Спосіб передпосівної обробки проб біоматеріалу при культуральному дослідженні на туберкульоз

Реферат: Спосіб передпосівної обробки проб біоматеріалу при культуральному дослідженні на туберкульоз, що включає підготовку біоматеріалу, додавання фізіологічного розчину, гомогенізацію, висів суспензії обробленого матеріалу. При здійсненні способу як бактерицид використовують 0,5-1,5 % розчин азотної кислоти за експозиції 30 хвилин. UA 105291 U (12) UA 105291 U UA 105291 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до галузі ветеринарної медицини, а саме до мікробіології, і може бути використана для виконання передпосівної обробки проб біоматеріалу з метою виділення культур мікобактерій від сільськогосподарських та лабораторних тварин при культуральному дослідженні на туберкульоз. В медичній практиці існує спосіб обробки мокротиння при туберкульозі із застосуванням 2та 3-заміщеного фосфорнокислого натрію [Косенко В.И., Кадочкин А.М., Тажгалиев Н.М. Влияние обработки патологического материала на высеваемость микобактерий / Ветеринария. - 1984. - № 5. - С. 67-68]. Застосування цих детергентів для обробки біоматеріалу від тварин є непридатним, тому що в 96 % випадків не забезпечує пригнічення росту супутньої мікрофлори. Існує спосіб обробки гомогенного біологічного матеріалу 0,5-1 % розчином етонію при експозиції 30 хвилин [Нуратинов Р. А., Вердиева Э. А., Абдурахманов Г. М., Исламова Ф. И. Метод предпосевной обработки биоматериала для выделения микобактерий / Проблемы туберкулеза и болезней легких. - 2006. - № 9. - С. 48-50]. Недоліком цього способу є те, що детергент, який застосовується для передпосівної обробки біоматеріалу, дозволяє більше в 11,4-14,7 % випадків виділити збудника туберкульозу, але в 4,5-29 % виникає проріст живильного середовища, що ускладнює облік та оцінку результатів досліджень. Відомий спосіб обробки біоматеріалу з використанням 5 % розчину щавлевої кислоти [Тажгалиев Н. М. Сравнительная оценка способов обработки патологического материала на высеваемость микобактерий: Автореф. дис. канд. вет. наук / ВНИИЭВ. - М., 1984, 12 с]. При цьому способі обробки патологічного матеріалу відмічається пригнічення росту на живильному середовищі, а саме: ріст мікобактерій отримано в 30 % випадків. До того ж не забезпечується стерильність посівів: проріст сторонньої мікрофлори склав від 11,6 до 22,5 %. Для виділення культур мікобактерій на живильних середовищах найбільш близьким до запропонованого способу є спосіб обробки патологічного матеріалу за методом Алікаєвої А. П. [Рекомендации ВНИИ бруцеллеза и туберкулеза животных - Омск, 1988. - с. 11-13]. Цей спосіб вибрано найближчим аналогом. За цим способом проводять передпосівну обробку патологічного матеріалу 3-6 % розчином сірчаної кислоти протягом 10-20 хвилин. Біоматеріал промивають стерильним фізіологічним розчином та гомогенізують у стерильних фарфорових ступках. До отриманого гомогенізату додають стерильний фізіологічний розчин, ретельно перемішують, а суспензію висівають на живильне середовище. Недоліком цього способу є проріст на живильному середовищі сапрофітної мікрофлори від 6 % до 10 %, що впливає на результативність культурального дослідження на туберкульоз. В основу корисної моделі поставлена задача розробити спосіб передпосівної обробки проб біоматеріалу при культуральному дослідженні на туберкульоз, що включає підготовку біоматеріалу, додавання фізіологічного розчину, гомогенізацію, висів суспензії обробленого матеріалу шляхом використання як бактерициду 0,5-1,5 % розчину азотної кислоти за експозиції 30 хвилин, щоб забезпечити ефективність способу. Порівняльний аналіз з найближчим аналогом дозволяє зробити висновок, що використання як бактерициду 0,5-1,5 % розчину азотної кислоти за експозиції 30 хвилин дає можливість підвищити висіваність культур мікобактерій на живильному середовищі та зменшити ріст супутньої мікрофлори. Заявлений спосіб виконують таким чином: Передпосівну обробку патологічного матеріалу проводять із використанням 0,5-1,5 % розчину азотної кислоти з експозицією 30 хвилин. Промивання біоматеріалу виконують із використанням 0,85 % стерильного фізіологічного розчину. Гомогенізацію біоматеріалу здійснюють у стерильних фарфорових ступках з додаванням стерильного фізіологічного розчину, матеріал перемішують та проводять висівання отриманої суспензії на живильне середовище. Облік росту культур мікобактерій на живильному середовищі проводять через кожні 5-7 діб