Спосіб спектрофотометричного визначення стрептоциду розчинного у водних розчинах аптечного виготовлення

Спосіб спектрофотометричного визначення стрептоциду розчинного у водних розчинах аптеч 3 ся кількість операцій пробопідготовки, що призводить до появи небажаних похибок в аналізі [3]. Авторами було отримано та вивчено ультрафіолетовий спектр поглинання розчину стрептоциду розчинного від 200 нм до 300 нм. Дослідним шляхом була обрана аналітична довжина хвилі, що складає 253 нм. У відповідності з заявленим способом при приготуванні розчинів випробуваного зразку та робочого стандартного зразку одержують концентрацію стрептоциду розчинного 8-10-4 г/мл з подальшим вимірюванням їх оптичних густин за довжини хвилі 253 нм лише за два етапи розведення, перше з яких здійснюють водою Р, а друге - 0,01 М розчином натрію гідроксиду. Заявлений спосіб здійснюється наступним чином. Приготування розчину випробуваного зразку: 5 мл 0,8 % або 2 мл 2 % водного розчину стрептоциду розчинного аптечного виготовлення поміщають у мірну колбу 100 мл та доводять об'єм водою Р до мітки (перше розведення). Для 1% водного розчину стрептоциду розчинного аптечного виготовлення перше розведення водою Р складає 2:50. Далі 2 мл одержаних розчинів першого розведення поміщають у мірну колбу 100 мл та доводять об'єм 0,01 М розчином натрію гідроксиду до мітки (друге розведення). Приготування розчину робочого стандартного зразку: 0,2 г (точна наважка) стрептоциду розчинного поміщають у мірну колбу 250 мл і додають 150 мл води Р, перемішують до повного розчинення, доводять об'єм водою Р до мітки (перше розведення). Далі 1,0 мл одержаного розчину поміщають у мірну колбу 100 мл, доводять об'єм розчином 0,01 М розчином натрію гідроксиду до мітки. Відразу після приготування вимірюють оптичну густину розчинів випробуваного зразку та робочого стандартного зразку за довжини хвилі 253 нм відносно до 0,01 М розчину натрію гідроксиду. Вимірювання оптичної густини проводять тричі з вийманням кювети завдовжки 1 см при температурі (20±1) °С за однакових умов з мінімальним інтервалом у часі. Розрахунок концентрації C x стрептоциду розчинного у випробуваному зразку здійснюють за формулою: A  Cst  b  100 , де CX  i A st   A i - оптична густина розчину випробуваного зразку; A st - оптична густина розчину робочого стандартного зразку; Cst - концентрація розчину робочого стандартного зразку, (г/мл); b - розведення, мл;  - аліквота, мл. До переваг заявленого способу можна віднести мінімальний діагностичний об'єм лікарської форми для аналізу, простота, зручність та швидкість 58814 4 виконання, малостадійність процесу пробопідготовки, малий набір реактивів. У відповідності до вимог ДФУ було проведено вивчення метрологічних характеристик заявленого способу: діапазон застосування, специфічність, лінійність, прецизійність, правильність і відтворюваність згідно зі стандартизованою процедурою валідації методик кількісного визначення екстемпоральних лікарських засобів [3]. Статистичну оцінку одержаних результатів проводили за схемою наведеною в ДФУ [5]. У заявленому способі наведений приклад для концентрацій розчину стрептоциду розчинного аптечного виготовлення 0,8 %, 1 % та 2 %. Згідно вмісту стрептоциду розчинного у лікарській формі та враховуючи вимоги АНД до допусків вмісту для 0,8 % розчину - ±7 %; для 1 % розчину - ±6 % та для 2 % розчину - ±5 % [6] був обраний діапазон застосування заявленого способу від 80 до 120 %. Використовуючи рівномірний розкид концентрації від номінальної на всьому діапазоні застосування методики 80 %, 90 %, 100 %, 110 %, 120 % були приготовані модельні розчини та здійснено на основі кожного по три паралельних розведення. Корисна модель ілюструється прикладами. Приклад 1. Приготували розчини випробуваного зразку