Спосіб діагностики прееклампсії вагітних

Спосіб діагностики прееклампсії вагітних шляхом оцінки стану перекисного окислення ЛІПІДІВ, Винахід, що заявляється, відноситься до медицини, зокрема до такого її розділу, як акушерство і гінекологія, і може бути використаний для підвищення точності і інформативності діагностики прееклампсії вагітних Прееклампсія залишається однією з найбільш актуальних проблем в акушерстві Це пов'язано з частотою даної патології (11-16%), яка є основною причиною материнської та перинатальної захворюваності і смертності і одним з найнебезпечніших ускладнень вагітності і пологів [1] ВІДОМІ способи діагностики прееклампсії не забезпечують точність встановлення діагнозу, а саме від точності встановлення діагнозу прееклампсії залежить своєчасність призначення специфічного, патогенетичне обґрунтованого лікування, необхідного для попередження розвитку тяжких ускладнень для вагітної та плоду Це можна пояснити тим, що жоден з відомих способів діагностики не враховує всіх патогенетичних змін, що лежать в основі розвитку прееклампсії, зокрема не враховується стан ендотелію - основного органу-мішені, який зацікавлений в розвитку прееклампсії Так, відомий спосіб діагностики прееклампсії, що передбачає визначення стероїдного профілю сечі вагітної (андростерон, етюхоланолон, депдроепіандростерон, 11-кетоандростерон, 11кетопрегнандюл, 11 -пдроксиандростерон, 11 пдроксиетюхоланолон, прегнандюл, прегнанолон, естрадюл, холестерин та ш) [2] Зміни кожного показника коливаються в межах від 10 до 97%, залежно від ступеня тяжкості прееклампсії Як ви який відрізняється тим, що визначають жирнокислотний спектр сироватки крові, а саме вміст олеїнової та лінолевої кислот, ессенціальних жирних кислот (ейкозатрієнової, арахідонової, ейкозапентаєнової), а також суму поліненасичених жирних кислот, розраховують співвідношення сумарного вмісту ессенціальних жирних кислот до вмісту олеїнової кислоти та вмісту лінолевої кислоти до суми поліненасичених жирних кислот і при їх значеннях 0,30 і більше та 0,82 і менше, ВІДПОВІДНО, діагностують прееклампсію вагітних дно, дана методика для встановлення діагнозу прееклампсії потребує визначення дуже великої КІЛЬКОСТІ параметрів, кожен з яких має свою похибку, сумарна похибка при цьому буває досить високою, тому даний спосіб не може бути достатньо точним Обмеженням цієї методики є відсутність характеристики стану мембран, що знижує його інформативність Відомий також спосіб діагностики прееклампсії вагітних, за яким для характеристики стану перекисного окислення ЛІПІДІВ (ПОЛ) визначають вміст дієнових кон'югатів (ДК), малонового диальдепда (МДК) та активність супероксиддисмутази (СОД) Вміст ДК і МДК у вагітних з прееклампсією перевищує середній показник в 1,67 рази, активність СОД залишається незмінною [3] Оскільки стан ПОЛ не є специфічним механізмом розвитку прееклампсії (підвищення рівня ПОЛ спостерігається і при багатьох інших ппоксичних станах), то цей спосіб не дає можливість точно діагностувати преек-лампсію Обмеження способу ще й в тому, що дані показники характеризують зміни СТІЙКОСТІ лише еритроцитарних мембран у вагітних, що знижує його інформативність Найближчим аналогом (прототипом) способу, що заявляється, є спосіб діагностики прееклапсм вагітних шляхом визначення оцінки стану перекисного окислення ЛІПІДІВ (ПОЛ) у сироватці крові, зокрема концентрації ліпоперекисів за вмістом малонового диальдипду (МДА) - продукту пероксидацм ненасиченних жирних кислот [4] Спектри поглинання вимірюють на спектрофотометрі "Спе (О о о (О 60076 логія та ІНШІ) За доступними даними такий спосіб діагностики невідомий Запропонований спосіб діагностики прееклампсм вагітних здійснюється наступним чином Для дослідження жирнокислотного спектру ЛІПІДІВ беруть 5мл крові вранці натще з кубітальної вени вагітної, яку центрифугують для отримання сироватки