протягом 90 діб. Приклад 1. Патологічний матеріал (лімфатичні вузли, шматочки печінки, селезінки, легень), відібраний від тварин, в стерильному боксі розрізали стерильними ножицями на шматочки 3 розміром 0,3-0,5 см , які поміщали в стерильну фарфорову ступку і заливали 0,5 % розчином азотної кислоти у співвідношенні 1:4, накривали стерильним пергаментним папером і залишали на 30 хвилин. Розчин кислоти зливали у колбу, а шматочки тканин промивали 2 рази стерильним фізіологічним розчином по 15 хвилин. Після другого промивання фізрозчин зливали, а шматочки тканин розтирали із стерильним склом або піском до отримання однорідної маси. 3 Після цього до тканинного гомогенізату додавали 2-2,5 см стерильного фізіологічного розчину, змішуючи стерильною скляною паличкою. Отриману суспензію висівали на живильне середовище для культивування мікобактерій. Пробірки з висівами розташовували у термостаті 1 UA 105291 U 5 10 15 20 25 30 за температури 37 °C на 2-3 доби у горизонтальному положенні. Після цього пробірки парафінували, розміщували у бактеріологічні штативи і культивували в термостаті за температури 37 °C. Облік росту культур мікобактерій на живильному середовищі проводили через кожні 5-7 діб протягом 90 діб. Приклад 2. Спосіб передпосівної обробки біоматеріалу проводили, як вказано в прикладі 1, тільки передпосівну обробку досліджуваного матеріалу проводили 1 % розчином азотної кислоти за експозиції 30 хвилин. Приклад 3. Те саме, що і в прикладі 1, тільки передпосівну обробку проводили 1,5 % розчином азотної кислоти за експозиції 30 хвилин. Результати ефективності запропонованого способу в порівнянні з найближчим аналогом наведені в таблиці. Із матеріалів наведених в таблиці видно, що при застосуванні для передпосівної обробки запропонованим способом 15 проб біоматеріалу від ВРХ, 5 проб від курей, 12 проб від морських свинок та 4 проб від кролів із застосуванням 0,5 % запропонованого розчину (приклад 1) було ізольовано 22 культури мікобактерій та в 25 % випадків відмічали ріст сторонньої мікрофлори (проріст). При застосуванні 1 % розчину азотної кислоти за експозиції 30 хвилин (приклад.2) із проб біоматеріалу було виділено 33 культури мікобактерій, а при застосуванні 1,5 % розчину реагенту за такої самої експозиції (приклад 3) ріст колоній мікобактерій спостерігали в 21 випадку. Відмічено відсутність росту на живильному середовищі банальної мікрофлори. При цьому необхідно відмітити, що 1,5 % розчин азотної кислоти пригнічує інтенсивність росту епізоотичних культур мікобактерій на живильному середовищі. При обробці патологічного матеріалу 3 % розчином сірчаної кислоти (найближчий аналог) ріст мікобактерій на живильному середовищі відмічали у 22 пробах (ізольовано 22 культури), що на 11 культур менше в порівнянні із запропонованим способом, та в 33,3 % проб відмічали ріст супутньої мікрофлори, тоді як при обробці 1 % розчином азотної кислоти (запропонований) в жодному випадку росту сторонньої мікрофлори не було відмічено. Результати проведених досліджень свідчать про те, що при використанні запропонованого способу передпосівної обробки проб біоматеріалу (приклад 2) дозволяє виділяти на 30,5 % більше культур мікобактерій із проб біологічного матеріалу та забезпечує стерильність висівів на живильному середовищі. Запропонований спосіб передпосівної обробки проб біоматеріалу відповідає сучасним вимогам при роботі із заразним матеріалом, ефективний та може використовуватись у профільних лабораторіях для проведення культурального дослідження на туберкульоз. Таблиця Спосіб передпосівної обробки проб біоматеріалу при культуральному дослідженні на туберкульоз № п/п Проби від проб тварин ВРХ Кури Морські 3 свинки 4 Кролі Всього % 1 2 15 5 Ізольовано культур Ріст сторонньої мікрофлори Запропонований Найближчий Найближчий Запропонований спосіб спосіб аналог аналог 0,5 % 1% 1,5 % 0,5 % 1% 1,5 % 9 13 8 9 3 4 2 5 2 4 12 9 12 8 8 2 2 4 36 2 22 61,1 3 33 91,6 2 21 58,3 2 22 61,1 2 9 25 2 12 33,3 35 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 40 Спосіб передпосівної обробки проб біоматеріалу при культуральному дослідженні на туберкульоз, що включає підготовку біоматеріалу, додавання фізіологічного розчину, гомогенізацію, висів суспензії обробленого матеріалу, який відрізняється тим, що як бактерицид використовують 0,5-1,5 % розчин азотної кислоти за експозиції 30 хвилин. 2 UA 105291 U Комп’ютерна верстка І. Скворцова Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3