1-дезокси-1-n-метиламонію-d-глюцитолу сукцинат

1. 1-дезокси-1-N-метиламонію-D-глюцитолу сукцинат формули: 2 3 41721 лози, печінка і м'язи втрачають здатність перетворювати цукор, що потрапляє в організм, на глікоген, цукор накопичується в крові і виводиться з організму з сечею. У більш складних випадках, слабшає функція печінки, і в ній перестають знешкоджуватися продукти розпаду білків і жирів. В результаті, в крові, а потім в сечі з'являється значна кількість ацетонових тіл, накопичення яких спричиняє за собою порушення кислотно-лужної рівноваги організму і розвиток ацидозу. Ацидоз може привести до діабетичної коми. До важких ускладнень цукрового діабету відносяться значні зміни серцево-судинної системи, нирок, органів зору. Таким чином, при цукровому діабеті розвивається цілий комплекс патологічних змін, що приводить до необхідності використання разом із замісною терапією - лікування інсуліном або препаратами, що активують функцію підшлункової залози, цілого ряду інших лікарських засобів, які сприяють швидкому виведенню з організму продуктів розпаду і чинять нормалізуючу дію на судинно-тромбоцитарну ланку гемостаза. Завданням корисної моделі є створення нової хімічної сполуки, яка володіє антидіабетичною дією при низькій токсичності і дозволяє впливати на комплекс патологічних змін, супутніх цукровому діабету, за рахунок прояву діуретичної і антиагрегантної активностей. Поставлене завдання вирішується створенням нової хімічної сполуки - 1-дезокси-1-N-метіламоніяd-глюцитола сукцината. Також поставлене завдання вирішується тим, що 1-дезокси-1-N-метіламонія-d-глюцитола сукцинат проявляє антидіабетичну активність. Також поставлене завдання вирішується тим, що 1-дезокси-1-N-метіламонія-d-глюцитола сукцинат проявляє діуретичну активність. Також поставлене завдання вирішується тим, що 1-дезокси-1-N-метіламонія-d-глюцитола сукцинат проявляє антиагрегантну активність. Авторами справжньої корисної моделі синтезована нова речовина і-дезокси-1-N-метіламоніяD-глюцитола сукцинат загальної формули С11H22NO9, структурної формули: CH2 CH2 C C O OH OH OH H3C NH2+ CH2 H OH C C C OH H C CH2 OH O O H H Заявлена хімічна сполука є моноглюкаміновою сіллю янтарної кислоти. Його одержують шляхом змішування янтарної кислоти, 1-дезокси-1-Nметіламонія-D-глюцитола (меглюміна) і води в певному кількісному співвідношенні. Наприклад, в скляну ємність завантажують 500г води, 118г янтарної кислоти, 195г меглюмина, перемішують до повного розчинення компонентів при кімнатній температурі. Потім розчин фільтрують і сушать розпилювальною або ліофільною сушкою. Отримують 298г 1-дезокси-1-N-метіламонія-Dглюцитола сукцината (меглюміна сукцината), вихід 95,2%. Фізико-хімічні властивості заявленої сполуки представлені в Таблиці 1. 4 Дослідження токсичності 1-дезокси-1-Nметіламмонія-D-глюцитола сукцината проводили на лінійних білих мишах лінії СВА і щурах Вістар обох статей, розподілених в дві групи по 18 тварин в кожній. Сполуку, що заявляється, вводили у вигляді 10% водного розчину в хвостову вену в зростаючих дозах по Вілкоксону-літчфілду і визначали показник ЛД50 - дозу препарату, що викликає загибель 50% тварин. В результаті дослідження отримано, що гостра токсичність даної сполуки - ЛД50 складає: для щурів-самців і самок 5611+534мг/кг і 6825+559мг/кг, а для мишей-самців і самок 2813+192мг/кг і 2923+304мг/кг відповідно. Таким чином, нова сполука є малотоксичною, володіє хорошими токсикологічними характеристиками і може бути використана при створенні лікарських засобів. Вивчення фармакологічних властивостей хімічної сполуки, що заявляється, показало, що поряд з низькою токсичністю, воно володіє антидіабетичною активністю, а також проявляє високу діуретичну і антиагрегантну активність. Антидіабетична активність нового з'єднання полягає в зниженні рівнів глюкози в крові і сечі, підвищенні рівня власного інсуліну в організмі за рахунок активізації функції підшлункової залози, що дозволяє використовувати сполуку, що заявляється, в комплексній терапії цукрового діабету. Діуретична активність нового з'єднання полягає в активізації діурезу, що сприяє виведенню з організму надлишкової кількості продуктів розпаду білків і жирів, характерного при розвитку діабету. Антиагрегантна активність нової сполуки полягає в нормалізації гемореологічних властивостей крові, внаслідок чого покращується компенсації вуглеводного обміну і, як наслідок, - підтримується нормальний рівень глюкози в крові. Виявлені фармакологічні активності нової сполуки дозволяють використовувати