Екстракцію ЛІПІДІВ з сироватки проводять за відомим методом Фолча Пробу сироватки в КІЛЬКОСТІ 0,5-1,0мл поміщають в пробірку з притертою пробкою ємністю Юмл, додають 5-7мл суміші хлороформ/метанол (у співвідношенні 2 1) і тримають ЗОхв в холодильнику Для кращого розділення фаз додають 1мл дистильованої води Далі відбирають хлороформну нижню фазу піпеткою Пастера Для повної реакції етап екстракції повторюють Дана методика є недостатньо точною, тому що ДВІЧІ Об'єднані хлороформні екстракти концентзалежність отриманих результатів від умов експерують упарюванням до сухості в потоці азоту при рименту коливається в дуже широких межах Спо45°С на водяній бані сіб-прототип має ще й наступі недоліки характеризує процес перекисного окислення ЛІПІДІВ лише Гідроліз та метилювання вищих жирних кислот за рівнем перекисів ненасичених жирних кислот ЛІПІДІВ здійснюють за методом Синяк К М , який Цей параметр тільки опосередковано вказує на полягає в тому, що до сухого осаду ЛІПІДІВ додаспіввідношення вазоконстрикторних та вазодилають 5мл 1% H2SO4 в метанолі і переносять розчин таторних медіаторів, що синтезуються ендотелієм в скляну ампулу ємністю Юмл Після запарювання (підвищений рівень окислення ліпопротеїдів припроводять гідроліз і метилювання в термостаті при гнічує синтез простацикліну і N0 в ендотелії су-85°С протягом 20 хвилин дин) Це знижує інформативність даної методики Екстракцію метильованих жирних кислот проводять ДВІЧІ гексан-ефірною сумішшю (у співвідЗадача, що вирішується винаходом, полягає у ношенні 1 1) в КІЛЬКОСТІ 5мл Для розділення фаз вдосконаленні способу діагностики прееклампсм додають 1мл дистильованої води Відбирають вагітних шляхом оцінки стану перекисного окисверхню фазу піпеткою Пастера Об'єднані екстраклення ЛІПІДІВ та ендотелію на основі визначення ти випарюють до сухості в потоці азоту при -45°С жирнокислотного спектру сироватки крові на водяній бані Сухий осад розчиняють в 40-50мл Технічним результатом нового способу буде чистого гексану і вводять у випарювач хроматогпідвищення точності та інформативності діагносрафа в КІЛЬКОСТІ 5мкл тики прееклампсм вагітних, а також можливість динамічного контролю за станом ендотеліальних Газохроматографічний аналіз спектру жирних мембран кислот ЛІПІДІВ здійснюється на газовому хроматографі серн Цвіт-500 в ізометричному режимі з плоПоставлена задача вирішується тим, що у віменисто-юнізаційним детектором при наступних домому способі діагностики прееклампсм вагітних умовах для визначення спектру жирних кислот шляхом оцінки стану перекисного окислення ЛІПІЛІПІДІВ використовують скляну колонку (розміром ДІВ, згідно винаходу, визначають жирнокислотний ЗмхО.Зсм), яка заповнена фазою 5% ПЕГС на хроспектр сироватки крові, а саме вміст олеїнової та матоні N-AW-HMDS (зернш-ня 0,125-0,160мм), лінолевої кислот, ессенціальних жирних кислот температура колонки 190°С, температура випаро(ейкозатрієнової, арахідонової, ейкозапентаєновувача 250°С, витрата азоту і водню 35мл/хв, повівоі), а також суму поліненасичених жирних кислот, тря - 200мм/год, швидкість діаграмної стрічки розраховують співвідношення сумарного вмісту 240мм/год, чутливість шкали 10 7А, об'єм проби, ессенціальних жирних кислот до вмісту олеїнової що вводиться, 3-5мкм, тривалість аналізу - 20хв кислоти та вмісту лінолевої кислоти до суми поліненасичених жирних кислот і при їх значеннях 0,30 Кількісну оцінку спектру жирних кислот ЛІПІДІВ і більше та 0,82 і менше, ВІДПОВІДНО, діагностують проводять за методом нормування площ і визнапрееклампсію вагітних чають долі кислот в процентах Похибка визначення становить 10% [7] В спектрі жирних кислот ВІДМІННОЮ особливістю запропонованого спо(ЖК) визначають вміст олеїнової (С18 1) та лінособу є використання для діагностики прееклампсм левої (С18 2) кислот, як найбільш чутливих до нового, більш специфічного критерію, яким є