Спосіб корекції неалкогольної жирової хвороби печінки, асоційованої з гіпергомоцистеїнемією

Реферат: Спосіб корекції неалкогольної жирової хвороби печінки, асоційованої з гіпергомоцистеїнемією, в експерименті у щурів шляхом інтрагастрального введення фармакологічного засобу. Тваринам вводять препарат омега-3 поліненасичених жирних кислот Епадол-Нео у дозі 150 мг/кг маси тіла 1 раз на добу інтрагастрально протягом 28 діб. UA 119010 U (12) UA 119010 U UA 119010 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до медицини, а саме до медичної біохімії та фармакології та призначена для корекції процесів стеатоґенезу та фіброґенезу за умов НАЖХП, асоційованої з ГГЦ, за допомогою препарату омега-3 поліненасичених жирних кислот "Епадол-Нео". Результати досліджень останніх років показали, що в НАЖХП часто супроводжується підвищенням рівня сірковмісного метаболіту гомоцистеїну, що може прискорювати трансформацію простого стеатозу у стеатогепатит [див. Пентюк Н.О. Вплив гіпергомоцистеїнемії на формування СС14-індукованого фіброзу печінки у щурів / Н.О. Пентюк // Сучасна гастроентерологія. - 2009. - № 5 (49). - С. 33-37]. Одним із шляхів негативного впливу ГГЦ на стан печінки може бути пригнічення ендогенної продукції біорегуляторів та цитопротекторів - гідроген сульфіду (H2S) та інсуліноподібного фактора росту-1 (IGF-1). Таким чином, актуальним залишається пошук препаратів, які поряд із антистеатогенною дією виявляли б здатність коригувати рівень гомоцистеїну, H2S та IGF-1. Спосіб корекції процесів стеатогенезу за умов експериментальної НАЖХП є відомим [див. Ding W. J. Regulation of adipokines by polyunsaturated fatty acids in a rat model of non-alcoholic steatohepatitis / Ding W. J., Wang Y., Fan J. G. // Arch Iran Med. - 2014. - Vol. 17, № 8. - P. 563-568]. Спосіб включає введення щурам препарату омега-3 поліненасичених жирних кислот інтрагастрально протягом 12 тижнів. Недоліком вказаного способу є те, що він не призначений для корекції НАЖХП, асоційованої з гіпергомоцистеїнемією. В основу корисної моделі поставлена задача розробити такий спосіб корекції НАЖХП, який поряд із антистеатогенним ефектом усував би гепатотоксичну дію ГГЦ та нормалізував рівень H2S та IGF-1. Технічний результат, який досягається при вирішенні задачі, полягає в підвищенні ефективності лікування НАЖХП та інших патологічних станів, пов'язаних з гіпергомоцистеїнемією. Поставлена задача вирішується шляхом застосування за новим призначенням препарату омега-3 поліненасичених жирних кислот "Епадол-Нео", який містить 300 мг ейкозапентаєнової кислоти, 200 мг докозагексаєнової кислоти, 498 мг інших жирних кислот, 2 мг d-α-токоферолу. Здійснення способу. Досліди проводили на білих лабораторних щурах самцях з початковою масою 210-280 г. Всі тварини мали вільний доступ до питної води та корму. Щурів було розподілено на три групи по 10 тварин у кожній. Тварин групи 1 (контроль) утримували на стандартній напівсинтетичній крохмально-казеїновій дієті, збалансованій по всіх макро- та мікронутрієнтах. НАЖХП, асоційованої із ГГЦ (групи тварин 2 та 3) моделювали як описано [Патент України № 109085 заявл. 18.02.16; опубл. 10.08.16; Бюл. № 15.]. Для лікування НАЖХП, асоційованої з ГГЦ, був застосований Епадол-Нео (AT "Київський вітамінний завод") в дозі 150 мг/кг маси тіла (1500 мг або 1,5 мл епадолу змішували з 8,5 мл рафінованої соняшникової олії і вводили із розрахунку 0,1 мл на 100 г маси щура) протягом 28 діб. Для оцінки ефективності лікування визначали маркери стеатозу, фіброзу, а також рівні гомоцистеїну, IGF-1 та H2S. Вміст гомоцистеїну та IGF-1 в сироватці крові визначали імуноферментним методом ELISA за наборами "Homocysteine EIA" (Axis-Shield, Англія); "m/r IGF-1-ELISA (IGFBP-blocked)» (Mediagnost, Німеччина). Для біохімічних досліджень печінку гомогенізували протягом 1-2 хв. в охолодженому середовищі 1,15 % КСl у відношенні маса/об'єм - 1:4 при 3000 