Застосування інгібітора рецептора прогестерону для лікування стероїдрезистентного раку молочної залози

1. Застосування сполуки загальної формули І 3 R1 R 2 3 76128 4 для приготування лікарського засобу для лікуван3. Застосування за п. 1 або 2, де пригнічується ня стероїдрезистентного раку молочної залози. зв„язування фактора росту EGF з раковими кліти2. Застосування за п. 1, де сполука являє собою нами молочної залози. 11 -(4-ацетилфеніл)-17 -гідрокси-17 -(1,1,2,2,2пентафторетил)естра-4,9-дієн-3-он. Винахід стосується застосування інгібіторів рецептора прогестерону для пригнічення залежності пухлинних клітин від фактора росту. Естрадіол і прогестерон беруть участь в розвиток раку грудної залози. Однак при діагностиці приблизно лише в 1/3 пухлин виявляється залежність від стероїдних гормонів. Передбачається, що в більшості пухлин, резистентних до стероїдних гормонів, проліферативний контроль місцеводіючих аутокринних і паракринних пептидних факторів росту послаблюється. У цьому випадку виникають інвазивні пухлини з надзвичайно поганим прогнозом, які є позитивними за рецепторами фактора росту і резистентними до стероїдних гормонів [Elledge і ін., Semin. Oncol. 19 (1992) 244-253]. Фактори росту регулюють клітинний ріст шляхом активації внутрішньоклітинних шляхів передачі сигналу після зв'язування на клітинній поверхні з високо афінними рецепторами тирозинкінази. Більш пізні дані дозволяють припустити, що клітини карциноми грудної залози можуть бути сенсибілізовані прогестинами до мітогенної дії EGF (епідермального фактора росту) [Groshong і ін., Моl. Endocrinol. 11 (1997) 1593-1607]. Так, наприклад, прогестерон може індукувати входження клітин лінії T47D людської карциноми грудної залози в Sфазу, що супроводжується тимчасовим підвищенням активності цикліну ID і циклїн-залежної кінази 4. Однак стимуляція росту обмежена одним циклом і супроводжується зупинкою росту при переході G1/S другого циклу [Groshong і ін., див. вище; Musgrove і ін., Моl. Cell. Biol. 13 (1993) 3577-3587]. В умовах зупинки циклу прогестероном клітини є чутливими до проліферативної дії EGF. Крім того, показано, що прогестерон підсилює дію EGF на клітини T47D шляхом збудження EGFR, Еrb2 і Еrb3 і підсилює фосфорилювання сигнальних молекул по тирозину. [Lange і ін., J. Biol. Chem. 273 (1998), 31308-31316; Richer і ін., J. Biol. Chem. 273 91998), 31317-31326]. На відміну від цього, поки не вдалося показати інгібуючої дії EGF на пухлинні клітини шляхом впливу на рецептор прогестерону. У рамках експериментів, що приводять до даного винаходу, у даний час достатньо несподівано було виявлено, що інгібітори прогестеронового рецептора, наприклад, 17 -фторалкілстероїди, можуть, принаймні, частково інгібувати зв'язування факторів росту, таких, як EGF, з пухлинними клітинами, особливо з пухлинними клітинами, які мають високу і/або істотну експресію рецептора прогестерону. Таким чином, об'єктом даного винаходу є застосування інгібітора рецептора прогестерону для одержання агента, який пригнічує зв'язування факторів росту з пухлинними клітинами й особливо агента, який пригнічує проліферацію пухлинних клітин або пухлин, які утворюються за допомогою факторів росту. Інгібітор рецептора прогестерону в термінах даного винаходу переважно означає речовину, яка конкурентно інгібує зв'язування прогестерону з його рецептором. У даному випадку інгібітор рецептора прогестерону переважно вибирають з 17 -фторалкілстероїдів, як вони розкриті, наприклад, у WO98/34947. Ці 17 фторалкілстероїди мають