вміст змін, що відбуваються в організмі вагітної з преекполіненасиченних жирних кислот (ПНЖК) та жирлампсією, а також ессенціальні жирні кислоти (ейно-кислотний спектр сироватки крові загалом Це козатрієнову, арахідонову, ейкозапентаєнову) та дає можливість дослідити саму основу метаболічсуму ПНЖК (лінолеву, ейкозатрієнову, арахідононих зрушень в організмі вагітної У прототипі стан ву, ейкозапентаєнову), які характеризують стан ПОЛ характеризується на основі аналізу вмісту мембран, в тому числі ендотеліальних, де синтемалонового диальдипду, який є продуктом пер зуються регуляторні медіатори Після цього розраоксидації ПНЖК і засвідчує лише факт активації ховують співвідношення сумарного вмісту вказапроцесу пероксидацм, що не є специфічним для них ессенціальних жирних кислот до вмісту олеїстану прееклампсм вагітних і може спостерігатись нової кислоти К1=Еесенц/С18 1 та вмісту лінолепри різноманітних патолопях (інфекційні захворювої кислоти до суми ПНЖК К2=С18 2/ЕПНЖК вання, патологія нирок, печінки, акушерська патокорд М40" Визначення окислення ліпопротеїдів в сироватці крові проводять за методом KYagi Розрахунок концентрації МДА проводять з використанням коефіцієнту молярної екстинкції для продукту реакції малоновий диальдепдл'юбарбітурова кислота (1 2) Оцінка спектрів поглинання видимого спектру (500-600нм) показала, що максимум поглинання припадає на 535-540 нм, що є характерним для продукту реакції МДАліобарбітурова кислота (1 2), а інтенсивність поглинання залежить від його концентрації Вміст ліпоперекисів в сироватці крові вагітних з прееклампсією знаходився в інтервалі 20-29нмоль МДА на 1мл сироватки Вимірюваний рівень окислення ЛІПІДНИХ пероксидів в залежності від умов експерименту може підвищуватись в 6-20 разів Значення К1 0,30 і більше та значення К2 0,82 і менше вважають діагностичними критеріями прееклампсм Коефіцієнт К1 характеризує ступінь накопичення ессенціальних жирних кислот та зміни процесу ПОЛ (олеїнова кислота метаболічно неактивна, и вміст відбиває зміни гомеостазу) Коефіцієнт К2 характеризує порушення метаболізму жирних кислот на етапі біосинтезу простагландинів та інших ліпопероксидів - простациклінів, тромбоксанів, лейкотрієнів (лінолева кислота є попередником арахідонової кислоти, яка є субстратом 60076 синтезу даних медіаторів) Вказані значення коефіцієнтів були встановлені на основі власного КЛІНІЧНОГО дослідження, описаного далі Основну групу склали 20 вагітних з прееклампсією Контрольну групу -20 жінок з фізіологічним перебігом вагітності Для порівняння була відібрана група з 20 здорових неваптних жінок тієї ж вікової категорії Результати газохроматографічного аналізу жирно-кислотного спектру сироватки наведені в таблиці Таблиця Жирні кислоти С18 1 С18 2 Еесенц ЕПНЖК К1=Еесенц/С18 1 К2=С18 2/ЕПНЖК Неваптні жінки 24,2±1,1 16,0±0,8 2,8±0,3 18,8±1,2 0,12 0,85 Як видно з таблиці, у жінок з фізіологічним перебігом вагітності спостерігається активація метаболічних процесів та збільшення синтезу простагландинів (своєрідний запас МІЦНОСТІ) за умови підвищеного навантаження на організм вагітної жінки порівняно з неваптними жінками 3 іншого боку, розвиток прееклампсм вагітних супроводжується порушеннями метаболізму - активацією ПОЛ та зниженням синтезу регуляторних медіаторів Отримані останніми роками дані підтримують нашу концепцію про те, що прееклампсія є хворобою ендотелію Саме в ендотелії синтезується ряд медіаторів, що забезпечують авто- та паракринну регуляцію судинного тонусу, а саме, простациклін, тромбоксани, лейкотрієни, ендотеліальний релаксуючий фактор (NO), ендотелій, анпотензин-1 та ш [5] Запропонований спосіб діагностики прееклампсм вагітних дозволяє оцінювати стан ендотелію за вмістом ПНЖК, які є важливим компонентом фосфоліпідів, з яких на 80% складається будь-яка мембрана, в тому числі ендотеліальна Приклад конкретного втілення