Спосіб прогнозування ризику розвитку атопічного дерматиту у новонароджених дітей з обтяженою за атопією спадковістю

Реферат: UA 97697 U UA 97697 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель, що заявляється, належить до медицини, зокрема до педіатрії, і призначена для прогнозування ризику розвитку атопічного дерматиту протягом першого року життя у новонароджених дітей з обтяженою за атопією спадковістю шляхом комплексного визначення генетичних, імунних та анамнестичних показників. Актуальності набирає питання захворюваності на алергію в дитячому віці. Згідно зі статистикою World Allergy Organization сенсибілізація до одного або кількох широко поширених алергенів зустрічається у 40-50 % випадків дітей шкільного віку, але не всі діти мають клінічні прояви алергії. Відмічається тенденція до полівалентності та поліорганності AЗ. Найбільш поширеними в дитячій популяції є такі прояви алергії як атопічний дерматит, кропив'янка, алергічний риніт та бронхіальна астма [1, 2]. Збільшення захворюваності на алергічну патологію у всьому світі пов'язують із зростанням антигенного навантаження на людину в результаті погіршенням екологічної ситуації, якості харчування, щоденним контактом з косметикою та засобами побутової хімії, а також з генетичними мутаціями, які можна розглядати як наслідок вищезазначених причин [3]. При потраплянні в організм антигенів (алергенів), його гомеостаз підтримує складна багаторівнева система детоксикації ксенобіотиків. Існує генетичний поліморфізм популяції людей щодо їх реакції на дію екологічних факторів довкілля та генетичного контролю біотрансформації в організмі хімічних сполук. Саме генетично запрограмована система біотрансформації, деградації та виведення ксенобіотиків робить унікальним кожного індивідуума щодо його адаптаційних властивостей, тобто стійкості або чутливості до дії пошкоджуючих факторів зовнішнього середовища. Процес детоксикації являє собою комплексну взаємодію різних ферментів з екзогенними речовинами, в тому числі з токсичними сполуками і включає три послідовні фази. Група генів, що кодує синтез ферментів детоксикації другої фази представлена суперсім'єю глутатіон-S-трансферази (GST). Гени GST каталізують взаємодію глутамата з електрофільними атомами N, C, S, О і відповідають за коньюгацію сульфгідрильної групи з молекулою ксенобіотиків. Глутатіон - опосередкована детоксикація має ключове значення в забезпеченні резистентності клітин до перикисного окислення ліпідів, вільних радикалів, алкілуванню протеїнів та в попередженні порушення структури ДНК. [4]. Іншим важливим патогенетичним механізмом розвитку атопічного дерматиту імунологічні зміни у дітей з алергічною патологією - вроджена, генетично детермінована гіперпродукція імуноглобулінів класу IgE внаслідок підвищення активності Т-хелперів 2 типу [5]. Відомий спосіб діагностики атопічного дерматиту через визначення рівня загального IgE в пуповинній крові шляхом імуноферментного аналізу. Даний спосіб забезпечує раннє прогнозування атопії, але не знайшов широкого застосування та не визначає генетично запрограмованої активності ферментних систем детоксикації ксенобіотиків, що могло б збільшити прогностичну цінність імунологічного показника [6]. Найбільш близьким до способу, що заявляється, є спосіб, який встановлює генетичну детермінованість атопічного дерматиту шляхом дослідження алельного поліморфізму генів цитокінів TNFA, IL4, IL5 і HLA-DRB1, -DQA1, -DQB1 при різних варіантах клінічного перебігу атопічного дерматиту. В основу цього способу поставлено задачу оцінити інформативність комплексного виявлення алелей генів цитокінів IL4, IL5, TNFA і HLA-комплексу для прогнозу розвитку різних варіантів перебігу атопічного дерматиту. Спосіб ґрунтується на генотипуванні алельних варіантів генів методом рестриктного аналізу продуктів ампліфікації (ПДРФ-аналіз) і методом алель-специфічної ампліфікації зі сиквенс-специфічними праймерами (PCR-mSSP), та асоційованості цих варіантів для прогнозування варіанту перебігу атопічного дерматиту на ранніх етапах виникнення захворювання [7]. Однак даний спосіб потребує широкомасштабних генетичних досліджень у пацієнтів, які вже хворіють на атопічний дерматит, що зменшує його профілактичне значення у дітей. Задача, яку вирішує корисна модель, що заявляється, полягає в виборі ефективного способу донозологічного прогнозування розвитку атопічного дерматиту на першому році життя у дітей з обтяженою атопією спадковістю. Технічний результат, який досягається при вирішенні задачі, полягає в оптимізації прогнозування і підвищенні ефективності лікування атопічного дерматиту навіть у складних випадках. Поставлена задача досягається тим, що у відомому способі, який передбачає визначення різних варіантів алельного поліморфізму генів групи глутатіон-S-трансферази: GSTM1 та GSTP1 та рівня загального IgE в пуповинній крові, згідно з корисною моделлю, одночасно визначають генетичні та імунологічні показники і при наявності делеційного поліморфізму в гомозиготному стані гена GSTM1 та поліморфізму A313G-AG для гена GSTP1 і рівня загального 1 UA 97697 U 5 10 15 IgE  29 МО/мл прогнозують ризик розвитку атопічного дерматиту у новонароджених дітей з обтяженою атопією спадковістю. Дослідження алельного поліморфізму генів GSTM1 та GSTP1 проводилось у крові, шляхом венопункції пупочної вени (після перетинання пупочного канатика) у новонароджених. Визначення алельного поліморфізму гена GSTM1 проведено із використанням мультиплексної полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) в автоматичному режимі у термоциклерах GeneAmp 2400, GeneAmp 2700 (Applied Biosystems) з послідовностями праймерів (Arand M. et al., 1996) синтезованих фірмою "Синтол" (Росія). Режим реакції ампліфікації складався з 35 циклів: денатурація - 94 °C (1 хвилина), віджим праймерів - 65 °C (1 хвилина), елонгація 72 °C (1 хвилина). Ампліфіковані фрагменти розподіляли із використанням горизонтального електрофорезу в 1,5 % агарозному гелі із забарвленням бромистим етидієм. Візуалізували отримані амплікони за допомогою трансілюмінатору ("Біоком", Росія) з подальшим архівуванням за допомогою відеосистеми "Vitran" (Росія). Якість виділення ДНК і умови постановки мультиплексної ПЛР контролювали ампліфікацією фрагменту гена альбуміну з молекулярною вагою 350 п.н. Для визначення рівня загального IgE в сироватці крові використовували твердофазний метод імуноферментного аналізу, заснований на принципі "сендвіча". Аналіз факторів ризику розвитку та перебігу атопічного дерматиту проводили з визначенням відношення шансів (OR) з оцінкою статистичної значимості показників 20 Таблиця Аналіз впливу поліморфізму генів групи глутатіон-S-трансферази (GSTM1, GSTP1), підвищеного рівня IgE та атопічної спадковості на ризик розвитку атопічного дерматиту протягом першого року життя. Анамнестичний фактор Делеційний поліморфізм GSTM1 Поліморфізм A313G-AG GSTP1 Рівень IgE  29 МО/мл при народженні Атопічна спадковість Узагальнена оцінка (OR) Відношення шансів (OR) 6,25 22,08 16,00 9,33 8,58 2 25 30 35 40 45 95 % довірчий інтервал (СІ) 1,14 34,29 1,20 405,72 2,72 94,08 1,06 81,92 3,75 19,60 Оцінка гетерогенності: І =0,0 %, р = 0,702. Статистична значимість узагальненої оцінки ризику (відношення шансів): OR=8,58; z=5,1 р = 0,005. Графічні результати представлені на Фіг. 1. Вплив поліморфізму генів групи глутатін-Sтрансферази (GSTM1, GSTP1), підвищеного рівня IgE та атопічної спадковості на ризик розвитку атопічного дерматиту протягом першого року життя. Отримані результати свідчать про підвищений ризик розвитку атопічного дерматиту на першому році життя при виявленні у них поліморфних варіантів генів GSTM1 тa GSTP1, підвищеного рівня IgE в пуповинній крові та обтяженої за атопією спадковості. Так вірогідність розвитку атопічного дерматиту на першому році життя у 6,25 (95 % СІ = 1,14-34,29) р < 0,05 підвищується при наявності делеційного поліморфізму в гомозиготному стані для гена GSTM1 і в 22,08 (95 % СІ = 1,20-405,72) разу при виявленні поліморфізму A313G-AG GSTP1. Підвищення рівня загального IgE в пуповинній крові у новонародженого  29 МО/мл в 16,00 (95 % СІ = 2,7294,08) раз збільшує ризик розвитку у нього АД протягом першого року життя, а наявність атопічного дерматиту або БА у матері або (і) батька збільшує ризик розвитку АД в 9,33 (95 % СІ = 1,06-81,92) разу у дитини. Оцінка гетерогенності: не виявлено статистично значимої різниці по переважанню впливу 2 окремих факторів в досліджуваній моделі, коефіцієнт гетерогенності І =0,0 %, р = 0,702. За узагальненою оцінкою наявність вказаних факторів ризику в середньому підвищує вірогідність розвитку атопічного дерматиту на першому році життя в 8,58 разу, р = 0,0001. На базі кафедри педіатрії № 1 Національного медичного університету імені О.О. Богомольця за запропонованим способом було обстежено 48 новонароджених дітей, які народились в пологовому будинку № 2 міста Києва; 26 новонароджених мали обтяжену за атопією спадковість і 22 дитини без такої. Протягом першого року життя на атопічний дерматит захворіло 9 дітей, взятих на обстеження в ранньому неонатальному періоді. З 9 дітей з атопічним дерматитом лише одна дитина не мала обтяженої атопією спадковості. Джерела інформації: 2 UA 97697 U 5 10 15 20 1. Ruby Pawankar, Giorgio Canonica, Stephen Т. Holgate, Richard F. Lockey. On behalf of the World Allergy Organization (WAO), the WAO White Book on Allergy 2011-2012: Executive Summary express their gratitude to the charity, Asthma, Allergy and Inflamation Research (AAIR) for support in the production of this publication. USA.-2012.-220 pages. 2. Сепиашвили Р.И. Славянской. Т.А. Белая книга WAO по аллергии 2011-2012: резюме на русском языке // Copyright 2011 World Allergy Organization-M: Медицина - Здоровье, - 2011. 12 с. 3. Романюк Л.И. Свободно дышать, чтобы жить: современные методы борьбы с бытовыми аллергенами / Л.И. Романюк // Здоров'я України. - 2010. - № 6 (235). - С. 45. 4. Литвинець Л.Я., Синоверська О.Б., Гнатейко О.З., Виштак Н.В. Поліморфізм генів детоксикації ксенобіотиків та їх зв'язок із розвитком і перебігом бронхіальної астми у дітей Прикарпаття / Л.Я. Литвинець, О.Б. Синоверська, О.З. Гнатейко, Н.В. Віштак // Перинатологія і педіатрія - 2012. - № 1 (49). - С. 96-99. 5. Клиническая иммунология и аллергология: пособие для студ., врачей-интернов, иммунологов, аллергологов, врачей лечебного профиля всех специальностей. 4-е изд., доп. / Г.Н. Дранник. - Киев, 2010. - 552 с: ил. 6. Углева Т.Н., Балашова Т.Ф. Способ прогнозирования развития атопического аллергического заболевания у новорожденного. RU 2108749 С1, дата публ. 20.04.1998. 7. Карпова А.В. Сочетанный анализ аллельного полиморфизма генов цитокинов TNFA, IL4, IL5 и HLA-DRB1, -DQA1, -DQB1 при различных вариантах клинического течения атопического дерматита.: автореф. на соискание уч. степени канд. мед. наук: спец. 14.00.36 "Аллергология и иммунология", 14.00.11 "Кожные и венерические болезни" / А.В. Карпова. - Новосибирск., 2009. - 22 с. 25 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 30 Спосіб прогнозування ризику розвитку атопічного дерматиту у новонароджених дітей з обтяженою за атопією спадковістю, що передбачає визначення різних варіантів алельного поліморфізму генів групи глутатіон-S-трансферази: GSTM1 та GSTP1 та рівня загального IgE в пуповинній крові, який відрізняється тим, що одночасно визначають генетичні та імунологічні показники і при наявності делеційного поліморфізму в гомозиготному стані гена GSTM1 та поліморфізму A313G - AG для гена GSTP1 і рівня загального IgE  29 МО/мл прогнозують ризик розвитку атопічного дерматиту у новонароджених дітей. Комп’ютерна верстка Л. Ціхановська Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3