її при лікуванні комплексу патологічних змін, супутніх цукровому діабету, внаслідок чого деякі ускладнення діабету пізніше виникають і повільніше прогресують. Така компенсація діабету забезпечує хворим довге і повноцінне життя. В Таблицях 2-6 приведені результати експериментальних досліджень, що підтверджують наявність біологічних активностей, які заявляються, у нової хімічної сполуки. В Таблиці 2, 3 приведені результати експериментального дослідження антидіабетичної активності сполуки, що заявляється. В Таблиці 4 приведені результати експериментального дослідження діуретичної активності сполуки, що заявляється. В Таблиці 5, 6 приведені результати експериментального дослідження антиагрегантної активності сполуки, що заявляється. Дослід 1. Дослідження антидіабетичної активності сполуки, що заявляється, на моделях алоксанового і стрептозоцинового діабету. Алоксановий і стрептозоциновий діабет моделювали згідно з класичною методикою (Баранов В.Г., Солоковерова И.М., Гаспарян И.Г. и др. Экс 5 периментальный сахарный диабет: роль в клинической диабетологии. Л., Наука, 1983г.). Для дослідження активності сполуки, що заявляється, були сформовані три групи по 25 тварин для кожної моделі діабету: - у 1-ій групі знаходилися інтактні тварини; - у 2-ій групі (контрольній) з четвертого дня досліду тваринам вводили в хвостову вену по 2мл 0.9% розчину натрію хлориду протягом трьох днів; - у 3-ій групі тваринам вводили 10% розчину сполуки, що заявлялася, внутрішньовенно в хвостову вену з розрахунку 116мг/кг (0,37ммоль/кг) по активній речовині протягом трьох днів; Активність сполуки, що заявляється, на моделі алоксанового діабету оцінювали на сьому добу досліду. Результати експерименту, представлені в Таблиці 2, показали, що нова сполука володіє вираженою протидіабетичною активністю, про що свідчать достовірне зниження глюкози крові - в 4,1 рази, загальних ліпідів - в 2,0 рази, глюкози сечі - в 3,6 разів, зниження рівня кетонових тіл в сечі - в 10 разів, і підвищення рівня інсуліну в крові - в 5,58 разів. При цьому його використання привело до зниження смертності тварин в 4,6 разів в порівнянні з контрольною групою. Активність сполуки, що заявляється, на моделі стрептозоцинового діабету оцінювали на сьому добу досліду по загальному стану тварин, вжитку води, рівня глюкози, інсуліну сироватки крові, взятої натщесерце. Статистичну обробку результатів, представлених в Таблиці 3, проводили по Стьюденту-Фішеру за допомогою прикладного пакету програм Statgraf. Проведений експеримент показав, що модель «стрептозоцинового» експериментального діабету виявилася «м'якшою»: ні в одній групі не загинула жодна тварина, проте у тварин 2-ої групи були присутні всі ознаки розвинутого діабету: рівень глюкози в крові збільшився в 3,37 разів, рівень глюкози в сечі в 2,4 рази, рівень інсуліну в крові впав в 2,25 разів, вжиток води зріс в 2,1 рази, сума кетонових тіл в сечі досягла 1ммоль/л в порівнянні з інтактними тваринами. При цьому вживання сполуки, що заявляється, в 3-ій групі привело до істотної нормалізації показників вуглеводного обміну: рівень глюкози впав в 3,2 рази, рівень глюкози в сечі - в 1,8 разів, рівень інсуліну в крові збільшився в 2,4 рази, рівень кетонових тіл в сечі знизився в 2 рази. Таким чином, дослідження антидіабетичної активності сполуки, що заявляється, на моделях алоксанового і стрептозоцинового діабету показало, що сполука, що заявляється, робить вплив на різні стадії розвитку цукрового діабету, володіє вираженою протидіабетичною дією. Дослід 2. Дослідження діуретичної активності сполуки, що заявляється. Експериментальне визначення діуретичної активності проводили за стандартною методикою: (Саркисов Д.С., Ремезов П.И. Воспроизведение болезней человека в эксперименте. М.: Наука, 1960г.). Для оцінки дії сполуки, що заявляється, на функцію нирок було сформовано дві експеримен 41721 6 тальні групи тварин по 18 щурів породи Вістар в кожній. Всім тваринам 3 рази на добу в хвостову вену повільно вводили наступні розчини: - сполуку, що заявляється, вводили тваринам 1-ої групи в кількості 3,0мл 10% розчину з вмістом 0,009 міль активної речовини; - фізіологічний розчин натрію хлориду вводили тваринам 2-ої групи в кількості 3,0мл 0.9% розчину (контроль). При проведенні дослідження, тварин поміщали в обмінні клітки Texnoplast на добу для збору сечі, обліку водоспоживання і функціональних проб. Динаміку ваги щурів, вагу і відносну масу нирок до ваги тіла визначали на вагах Sartorius. Аналіз сечі проводили загальноприйнятими