загальну формулу І: де R1 означає метальну або етильну групу, R2 означає радикал формули CnFmH0, де n=2, 3, 4, 5 або 6, m>1 і m+o=2n+1, R3 означає вільну або етерифіковану у вигляді простого або складного ефіру гідроксильну групу, R4 і R5 означають кожен атом водню, разом додатковий зв'язок або метиленову групу, St означає стероїдну кільцеву систему ABC або окрему формулу А, В або С де R6 означає атом водню, лінійну (С1-С4)алкільну групу або розгалужену (С3-С4)алкільну групу, або атом галоїду, R7 означає атом водню, лінійну (С1-С4)алкільну групу або розгалужену (С3-С4)алкільну групу, або, якщо St означає стероїдну ABC-кільцеву систему А або В, на додаток до цьому R6 і R7 означають разом додатковий зв'язок, X означає атом кисню, гідроксііміногрупу =NOH або два атоми водню, R8 означає радикал Υ або арильний радикал, який необов'язково заміщений групою Υ у декількох положеннях, при цьому Υ означає атом водню, атом галоїду, -ОН, -NO2, -N3, -CN, -NR9aR9b, NHSO2R9, -CO2R9, (С1-С10)алкокси, (С1С10)алканоїлокси, бензоїлокси(С1-С10)алканоїл, (С1-С10)гідроксіалкіл або бензоїльну групу, і R9a і 5 76128 6 R9b однакові або різні і, подібно до R9, означають триєн-3,17р-діол або їх фармацевтично сумісні атом водню або (С1-С10)алкільну групу і похідні або аналоги. Подібним способом як антиеу випадку радикалів -NR9aR9b також їх фізіолострогени можуть бути використані інгібітори арогічно сумісні солі з кислотами, а у випадку радикаматази з антиестрогенною дією, такі, як, наприлів -CO2R9, з R9 у значенні водню, також їх фізіолоклад, ті, які наведені в ЕР 0495825 В1 на стор.7-8. гічно сумісні солі з основами. Введення інгібіторів рецептора прогестерону Особливо кращим прикладом таких інгібіторів може бути здійснене відповідно до загальноприйнятих способів, наприклад, локально, місцево, рецептора прогестерону є сполука 11 -(4підшкірно, ентерально або парентерально. Для ацетилфеніл)-17 -гідрокси-17 -(1,1,2,2,2ентерального введення особливо підходять табпентафторетил)естра-4,9-дієн-3-он (сполука А летки, таблетки з нанесеним покриттям, капсули, нижче). Крім того, і інші антипрогестини, наприпігулки, суспензії або розчини, які можуть бути клад, онапристон (11 -[n-(диметиламіно)феніл]приготовлені звичайним способом з додаванням 17 -гідрокси-17-(3-гідроксипропіл)-13 -естра-4,9додаткових речовин і наповнювачів, відомих в гадієн-3-он) є проте також придатними. лузі галенових препаратів. Для локального або Дія інгібіторів рецептора прогестерону виявмісцевого застосування придатні, наприклад, вагілено, головним чином, у випадку пухлинних клітин нальні супозиторії або трансдермальні системи, з високою і/або істотною експресією прогестеротакі, як шкірні пластирі. Підшкірне введення може нового рецептора, наприклад, у позитивній за рездійснюватися шляхом ін'єкції масляного розчину. цептором прогестерону лінії клітин T47D карциноСтандартна доза може містити, наприклад, ми грудної залози [Sartorius і ін., Cancer Res. 54 0,1-100мг активної сполуки або активних сполук (1994), 3668-3877]. (інгібітора або інгібіторів рецептора прогестерону). Інгібітори прогестеронового рецептора пригніПри введенні людині добова доза активної сполучують індуковане прогестероном посилення екски або активних сполук становить приблизно 0,1пресії факторів росту, особливо тих факторів, які 400мг, переважно приблизно 10-100мг і, зокрема, зв'язуються з факторами росту сімейства рецепприблизно 50мг. торів EGF, таких, як, наприклад, рецептор EGF. Крім того, винахід повинен бути пояснений за Інгібітори