Спосіб якісного визначення вітаміну а

союз совет сних СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕСПУБЛИК ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ ПРИ ГКНТ СССР (21) (22) Ы 15.Ю.Э1. Ьюл. № 35 (71) Украинский научно-исследовательский институт птицеводства (72) П.!i. Витамины А, С, Д, В,, З г и РР {отбор проб, методы определения витаминов и испытания качества витаминных препаратов), м . , (!>7) Изобретение относится к пищевой, фармацевтической, химической и с е л ь скохозяйственной промышленности и может боїть использовано для определенен витамина А ь различных пицевых продуктах, биологическом материале, в масляных концентратах, витаминных премиксах и т.д. Цель - повышение точности определения. Из отобранной пробы анализируемого материала извлекают витамин А экстракцией органическим растворителем, осуществляют взаимодействие витамина с кочплексообразователем, в качестве которого используют эфират трифторида бора, с конечной концентрацией і6~20%. Количество витамина А определяют по изменению интенсивности окраски при 61Q нм образующегося цветного комплекса. 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 3 табл. Изобретение относится.к, лицевой, фармацевтической, химической и сельскохозяйственной промышленности и может быть использовано для определения витамина А в различных пищевых продуктах, биологическом материале, в масляных концентратах, витаминных премиксах и т.д., а также при контроле производства витамина А, Целью изобретения является повышение точности * определения. Для осуцествления данного способа из отобранной пробы анализируемого материала извлекают витамин А экстракцией органическим растворителем, проводят цветную реакцию витамина А с эфиратом тоифторида бора при конечной концентрации последнего 16-20%, а ко личество витамина А рассчитывают по величине изменения интенсивности окрзски цветного комплекса при 610 нм. При извлечении витамина А из материалов, содержащих липиды, перед экстрак- 00 цией органическим растворителем проводят целочное омыление. Для повышения селективности метода в качестве комплексооЪразователя используют офират трифторида бора, который образует окрашенный комплекс только с витамином А. При этом этот комплексообразователь взаимодействует со всеми формами витамина А в отличие от других комплексооЬрозователей, например, трихлорпда сурьмы, который дает окраску только лишь при взаимодействии со слирто&ой формой витамина А, Эфират V. (5*0 СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИТАМИНА А торонних продуктов распада комплекса, мешаюцих определению витамина А. По мере течения реакции основной пик, , где согласно предлагаемому способу необходимо проводить измерения, постепенно уменьшается, уменьшается соответственно и разность между двумя измерениями. Одновременно растет дополнительный пик, что вызывает завышение полученных результатов и снижение точности анализа. Измеоения скорости распада цветного комплекса проводят в начальный момент хода реакции: согласно данному способу это делается через 30 с после смешения реагентов. П р и м е р 1. Определение витамина А в печени кур (вариант с омылением) . Навеску гомогенизированной куриной печени (200 мг) заливают 50 мл этанола, добавляют Ї г гранулированной гидроокиси натрия, 100 мг пирогаллола и нагревают в течение 30 мин при 90°С иа водяной бане. Затем гидролизат охлаждают , переносят в делителопую воронку, витамин А экстрагируют трижды по 30 мл гексана. Объединенный гексановый экстракт выпаривают досуха на оаторном испарителе, сухой остаток растворяют в 1^ мл хлороформа. Для анализа берут 5 мл хлороформного раствора добавляют 1 ял эфирата трифторида бора по стенкам пробирки, смешивают v включают секундомер. Через 30 с после смешания делают первое измерение оптической плотности раствора иа длине волны 6JU нм. Затем через 1 мин после первого измерения npbводят второе измерение. По разнице между вторым и первым измерениями рассчитывают изменение оптической плотности раствора и по величине этого х изменения, используя калибровочный график, рассчитывают содержание вита і мина А в анализируемом образце, Из э т о т следует, что проводить реСогласно данному примеру в печени гистрацию изменения скорости распаца проводится измерение витамина А в вицветного комплекса следует в пеовую (-« де его спиртовой формы - ретинола. .минуту, так как в этот момент измереП р и м е р 2, Определение витаминия будут более точными и чувствительна А в печени кур {вариант без омылеными. ния) , На необходимость проведения измереНавеску гомогенизированной куриной печени (200 мг) вносят в фарфоровую ний а первую минуту течения реакции ступку, насыпзют туда ; г безводного ? .указывает такме и то, что по мере сульфата натрия и тщательно перетиее хода начин-от появляться и реазют до получения однородной массы, гистрироваться дополнительный пик этом происходит измельчение печеҐ F), вызванный образованием пос трифТорида бора менее токсичен, чем трихлормд сурьмы. Окрашенный комплекс витамина А и эфирата трифторида бора образуется во всех неполярных органических раствооителях {гексан, бензол 9 хлороформ, дихлорэтан и т . д . ) . Скорость распара комплекса для разных" растворителей не одинакова, например, в гексане ранная реакция протекает очень быстро, что затрудняет анзпиэ. Наилучшие результаты получены при использовании хлороформа, Для уменьшения оыибки измерения однократном измерении оптической плот ности, связанной с распадом окрашенного комплекса, количественно определение витамина А производят в данном '.пособе по изменению интенсивности окраски цветного комплекса пои 20 610 нм. Способ иллюстрируется чертежом. На чертеже графически отражена к и котика реакции распада цветного ком25 плекса после добавления к раствору, содержащего витамин А, эфирзта трмфто пида бора в количестве 1 мл. Покеза*а часть спектра этого комплекса в хтерваге 1>50 - 630 нм. Цифра 1 соответствует величине оптической плотноети раствора через 30 с после добэвле- зо -fiiq эфирата трифторида бора. See посл едущие измерения (цифры 2 - $} про-* ВСДИРИСЬ через каждые 60 с. Образовав шаяся синяя окраска цьетного комплек** са витамина А и эфирата трифторида оора со временем постепенно ослабевает и теряет свою интенсивность. Наибольшая скорость изменения окраски наблюдается в первую минуту течения 40 реакции (интервал между цифрами 2 и 1 - наибольший) , 1 дальнейшем ско3 рость распада комплекса постепенно замедляется, что отражено в уменьшении интервала между всеми последующи- 45 ми цифрами. 168^661 ни и одновременное ее o6e^ f оживание, ных кояч'ес г в эфирата • тоифторидз бо^то необходимо для следующего эгапа ра. Для испытаний был взят стандарт-экстракции витамина А. Затем е ступный раствор аитамина А с известной ку наливают 10 мл хлороформа, хорошо с концентрацией и в иакдый образец вноперемешивают пестиком и содержимое сили по j мкг ретинола. Из данных табфильтруют в пробирку через бумажный лицы следует, что при добавлении к фильтр. Потом дважды по 5 мл ополаскц" хлороформенному раствору 0,1-0,7 мл вают ступку хлороформом, переносят его реагента анализ искового компонента на тот же фильтр и содержимое пробир- 10 j H e представляется возможным, тэк как ки доводят до 15 мл хлороформом. Все в этих соотношениях получается мутдальнейшие процедуры выполняют также^" ный раствор, который невозможно фокак описано в примере 1. томегрировать. Раствор становится Таким образом, в данном варианте прозрачным только при добавлении боопределения витамина А исключаются та- 5 лее-, 0,8 мп эфиратэ трифторида бора кие длительные процедуры как омыле(например, 0 а З мл цветореагента и ние, отмывка экстракта и его выпариваh,2 мл хлороформенного раствора виние. Это значительно сокращает время тамина А; 1,0 мл цветорезгентэ и анализа и повышает его точность за мл раствора и так далее). 20 счет сокращения ряда операций. Согласно данному примеру в печени Увеличение концентрации эфирата определяется витамин А в нативной фортрифторида бора более 16-20% (что ме, в которой он присутствует в ткасоответствует добавлению 0,Ь-1,0 f-л реагента к хлороформениому раствору нях, а именно в виде ретинилпальмита25 та, т . е . эфирной форме, поскольку эфиобщим объемом 'j мл) нецелесообразно, рат трифторида бора позволяет опредетак как при этом точности анализа не лять все формы витамина А. повышается. Поэтому с целью экономии П р и м е р З . Определение витамицветореагента Ъыл выбран интервал на А в масляном концентрате. 0,8-1,0 мл, т . е . 16-20%. Все производимые масляные препэра- 30 П р и м е р ? . $ табл. 2 и 3 предты как для витаминизации продуктов пиставлены результаты сравнительных истания человека, так и для обогащения пытаний данного способа, который про.комбикормов животных представляют соводился так как описано в примере бой эфирные формы витамина А в масле 3 и прототипа. Из таблицы видно, что например, ретинилпальмитат или рети- 35 предлагаемый способ определения витанилацетат. мина А превосходит известный как по 1 мл масляного препарата витамина точности определений, так и по селек™ А (активностью; например, 100 тыс. тивности определений. Кроме того, спо интернациональных единиц в мл) раствособ значительно упрощается, так как ряют в 10 мл гексана или хлороформа в 40 нет необходимости проводить щелочное мерной колбе. Затем 1 мл полученного опыление масляного препарата витамираствора переносят в другую мерную на А, тогда как в известном способе колбу на 100 мл с хлороформом и хороэта процедура обязательна. шо перемешивают. Таким образом, первоИспользование в качестве цветореаначальный масляный препарат разбави- 45 гента эфирата трифторида бора позволяли в 10000 раз. 1 мл разбавленного 1 ет определять витамин А в любой его таким способом раствора витамина А форме (спиртовой, эфирной и т . д . ) , вносят в химическую пробирку,доливают значительно сокращает время анализа к мл хлороформа и перемешивают. Затем в пробирку приливают 1 мл эфира три- 50 материалов, не содержащих липиды,, так как позволяет обойтись без целого фторида бора и все измерениямпроводят ряда таких операций как омыление, оттакже как описано в примере 1. мыока экстракта и-выпаривание раствоП р и м е р і Определение оптирителя. Данный способ позволяет провомальных количеств эфирата трифтррида бора для проведения реакции с витами- 55 Д и т ь опредение витамина А во мнегоном А, компонентных смесях, содержащих самые В табл. 1 представлены данные по различный вещества, так как эс^чрат определению витамина А при добавлетрифторида бора является специфичеснии к анализируемому образцу различким реактивом по отношению к ретинолу. 8 1664661 ности,.извлечение витамина А осущеИспользование менее токсичного комствляют путем экстракции органическим плексообразователя улучшает условия растворителем, в качестве комплексоработы аналитиков. образователя используют раствор эфираФ о р м у л а и з о б р е т е н и я 5 та трифторида бора с конической концентрацией 16-20%, а измерение значе1. Способ' количественного определения оптической плотности осуществляют ния витамина А, включающий отбор-пропутем фиксации изменения интенсивносбы анализируемого материала, извлечети окраски при 610 им. ние из него витамина А, взаимодействиє последнего с комплексообразовате2. Способ по п . 1, о т л и ч а ю лем и измерение значения оптической щ и й с я тем, что при извлечении аи-' плотности образующегося окрашенного тамина А из материалов, содержащих ли'соединения, соответствующее количестпиды, перед экстракцией органическим ву витамина А, о т л и ч а ю щ и й - 15 растворителем проводят щелочное опыс я тем, что, с целью повышения точление. Таблица 1 Добавлено эфирата трифторида бора, мл Показатель 0,1 Определено витамина А, мкг Выход анализируемого вещества, % |0,2 | 0,4 Го,6 | 0,7 ] 0,8 0,9 J 1,0 ] 1,2 ] 1,3 4, $2 Раствор мутный 98,4 4,95 4,95 99J 99,1 *. 98,9 99,2 Т а б л и ц а Способ Кол-во оп- Кол-во витамина А Добавлено Найдено ределений в 1 мл препарата, внутрен- витамимкг него на, А, і стандар- % та, мкг Предлагае мый 10 1U Известный 45 .8+0. 25 зв ^ 96, 8 84, 2 5, 0 5, 0 47 2 Средняя продолжительность анали- • за, мин 20 90-100 • ' Т а 6 л їй ц а З Способ Кол-во ОПРЄДЄ' лени и Кол-во витаДобавлено в раствор, мкг мина А в 1 мл препа- витами- витами- вит а міг сантората, мкг на Д на Е хина на ? Найдено витамина, А, % Предлагаемый Иэвесть. 10 45,03+0,28 5,0 5,0 5,0 5,0 95,9 НЫЙ Ю 38,10±2,47 5,0 5,0 5,0 5,0 109,8' Определение витамина А согласно известному способу в данном случае дает завышенный результат, так как треххлористая сурьма не является специфичным реактивом для витамина А и дает окрашивание с другими веществами, присутствующими в растворе. '168^661 Редактор 3, Трубченко Составитель И. Пинуев \ Техред л.Сердюкова Корректор А. Заказ 3502 Тираж . Обручар Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при 113035» Москва, Ж-35 ,*Раушская н а б , , д . 4/5 Производственно-издательский комбинат " П а т е н т " , гкнт' СССР г.Ужгород, у л . Гагарина,101