об./хв. (тефлон-скло). Центрифугували 30 хв. при 600 g, відбирали аліквоти постядерного супернатанту в мікропробірки Еппендорф і до проведення досліджень зберігали при -20 °C. Вміст H2S в печінці визначали як описано [див. Carvedilol induces endogenous hydrogen sulfide tissue concentration changes in various mouse organs / Wilinski B, Wilinski J, Somogyi E [див. et al.] // Folia Biol (Krakow). - 2011. - Vol. 59, № 3-4. - P. 151-155]. Для оцінки стеатозу в гомогентах печінки визначали вміст ЗХС та ТГ за наборами "Холестерин-Ф", "Тригліцериди-Ф" (Філісіт-Діагностика, Україна), вміст загальних фосфоліпідів визначали екстракційно-фотометричним методом за утворенням гідрофобного комплексу з феротіоціанатом амонію [див. Пентюк А.А. Определение фосфолипидов по образованию гидрофобного комплекса с феротиоцианатом аммония / А.А. Пентюк, В.И. Гуцол, О.А. Яковлева // Лаб. дело. - 1987. - № 6. - С. 457-459.]. Як маркер фіброзу в гомогенаті печінки визначали вміст гідроксипроліну за реакцією з парадиметиламінобензальдегідом як описано [див. Siddiqi N. J. Investigation into the distribution of total, free, peptide-bound, protein-bound, soluble-and insoluble-collagen hydroxyproline in various bovine tissues / Siddiqi N. J., Alhomida A. S. // J Biochem Моl Biol. - 2003. - Vol. 36, № 2. - P. 154158]. 1 UA 119010 U 5 10 15 20 Конкретний приклад застосування способу. Встановлено, що при НАЖХП, асоційованої із ГГЦ, відбувається суттєве підвищення рівня гомоцистеїну та зниження рівня IGF-1 в сироватці крові. Було виявлено, що за станом на 60 добу рівень гомоцистеїну був достовірно вищим на 106 %, ніж у щурів групи контролю (табл.). Застосування препарату ω-3 ПНЖК сприяло зниженню рівня гомоцистеїну в сироватці крові: у щурів групи 3 цей показник був достовірно нижчим на 32,6 %, ніж у щурів групи 2. Аналіз сироваткового рівня IGF-1 показав, що на 60 добу у щурів з НАЖХП+ГГЦ спостерігалось вірогідне зниження рівня IGF-1 в сироватці крові на 41,4 %, порівняно з контролем. Натомість, застосування препарату ω-3 ПНЖК сприяло підвищенню рівня IGF-1 у щурів групи 3 на 31,1 %, ніж у щурів груп 2. У тварин з НАЖХП+ГГЦ відмічено достовірне підвищення вмісту ТГ (на 198,9 %) та ЗХС (на 63,7 %) та зниження вмісту фосфоліпідів (на 28,9 %) в печінці порівняно з групою контролю. Виявилось, що застосування препарату ω-3 ПНЖК забезпечувало суттєвий антистеатогенний ефект. Так, достовірно зменшився вміст ТГ (на 42,5 %) та ЗХС (на 23,4 %), а також підвищився вміст фосфоліпідів (на 26 %) в печінці у щурів групи 3, ніж у нелікованих щурів групи 2. Виявлено, що у тварин з НАЖХП+ГГЦ вміст H2S в печінці був достовірно нижчим (на 40,0 %), ніж у тварин контрольної групи. В той же час, застосування препарату ω-3 ПНЖК сприяло зменшенню дефіциту H2S і у щурів групи 3 цей показник був достовірно вищим на 27,2 %, ніж у щурів групи 2. Встановлено, що при поєднанні НАЖХП, асоційованої з ГГЦ, акселеруються процеси печінкового фіброґенезу, про що свідчить достовірне підвищення вмісту гідроксипроліну (на 67,3 %) У порівнянні із групою контролю. Натомість застосування препарату ω-3 ПНЖК ефективно зменшувало вміст гідроксипроліну: у щурів групи 3 цей показник достовірно знизився на 32 % у порівнянні із щурами групи 2 (Таблиця 1). 25 Таблиця 1 Вплив препарату ω-3 ПНЖК на вміст маркерів стеатозу та фіброзу в сироватці крові та в печінці щурів за НАЖХП, асоційованої з ГГЦ (М±m, n=10) Групи тварин Показники Сироватка крові Гомоцистеїн, мкмоль/л IGF-1, нг/мл Гомогенат печінки H2S, мкг/ г тканини ТГ, мкмоль /г тканини ЗХС, мкмоль /г тканини Фосфоліпіди, мкмоль /г тканини Гідроксипролін, мкмоль /г тканини Контроль НАЖХП+ГГЦ НАЖХП+ГГЦ+СД+ω-3 ПНЖК 5,57±0,51 304,3±13,4 11,7±0,43* 174,1±5,96* 7,89±0,67* # 228,3±11,5* 5,15±0,24 17,7±0,87 6,37±0,27 26,1±0,49 3,07±0,24* 56,2±2,79* 11,0±0,53* 18,2±1,12* 4,25±0,24* # 32,3±2,12* # 8,43±0,38* # 23,0±1,16* 2,73±0,10 4,75±0,24* 3,21±0,14* # # # Примітки: 1. * - р