суміші під впливом електричного поля, ші оксиду хрому (VI), діетаноламіну, дистильованої забезпечує дуже високу ефективність розподіленводи, цетилтриметиламонію броміду, взятих у ня, малий расход реактивів, для аналізу необхідна співвідношенні 2,0:4,0:2,0:2,0 (см3) відповідно; друмала кількість проби. Швидкість аналізу - висока, гий отримують розбавленням першого буферного апаратурне застосування - просте і зручне. розчину водою дистильованою у співвідношенні Спосіб включає ряд послідовних етапів: відбір 1:10. Між вимірюваннями капіляр промивають по 5 та підготовку проби досліджуваної рідини (слину хвилин дистильованою водою і буферним розчивідбирають натще, після ретельного промивання ном. Перед вимірюванням в пробірку за допоморотової порожнини дистильованою водою; гою дозатора вносять 300 мкл досліджуваної рідицентрифугують та фільтрують), підготовку капіляни і 300 мкл хроматного буферного розчину (2), їх ру приладу до роботи, введення досліджуваної перемішують. Пробірку з цими розчинами встанорідини в капіляр, розподіл компонентів проби, ви 5 41512 6 явлення і реєстрацію процесу на електрофорегпершими буферами передбачає поляризацію прорамі, обробка результатів дослідження. би та подальше розпізнання при скануванні. РозСпосіб визначення катіонів натрію та аніонів міщення капілярної трубки між поляризованими хлору в слині та шлунковому соку містить підготопробами та другими буферними розчинами відвку проби, центрифугування в технологічно пройтворює капілярний електрофорез, сприяє перемінятому режимі, ідентифікацію на заданій довжині щенню проби для остаточної ідентифікації та розхвилі аналізатора, та якісно-кількісний аналіз, скапізнання. Отже сукупність умов відтворення нують оптичну щільність поляризованих проб, пекапілярного електрофорезу виключає необхідність ретворюють її у аналогово-цифровий сигнал, використання хімічних засобів, забезпечує оптиотримують електрофореграми, з яких ідентифікумальні рівні поляризації, стабілізує експозицію ють амплітуди сигналів катіонів та аніонів, при відінтервалів між періодами їх виділення в пробі. повідній полярності потенціалів джерела живленОзначені властивості капілярного електрофорезу ня. Пробу досліджуваної рідини розміщують в істотно збільшують чутливість ідентифікації, що пробірку Епендорфа, центрифугують 5 хвилин зі забезпечує підвищення об'єктивності та вірогідношвидкістю 5-6 тис. обертів/хв., а потім фільтрують сті визначення. через целюлозно-ацетатний фільтр. Поляризація Виконання способу, що заявляється, ілюструпроб здійснюється першими буферними розчинається конкретними прикладами. ми, між поляризованими пробами та другими буПриклад 1 ферними розчинами розміщують капілярну трубку, Хворий С, 41 рік. Знаходився під спостерез можливістю підтримки тиску 30 мБар протягом 5 женням у відділенні захворювань печінки та підсек в її порожнині (для визначення катіонів) і 30 шлункової залози ІГАМНУ з 03.04.06 по 10.05.06. мБар протягом 10 сек (для визначення аніонів), та Скарги: на швидку стомлюваність, біль, печію, впритул до капілярної трубки встановлюють аналівідчуття тяжкості і розпирання в епігастральній затор, а сканування оптичних щільностей поляриобласті, дискинетичний синдром. зованих проб здійснюють під час міграції останніх Об'єктивно: Гіперстенічної статури, шкіра і викрізь капілярну трубку. Перший буферний розчин димі слизові оболонки звичайного забарвлення. для ідентифікації профілю катіонів формують у Язик вогкий, чистий. Живіт м'який, трохи болючий вигляді суміші бензимідазолу, винної кислоти, 18в епігастрію. краун-6 та води дистильованої, взятих у співвідДані лабораторних і інструментальних досліношенні 3,0:1,0:2,0:4,0 см3. Другі буферні розчини джень: загальний аналіз крові - без патології, УЗД отримують змішуванням 1 см3 буферного розчину органів черевної порожнини, гастроскопічне дослі№ 1 та 9 см3 дистильованої води. Буферний роздження; відомими заходами проводили збирання чин № 1 для визначення аніонів - хроматний, який шлункового соку та слини з метою визначення складається з 2 см3 розчину оксиду хрому (VI) пеелектролітного стану. Було виявлено, що у хворовної концентрації, 4 см3 розчину діетаноламіну, 2 го - постхоліцистектомічний синдром гепатопанксм3 дистильованої води та 2 см розчину цетилтриреатична форма з больовим синдромом та дискиметиламоніюброміду (ЦТАБ). Другий буферний нетичним синдромом; гіперацидна секреція; розчин розбавляють дистильованою водою у співзберігана функція головних клітин та знижена фувідношенні 1:10. нкція поверхнево-епітеліальних клітин. Виражений Розділення компонентів суміші рідини відбувадуоденогастральний рефлюкс. Недостатня функється за рахунок розходження швидкостей їх мігція пілоричного сфінктера. рН шлункового соку рації в капілярі, що знаходяться під впливом елек=2,0. Співвідношення коефіцієнтів Na+ слини/ Na+ тричного поля. Компоненти, що