особливо переважно пригнічують зв'язудопомогою наступних прикладів і фігур. вання EGF із клітинами людської карциноми грудФіг.1 представляє антипроліферативну дію ної залози. досліджуваних речовин на клітини лінії T47D карОтже, відповідно до даного винаходу інгібітори циноми грудної залози. рецептора прогестерону можуть застосовуватися Фіг.2 представляє кількості білка рецептора в терапії пухлин у ссавців і переважно в людини, прогестерону (PR) і рецептора естрогену (ER) у щоб особливо специфічно блокувати прогресію клітинах лінії T47D карциноми грудної залози. пухлини, особливо карциному грудної залози на Фіг.3 представляє транскрипційну активність стадії стероїд-залежного росту до стадії залежного рецептора прогестерону в клітинах T47D. від фактора росту розвитку. При цьому може відФіг.4 представляє аналіз за Скетчардом зв'ябуватися ефективна обробка пухлини на стадії зування EGF із клітинами T47D як функції від пристероїд-залежного росту, наприклад, антиестрогесутності досліджуваних речовин. нами, що позбавляє пухлину здатності прогресуФіг.5 представляє залежність зв'язування EGF вати на стадії залежного від фактора росту розвиіз клітинами T47D від присутності досліджуваних тку, пов'язаного зі значним погіршенням прогнозу речовин. для пацієнта. Введення інгібіторів рецептора проПриклад гестерону може також забезпечити уповільнення Матеріали і способи. пухлинного росту на стадії залежного від фактора Матеріали: росту розвитку. 125 I-EGF (100мКі/ммоль) одержували від фірми Для мети за даним винаходом можуть бути Amersham Buchler. Сполука А, гідротамоксифен (4використані нестероїдні антиестрогени, такі, як, OH-Tam), ZM182780 і естрадіол були синтезовані наприклад, тамоксифен, нафоксидин, ралоксифен (в Інституті хімії фармацевтичних агентів) Schering і ЕМ800. Два останні згадані антиестрогени є AG відповідно до відомих способів. представниками, так званих, SERMs (селективниЛінії клітин ми модуляторами рецептора естрогену); відповідВикористовували клітини лінії T47D карциноми но до винаходу можуть бути використані також і грудної залози людини, позитивні за рецепторами інші сполуки з типом дії SERMs, наприклад, сполуестрогену (ER) і прогестерону (PR) [Freake і ін., ки, які згадуються в РСТ/ЕР99/05093, і з останніх, у BBRC, 101(1981), 1131-1138]. свою чергу, сполука 5-(4-{5-[(RS)-4,4,5,5,5Дослідження росту пентафторпентил)сульфініл]пентилокси}феніл)-6Пухлинні клітини культивували при щільності феніл-8,9-дигідро-7H-бензоциклогептен-2-ол. 5000 клітин/лунку в 96-лункових планшетах протяПриклади стероїдних антиестрогенів включагом 6 днів у середовищі RPMI з додаванням 10% ють ті сполуки, які розкриті в ЕР 0348341А, особбичачої сироватки, 200нМ інсуліну і 0,1нМ естраділиво фаслодекс, і ті, які розкриті в WO98/07740, олу в присутності сполук, вказаних у кожному виособливо 11 -фтор-7 -{5-[Ν-метил-Ν-3-(4,4,5,5,5падку, і оцінювали ріст клітин шляхом фарбування пентафторпентилтіопропіламіно]пентил}естракристалічним фіолетовим. 1,3,5(10)-триєн-3,17 -діол, або ті, які описані у Кількість білка PR і ER WO99/33855, особливо 17 -фтор-7 -{5-[метилКількості PR і ER у клітинних лізатах визнача(7,7,8,8,9,9,10,10,10ли з використанням аналізів зв'язування стероїду з нонафтордецил)аміно]пентил}естра-1,3,5(10) 7 76128 8 радіоактивно міченим прогестероном або естрадіінкубації протягом 2год при 4°С. Вставки показуолом відповідно до способів, описаних [Fuhrmann і ють кількість зв'язаних лігандів відносно логарифін. (Contraception, 54 (1996), 243-251)]. ма концентрації