та робочого стандартного зразку у розведенні 8-10-4 г/мл за наведеним вище способом. Кількісне визначення стрептоциду розчинного у 0,8 %, 1% та 2 % розчині випробуваного зразку та розчині робочого стандартного зразку проводили шляхом вимірювання оптичної густини за довжини хвилі 253 нм тричі з вийманням кювети завдовжки 1 см при температурі (20±1) °С за однакових умов з мінімальним інтервалом у часі. Паралельно визначали оптичну густину розчину робочого стандартного зразку A st . Розрахунок значень концентрацій C x стрептоциду розчинного здійснювали за формулою: C0,8%  X Ai  Cst  b  100 0,531 0,0008  100  100   0,8 A st   0,5316  5  2 C1%  X Ai  Cst  b  100 0,533  0,0008  50  100  1 A st   0,5316  5  2 C2%  X Ai  Cst  b  100 0,532  0,0008  100  100  2 A st   0,5316  5  2 A i - оптична густина розчину випробуваного зразку; A st - оптична густина розчину робочого стандартного зразку; Cst - концентрація розчину робочого стандартного зразку, (г/мл); b - розведення, мл;  - аліквота, мл. Концентрація стрептоциду розчинного у випробуваних зразках аптечного виготовлення, що визначена за заявленим способом, відповідає нормі. Приклад 2. Важливе значення для випробовування заявленого способу має вивчення параметру робасності, що характеризує стійкість розчинів стрептоциду розчинного до змін зовнішніх факто 5 58814 рів. З цією метою було досліджено стабільність розчиніiв стрептоциду розчинного у часі шляхом вимірювання оптичної густини кожні 15 хвилин протягом години, а також вплив на pH середовище 6 шляхом попередньої дії розчинів 0,01 М натрію гідроксиду та 0,01 М хлористоводневої кислоти. Статистичні величини отриманих результатів наведені у табл. 1 та табл. 2. Таблиця 1 Результати визначення стабільності у часі розчинів випробуваного зразку та робочого стандартного зразку Розчини Термін nt ,, хв. ( Ai* ) 0 15 30 45 60 Середнє 3-х вимірів розчинів 0,5315 0,5310 0,5309 0,5320 Розчин 0,8 % 0,5319 Розчин 1 % 0,5440 0,5440 0,5420 0,5450 0,5430 Розчин 2 % 0,5430 0,5440 0,5420 0,5410 0,5320 0,5319 0,5310 0,5319 0,5320 0,5314 Розчин РСЗ * Значення оптичної густини є середнім 3-х вимірів розчину Виходячи з отриманих результатів маємо можливість стверджувати про незначні зміни оптичної густини розчинів стрептоциду розчинного, а середнє RSD t ,%  t ,% Max δ,% 0,5313 0,5432 0,5402 0,5316 0,0862 0,2255 0,8945 0,0805 0,18 0,48 1,91 0,17 0,72 0,61 0,51 також розчину робочого стандартного зразку та про їх стабільність протягом години. Таблиця 2 Результати визначення впливу коливання pH на поглинання оптичної густини Оптичні густини A i* № роз- Випробування Випробування Випробування середнє чину 1: + 1 крп. 2: без дода3: + 1 крп. 0,01М НС1 вання 0,01 К NaOH Розчин 0,8 % 1 0,4280 0,4827 0,4817 0,4821 2 0,5320 0,5310 0,5307 0,5312 3 0,5877 0,5877 0,5860 0,5871 Розчин 1% 1 0,4783 0,4787 0,4777 0,4782 2 0,5340 0,5347 0,5340 0,5342 3 0,5860 0,5867 0,5863 0,5863 Розчин 2 % 1 0,4747 0,4743 0,4773 0,4754 2 0,5307 0,5310 0,5323 0,5313 3 0,5917 0,5907 0,5900 0,5908 * Значення оптичної густини є середнім 3-х вимірів розчину Статистичні результати впливу коливань pH на результати аналізу свідчать, що величини  pH ,% не перевищують критичні значення max  ,% та заявлений спосіб є надійним при його виконанні за умов незначних змін в його проведенні. Приклад 3. Для оцінки метрологічних характеристик заявленого способу було вивчено лінійність, що поєднує у собі визначення критерію за  pH , % max  ,% SrpH RSDpH ,% 0,0005 0,0007 0,0010 0,0509 0,0694 0,0962 0,15 0,20 0,28 0,72 0,0005 0,0004 0,0003 0,05 0,04 0,03 0,15 0,11 0,10 0,61 0,0016 0,0009 0,0007 0,16 0,09 0,08 0,48 0,26 0,24 0,51 лишкового стандартного відхилення RSD0,%, критерію лінійного коефіцієнту кореляції R c , значення практичної невизначеності вільного члену лінійної залежності а,%. Результати вивчення статистичних показників метрологічних характеристик лінійності для випробуваних розчинів 0,8; 1,0 та 2,0 % наведені у табл. 3. 