розділяються, шлункового соку =1,45 ммоль/л, співвідношення виходили з різними швидкостями і фіксувалися коефіцієнтів Сl- слини/ Сl- шлункового соку =0,47 автоматично за допомогою фотометричного детеммоль/л. ктора на довжині хвилі 254 нм на електрофорегПриклад 2 рамі, яка уявляє собою набір добре виражених Хвора М., 49 рік. Знаходилася під спостерепозитивних піків, що піднімаються над базовою женням у відділенні захворювань печінки та підлінією. Отримані аналітичні сигнали у вигляді пошлункової залози ІГАМНУ з 09.02.06 по 07.03.06. зитивних піків на електрофореграмі використовуСкарги: на періодичний біль, здуття живота, вали для ідентифікації та кількісного визначення. гіркоту, сухість у роті, тошноту, періодичну рвоту. Концентрацію елементів в пробі визначали за веОб'єктивно: Гіперстенічної статури. Слизові личиною площини піків відповідного катіону (або оболонки чисті. Язик червоний, біля кореня обклааніону) і калібрувальної кривої. дений білим нальотом.. Живіт м'який, безболісний. Перетворення результатів сканування в анаПечінка збільшена по серединно-ключичній лінії + логово-цифровий сигнал засвідчує витончену, 2-3 см, край закруглений, еластичний. більш прозору графологічну картину поточної проДані лабораторних і інструментальних досліби. Виготовлення буферних розчинів дозволяє джень: загальний аналіз крові - без патології, УЗД отримати та підготовити форетичне й електрофоорганів черевної порожнини, гастроскопічне досліретичне середовище для відтворення процесу, дження; відомими заходами проводили збирання забезпечує поляризацію проби, міграцію її компошлункового соку та слини з метою визначення нентів, та виявлення кількісного вмісту. Центрифуелектролітного стану. Було виявлено, що у хворої гування проби зі швидкістю 6000 об/хв протягом 5 - постхоліцистектомічний синдром гепатопанкреахвилин переслідує її дегазацію для безперешкодтична форма; антацидна гіпосекреція; знижена ного потрапляння в порожнину капілярної трубки функція головних та поверхнево-активних клітин. та подальшого переміщення. Змішування проб з Виражений дуоденогастральний рефлюкс. рН 7 41512 8 шлункового соку =6,7. Співвідношення коефіцієнтів органів черевної порожнини, гастроскопічне досліNa+ слини/ Na+ шлункового соку =0,076 ммоль/л, дження; відомими заходами проводили збирання співвідношення коефіцієнтів Сl- слини/ Сl- шлункошлункового соку та слини з метою визначення вого соку =0,179 ммоль/л. електролітного стану. Було виявлено, що у хвороПриклад 3 го - постхоліцистектомічний синдром панкреатична Хвора Т., 53 роки. Знаходився під спостереформа; нормоацидна гіпосекреція; ерозивний гасженням у відділенні захворювань печінки та підтродуоденіт; хронічний коліт; знижена функція пошлункової залози ІГАМНУ з 12.05.07 по 28.05.07. верхнево-епітеліальних клітин. Виражений дуодеСкарги: на швидку стомлюваність, біль, яка ногастральний рефлюкс. посилюється через 1-1,5 години після їжі, іноді рН шлункового соку =3,7. Співвідношення конічний біль, періодичну нудоту. ефіцієнтів Na+ слини/ Na+ шлункового соку =0,497 Об'єктивно: Гіперстенічної статури, шкіра і виммоль/л, співвідношення коефіцієнтів Сl- слини/ Сlдимі слизові оболонки звичайного забарвлення. шлункового соку =0,314 ммоль/л. Язик вогкий, чистий. Живіт м'який, болючий в верДані таблиці 1 дають можливість спостерігати хній половині. пряму залежність між катіонами натрію та аніонаДані лабораторних і інструментальних досліми хлору та кислотоутворюючої функцією шлунку. джень: загальний аналіз крові - без патології, УЗД Таблиця 1 рН Співвідношення коефіціє+ + нтів Na слини/ Na шлункового соку співвідношення коефіцієнтів Сl- слини/ Сl- шлункового соку рН шлункового вмісту 0,95-2,0 рН шлункового вмісту 2,0- рН шлункового вмісту 5,04,0 7,0 та більше 1,4÷1,5 ммоль/л 0,4÷0,5 ммоль/л 0,07÷0,08 ммоль/л 0,4÷0,5 ммоль/л 0,3÷0,4 ммоль/л 0,1÷0,2 ммоль/л Робота, згідно з заявленим способом може бути виконана в умовах звичайної лабораторії при кімнатній температурі, атмосферному тиску та вологості, згідно з вимогами до лабораторії. Всього виконано 60 аналізів дослідження слини та шлункового соку, отриманих у людей з захворюваннями органів травлення. Спосіб забезпечує високу чутливість розпізнання компонентів, точність дослідження, швидкість визначення і головне для виконання аналізу необхідна мала кількість проби, що дозволяє досліджувати рідини невеликого об'єму. Спосіб зби рання об'єктів дослідження (слини та шлункового соку) простий, доступний не обтяжливий та безпечний для людини. Використання запропонованого способу дозволить скоротити час визначення, зменшити трудомісткість способу за рахунок скорочення багатьох довготривалих етапів, значно знизити витрати на його проведення та головне дати можливість пацієнтам, які не переносять зондування, або які мають протипоказання з різних причин на використання зонду, визначити рівень кислотоутворюючої функції шлунку.