Вагітна П , 23 роки Історія хвороби №3954 Поступила у відділення патології вагітних зі скаргами на незначний ниючий біль в потиличній ДІЛЯНЦІ голови, появу набряків протягом останнього тижня Термін гестацм 39 тижнів Об'єктивно загальний стан задовільний AT 140/80, 145/80ммртст Пульс 86уд/хв, ритмічний, задовільних властивостей Набряки гомілок, стоп, кистей 3 боку внутрішніх органів патології не виявлено Стан плоду кардютокограма за Фішером - 7 балів, біофізичний профіль - 8 балів При дослідження жирнокислотного спектру ЛІПІДІВ отрамані наступні дані пальмітинова кислота 48,2%, стеаринова кислота 10,4%, олеїнова кислота 14,3%, лінолева кислота 21,5%, ейкозатрієнова кислота 0,5%, арахідонова кислота 4,0%, ейкозапентаєнова кислота 1,1%, вміст насичених ЖК 58,6%, вміст ненасичених ЖК 41,4%, вміст поліненасиченихЖК 27,1% Розрахунок коефіцієнтів дав значення 0,39 і 0,79 для К1 і К2, ВІДПОВІДНО Отри Контрольна група 15,9±0,9 24,0±1,3 3,4±0,3 27,4±1,3 0,21 0,88 Основна група 14,8±1,0 20,0±1,1 4,5±0,5 24,5±1,5 0,30 0,82 мані дані дозволили діагностувати у вагітної прееклампсію Наступні лабораторні показники підтвердили діагноз прееклампсм Лабораторні дані Загальний аналіз крові НЬ 120г/л, L 8,5 10*9/л, Ht 0,45, тромбоцити 170г/л, ШОЕ 20мм/год Коагулограма етаноловий тест 2+, нафтоловий тест 3+, протромбіновий індекс 92%, АВР 49", фібриноген бг/л, фібрин 22мг БІОХІМІЯ крові загальний білок 56г/л, загальний білірубін 20,0мкмоль/л, прямий білірубін 0, АЛТ 0,49ммоль/л, ACT 0,72ммоль/л, сечовина 4,4ммоль/л, азот сечовини 1,59ммоль/л Загальний аналіз сечі білок 0,192г/л, ЩІЛЬНІСТЬ 1020, епітелій - помірна КІЛЬКІСТЬ, лейкоцити 5-6 в полі зору, еритроцити 0-0-1, циліндри - палінові 10-15, солі оксалати помірно Рутинні лабораторні дані підтвердили діагноз прееклампсм характерні зміни біохімії (зменшення рівня загального білку, підвищення вмісту печінкових ферментів - ACT, АЛТ), підвищення коагуляційних властивостей крові, поява палінових циліндрів в сечі Спостерігаємо у вагітної класичну тріаду Цангемейстера гіпертензія, набряки, пртеїнурія В період з серпня 2002 року до січня 2003 року у відділенні патології вагітних Пологового будинку №7 запропонований спосіб включали в схему діагностики прееклампсм, у 96% позитивна оцінка співпала з іншими діагностичними критеріями Даний спосіб діагностики є більш точним порівняно з прототипом, при використанні якого позитивна оцінка співпадала з іншими діагностичними критеріями у 78% випадків Таким чином, запропонований спосіб діагностики прееклампсм є більш точним та інформативним за рахунок більш повної характеризацм процесу перекисного окислення ЛІПІДІВ та стану ендотелію у вагітних Список літератури 1 Липко О П Сучасні уявлення про етюпатогенез пізнього гестозу// Педіатрія, акушерство та гінекологія -1997 - №3 - с 92-94 2 Подтетенов А Д , Братчикова Т В , Орлова Е Н Стероидные гормоны и их роль в течение беременности и родов // Москва - 2000 3 Берко А Т , Мелехина Л М ,Берко Е М Перекисное окисление липидов у беременных работниц завода "Скиф"/ /Актуальные вопросы гигиены труда -1995 -с 284 4 Музя Г И , Куликов В И , Пономарева В И , Сухих Г Н Окисление липопротеинов в крови женщин при патологическом течении беременности // Клиническая лабораторная диагностика - 1999 Комп'ютерна верстка О Воробей 60076 8 №3 -с 8-Ю 5 Moncada S, Higgs EA //New Engl J Med 1993 -Vol329 -p 2002-2012 6 Афонина Г Б , Куюн Л А Липиды, свободные радикалы и иммунный ответ - Киев 2000 - 287с 7 Гичка С Г, Брюзгина Т С , Вретик Г М , Рева С Н Газохроматографическии метод определения липидных показателей крови при ишемической болезни сердца // Украинский кардиологический журнал -1998 -№7-8 - с 50-52 Підписано до друку 06 10 2003 Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ТОВ "Міжнародний науковий комітет", вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна