Процес синтезу терапевтичних пептидів

Реферат: Винахід стосується процесу синтезу терапевтичних пептидів за допомогою амідної смоли Сібера, який полягає у застосуванні твердофазної Fmoc-хімії. UA 115542 C2 (12) UA 115542 C2 UA 115542 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Даний винахід стосується нового процесу широкомасштабного синтезу терапевтичних пептидів, які містять неприродні та створені людиною амінокислоти. Процес може бути застосований у широких масштабах та забезпечувати ефективне виробництво високоочищених пептидів. Твердофазний синтез пептидів (SPPS) – це надзвичайно успішний спосіб, вперше запроваджений Мерріфілдом у 1963 році (Merrifield, R. B., J. Amer. Chem. Soc., 1963, 85:214954). Ціла низка пептидів була синтезована до цього часу за допомогою цієї методики. Огляд способів, що використовувались у прототипах винаходу для синтезу пептидів, здійснено Kent, S. B. H., Ann. Rev. Biochem., 1988, 57:957-89. Твердофазний синтез дає змогу с интезувати природні пептиди, які важко експресувати в бактеріях, здійснювати включення неприродних та синтетичних амінокислот, модифікацію пептидного остова та синтез D-білків, які містять Dамінокислоти. Для збирання пептидних ланцюгів за допомогою твердофазного синтезу використовуються дві стратегії: 1) ступінчастий (поетапний) твердофазний синтез і 2) твердофазна конденсація фрагмента. У ступінчастому SPPS, C-кінцева амінокислота у вигляді N-α-захищеної амінокислоти, і якщо це необхідно, похідні із захищеними функціональними групами бічних ланцюгів, ковалентно зв'язуються безпосередньо або за допомогою прийнятного лінкера до "твердої основи"-підложки, напр., полімерної смоли, яка здебільшого набухає в органічному розчиннику. N-α-захисна група видаляється і поетапно додаються наступні захищені амінокислоти. Після отримання пептидного ланцюга бажаної довжини захисні групи бічних ланцюгів видаляються, а пептид відщеплюється від смоли. Процес відщеплення/депротекції може бути здійснений на окремих етапах або впродовж одного й того ж. При конденсації фрагмента на твердій фазі, цільова послідовність збирається шляхом послідовної конденсації фрагментів на твердій підкладці з використанням захищених фрагментів, отриманих внаслідок поетапного SPPS. Одна з форм SPPS базується на використанні флуоренілметоксикарбонільної групи (або "Fmoc") для тимчасового захисту α-аміногрупи. За допомогою цього методу, Fmoc-група ковалентно зв'язується з аміногрупою для пригнічення її нуклеофільності. C-кінцева амінокислота ковалентно зв'язується зі смолою через лінкер. Далі, Fmoc-група видаляється з основи, такої як піперидин. Це вивільняє аміногрупу, яка після цього готова до реакції з активованою амінокислотою. Для завершення реакції необхідний надлишок (переважно від двох до чотирьох разів) активованої амінокислоти. Після кожного етапу депротекції та приєднання, проводиться одне або більше промивань, для того щоб видалити надлишок реагентів. Відщеплення пептиду від смоли з видаленням захисних груп з бічних ланцюгів відбувається шляхом ацидолізу за допомогою розчину кислоти, такої як трифтороцтова кислота (TFA). Загальновизнаною практикою є додавання додаткових реагентів, так званих "скавенджерів", таких як триізопропілсилан (TIPS), тріетилсилан (TES), фенол, анізол, тіоанізол, вода, 1,2етандітіол (EDT), 1-додекантіол, дитіотреїтол (DTT) та індол, з кислотою в розщеплюючій суміші, для того щоб зв'язати звільнені захисні групи бічних ланцюгів, попереджуючи у такий спосіб їх повторне зв'язування з відщепленим пептидом. Амінокислоти мають реакційні функціональні групи на N- та C-кінцевих частинах, які сприяють зв'язуванню амінокислот у процесі синтезу. Крім того, реакційні функціональні групи бічних ланцюгів, що є на більшості амінокислот, можуть взаємодіяти з вільними кінцевими або іншими групами бічних ланцюгів у процесі синтезу та видовження пептиду і негативно впливати на вихід та чистоту продукту. Для того щоб забезпечити належний синтез амінокислот із мінімальною реактивністю бічних ланцюгів, використовуються хімічні групи, що тут називаються як "захисні групи", для зв'язування зі специфічними амінокислотними функціональними групами, для того щоб "блокувати" або "захистити" функціональні групи від неспецифічних реакцій. Захисні групи бічних ланцюгів, як відомо, можуть бути перманентними або напівперманентними захисними групами, тому що вони здатні витримувати численні цикли хімічної обробки у процесі синтезу та зазвичай видаляються лише під час обробки сильними кислотами, після того, як синтез пептиду завершено. Ці вищезгадані стратегії не бажані для виробництва терапевтичних пептидів у комерційному масштабі, тому що смоли, які при цьому використовуються, передбачають видалення пептиду за допомогою сильно концентрованих кислот для відщеплення ("зняття") пептиду з полімерної смоли. Крім аспектів безпеки, пов'язаних з використанням великих кількостей надзвичайно корозійних матеріалів у великих масштабах, може бути потрібне спеціальне устаткування, для того щоб дозволити це використання. Крім того, використання висококонцентрованих сильних кислот для розщеплення та депротекції пептидів може призвести до серйозної деградації бажаного пептиду та обумовити низький вихід і/або утворення нових домішок в результаті дії на 1 UA 115542 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 пептид сильної кислоти протягом проміжку часу, необхідного для проведення кліважу та отримання достатньої кількості продукту. Такі домішки можуть включати дегідратовані або окиснені сполуки або домішки, пов'язані з прикріпленням всієї або частини смоли-лінкера до пептиду – надалі ці домішки може бути важко видалити. Відтак, існує потреба у розробці ефективного способу широкомасштабного виробництва терапевтичних пептидів. Як було згадано раніше, твердофазний синтез пептидів розпочинається на "твердій" підкладці або "якорі". Ці "підкладки" у промисловості називаються "смолами". Смоли можуть бути полістиролові або з інших полімерних матеріалів, таких як полімери етиленоксиду, напр., смоли на основі ПЕГ або суміш обох типів полімерів, напр., "гібридні" або ПЕГ-полістиролові смоли. Як правило, використовуються смоли для виробництва пептидних амідів з використанням Fmoc технології SPPS, що включає смоли на основі полістиролу, пов'язані з лінкером, придатним для вивільнення повністю депротектованого амідного пептиду після обробки кислотою у високих концентраціях. Смоли, які зазвичай використовуються, включають амідні смоли Ринка, наприклад, амідну смолу Ринка, амідну смолу Ринка MBHA і амідну смолу Ринка AM. Амідні смоли Ринка вивільняють повністю деблокований пептидний амід зі смоли після обробки високим відсотком в/о кислоти в відщеплюючій суміші (кліважному коктейлі) наприклад, як правило, використовується 80-95 % в/о трифтороцтова кислота (TFA). Нова кислотно-лабільна смола для твердофазного синтезу C-кінцевих амідів була розроблена Сібером у 1987 р. (Tetrahedon Lett., 1987, 28(19):2107-10). Ця смола використовує 9ксантенільну групу з –OCH2- групою, введеною між вказаною ксантенільною групою та полістиролом, для того щоб підвищити лабільність в кислотних умовах. Відщеплення пептидних амідів від цієї смоли проводиться шляхом дуже легкого ацидолізу. Ця стаття описує синтез двох пептидів на цій смолі – перший без захисних груп бічних ланцюгів (Z-Val-Gly-Ala-Pro-NH2), де відщеплення від смоли при обсязі партії 0,5 г відбувається шляхом прокачування кислотної відщеплюючої суміші (TFA:1,2-дихлоретан 2:98 в/о) через смолу у скляній колонці; другий пептид (α-MSH) – це пептид, який складається з 13 амінокислот, що містять захищені групи бічних ланцюгів (трет-бутилові, Trt, Mtr і Boc), відщеплювався від смоли шляхом прокачування кислотної кліважної (відщеплюючої) суміші (TFA/1,2-дихлоретан-/1,2-етандитіол 2:98:0.1) через колонку зі смолою. Два наступні етапи, що відбуваються за участі сильно концентрованої кислоти та при підігріві (TFA/вода 9:1 при 30º C, з подальшою обробкою 95 % TFA зі скавенджерами при 50º C), були потрібні, для того щоб видалити всі захисні групи бічних ланцюгів. Незважаючи на те, що у наведеній вище статті це не стверджувалось очевидно, основне призначення амідної смоли Сібера (наразі стає відомою як ксантанова смола) полягає у тому, щоб забезпечити отримання пептидів із повністю захищеними бічними групами ланцюгів для використання у подальших реакціях конденсації фрагментів. Цього можна досягти шляхом використання низького відсоткового співвідношення в/о кислоти у відщеплюючій суміш – як ® правило, 1-5 % в/о. Згідно з анотацією комерційного постачальника (Novabiochem , Merck KGaA), смола Сібера являє собою "гіперкислотнолабільний лінкер (смолу) для FMOC SPPS захищених пептидних амідів шляхом м'якого відщеплення з використанням 1 % TFA.” Було встановлено, що використання амідної смоли Сібера у поєднанні з Fmoc-хімією та застосуванням кліважного (розщеплюючого) розчину із використанням певних концентрацій трифтороцтової кислоти (TFA) (наприклад, понад 10 % в/о) може бути використано для синтезу на практиці повністю розблокованих пептидних амідів у великому масштабі (вимірюється в кг). Це виключно ефективний метод для виробництва повністю розблокованих пептидних амідів у порівнянні з використанням амідної смоли Ринка, тому що: (i) він дає можливість досягти більшого виходу продукту за допомогою цього методу; (ii) він дає можливість досягти вищого ступеня чистоти пептиду за допомогою цього методу, що сприяє подальшому очищенню; (iii) він сприяє зниженню витрат на вихідні матеріали та розчинники, і, відповідно, є більш ефективним способом виробництва з погляду затратності; (iv) це потужний та відтворюваний спосіб для виробництва від незначних до великих масштабів, що, відповідно, дає змогу його масштабувати. Даний винахід пропонує процес широкомасштабного синтезу терапевтичних пептидів, який включає поетапну твердофазну Fmoc-хімію. В одному аспекті, даний винахід пропонує процес синтезу терапевтичних пептидів, який включає послідовні етапи: (a) набухання Fmoc-смоли Сібера (також називається як амідна смола Сібера або Fmoc амідна смола Сібера) у диполярному апротонному розчиннику; 2 UA 115542 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 (b) депротекція Fmoc-групи за допомогою розчину піперидину в диполярному апротонному розчиннику; (c) промивання смоли після Fmoc депротекції диполярним апротонним розчинником; (d) активування Fmoc-амінокислот для приєднання до депротектованої смоли шляхом розчинення Fmoc-амінокислоти та приєднання реагенту (ів) у диполярному апротонному розчиннику з наступним додаванням основи та перемішуванням; (e) завантаження розчину активованої Fmoc-амінокислоти до смоли у реакторі; (f) конденсація активованих Fmoc-амінокислот за допомогою (2-(6-хлоро-1H-бензотріазол-1їл)-1,1,3,3-тетраметиламінію гексафторфосфату) (HCTU) або 2-(1H-бензотріазол-1-їл)-1,1,3,3тетраметилуроній тетрафторборат (TBTU)/1-гідроксибензотріазол (HOBt) з основою в диполярному апротонному розчиннику як зв'язуючому реагенті (g) промивання смоли після кожного приєднання Fmoc-амінокислоти; (h) повторення етапів (b)-(g) до утворення пептиду; (i) відщеплення бажаного пептиду від смоли з одночасним деблокуванням бічних амінокислотних груп за допомогою реакційної суміші; (j) відфільтровування кліважної суміші від смоли; та (k) випарювання фільтратів, преципітація та часткове очищення сирого продукту від концентрованого розчину за допомогою органічного розчинника, що забезпечує вихід частково очищеного пептиду. Відповідно до етапів (a), (b), (c) та (f) способу, як було визначено вище, використовується диполярний апротонний розчинник. Такий диполярний апротонний розчинник може бути обраний з-поміж диметилформаміду (DMF), диметилацетаміду (DMA) або N-метилпіролідону (NMP) або їх комбінації. У кращому втіленні як диполярний апротонний розчинник використовується DMF. В іншому аспекті, даний винахід пропонує процес синтезу терапевтичних пептидів, який включає послідовні етапи: (a) набухання Fmoc-смоли Сібера (також називається як амідна смола Сібера або Fmoc амідна смола Сібера) у диметилформаміді (DMF); (b) депротекція Fmoc-групи за допомогою розчину піперидину в DMF; (c) промивання смоли після Fmoc депротекції з використанням DMF; (d) активування Fmoc-амінокислот для приєднання до депротектованої смоли шляхом розчинення Fmoc-амінокислоти та зв'язуючого реагента (ів) в DMF з наступним додаванням основи та перемішуванням; (e) завантаження розчину активованої Fmoc-амінокислоти до смоли у реакторі; (f) конденсація активованих Fmoc-амінокислот за допомогою (2-(6-хлоро-1H-бензотріазол-1їл)-1,1,3,3-тетраметиламінію гексафторфосфату) (HCTU) або 2-(1H-бензотріазол-1-їл)-1,1,3,3тетраметилуроній тетрафторборат (TBTU)/1-гідроксибензотріазол (HOBt) з основою в DMF як зв'язуючому реагенті; (g) промивання смоли після кожного приєднання Fmoc-амінокислоти; (h) повторення етапів (b)-(g) до утворення пептиду; (i) відщеплення бажаного пептиду від смоли з одночасним деблокуванням бічних амінокислотних груп за допомогою реакційної суміші; (j) відфільтровування кліважної суміші від смоли; і (k) випаровування фільтратів, преципітація та часткове очищення сирого продукту від концентрованого розчину за допомогою органічного розчинника, що забезпечує вихід частково очищеного пептиду. Згідно з етапом (d) способу даного винаходу, як було визначено вище, використовується основа. Вказана основа може бути третинною амінною основою або їх сумішшю та обрана з N, N-диізопропілетиламіну (DIEA), третинного аміну (TEA), N-метилморфоліну (NMM), 2,4,6триметилпіринідину (TMP, відомий також як колідин), 2,3,5,6-тетраметилпіридину (TEMP), 2,6ди-трет-бутил-4-диметиламінопіридину (DBDMAP), або 4-диметиламінопіридину (DMAP). Краще втілення щойно згаданого аспекту даного винаходу характеризується тим, що основа, використовувана на етапі (d), являє собою третинний амін, і що у ще кращому втіленні, вказана основа являє собою N, N-диізопропілетиламін (DIEA). В іншому аспекті, даний винахід пропонує процес синтезу терапевтичних пептидів, який складається з етапів: (a) набухання Fmoc-смоли Сібера (називається також як амідна смола Сібера або Fmoc амідна смола Сібера) у диметилформаміді (DMF); (b) депротекція Fmoc-групи за допомогою розчину піперидину в DMF; (c) промивання смоли після Fmoc депротекції з використанням DMF; 3 UA 115542 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 (d) активування Fmoc-амінокислот для приєднання до депротектованої смоли шляхом розчинення Fmoc-амінокислоти та зв'язуючого реагента (ів) в DMF з наступним додаванням основи та перемішуванням; (e) завантаження розчину активованої Fmoc-амінокислоти до смоли у реакторі; (f) конденсація активованих Fmoc-амінокислот за допомогою (2-(6-хлоро-1H-бензотріазол-1-їл)1,1,3,3-тетраметиламінію гексафторфосфату) (HCTU) або 2-(1H-бензотріазол-1-їл)-1,1,3,3тетраметилуроній тетрафторборат (TBTU)/1-гідроксибензотріазол (HOBt) з N, Nдиізопропілетиламіном (DIEA) в DMF як зв'язуючому реагенті; (g) промивання смоли після кожного приєднання Fmoc-амінокислоти; (h) повторення етапів (b)-(g) до утворення пептиду; (i) відщеплення бажаного пептиду від смоли з одночасним деблокуванням бічних амінокислотних груп за допомогою реакційної суміші; (j) відфільтровування кліважної суміші від смоли; та (k) випаровування фільтратів, преципітація та часткове очищення сирого продукту від концентрованого розчину з органічним антирозчинником, для того щоб забезпечити вихід частково очищеного пептиду. В іншому аспекті, даний винахід пропонує процес синтезу терапевтичних пептидів, який включає наступні етапи: (a) набухання Fmoc-смоли Сібера (називається також як амідна смола Сібера або Fmoc амідна смола Сібера) у диметилформаміді (DMF); (b) депротекція Fmoc-групи за допомогою розчину піперидину в DMF; (c) промивання смоли після Fmoc депротекції з використанням DMF; (d) активування Fmoc-амінокислот для приєдання до депротектованої смоли шляхом розчинення Fmoc-амінокислоти та зв'язуючого реагента (ів) в DMF, далі додавання N, Nдиізопропілетиламін (DIEA) та перемішування; (e) завантаження розчину активованої Fmoc-амінокислоти до смоли у реакторі; (f) конденсація активованих Fmoc-амінокислот за допомогою (2-(6-хлоро-1H-бензотріазол-1їл)-1,1,3,3-тетраметиламінію гексафторфосфату) (HCTU) або 2-(1H-бензотріазол-1-їл)-1,1,3,3тетраметилуроній тетрафторборат (TBTU)/1-гідроксибензотріазол (HOBt) з N, Nдиізопропілетиламіном (DIEA) в DMF як зв'язуючому реагенті; (g) промивання смоли після кожного приєднання Fmoc-амінокислоти; (h) повторення етапів (b)-(g) до утворення пептиду; (i) відщеплення бажаного пептиду від смоли з одночасним деблокуванням бічних амінокислотних груп за допомогою реакційної суміші; (j) відфільтровування кліважної суміші від смоли; та (k) випаровування фільтратів, преципітація та часткове очищення сирого продукту від концентрованого розчину за допомогою органічного розчинника, для того щоб забезпечити вихід частково очищеного пептиду. Інше краще втілення даного винаходу характеризується тим, що вказана суміш реагентів для відщеплення пептиду, яка використовується на етапі (i) способу, як було визначено вище, містить TFA, один або більше скавенджерів та DCM, де вказаний скавенджер обирається з групи, що включає триізопропілсилан (TIPS), тріетилсилан (TES), фенол, анізол, тіоанізол, воду, 1,2-етандитіол (EDT), 1-додекантіол, дитіотреїтол (DTT) та індол, за умови, що відсоткова частка TFA у вказаній суміші реагентів для відщеплення пептиду не перевищує 25 %. Краще втілення щойно згаданого аспекту даного винаходу характеризується тим, що вказаний скавенджер обирається з групи, яка включає TIPS, TES, анізол та воду. Інше краще втілення цього винаходу характеризується тим, що вказана суміш реагентів для відщеплення пептиду, яка використовується на етапі (i), як було визначено вище, включає TFA, один або більше скавенджерів та DCM, де скавенджер може бути обраний з групи, що включає TIPS, TES, анізол та воду, за умови, що відсоткова частка TFA у вказаній суміші реагентів для відщеплення пептиду не перевищує 25 %. Для пептидів, де потрібно видалити лише Boc- та tBu- захисні групи бічних ланцюгів, краще втілення даного винаходу характеризується тим, що вказана суміш реагентів для відщеплення пептиду містить від 15 до 25 % в/о TFA з від 2,5 до 12 % в/о TIPS і від 62,5 до 82,5 % в/о DCM; і навіть ще краще втілення характеризується тим, що вказана суміш реагентів для відщеплення пептиду містить 20 % в/о TFA з 10 % в/о TIPS і 70 % в/о DCM. Для пептидів, де потрібно видалити лише Boc- та tBu- захисні групи бічних ланцюгів, краще втілення способу даного винаходу, як було визначено вище, характеризується тим, що: 4 UA 115542 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 вказана суміш реагентів для відщеплення пептиду, що використовується на етапі (i) як було визначено вище, містить від 15 до 25 % в/о TFA, від 2,5 до 12 % в/о TIPS, а решту кліважного коктейлю до 100 % складає DCM; і навіть ще краще, коли вказана суміш реагентів для відщеплення пептиду, що використовується на етапі (i), як було визначено вище, містить приблизно 20 % в/о TFA, приблизно 10 % в/о TIPS і 70 % в/о DCM. Ще краще втілення способу даного винаходу, як було визначено вище, з етапами від (a) до (k), полягає в тому, що отриманий пептид відщеплюється від амідної смоли Сібера одночасно з депротекцією захисних груп бічних ланцюгів. Інше краще втілення цього винаходу характеризується тим, що Fmoc-група спочатку видаляється зі смоли за допомогою піперидину в DMF. У ще кращому втіленні, Fmoc-група спочатку видаляється зі смоли за допомогою піперидину в DMF, де концентрація вказаного піперидину в DMF становить менше, ніж 20 % (в/о) і ще краще - близько 15 % (в/о). Згідно з етапом (f) способу даного винаходу, як було визначено вище, конденсація активованих Fmoc-амінокислот здійснюється за допомогою (2-(6-хлоро-1H-бензотріазол-1-їл)1,1,3,3-тетраметиламінію гексафторфосфату) (HCTU) або 2-(1H-бензотріазол-1-їл)-1,1,3,3тетраметилуроній тетрафторборат (TBTU)/1-гідроксибензотріазол (HOBt) з основою, такою як N, N-диізопропілетиламін (DIEA), в диполярному апротонному розчиннику, такому як DMF, окремо або у комбінації. У кращому втіленні будь-якого з вищезгаданих аспектів цього винаходу, амінокислотні залишки зв'язуються за допомогою "комбінації зв'язуючих реагентів", обраних з групи, яка містить TBTU/HOBt/DIEA, HBTU/HOBt/DIEA, HATU/DIEA, HCTU/DIEA, DIC/HOBt, DIC/HOAt, HATU/HOBt/DIEA та HCTU/HOBt/DIEA, ще краще – обраних з групи, яка містить HCTU/DIEA та TBTU/HOBt/DIEA. Краще втілення процесу даного винаходу з послідовними етапами від (a) до (j), як було визначено вище, характеризується тим, що на етапі (a) (Fmoc-амідна смола Сібера спочатку просочується за допомогою від 1 до 3 обробок з використанням 7-12 об'ємів DMF протягом до 1 години, навіть ще краще, 3 обробками з використанням 10 об'ємів DMF, тривалістю від 10 до 30 хвилин. Краще втілення процесу даного винаходу з послідовними етапами від (a) до (j), як було визначено вище, характеризується тим, що на етапі (b), Fmoc-група на смолі Сібера деблокується за допомогою 1-2 обробок розчину піперидину в DMF (10-20 % в/о) тривалістю від 5 до 20 хвилин, навіть ще краще за допомогою 2 обробок 15 % в/о піперидином в DMF тривалістю 10 хвилин. Краще втілення процесу даного винаходу з послідовними етапами від (a) до (j), як було визначено вище, характеризується тим, що на етапі (c), розблокована смола промивається від 3 до 5 разів з використанням від 7 до 12 об'ємів DMF; кожне промивання триває до 5 хвилин, навіть ще краще, застосовується 3 промивання з використанням 10 об'ємів DMF; кожне промивання триває до 5 хвилин. Краще втілення процесу даного винаходу з послідовними етапами від (a) до (j), як було визначено вище, характеризується тим, що, на етапі (d) 1,2 – 2,0 моль-еквів. (залежно від вагового дозування смоли) Fmoc-амінокислоти активується для конденсації шляхом розчинення Fmoc-амінокислоти та зв'язуючого реагента (ів) в DMF, додаванням DIEA, перемішуванням протягом до 5 хвилин; і ще краще 1,5 моль-еквів. (залежно від вагового дозування смоли) Fmocамінокислоти активується для конденсації шляхом розчинення Fmoc-амінокислоти та зв'язуючого реагента (ів) в DMF, додаванням DIEA, перемішуванням упродовж від 1 до 2 хвилин. Краще втілення процесу даного винаходу з послідовними етапами від (a) до (j), як було визначено вище, характеризується тим, що на етапі (f) від 0,5 до 1,5 моль-еквів. (відносно Fmocамінокислоти) зв'язуючого реагента (ів) використовується від 1,5 до 2,5 моль-еквів. (відносно Fmoc-амінокислоти) DIEA в 4-10 об'ємах DMF протягом від 30 до 120 хвилин при кімнатній температурі; і ще краще, від 0,5 до 1,5 моль-еквів. (відносно Fmoc-амінокислоти) зв'язуючого реагента (ів) використовується з від 1,5 до 2,5 моль-еквів. (відносно Fmoc-амінокислоти) DIEA у 5-7 об'ємах DMF протягом 60 хвилин при температурі від 15 до 30 °C. Краще втілення процесу даного винаходу з послідовними етапами від (a) до (j), як було визначено вище, характеризується тим, що на етапі (g) смолу промивають після кожного приєднання, від 2 до 4 разів з використанням від 7 до 12 об'ємів DMF протягом до 5 хвилин; і у ще кращому втіленні, смола після кожного приєднання промивається 2 рази з використанням 10 об'ємів DMF протягом до 5 хвилин. Краще втілення процесу даного винаходу з послідовними етапами від (a) до (j), як було визначено вище, характеризується тим, що на етапі (i): 5 UA 115542 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 - смолу промивають, занурюють у суміш реагентів для відщеплення та струшують упродовж від 2 до 3 годин при кімнатній температурі, і ще краще смолу промивають, занурюють та струшують упродовж 2,5 годин, і - через розчин смоли/кліважного коктейлю періодично продували газоподібний азот. Краще втілення процесу даного винаходу з послідовними етапами від (a) до (j), як було визначено вище, характеризується тим, що на етапі (j): - використана смола промивається невеликим об'ємом або свіжого кліважного коктейлю, або TFA/DCM (20:80 в/о) від 1 до 2 разів; - використана смола необов'язково промивається невеликим об'ємом MeOH. Краще втілення процесу даного винаходу з послідовними етапами від (a) до (j), як було визначено вище, характеризується тим, що на етапі (k), після об'єднання фільтратів та випарювання комбінації: - преципітація неочищеного продукту з використанням від 5 до 15 об'ємів MtBE; - преципітований пептид висушується до потрібного рівня сухості; - преципітований пептид розчиняється у розведеній кислоті або розведеній кислоті з органічним модифікатором, для використання у подальшому хроматографічному очищенні; - очищення пептиду, після чого здійснюється етап сольового обміну за допомогою оберненофазової препаративної хроматографії. Інше краще втілення способу цього винаходу характеризується тим, що воно включає наступні послідовні етапи від (a) до (j): (a) просочування Fmoc-амідної смоли Сібера за допомогою від 1 до 3 обробок 7-12 об'ємами DMF протягом до 1 години, навіть ще краще, 3 обробками з використанням 10 об'ємів DMF, тривалість яких становить від 10 до 30 хвилин на обробку; (b) депротекція Fmoc-групи на смолі Сібера шляхом 1-2 обробок розчину піперидину в DMF (10-20 % в/о), тривалістю від 5 до 20 хвилин, навіть ще краще 2 обробками 15 % в/о піперидину в DMF тривалістю 10 хвилин; (c) промивання розблокованої смоли від 3 до 5 разів із використанням від 7 до 12 об'ємів DMF; кожне промивання триває до 5 хвилин, навіть ще краще, 3 промивань з використанням 10 об'ємів DMF; кожне промивання триває до 5 хвилин. (d) активування 1,2-2,0 моль-еквів. (залежно від вагового дозування смоли) Fmocамінокислоти для конденсації на розблокованій смолі шляхом розчинення Fmoc-амінокислоти та зв'язуючого реагента (ів) в DMF, додавання DIEA, перемішування упродовж від 1 до 2 хвилин; і навіть краще – активування 1,5 моль-еквів. (залежно від вагового дозування смоли) Fmoc-амінокислоти для конденсації шляхом розчинення Fmoc-амінокислоти та зв'язуючого реагента (ів) в DMF, додавання DIEA, перемішування упродовж від 1 до 2 хвилин. (e) завантаження розчину активованої Fmoc-амінокислоти до смоли у реакторі; (f) конденсація Fmoc-амінокислоти на розблокованій смолі шляхом занурення та струшування розблокованої смоли з розчином активованої Fmoc-амінокислоти протягом 30-120 хв при кімнатній температурі; вказаний розчин активованої Fmoc-амінокислоти, що включає Fmoc-амінокислоту, як описано у (d) вище разом з від 0,5 до 1,5 моль-еквів. (відносно Fmocамінокислоти) зв'язуючого реагента (ів) з від 1,5 до 2,5 моль-еквів. (відносно Fmocамінокислоти) DIEA у від 4 до 10 об'ємах DMF при кімнатній температурі; і ще краще, від 0,5 до 1,5 моль-еквів. (відносно Fmoc-амінокислоти) зв'язуючого реагента (ів) з від 1,5 до 2,5 мольеквів. (відносно Fmoc-амінокислоти) DIEA у від 5 до 7 об'ємах DMF протягом 60 хвилин при температурі від 15 до 30 °C. (g) промивання смоли після кожного приєднання, від 2 до 4 разів з використанням від 7 до 12 об'ємів DMF протягом до 5 хвилин; і ще краще 2 рази з використанням 10 об'ємів DMF до 5 хвилин; (h) повторення етапів (b)-(g) до утворення пептиду; (i) відщеплення бажаного пептиду від смоли з одночасним деблокуванням бічних амінокислотних груп за допомогою реакційної суміші; - занурення смоли у кліважний коктейль та струшування упродовж від 2 до 3 годин при кімнатній температурі, і ще краще - занурення та струшування протягом 2,5 годин, і - періодичний барботаж суміші смола/кліважний коктейль газоподібним азотом. (j) відфільтровування кліважної суміші від смоли, далі - промивання використаної смоли невеликим об'ємом або свіжого кліважного коктейлю, або TFA/DCM (20:80 в/о) від 1 до 2 разів; і - необов'язково, промивання використаної смоли невеликим об'ємом MeOH. (k) об'єднання фільтратів, промивання та випарювання комбінації, після цього 6 UA 115542 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 - преципітація неочищеного пептиду з об'єднаного упареного фільтрату та промивання з використанням від 5 до 15 об'ємів MtBE; - висушування преципітованого пептиду до потрібних рівнів сухості; - розчинення преципітованого пептиду у розведеній кислоті або розведеній кислоті з органічним модифікатором, для використання у подальшому хроматографічному очищенні; - очищення пептидів та проведення етапу сольовогообміну за допомогою обернено-фазової препаративної хроматографії. Краще втілення будь-якого із щойно наведених аспектів даного винаходу характеризується тим, що етапи від (a) до (j) (нові підетапи позначені -#) далі визначені наступним чином: (a) просочування Fmoc-амідної смоли Сібера спочатку за допомогою від 1 до 3 обробок з використанням 7-12 об'ємів DMF протягом до 1 години, навіть ще краще, 3 обробками з використанням 10 об'ємів DMF, тривалість яких становить - від 10 до 30 хвилин на обробку; (b) депротекція Fmoc-групи на смолі Сібера за допомогою 1-2 обробок розчином піперидину в DMF (10-20 % в/о), які тривають від 5 до 20 хвилин, навіть ще краще 2 обробки 15 % в/о піперидину в DMF тривалістю 10 хвилин; (c) промивання розблокованої смоли від 3 до 5 разів з використанням від 7 до 12 об'ємів DMF; кожне промивання триває до 5 хвилин, навіть ще краще, 3 промивання з використанням 10 об'ємів DMF; кожне промивання триває до 5 хвилин; (d) активування Fmoc-амінокислоти (1,2 – 2,0 моль-еквів., або ще краще, 1,5 моль-еквів. залежно від вагового дозування смоли) для конденсації шляхом розчинення Fmoc-амінокислоти та зв'язуючого реагента (ів) в DMF, додавання DIEA, перемішування до 5 хвилин, навіть ще краще, перемішування упродовж від 1 до 2 хвилин; (e) завантаження зв'язуючого розчину до смоли у реакторі; (f) використання від 0,5 до 1,5 моль-еквів. зв'язуючого реагента (ів) відносно Fmoc-амінокислоти з від 1,5 до 2,5 моль-еквів. DIEA відносно Fmoc-амінокислоти в 4-10 об'ємах DMF протягом від 30 до 120 хвилин при кімнатній температурі, навіть ще краще, використання від 5 до 7 об'ємів DMF протягом 60 хвилин при температурі від 15 до 30 °C; (g) промивання смоли після кожного приєднання, від 2 до 4 разів з використанням від 7 до 12 об'ємів DMF протягом до 5 хвилин; і навіть ще краще 2 рази з використанням 10 об'ємів DMF до 5 хвилин; (h) повторення етапів (b)-(g) до утворення пептиду; (i) занурення смоли у кліважний коктейль та струшування упродовж від 2 до 3 годин при кімнатній температурі, і ще краще занурення та струшування протягом 2,5 годин; (i-1) періодичне продування через суміш смоли/кліважного коктейлю газоподібного азоту; (j) відфільтровування кліважної суміші від смоли; (j-1) промивання використаної смоли невеликим об'ємом або свіжого кліважного коктейлю або TFA/DCM (20:80 в/о) від 1 до 2 разів; (j-2) промивання використаної смоли невеликим об'ємом MeOH; (k) об'єднання фільтратів та упарювання комбінації; (k-1) преципітація неочищеного пептиду з використанням від 5 до 15 об'ємів MtBE; (k-2) висушування преципітованого пептиду до потрібного рівня сухості; (k-3) розчинення преципітованого пептиду у розведеній кислоті або розведеній кислоті з органічним модифікатором, для використання у подальшому хроматографічному очищенні (k-4) очищення пептидів та проведення етапу сольового обміну за допомогою оберненофазової препаративної хроматографії. Було визнано, що деякі захисні групи (напр., 2,2,4,6,7-пентаметил-дигідробензофуран-5сульфонільна (Pbf) бічна захисна група Arg) потребують високо концентрованих кислот, як правило, 50-80 %, для видалення захисних груп бічних ланцюгів в межах практичного періоду часу, однак, всі інші аспекти цього винаходу залишаються тими ж. Інші захисні групи бічних ланцюгів, які були розглянуті, включають, але не обмежені ними, метокси-триметилбензолсульфонільну групу (Mtr), 2,2,5,7,8-пентаметил-хроман-6-сульфонілхлоридну (Pmc), 4,4диметилоксибензгідрильну (Mbh) та 2,4,6-триметоксибензильну (Tmob). Даний винахід також призначений для тих ситуацій, коли бажано зберегти захисні групи бічних ланцюгів протягом та після процесу відщеплення. Наприклад, важливо, що збереження ацетамідметильної (Acm) захисної групи бічного ланцюга на Cys забезпечує те, що зібраний пептид може бути очищений в його лінійній формі та після цього циклізований, коли захисні групи видаляються, а дисульфідний зв'язок утворюється від двома Cys залишками. Короткий опис креслень ФІГ. 1: графік відображає пряме порівняння пептидів, синтезованих з використанням амідної смоли Ринка, з пептидами, синтезованими з використанням амідної смоли Сібера за допомогою 7 UA 115542 C2 5 10 15 20 25 30 35 аналогічних методик синтезу. Були отримані пептиди різної довжини – від 5 до 30 амінокислот, згідно з методиками, описаними тут, був визначений вихід продукту синтезу. Для кожної довжини пептиду (відкладено на осі Y на графіку), відсоток отриманого продукту (позначено на осі X) з використанням амідної смоли Ринка представлений верхнім циліндром, а відсоток отриманого продукту з використанням амідної смоли Сібера, представлений нижнім циліндром. Для кожного синтезованого пептиду, тобто: послідовності, що складається з 5 амінокислот; двох послідовностей, складених 8 амінокислотами; послідовності, утвореної 8 амінокислотами, яка модифікована однією або більше дофаміновими функціональними групами; послідовності, яка складається з 30 амінокислот, використання амідної смоли Сібера показало вищий % ефективності синтезу. ФІГ. 2: графік відображає відтворюваність ефективності синтезу в інтервалі від 2 г до 2200 г, при використанні амідної смоли Сібера для синтезу пептиду, який складається з 5 амінокислот. Як повідомляється, ефективність синтезу близько 80 % була досягнута в межах всього інтервалу. ФІГ. 3: графік відображає відносну вартість, виходячи з вартості матеріалу, використаного для синтезу пептиду, який складається з 8 амінокислот, і пептиду, що складається з 30 амінокислот, з використанням амідної смоли Ринка порівняно з амідною смолою Сібера. Відносна вартість матеріалів, використаних для синтезу цих пептидів, з використанням амідної смоли Ринка для пептиду, утвореного 8 амінокислотами, та пептиду, утвореного 30 амінокислотапми, представлені у вигляді верхніх циліндрів, натомість відносна вартість того ж пептиду, отриманого з використанням амідної смоли Сібера, представлена для кожного пептиду нижніми циліндрами. Як повідомляється, відносна вартість при використанні амідної смоли Сібера, менша, ніж при використанні амідної смоли Ринка. Здебільшого поетапний твердофазний синтез потребує наявності полістиролової смоли для синтезу пептидних амідів. У твердофазному синтезі пептидів використовуються амідні смоли Ринка для отримання пептидних амідів з Fmoc-захищених амінокислот. Приєднання першої амінокислоти можна досягти за допомогою загальноприйнятих методів утворення амідного зв'язку. Пептидна послідовність збирається за лужних або нейтральних умов на амідній смолі Ринка, тоді як завершений пептид відщеплюється від смоли у кислотних умовах. У типовому випадку пептид відщеплюється від амідної смоли Ринка за допомогою більше, ніж 80 % TFA в/о. (Stathopoulos, P.; Papas, S.; and Tsikaris, V., J. Pept. Sci., 2006, 12:227-37). Застосування сильніших кислот або вищих концентрацій TFA інколи обумовлюють відщеплення лінкера Ринка від полістиролового носія і потрапляння забарвлених домішок у відщеплений продукт. По суті для деяких пептидів вихід синтезованого продукту з використанням амідної смоли Ринка традиційно є низьким. Прикладами смол Ринка є: 8 UA 115542 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 Лабільність лінкерного фрагмента "суперкислотно-чутливої" або "гіперкислотно-чутливої" смоли при низьких концентраціях кислоти дозволяє вивільняти ("знімати") повністю захищений пептид зі смоли. Як правило, для відщеплення пептиду потрібна 1-5 % в/о TFA. За виключенням зниженої здатності кислоти, потрібної для відщеплення, ці смоли подібні до амідних смол Ринка, а саме - вони являють собою полістироловий матрикс, який складається з гранул подібного розміру з однаковою несучою здатністю (ємністю). Як такі, ці смоли використовуються для конвергентного синтезу, основаного на застосуванні Fmoc-хімії, що стосується імобілізації першого та приєднання наступних залишків. Амідна смола Сібера, що є прикладом "суперкислотночутливих" смол (Sieber, P., Tetrahedron Lett., 1987, 28(19):2107-10), передусім використовується для синтезу пептидних амідів з бічними захищеними групами, включаючи, але не обмежуючись ними, третбутоксикарбонільну групу (Boc) і групу трет-бутилого етеру (tBu) при використанні з низькими концентраціями трифтороцтової кислоти (TFA) (1-5 % в/о) у кліважному коктейлі. Оскільки амідна смола Сібера традиційно використовується для Fmoc твердофазного синтезу, необхідно, щоб аміноксилоти були Fmoc-захищеними. Відповідно, захисні групи, які залишаються після завершення синтезу пептидів, мають бути відщеплені. Відщеплення захисних груп, які залишились, потребує застосування висококонцентрованих кислот, таких як до 95 % TFA, що містить до 5 % етандіолу і до 4-(метилмеркапто)фенолу (Sieber, P., Tetahedron Lett., 1987, 28(19):2107-10). Заявники зробили спробу синтезувати чутливий до кислоти пептид, який складається із 8 залишків, за допомогою амідної смоли Сібера. Вони виявили, що лінійний SPPS може бути проведений з використанням амідної смоли Сібера разом із застосуванням Fmoc-хімії. Заявники встановили, що підбирання умов, високої концентрації кислоти, тобто TFA, не потрібно для відщеплення кінцевого продукту зі смоли Сібера. Крім того, було встановлено, що захищені групи бічних ланцюгів можуть бути видалені одночасно з відщепленням отриманого кінцевого пептиду з амідної смоли Сібера при застосуванні кліважного коктейлю TFA/TIPS/DCM "помірної" сили. З деякою оптимізацією, заявники відкрили, що можна синтезувати непроцесовані (повної довжини) пептиди із захищеними амінокислотами, зокрема ті, що несуть Boc, tBu і/або Trt захисні групи, а після цього видалити повністю розблокований пептидний амід зі смоли, зводячи при цьому до мінімуму деградацію пептиду. Заявники також намагались застосувати амідну смолу Сібера для синтезу інших пептидів, від 5 до 30 амінокислот завдовжки та пептидів, що включають неприродні амінокислоти, а також проблемні природні амінокислоти, такі як триптофан, цистеїн та аргінін. Заявники встановили, що пептиди, які містять неприродні та проблемні амінокислоти, можуть бути синтезовані за допомогою амідної смоли Сібера з використанням середніх концентрацій TFA у процесі відщеплення. Було також встановлено, що пептиди, які містять аргінін, можуть бути синтезовані за допомогою амідної смоли Сібера, хоча вищі концентрації TFA були необхідні в процесі відщеплення, насамперед при наявності захищених бічних сульфонільних груп. Неочікувано виявилось, що амідна смола Сібера, при застосуванні у спосіб, відмінний від того, що був описаний в літературі, призвела до вищого виходу чистішого сирого продукту. Наприклад, заявники встановили, що вихід цільового синтезованого продукту зріс на 18-30 % при використанні амідної смоли Ринка до 78-83 % у тому випадку, коли була використана 9 UA 115542 C2 5 10 15 20 25 30 35 амідна смола Сібера, для отримання аналога греліну H-Inp-D-Bal-D-Trp-Phe-Apc-NH2, як повідомляють у WO 2004/014415. Для інших пептидів, таких як дофаміново-соматостатинові химерні сполуки, Заявники повідомляють, що ефективність синтезу з використанням амідної смоли Сібера становив від 72,6 до 80,8 % порівняно з родиною відомих амідних смол Ринка (напр., амідною смолою Ринка MBHA, амідною смолою Ринка AM, амідною смолою Ринка), які за аналогічних умов забезпечують вихід від 13 до 71 %. Заявники встановили, що використання амідної смоли Сібера підвищує вихід приблизно на 50 % у порівнянні з використанням амідної смоли Ринка. Крім того, ефективність синтезу була репродуцибельною між партіями та в інтервалі від 2 г до 2,2 кг. Порівняння ефективності синтезу з використанням амідної смоли Ринка з ефективністю синтезу з використанні амідної смоли Сібера за ідентичних умов для синтезу пептидів різної довжини, тобто від 5 до 30 амінокислот завдовжки, представлено на ФІГ. 1. У кожному порівнянні, використання амідної смоли Сібера забезпечує вищий вихід синтезованого продукту, 70 % порівняно з 10 %. В результаті, відносна процентна вартість, виходячи з довжини пептиду, була меншою, ніж при використанні амідної смоли Сібера замість традиційної амідної смоли Ринка (ФІГ. 3). На ФІГ. 2. Заявники також демонструють відтворюваність ефективності синтезу при використанні смоли Сібера. Далі, загальновідомі смоли Ринка потребують високої концентрації TFA, як правило, 80-95 % в/о, для відщеплення остаточного пептиду зі смоли. Заявники встановили, що при використанні амідної смоли Сібера, потрібна лише 10-25 % TFA. Як стверджувалось раніше, вищі концентрації TFA можуть призвести до значного розпаду пептиду в процесі синтезу, а також обумовити присутність домішок, таких як ті, що виникають внаслідок прикріплення всього або частини лінкерного фрагмента смоли до пептиду, який надалі може бути важко відокремити. Тим більше, процес після відщеплення відбувається швидше при застосуванні заявленого способу, оскільки менше кислоти потрібно для кінцевого етапу відщеплення. Крім того, було виявлено, що можливо зменшити кількості Fmoc-амінокислот, зв'язуючих реагентів та розчинників внаслідок використання амідної смоли Сібера, не впливаючи на ефективність синтезу або чистоту отриманого пептиду. Деякі амінокислоти, присутні у сполуках даного винаходу, представлені тут наступним чином: A3c 1-аміно-1-циклопропанкарбонова кислота A4c 1-аміно-1-циклобутанкарбонова кислота A5c 1-аміно-1-циклопентанкарбонова кислота A6c 1-аміно-1-циклогексанкарбонова кислота Abu α-аміномасляна кислота Acc 1-аміно-1-цикло(C3-C9)алкіл карбонова кислота Act 4-аміно-4-карбокситетрагідропіран, тобто, : O N H O Aepa 4-(2-аміноетил)-1-карбокси метил-піперазин, представлений на структурі: N H 40 N N O Aib α-аміноізомасляна кислота Ala або A аланін ß-Ala бета-аланін Apc аміно піперидинілкарбонова кислота, тобто: O HN NH ; 45 Arg або R аргінін 10 UA 115542 C2 hArg гомоаргінін Asn або N аспарагін Asp або D аспарагінова кислота Bal 3-бензотієнілаланін, тобто: S N H O 5 ; Bip 4,4’-біфенілаланін, тобто: N H O ; Bpa 4-бензоїлфенілаланін, тобто: O N H 10 O ; Caeg N-(2-аміноетил)-N-(2-цитозиніл-1-оксо-етил)-гліцин, представлена структурою: NH2 N O N O N H 15 Cha ß-циклогексилаланін; Cys або C цистеїн; Dab 2,4-диаміномасляна кислота, (α,γ-диаміномасляна кислота); Dap 2,3-диамінопропіонова кислота, (α,β-диамінопропіонова кислота); Dip ß, ß-дифенілаланін, тобто: N H 20 O N O Dhp 3,4-дегідропролін Dmt 5,5-диметилтіазолідин-4-карбонова кислота 2-Fua ß-(2-фурил)-аланін, тобто: 11 ; UA 115542 C2 O N H 5 10 O ; Gln або Q глутамін Glu або E глютамінова кислота Gly або G гліцин His або H гістидин 3-Hyp транс-3-гідрокси-L-пролін, тобто, (2S, 3S)-3-гідроксипіролідин -2-карбонова кислота; 4-Hyp 4-гідроксипролін, тобто, (2S, 4R)-4-гідроксипіролідин-2-карбонова кислота; Ile або I ізолейцин Inc індолін-2-карбонова кислота Inp ізоніпекотинова кислота, тобто: O N ; 15 20 Ktp 4-кетопролін Leu або L лейцин hLeu гомолейцин Lys або K лізин Lys(Ac) лізин (ацетил) Met або M метионін 1-Nal ß-(1-нафтил)аланін: 2-Nal ß-(2-нафтил)аланін; Nle норлейцин Nva норвалін Oic октагідроіндол-2-карбонова кислота Orn орнітин 2-Pal ß-(2-піридил)-аланін, тобто, N N H O 25 ; 3-Pal ß-(3-піридил)-аланін, тобто: N N H O 4-Pal ß-(4-піридил)-аланін, тобто: 12 ; UA 115542 C2 N N H O ; Pff пентафторфенілаланін, тобто F F F F F N H 5 O ; Phe або F фенілаланін hPhe гомофенілаланін Pim 2'-(4-феніл)імідазоліл, тобто: N HN 10 Pip піпеколова кислота Pro або P пролін Ser або S серин Ser(Bzl) серин (O-бензил) Taz ß-(4-тіазоліл)аланін, тобто, N S N H O ; 2-Thi ß-(2-тієніл)аланін, тобто: S N H O 15 ; 3-Thi ß-(3-тієніл)аланін, тобто: S N H 20 O Thr або T треонін Thr(Bzl) треонін(O-бензил) Thz тіазолідин-4-карбонова кислота Tic 1,2,3,4-тетрагідроізохінолін-3-карбонова кислота Tle трет-лейцин 13 ; UA 115542 C2 5 Trp або W триптофан α (N-Me)D-Trp N -метил-D-триптофан Tyr або Y тирозин 3-I-Tyr 3-йодо-тирозин Val або V валін "Dop1" означає сполуку, яка має структуру: S H N O H N H "Dop2" означає сполуку, яка має структуру: S H N O H N H 10 "Dop3" означає сполуку, яка має структуру: NH O N H N N O O H N H "Dop4" означає сполуку, яка має структуру: NH O H H N N N O O H N H "Dop5" означає сполуку, яка має структуру: OH OH H2 N 15 O "Dop6" означає сполуку, яка має структуру: 14 UA 115542 C2 N O O N H "Dop7" означає сполуку, яка має структуру: O N H2 N NH S H "Dop8" означає сполуку, яка має структуру: O HN 5 "Dop9" означає сполуку, яка має структуру: N H2N N S O "Dop10" означає сполуку, яка має структуру: OH HO H N O 10 "Dop11" означає сполуку, яка має структуру: OH O H N O "Dop12" означає сполуку, яка має структуру: HO H O O N H "Dop13" означає сполуку, яка має структуру: 15 UA 115542 C2 O N Cl HO OH OH Lys(Dop2) має структуру: O HN H S NH N N H H O Dop2-Lys(Dop2) має структуру: O HN H S H N HN 5 NH N S H N H O O Lys(Dop5) має структуру: O N N O O H O Dop5-Lys(Dop5) має структуру: 16 N H H UA 115542 C2 O O O N N O N O O H O 5 10 15 20 25 30 35 40 N H Грецька літера псі “Ψ” використовується тут, для того щоб позначити, що пептидний зв'язок був заміщений псевдопептидним зв'язком. У назвах амінокислотних послідовностей, формат Ψ 1 2 1 терміну являє собою A -Ψ-(X-X')A , де A – це аміноацильний радикал, у якому карбонільна 2 група була модифікована до X, а A являє собою аміноацильний радикал, у якому α-аміногрупа була модифікована до X'. X та X' представлені як послідовності символів елементів, відокремлених зв'язком, напр., Tyr-Ψ-(CH2-NH)Gly. У заявці використовуються наступні скорочення: Ac ацетил ACN ацетонітрил Acm ацетамідметил AM амінометил Boc трет-бутоксикарбоніл DCE дихлоретан DCM дихлорметан DIC N, N’-диізопропілкарбодиімід DIEA N, N-диізопропілетиламін DMF N, N-диметифорамід DTT дитіотреїтол EDT етандитіол Fmoc 9-Флуоренілметоксикарбоніл HATU O-(7-азабензотріазол-1-їл)-1,1,3,3-тетраметилуронію гексафторфосфат (або N[(диметиламіно)-1H-1,2,3-тріазоло-[4,5-b]піридин-1-їл-метилен]-N-метилметанамінію гексафторфосфат N-оксид) HBTU 2-(1H-бензотріазол-1-їл)-1,1,3,3-тетраметилуронію гексафторфосфат (або N-[(1Hбензотріазол-1-їл)-(диметиламіно)метилен]-N-метилметанамінію гексафторфосфату N-оксид) HCTU (2-(6-хлоро-1H-бензотріазол-1-їл)-1,1,3,3-тетраметиламінію гексафторфосфат) (або N-[(1H-6-хлоро-бензотріазол-1-їл)-(диметиламіно)метилен]-N-метилметанамінію гексафторфосфату N-оксид) HOAt 1-гідрокси-7-азабензотріазол HOBt 1-гідроксибензотріазол HPLC рідинна хроматографія високого тиску LOD втрата внаслідок висушування Mbh 4,4-диметилоксибензгідрил MBHA 4-метилбензгідриламін MtBE метил трет-бутиловий етер Mtr метокси-триметил-бензолсульфоніл OtBu трет-бутиловий естер Pbf 2,2,4,6,7-пентаметилдигідробензофуран-5-сульфоніл PEG поліетиленгліколь Pmc 2,2,5,7,8-пентаметилхроман-6-сульфоніл хлорид TBTU 2-(1H-бензотріазол-1-їл)-1,1,3,3-тетраметилуронію тетрафторборат (або N-[(1Hбензотріазол-1-їл)-(диметиламіно)метилен]-N-метилметанамінію тетрафторборат N-оксид) 17 UA 115542 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 tBu трет-бутиловий етер TES тріетилсилан TFA трифтороцтова кислота TIPS триізопропілсилан Tmob 2,4,6-триметоксибензил Trt трітил або трифенілметил Якщо не зазначено щось інше, наступні визначення наведені, для того щоб ілюструвати та визначити суть і межі винаходу різними термінами, що використовуються тут для опису винаходу. Термін "кліважний (відщеплюючий) коктейль", що тут застосовується, стосується суміші реагентів, які тут використовуються для видалення або відщеплення чи збирання пептиду зі смоли. Крім того, відщеплюючий коктейль також слугує для видалення всіх захисних груп бічних ланцюгів та N-кінцевих захисних груп. Термін "близько" (або "приблизно"), як тут використовується у зв'язку з параметрами або кількісними даними, означає, що параметр або кількість знаходяться в межах + 5 % того параметру чи кількості, які стверджуються. Наприклад, "близько 20 %" означає (20±20*0,05)%, що дорівнює (20±0,1)%. Термін "смола", як тут далі використовується, стосується або Fmoc-амідної смоли Сібера, або амідної смоли Сібера, до якої прикріплюються одна або більше амінокислот. Термін "кімнатна температура" (або температура оточуючого середовища) означає температурний інтервал від 15 до 30 °C. Наступний приклад описується з метою ілюстрації способу цього винаходу і жодною мірою не призначений для того, щоб у будь-який спосіб обмежити цей винахід. Винахід описує новий метод синтезу пептиду, який включає стратегію поетапної твердофазної хімії. У кращому втіленні, даний приклад стосується процесу синтезу терапевтичного пептиду, де вказаний пептид обирається з-поміж аналогів соматостатину, бомбезину, VIP, PACAP, GHRH, глюкагону, кальцитоніну, пептиду YY, нейромедину B, PTH, PTHrP, PTH2, GLP-1, Уротензину-II, греліну, меланокортину, MIS, LHRH, адропіну, GIP, нейропептиду Y, IGF-1, химерних сполук дофамін-соматостатин і ACTH. У ще кращому втіленні, даний приклад стосується процесу синтезу терапевтичного пептиду, де вказаний пептид обирається з-поміж аналога греліну або химерних сполук дофамінсоматостатин. У ще кращому втіленні, даний приклад стосується процесу синтезу терапевтичного пептиду, де вказаний пептид обирається з аналога греліну. У ще кращому втіленні, даний приклад стосується процесу синтезу терапевтичного пептиду, де вказаний пептид обирається з аналога греліну за формулою (I) 1 1 2 3 4 5 2 R -A -A -A -A -A -R (I) де 1 A являє собою Aib, Apc або Inp; 2 A являє собою D-Bal, D-Bip, D-Bpa, D-Dip, D-1Nal, D-2Nal, D-Ser(Bzl), або D-Trp; 3 A являє собою D-Bal, D-Bip, D-Bpa, D-Dip, D-1 Nal, D-2Nal, D-Ser(Bzl), або D-Trp; 4 A являє собою 2Fua, Orn, 2Pal, 3Pal, 4Pal, Pff, Phe, Pim, Taz, 2Thi, 3Thi, Thr(Bzl); 5 A являє собою Apc, Dab, Dap, Lys, Orn, або видалений; 1 R являє собою водень; і 2 R являє собою OH або NH; за умови, що 5 коли A являє собою Dab, Dap, Lys, або Orn, тоді: 2 A являє собою D-Bip, D-Bpa, D-Dip або D-Bal; або 3 A являє собою D-Bip, D-Bpa, D-Dip або D-BaI;або 4 A являє собою 2Thi, 3Thi, Taz, 2Fua, 2Pal, 3Pal, 4Pal, Orn, Thr(Bzl), або Pff; 5 якщо A видалений, тоді: 3 A являє собою D-Bip, D-Bpa, або D-Dip; або 4 A являє собою 2Fua, Pff, Taz, або Thr(Bzl); або 1 A являє собою Apc і – 2 A являє собою D-Bip, D-Bpa, D-Dip або D-Bal; або 3 A являє собою D-Bip, D-Bpa, D-Dip або D-Bal; або 4 A являє собою 2Thi, 3Thi, Orn, 2Pal, 3Pal, або 4Pal; І ще конкретніше, сполуку за формулою (I), де 1 A являє собою Aib, Apc або lnp; 2 A являє собою D-Bal, D-Bip, D-Bpa, D-Dip, D-1 Nal, D-2Nal, D-Ser(Bzl), або D-Trp; 18 UA 115542 C2 3 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 A являє собою D-Bal, D-Bpa, D-Dip, D-1 Nal, D-2Nal, або D-Trp; 4 A являє собою Orn, 3Pal, 4Pal, Pff, Phe, Pim, Taz, 2Thi, або Thr(Bzl); та 5 A являє собою Apc, Lys, або видаляється. У ще кращому втіленні, даний приклад стосується процесу синтезу терапевтичного пептиду де вказаний пептид є аналогом греліну за Формулою (I), як було визначено вище, де 1 A являє собою Apc або lnp; 2 A являє собою D-Bal, D-Bip, D-1 Nal, або D-2Nal; 3 A являє собою D-Bal, D-1 Nal, D-2Nal, або D-Trp; 4 A являє собою 3Pal, 4Pal, Pff, Phe, Pim, Taz, 2Thi, або Thr(Bzl); та 5 A являє собою Apc або Lys. У ще кращому втіленні, даний приклад стосується процесу синтезу терапевтичного пептиду, де вказаний пептид є аналогом греліну, обраний з H-Inp-D-Bal-D-Trp-Phe-Apc-NH2, H-Inp-D-2BalD-Trp-Phe-Apc-NH2, H-Inp-D-Bal-D-Trp-2Thi-Apc-NH2, і H-Inp-D-Bal-D-Trp-Taz-Apc-NH2, і ще конкретніше H-Inp-D-Bal-D-Trp-Phe-Apc-NH2. У ще кращому втіленні, даний приклад стосується процесу синтезу терапевтичного пептиду, де вказаний пептид є аналогом дофаміново-соматостатинових химерних сполук, тобто химерною молекулою, яка включає соматостатин або його аналог і, щонайменше, одну функціональну групу дофаміну. У ще кращому втіленні, даний приклад стосується процесу синтезу терапевтичного пептиду, де вказаний пептид є аналогом дофаміново-соматостатинових химерних сполук, включаючи структуру Dop A або DopA-Lys(DopA), де Lys – це L-Лізин, за винятком випадку, коли чітко застосовується позначення D-Lys, A означає 1-13, наприклад, Dop1, Dop2, Dop3, Dop4, Dop5, Dop6, Dop7, Dop8, Dop9, Dop10, Dop11, Dop12, Dop13. У іншому ще кращому втіленні, даний приклад стосується процесу синтезу терапевтичного пептиду, де вказаний пептид являє собою аналог дофаміново-соматостатинових химерних сполук, включаючи структуру DopA-Lys(DopA), і сполуку Dop2-D-Lys(Dop2)-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH2. Загальна методика синтезу повністю розблокованого терапевтичного пептидного аміду згідно зі способом даного винаходу наведена нижче. Fmoc-амідна смола Сібера (Merck Chemicals, Дармштадт, Німеччина) спочатку просочується (для набухання) за допомогою від 1 до 3 обробок з використанням від 7 до 12 об'ємів, краще 10 об'ємів DMF (Samsung, Корея). Крім того, обробка триває до 11 годин, хоча слід віддати перевагу 3 обробкам тривалістю приблизно 10-30 хвилин кожна. Fmoc-депротекція амідної смоли Сібера проводиться шляхом від 1 до 2 обробок розчином піперидину в DMF (близько 10-20 % в/о, краще 15 % в/о), що тривають від 5 до 20 хвилин, хоча слід віддати перевагу 2 обробкам тривалістю приблизно 10 хвилин кожна. Смола після депротекції промивається від 3 до 5 разів з використанням від 7 до 12 об'ємів DMF протягом до 5 хвилин, хоча слід надати перевагу 3 промиванням 10 об'ємами DMF, тривалістю до 5 хвилин для кожного промивання. Fmoc-амінокислоти активуються для імобілізації на смолі шляхом розчинення Fmocамінокислоти разом із зв'язуючим реагентом (ами) в DMF, додавання основи, такої як DIEA (SAFC, Гіллінгем, Велика Британія), перемішуються протягом до 5 хвилин (краще 1-2 хвилини), та завантажуються до смоли у реактор. Конденсація Fmoc-амінокислоти проводиться з використанням надлишку приблизно від 1,2 до 2,0 моль-еквів. (краще - 1,5 моль-еквів.) Fmoc-амінокислоти по відношенню до смоли, застосовуючи HCTU (Merck Chemicals) або TBTU/HOBt (від 0,5 до 2,0 моль-еквів. по відношенню до Fmoc-амінокислоти) (як TBTU, так і HOBt отримані від SAFC) з основою, переважно DIEA (приблизно від 1,5 до 3,5 моль-еквів. по відношенню до Fmoc-амінокислоти, хоча для конкретних амінокислот краще застосовувати специфічні величини моль-еквівалентів), в DMF (слід віддати перевагу від 4 до 10 об'ємів і від 5 до 7 об'ємів) тривалістю від 30 до 120 хвилин (хоча тривалість варіює залежно від амінокислоти, що конденсується, однак, 60 хвилин – це найкращий час для переважної більшості амінокислот) при кімнатній температурі (переважно від 15 до 30° C). HCTU (1,2 еквів. по відношенню до Fmoc-амінокислоти) або TBTU з HOBt (0,98 моль-еквів.) є кращими, залежно від амінокислоти, що має бути конденсована. Після кожного приєднання Fmoc-амінокислоти, смолу промивають від 2 до 4 разів з використанням від 7 до 12 об'ємів DMF (слід надати перевагу 2 промиванням 10 об'ємами DMF); кожне промивання триває до 5 хвилин. Бажаний пептид відщеплюється від смоли і захисні групи будь-якого бічного ланцюга розблоковуються з використанням кліважного коктейлю, який містить приблизно від 15 до 25 % в/о TFA (Rhodia, Ліон, Франція) (хоча слід надати перевагу – 15-20 % в/о, і приблизно 20 % в/о є ще кращим), приблизно від 2,5 до 12 % в/о TIPS (SAFC, Гіллінгем, Велика Британія) (хоча слід 19 UA 115542 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 надати перевагу 5-10 % в/о, і приблизно 10 % в/о є ще кращим) використовується як скавенджер із рештою кліважного коктейлю, що містить від 62,5 до 82,5 % в/о DCM (INEOS Chlor, Рункорн, Велика Британія) (залежно від відсоткового вмісту TFA і TIPS, що використовуються). Смолу промивають, занурюють та струшують із кліважним коктейлем упродовж від 2 до 3 годин (краще - 2,5 години) приблизно при кімнатній температурі (приблизно від 15 до 30 °C). Було проведено імпульсний барботаж газоподібним азотом або ущільнення кліважної реакційної суміші за допомогою газоподібного азоту. Кліважну суміш, яка містить бажаний пептид та використану смолу, відфільтровували. Використану смолу промивали невеликим об'ємом або свіжого кліважного коктейлю, або суміші TFA/DCM (15-20:80-85 в/о) (1-2 рази з використанням від 1 до 2 об'ємів у надлишку порівняно з вагою смоли). Оптимальним можна вважати промивання невеликим об'ємом MeOH (1-2 рази з використанням від 1 до 2 об'ємів надлишку порівняно з вагою смоли) (Univar, Дублін, Ірландія). Фільтрати з високим вмістом пептиду об'єднували та випарювали до < 20 % початкової ваги фільтрату (< 15 % є кращим). Неочищений пептид переводили в осад з концентрованого розчину за допомогою органічного антирозчинника, такого як MtBE (Univar, Дублін, Ірландія) (приблизно від 5 до 15 об'ємів, краще – від 6,5 до 10 об'ємів), фільтрували та промивали невеликими об'ємами того ж органічного антирозчинника (до 3 разів з використанням від 1 до 2 об'ємів). Преципітований пептид можна висушувати. Розчинення сухого або напівсухого преципітату пептиду для подальшого очищення виконували за допомогою розведеної кислоти, такої як оцтова кислота, разом з органічним розчинником, таким як ACN (INEOS Nitriles, Роль, Швейцарія) (приблизний % в/о залежить від розчинності пептиду та %, до якого відбувається його елюція у процесі хроматографічного очищення). Очищення пептиду до дуже високого ступеня чистоти (≥ 99 %) разом із сольовим обміном (напр., від TFA до ацетатів) досягали фахівці з досвідом роботи у цій галузі за допомогою препаративної HPLC зі зворотною фазою (на C18 чи C8 silica, або з іншим прийнятним наповнювачем). Виділення очищеного пептиду шляхом ліофілізації чи інших методів виділення порошкоподібного пептиду з розчину (напр., висушування розпиленням, преципітація або кристалізація за допомогою висушування) є можливим для досвідчених у цій галузі фахівців. При синтезі химерних сполук, таких як дофаміново-соматостатинова химерна сполука, спосіб включає додаткові етапи. Загальна методика цих додаткових етапів може бути проілюстрована таким чином: перед етапом (i), Етап h-1: дофамін активується для конденсації розчиненням у HCTU та HOBt в DMF; Етап h-2: - до розчину Етапу (h-1) додається основа; Етап h-3: розчин Етапу (h-2) струшується протягом 1 хвилини, після чого вказана смола перемішується протягом 1,5 годин; Етап h-4: отриману смолу промивали DMF; і Етап h-5: далі смолу промивали 1-3 об'ємами MeOH. Суміш TFA, TIPS і DCM використовується для відщеплення пептиду від смоли з одночасним розблокуванням захисних груп бічних ланцюгів амінокислот, і, переважно, співвідношення TFA:TIPS:DCM становить 15:5:80. Після цього преципітат промивається MtBE. На завершення відбувається циклізація преципітату. Експериментальна частина Приклад 1: Синтез аналога греліну H-Inp-D-Bal-D-Trp-Phe-Apc-NH2 (як описано в Міжнародній Заявці на Патент WO 2004/014415, яка включена тут у повному обсязі шляхом посилання). У спосіб, описаний нижче, всі еквіваленти наведено відносно співвідношення смола – об'єм партії. Цільовий пептид синтезували в 50-літровому фільтраційному реакторі (Buchi, Флавіль, Швейцарія. Синтез проводили у масштабі 1,04 моль-еквівалент (1,4 кг вихідна кількість смоли). Приблизно, 1,41 кг Fmoc-амідної смоли Сібера просочували DMF (3 рази з використанням 10 об'ємів). Fmoc-групу розблоковували за допомогою двох обробок 15 % в/о розчином піперидину (BASF, Schwarheide, Німеччина) в DMF (2 × 10 об'ємів, 10 хвилин кожна). Після цього смолу промивали DMF (3 × 10 об'ємів). Деякі з використаних Fmoc амінокислот (Apc, D-Trp) потребують Boc-захищених бічних ланцюгів, натомість інші (Phe, D-Bal, Inp) не потребують захисту бічного ланцюга. У реактор вводили розчин 1,5 еквів. Fmoc-Apc(Boc)-OH, преактивованої 1,8 еквівалентами HCTU і 3 еквівалентами DIEA в DMF (6 об.). Розчин та смолу перемішували протягом приблизно 90 хвилин. Смолу просушували та промивали DMF (2 × 10 об.). Fmoc-групу деблокували, як було зазначено вище, та приєднували другу амінокислоту, Fmoc-Phe-OH, за допомогою тих же умов, що визначені й для Fmoc-Apc(Boc)-OH. Цикл Fmoc депротекції, промивання та 20 UA 115542 C2 5 10 15 конденсації Fmoc-амінокислоти, промивання повторювали для Fmoc-D-Trp(Boc)-OH, Fmoc-DBal-OH та Fmoc-Inp-OH, причому на етапах конденсації Fmoc-амінокислоти використовували 1,45 еквів. TBTU, 1,45 еквів. HOBt та 2,25 еквів. DIEA в DMF (6-7 об'ємів). Час зв'язування становив 60 хвилин. По завершенні збирання пептиду на амідній смолі Сібера смолу промивали DMF, а після цього ще промивали двічі 10 літрами метанолу і висушували. Пептид відщеплювали від смоли та видаляли захисні групи бічних ланцюгів за допомогою 10 об'ємів кліважного коктейлю, що містить TFA/TIPS/DCM (20/10/70 % в/о), протягом 2,5 годин. Фільтрат, що містить пептид, упарювали під зниженим тиском, преципітували й промивали перед розчиненням у розведеній оцтовій кислоті та ацетонітрилі для подальшого очищення. Вихід продукту становив 80,8 %, чистота за даними HPLC 90,0 %. Пептид очищували за допомогою колонки (Novasep, Pompey, France) для препаративної HPLC зі зворотною фазою, наповненої стаціонарною фазою C18 (EKA Chemicals AB, Bohus, Швеція). Очищення та сольовий обмін здійснювали при градієнті елюції, використовуючи буферні розчини ацетату амонію та оцтової кислоти з ацетонітрилом як органічним модифікатором. Приклад 2: Синтез дофамін-соматостатинової химерної сполуки за формулою: HN S O H H N S H O N H N O H N O N H O NH OH H N NH O O OH N H H N O S O N H NH2 O NH2 S H HN N H 20 25 30 35 40 (тобто Dop2-D-Lys(Dop2)-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH2 як описано у Міжнародній заявці на патент WO 2004/091490, що включена тут шляхом посилання у повному обсязі). У способі, як описано нижче, всі еквіваленти наведено по відношенню до співвідношення смола – об'єм партії. Цільовий пептид синтезували у 50-літровому фільтраційному реакторі. Синтез здійснювали у масштабі 0,72 моль-еквівалента (1,2 кг – початкова вага смоли). Захищені амінокислоти, які тут застосовуються, можуть бути отримані у фірмах Synthetech, Inc., (м. Албані, Орегон, США) або Senn Chemicals (м. Дільсдорф, Швейцарія). Приблизно 1,2 кг Fmoc-амідної смоли Сібера просочували DMF (3 × 10 об.) у реакторі, Fmocгрупу розблоковували за допомогою двох обробок 15 % в/о розчином піперидину в DMF (10 об'ємів на обробку, що триває 10 хвилин). Смолу промивали DMF (4 × 10 об'ємів). Для того, щоб відбулось зв'язування першої амінокислоти зі смолою, Fmoc-Thr(tBu)-OH (2,0 еквів.), TBTU (1,96 еквів.), HOBt (1,96 еквів.) і DIEA (3,0 еквів. в DMF (5,5 об.)) перемішували зі смолою протягом 60 хвилин. Смолу відфільтровували і повторно конденсували Fmoc-Thr(tBu)OH із застосуванням Fmoc-Thr(tBu)-OH (1,0 еквів.), TBTU (0,98 еквів.), HOBt (0,98 еквів.) та DIEA (1,5 еквів.) в DMF (2,8 об.) протягом 60 хвилин. Смолу промивали DMF (4 × 10 об'ємів). Fmoc-групу розблоковували, як описано вище, і зв'язували другу амінокислоту, FmocCys(Acm)-OH, застосовуючи ті ж умови, що й були окреслені для Fmoc-Thr(tBu)-OH. Цикл Fmoc депротекції, промивання та конденсації Fmoc-амінокислоти, промивання повторювали для Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-D-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Cys(Acm)-OH та Fmoc-D-Lys(Fmoc)-OH у такому ж порядку. Етапи конденсації Fmoc-амінокислоти проводили, використовуючи TBTU (1,96 еквів.), HOBt (1,96 еквів.) і DIEA (3,0 еквів.) у DMF (5,8-7 об'ємів) протягом 60 хвилин. Дофамінову функціональну групу вказаної сполуки, тобто 21 UA 115542 C2 H H 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 OH S HN N O (Biomeasure, Inc., м. Мілфорд, Mасачусетс, США) активували для конденсації шляхом розчинення її (у 2,75 молярному надлишку по відношенню до смоли), HCTU (2,79 еквів.) і HOBt (3,3 еквів.) в DMF (12,3 об'ємів на 1 грам смоли), додаванням DIEA (6,27 еквів.) та струшуванням протягом 1 хвилини перед перемішуванням зі смолою протягом 1,5 годин. Після остаточного промивання пептидильної смоли за допомогою DMF, смолу далі промивали MeOH (2 × 10 об.) та висушували. Відщеплення пептидної химерної сполуки зі смоли та видалення захисних груп бічних ланцюгів проводили в одній камері за допомогою TFA:TIPS:DCM (15:5:80, 12 об'ємів, 34,3 л) протягом 2,0 годин. Проводили періодичний барботаж кліважної реакційної суміші газоподібним азотом (протягом 1-2 хвилин через кожні 30 хвилин). Після відфільтровування кліважної суміші (яка містить бажаний пептид) від смоли використану смолу промивали сумішшю TFA/DCM (15:85) (надлишком 1,3 об'ємів порівняно з вагою смоли, 3 рази). Фільтрати з високим вмістом пептиду об'єднували та випарювали до 10,4 % (6,2 кг) від початкової ваги фільтрату. Неочищений пептид преципітували з концентрованого розчину шляхом додавання до MtBE при перемішуванні (у надлишку 6,5 об. по відношенню до ваги залишку після упарювання, 40 л), фільтрували та промивали MtBE (1 об. по відношенню до ваги залишку після упарювання, 6,2 л, один раз). Розчинення напівсухого пептидного преципітату для подальшу циклізацію проводили, використовуючи надлишок 38 об'ємів (45 л), порівняно з вагою смоли, суміші 0,1 % в/о TFA/вода, з ацетонітрилом (30 % в/о). Продуктивність синтез/відщеплення становив 72,6 %, чистота продукту на основі даних HPLC становила 79,1 %. Приклади терапевтичних пептидів, які можуть бути синтезовані за допомогою нового способу, описані тут, включаючи, але не обмежуючись ними, наступні: H-Inp-D-1-Nal-D-Trp-3-Pal-Lys-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-4-Pal-Lys-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-Orn-Lys-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Trp-Phe-Lys-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-Thr(Bzl)-Lys-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-Pff-Lys-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-2-Thi-Lys-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-Taz-Lys-NH2 H-Inp-D-Dip-D-Trp-Phe-Lys-NH2 H-Inp-D-Bpa-D-Trp-Phe-Lys-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Bpa-Phe-Lys-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-3-Pal-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-4-Pal-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Trp-3-Pal-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Trp-Phe-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-Thr(Bzl)-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-Pff-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-2-Thi-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-Taz-NH2 H-Inp-D-Dip-D-Trp-Phe-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Dip-Phe-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Trp-Phe-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Bal-Phe-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-3-Pal-Lys-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Trp-2-Thi-Lys-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Trp-Phe-Lys-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Trp-2-Thi-Lys-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-Phe-Apc-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Trp-Phe-Apc-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Trp-Phe-Apc-NH2 22 UA 115542 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-Phe-Lys-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-2-Thi-Lys-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Trp-2-Thi-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-Phe-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Trp-Taz-Lys-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Trp-Taz-Lys-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-Taz-Lys-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-Taz-Lys-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-2-Thi-Lys-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-Phe-Lys-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-Phe-Apc-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-Phe-Apc-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-1-Nal-Phe-Apc-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-2-Nal-Phe-Apc-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-1-Nal-Phe-Lys-NH2 H-Apc-D-Bal-D-1-Nal-Phe-Apc-NH2 H-Apc-D-Bal-D-2-Nal-Phe-Apc-NH2 H-Apc-D-Bal-D-1-Nal-Phe-Lys-NH2 H-Apc-D-Bal-D-2-Nal-Phe-Lys-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-2-Thi-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-Phe-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-Taz-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-2-Thi-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-Taz-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-2-Thi-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-Taz-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Trp-Taz-Apc-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Trp-Taz-Apc-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-Taz-Apc-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-Taz-Apc-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-2-Fua-Apc-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-2-Fua-Lys-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-2-Fua-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-2-Pal-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-3-Pal-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-3-Thi-Apc-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-3-Thi-Lys-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-3-Thi-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-4-Pal-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-Pff-Apc-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-Pff-Lys-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-Pff-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-2-Fua-Apc-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-2-Fua-Lys-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-2-Fua-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-2-Pal-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-2-Thi-Apc-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-2-Thi-Lys-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-3-Pal-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-3-Thi-Apc-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-3-Thi-Lys-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-3-Thi-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-4-Pal-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-Pff-Apc-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-Pff-Lys-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-Pff-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-Taz-Apc-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-Taz-Lys-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-2-Fua-Apc-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-2-Fua-Lys-NH2 23 UA 115542 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 H-Apc-D-Bal-D-Bal-2-Fua-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-2-Pal-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-2-Thi-Apc-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-2-Thi-Lys-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-2-Thi-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-3-Pal-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-3-Thi-Apc-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-3-Thi-Lys-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-3-Thi-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-4-Pal-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-Pff-Apc-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-Pff-Lys-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-Pff-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-Phe-Apc-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-Phe-Lys-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-Phe-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-Taz-Apc-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-Taz-Lys-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-Taz-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-2-Fua-Apc-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-2-Fua-Lys-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-2-Fua-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-2-Pal-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-3-Pal-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-3-Thi-Apc-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-3-Thi-Lys-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-3-Thi-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-4-Pal-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-Pff-Apc-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-Pff-Lys-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-Pff-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Bal-2-Fua-Lys-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Bal-2-Fua-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Bal-2-Thi-Lys-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Bal-3-Thi-Lys-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Bal-Pff-Lys-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Bal-Pff-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Bal-Phe-Lys-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Bal-Taz-Lys-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Bal-Taz-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Trp-2-Fua-Apc-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Trp-2-Fua-Lys-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Trp-2-Fua-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Trp-3-Thi-Apc-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Trp-3-Thi-Lys-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Trp-Pff-Apc-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Trp-Pff-Lys-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Trp-Pff-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Trp-Taz-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-2-Fua-Apc-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-2-Fua-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-2-Thi-Apc-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-3-Thi-Apc-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-3-Thi-Lys-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-3-Thi-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-Pff-Apc-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-Pff-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-Taz-Apc-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-Taz-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Bal-2-Fua-Lys-NH2 24 UA 115542 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 H-Inp-D-Bal-D-Bal-2-Fua-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Bal-2-Thi-Lys-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Bal-3-Thi-Lys-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Bal-Pff-Lys-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Bal-Pff-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Bal-Phe-Lys-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Bal-Taz-Lys-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Bal-Taz-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Trp-2-Fua-Apc-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Trp-2-Fua-Lys-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Trp-2-Fua-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Trp-3-Thi-Apc-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Trp-3-Thi-Lys-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Trp-Pff-Apc-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Trp-Pff-Lys-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Trp-Pff-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Trp-Taz-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Bal-2-Fua-Lys-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Bal-2-Fua-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Bal-2-Thi-Lys-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Bal-3-Thi-Lys-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Bal-Pff-Lys-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Bal-Pff-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Bal-Taz-Lys-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Bal-Taz-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Trp-2-Fua-Lys-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Trp-2-Fua-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Trp-2-Thi-Lys-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Trp-3-Thi-Lys-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Trp-Pff-Lys-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Trp-Pff-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Trp-Taz-Lys-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Trp-Taz-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Trp-3-Pal-Lys-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-4-Pal-Lys-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-Orn-Lys-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Trp-Phe-Lys-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-Thr(Bzl)-Lys-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-Pff-Lys-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-2-Thi-Lys-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-Taz-Lys-NH2 H-Inp-D-Dip-D-Trp-Phe-Lys-NH2 H-Inp-D-Bpa-D-Trp-Phe-Lys-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Bpa-Phe-Lys-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-Thr(Bzl)-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-Pff-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-Taz-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Dip-Phe-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-3-Pal-Lys-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Trp-2-Thi-Lys-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Trp-Phe-Lys-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Trp-2-Thi-Lys-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-Phe-Apc-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Trp-Phe-Apc-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Trp-Phe-Apc-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-Phe-Lys-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-2-Thi-Lys-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Trp-Taz-Lys-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Trp-Taz-Lys-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-Taz-Lys-NH2 25 UA 115542 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 H-Apc-D-Bal-D-Trp-Taz-Lys-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-2-Thi-Lys-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-Phe-Lys-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-Phe-Apc-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-Phe-Apc-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-1-Nal-Phe-Apc-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-2-Nal-Phe-Apc-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-1-Nal-Phe-Lys-NH2 H-Apc-D-Bal-D-1-Nal-Phe-Apc-NH2 H-Apc-D-Bal-D-2-Nal-Phe-Apc-NH2 H-Apc-D-Bal-D-1-Nal-Phe-Lys-NH2 H-Apc-D-Bal-D-2-Nal-Phe-Lys-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-2-Thi-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-Phe-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-Taz-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-2-Thi-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-Taz-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-2-Thi-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-Taz-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Trp-Taz-Apc-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Trp-Taz-Apc-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-Taz-Apc-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-Taz-Apc-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-3-Thi-Lys-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Trp-3-Thi-Lys-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Trp-2-Fua-Lys-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Trp-Pff-Lys-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Trp-3-Thi-Apc-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Trp-2-Fua-Apc-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Trp-Pff-Apc-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-3-Thi-Lys-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-2-Fua-Lys-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-Pff-Lys-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Bal-Phe-Lys-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Bal-2-Thi-Lys-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Bal-3-Thi-Lys-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Bal-Taz-Lys-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Bal-2-Fua-Lys-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Bal-Pff-Lys-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-Phe-Lys-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-2-Thi-Lys-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-3-Thi-Lys-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-Taz-Lys-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-2-Fua-Lys-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-Pff-Lys-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Trp-3-Thi-Lys-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Trp-2-Fua-Lys-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Trp-Pff-Lys-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Bal-Phe-Lys-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Bal-2-Thi-Lys-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Bal-3-Thi-Lys-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Bal-Taz-Lys-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Bal-2-Fua-Lys-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Bal-Pff-Lys-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-2-Thi-Apc-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-3-Thi-Apc-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-Taz-Apc-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-2-Fua-Apc-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-Pff-Apc-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Trp-3-Thi-Apc-NH2 26 UA 115542 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 H-Inp-D-1-Nal-D-Trp-2-Fua-Apc-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Trp-Pff-Apc-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-3-Thi-Lys-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-2-Fua-Lys-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-Pff-Lys-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-2-Thi-Lys-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-3-Thi-Lys-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-Taz-Lys-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-2-Fua-Lys-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-Pff-Lys-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Trp-2-Thi-Lys-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Trp-3-Thi-Lys-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Trp-Taz-Lys-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Trp-2-Fua-Lys-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Trp-Pff-Lys-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Bal-2-Thi-Lys-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Bal-3-Thi-Lys-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Bal-Taz-Lys-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Bal-2-Fua-Lys-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Bal-Pff-Lys-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-3-Thi-Apc-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-2-Fua-Apc-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-Pff-Apc-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-Phe-Apc-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-2-Thi-Apc-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-3-Thi-Apc-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-Taz-Apc-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-2-Fua-Apc-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-Pff-Apc-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-3-Thi-Apc-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-2-Fua-Apc-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-Pff-Apc-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-2-Thi-Apc-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-3-Thi-Apc-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-Taz-Apc-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-2-Fua-Apc-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-Pff-Apc-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Trp-Taz-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Trp-2-Fua-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Trp-Pff-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-3-Thi-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-2-Fua-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-Pff-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-4-Pal-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-3-Pal-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-2-Pal-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Bal-Taz-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Bal-2-Fua-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Bal-Pff-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-Phe-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-2-Thi-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-3-Thi-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-Taz-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-2-Fua-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-Pff-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-4-Pal-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-3-Pal-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Bal-2-Pal-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Trp-Taz-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Trp-2-Fua-NH2 27 UA 115542 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 H-Inp-D-1-Nal-D-Trp-Pff-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Bal-Taz-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Bal-2-Fua-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Bal-Pff-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-Taz-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-2-Fua-NH2 H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-Pff-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-3-Thi-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-2-Fua-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-Pff-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-4-Pal-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-3-Pal-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-2-Pal-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-3-Thi-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-2-Fua-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-Pff-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-4-Pal-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-3-Pal-NH2 H-Apc-D-2-Nal-D-Trp-2-Pal-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Trp-Taz-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Trp-2-Fua-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Trp-Pff-NH2; H-Inp-D-Bip-D-Bal-Taz-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Bal-2-Fua-NH2 H-Inp-D-Bip-D-Bal-Pff-NH2 H-Inp-D-1-Nal-D-Trp-2-Thi-Apc-NH2 H-Inp-D-Bal-D-Trp-2-Thi-Apc-NH2 H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-2-Thi-Apc-NH2 H-Apc-D-Bal-D-Trp-2-Thi-Apc-NH2 and H-Apc-D-1-Nal-D-Trp-Phe-Lys-NH2. Дофамін-соматостатинові химерні сполуки, які можуть бути синтезовані за допомогою заявленого способу, включають, але не обмежені ними, ті сполуки, що описуються в WO 02/100888 та WO 04/091490, як наведено нижче: Dop2-D-Phe-Doc-D-Phe-c[Cys-3-I-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys]-Thr-NH2 Ac-Lys(Dop2)-D-Tyr-D-Tyr-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH2 Ac-D-Lys(Dop2)-D-Phe-c[Cys-3-I-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Thr-NH2 Dop2-Lys(Ac)-D-Tyr-D-Tyr-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH2 Dop2-D-Lys(Ac)-D-Phe-c[Cys-3-I-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Thr-NH2 Dop3-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH2 Dop4-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH2 Dop3-Aepa-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH2 Dop4-Aepa-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH2 Dop5-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH2 Dop6-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH2 Dop7-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH2 Dop8-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH2 Dop9-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH2 Dop10-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH2 Dop11-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH2 Dop12-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH2 Dop13-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH2 Dop5-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH2 Dop6-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH2 Dop7-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH2 Dop8-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH2 Dop9-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH2 Dop10-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH2 Dop11-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH2 Dop12-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH2 Dop13-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH2 28