7 58814 8 Таблиця 3 Результати вивчення лінійності Метрологічні характеристики кутовий коефіцієнт лінійної залежності b Sb вільний член лінійної залежності а Sa критичне значення практичної невизначеності вільного члена лінійної залежності а залишкове стандартне відхилення Srest критичне значення для остаточного стандартного відхилення RSD0 коефіцієнт кореляції методики г критерій лінійного коефіцієнту кореляції Rс Отримані дані дослідження були оцінені відповідно до [3] та є підтвердженням виконання вимог до параметрів лінійної залежності, що виконуються на всьому діапазоні застосування методики від 80 до 120%. Приклад 4. Відтворюваність заявленого способу вказує на придатність методики давати ті ж самі результати в умовах іншої аптеки або лабораторії з аналізу якості лікарських засобів. Для цього були вивчені параметри прецизійність, що Розчини стрептоциду розчинного 0,8 % 1% 2% Отриманні величини, % 1,004 0,9954 1,0190 0,0062 0,0059 0,0177 0,1367 0,8326 -2,3649 0,6251 0,5969 1,7926 3,58 1,08 2,56 0,3390 1,26 0,9998 0,9963 0,3236 1,08 0,9998 0,9973 0,9720 0,90 0,9980 0,9981 відповідає значенням відносного довірчого інтервалу  as ,% та правильність, що характеризується величиною систематичної похибки аналізу  ,%. Експериментальні дані щодо оцінки відтворюваності заявленого способу досліджували в умовах двох різних лабораторій для розчинів однієї аналітичної серії на різному обладнанні, у різні дні, різними аналітиками. Результати дослідження наведені у табл. 4. Таблиця 4 Результати дослідження відтворюваності Розчини стрептоциду розчинного 0,8% і 1% 2% Отриманні величини при визначенні, % 100,54 100,11 100,39 100,06 99,49 99,44 100,32 100,23 99,46 Метрологічні характеристики середнє значення лабораторій № 1 та № 2 об'єднане середнє Zint ra відносне стандартне відхилення Sint ra 0,40 0,45 0,40 0,33 1,00 0,37 об'єднане відносне стандартне відхилення RSDint ra 0,43 0,36 0,75 критичне значення для збіжності результатів  as % 2,24 % 1,92 % 1,60 % міжлабораторна систематична погрішність  ,% критерій невизначеності систематичної погрішності  , % 0,32 0,72 0,23 0,61 0,54 0,51 відносний довірчий інтервал окремого результату int ra 0,26 0,23 0,47 Статистично оброблені результати експерименту свідчать, що заявлений спосіб характеризується відтворюваністю, може давати коректні результати при подальшому використанні за умов дотримання вимог до критеріїв прийнятності, що охарактеризовані у табл. 4. Таким чином, авторами визначено достовірність заявленого способу спектрофотометричного визначення стрептоциду розчинного у водних розчинах аптечного виготовлення для контролю їх якості в умовах аптек та лабораторії з аналізу якості лікарських засобів. Джерела інформації: 1. Аналитическая химия. Химические методы анализа /Под ред. О.М. Петрухина. М: Химия, 1992, 400с. 2. Державна Фармакопея України / Державне підприємство «Науково-експертний фармакопейний центр». - 1-е вид. - Харків: РІРЕГ, 2001. -556 с. 3. Стандартизованная процедура валидации методик количественного определения эктемпоральных лекарственных средств в условиях аптек и лабораторий по контролю качества / Евтифеева О.А., Георгиянц В.А. // Фармаком. - 2007. - № 1. С.69-81. 9 58814 4. Наказ МОЗ України „Про затвердження Правил виробництва (виготовлення) лікарських засобів в умовах аптеки" від 15.12.2004 р. №626. Комп’ютерна верстка Г. Паяльніков 10 5. Державна Фармакопея України / Державне підприємство «Науково-експертний фармакопейний центр». Доповнення 1. - Харків: РІРЕГ. -2004. – 520 с. Підписне Тираж 23 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601