вільного ліганду. Очевидно, що Зв'язування 125I-EGF з пухлинними клітинами можна було блокувати посилення зв'язування Клітини T47D, попередньо оброблені R5020, EGF, яке викликається R5020 (середня фігура), 125 інкубували протягом 2год з I-EGF при 4°С. Невідносно контролю (верхня фігура) при додаванні специфічне зв'язування становило у всіх випадках сполуки А (нижня фігура). менше 10% загального зв'язування. На Фіг.5 показане зв'язування 125I-EGF з інтакТрансактиваційний аналіз тними клітинами T47D. З цією метою клітини обКлітини T47D короткочасно трансфіксували з робляли протягом 48год 2 або 20нМ R5020 і споMTV-LUC [Cato і ін., ЕМВО J., 9:2237-40] і культилукою А або онапристоном або однією сполукою вували за відсутності або за присутності 1нМ А. Тут також можна бачити, що сполука А блокує R5020. У досліді з опосередкованим PR антагонізпосилення зв'язування EGF із клітинами T47D, яке мом короткочасно трансфіксовані клітини T47D викликається R5020. Подібний, хоча і значно обробляли R5020 і, крім того, збільшуваними конбільш слабкий ефект, виявлений також і у випадку центраціями сполуки А або RU486. Через 24год онапристону. проводили тест із люциферазою. Обговорення 2. Результати Наведені вище результати показують, ріст кліФіг.1 демонструє антипроліферативну дію різтин T47D, який стимулюється естрадіолом, при них досліджуваних речовин. Клітини T47D культиінтенсивному й істотному контакті з PR був ефеквували за присутності (верхня поперечно заштритивно блокований сполукою А. хована смуга) або за відсутності (нижня поперечно За допомогою трансактиваційних аналізів мозаштрихована смуга) 0,1нМ Е2 і збільшуваних конжна показати, що PR у клітинах T47D виявляв трацентрацій сполуки А (▲), онапристону ( ), нскрипційну активність і міг бути блокований споZK191703 (●) або 4-ОН-Тат (♦). У випадку клітин лукою 1. T47D сполука А виявляє виражену антипроліфеСтимуляція клітин T47D з R5020 приводила до ративну дію в надзвичайно малих концентраціях. 2-3-кратного посилення експресії рецептора EGF, Фіг.2 демонструє кількості білка PR і ER у кліяка блокувалася сполукою А. У той же самий час, тинах T47D. зв'язування EGF із клітинами збільшувалося в 2-3 Фіг.3 демонструє транскрипційну активність рази і цьому можна було запобігти сполукою А і PR у клітинах T47D, на основі чого дані клітини менш ефективно онапристоном. Підвищене зв'ябули короткочасно трансфіксовані з MTV-LUC і зування EGF із клітинами, обробленими R5020, культивовані (а) за відсутності (Co) або за присутмогло бути викликане посиленою експресією реності 1нМ R5020. У тесті на опосередкований PR цептора EGF або підвищеним утворенням гетероантагонізм короткочасно трансфіксовані клітини димеру між рецептором EGF і еrbВ2. T47D обробляли 0,1нм R5020 і сполукою А або Дані результати свідчать про взаємодію між RU468 у збільшуваних концентраціях (б). сигнальними системами PR і фактора росту в кліНа Фіг.4 представлений аналіз за Скетчардом тинах людської карциноми грудної залози. Шляхом зв'язування 125I-EGF із клітинами T47D. Клітини застосування антипрогестинів прогресія пухлинних культивували протягом 48год у присутності 20нМ клітин від стадії залежного від стероїдів росту приR5020 з 20нМ сполуки А або без неї і потім промигнічується або запобігається до стадії залежного вали. Після цього визначали зв'язування EGF у від фактора росту розвитку. діапазоні концентрацій 0,25-150нг/мл EGF шляхом 9 Комп‟ютерна верстка О. Гапоненко 76128 Підписне 10 Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601