методами. Статистичну обробку проводили по Стьюденту-Фішеру за допомогою прикладного пакету програм Statgraf. Результати дослідження, представлені в Таблиці 4, показали, що добовий діурез у тварин 1-ої групи достовірно збільшився в 2,98 разів в порівнянні з групою контролю; секреторна функція нирок, яка визначалася по секреції фенолового червоного, підвищилася у тварин 1-ої групи в порівнянні з контрольною групою в 1,41 разів. При цьому показник кислотно-лужного балансу сечі зрушився в лужну область, щільність сечі дещо зросла; вміст в сечі білка, цукру і хлоридів дещо знизився, що свідчить про поліпшення фільтраційної функції нирок. Таким чином, показники, отримані в результаті даного дослідження, свідчать про високу діуретичну активність сполуки, що заявляється. Дослід 3. Дослідження впливу антиагрегантної активності сполуки, що заявляється. Оцінка впливу сполуки, що заявляється, на гемореологічні властивості крові проводилася на основі вивчення синдуцированої агрегації тромбоцитів при її дії на судинно-тромбоцитарну ланку гемостаза згідно зі стандартною методикою (Балуда В.П., Баркаган З.С., Гольдберг Е.Д. и соавт. Лабораторные методы исследования системы гемостаза Томск: Медицина, 1980. С. 26-29., Gabbasov Z.A., Popov E.G., Gavrilov I.Yu. and Posin E.Ya. Platelet aggregation: the use of optical density fluctuations to study microaggregate formation in platelet suspension. Thromb. Res., 1989, 54(3), p. 215-223.). Для дослідження впливу сполуки, що заявляється, на показники згортаючої системи in vitro були сформовані три групи по 24 зразка багатої тромбоцитами плазми: - в 1-ій групі з 24 зразків до 0,874мл багатої тромбоцитами плазми додавали 0,026мл 1% розчину сполуки, що заявлялося (0,08ммоль активної речовини); - в 2-ій групі з 24 зразків до 0,874мл багатої тромбоцитами плазми додавали 0,026мл 0,9% розчину натрію хлориду (контроль). - в 3-їй групі з 24 зразків до 0,874мл багатої тромбоцитами плазми додавали 10мкг індуктора агрегації тромбоцитів Адреналіну (Sigma) в 0,026мл 0,9% розчину натрію хлориду (негативний контроль). 7 41721 Визначення агрегації тромбоцитів проводили турбідиметричним методом на лазерному агрегометрі 230-LA (НПФ Біола). Обробку отриманої кривої Борна-О'Брайена проводили за допомогою комп'ютера, зв'язаного з агрегометром за допомогою пакету прикладних програм AGGR Версия 2.20. Криву відносного середнього радіусу агрегатів тромбоцитів інтерпретували по Габбасову (Габбасов З.А., Попов Е.Г., Гаврилов И.Ю., Позин Е.Я., Маркосян Р.А. Новый высокочувстительный метод анализа агрегации тромбоцитов. Лабораторное дело, 1989, N10, с. 15-18.). Результати дослідження оброблені методом варіаційної статистики з використанням критерію Стьюдента. Експериментальні дані, представлені в Таблицях 5 і 6, показують, що такі ключові параметри антиагрегантної активності, як ступінь агрегації тромбоцитів і швидкість агрегації тромбоцитів, під дією сполуки, що заявляється, достовірно змен 8 шилися в порівнянні з контролем в 1,52 рази і 1,83 рази - відповідно. При цьому час максимальної агрегації в зразках плазми, що містить цю сполуку, збільшився в 1,3 рази. Крім того, в 1-ій групі показник агрегації тромбоцитів достовірно зменшився в 1,86 рази. Проведене дослідження показало вплив сполуки на гемореологічні властивості крові, зокрема, на показники агрегації тромбоцитів, що свідчать про наявність вираженої антиагрегантної дії сполуки, що заявляється. Таким чином, експериментальні дослідження підтверджують, що нова хімічна сполука, що заявляється, разом з низькою токсичністю, проявляє високу антидіабетичну активність, а також діуретичну і антиагрегантну активності і, отже, може бути використана при створенні лікарських препаратів, що дозволяють впливати на комплекс патологічних змін, супутніх цукровому діабету. Таблиця 1 Показник 1. Зовнішній вигляд 2. Розчинність 3. Температура плавлення (°С) (з бутанолу) 4. Брутто-формула 5. Молекулярна маса (г/моль) 6. Ультрафіолетовий спектр (нм) 7. ИК-спектр (см-1) (таблетка КВr) 8. Спектр ЯМР 1Н (DMSO-D6) 9. Спектр ЯМР 13C (DMSO-D6), d Обчислено %: 10. Елементний аналіз Знайдено, % Знайдено: (кріоскопічно в 11. Молекулярна маса діметілсульфооксиді) Обчислено Фізико-хімічні властивості 1-дезокси-1-Nметіламмонія-D-глюцитола сукцината Аморфна гігроскопічна речовина білого кольору Розчинний у воді, діметілфораміде, діметілсульфоксиді, малорозчинний в спиртах, нерозчинний в бензолі, хлороформі, діетиловому ефірі 65-67 (з розкладанням) C11H22NO9 312 Прозорий 3300, 1566, 1400, 1290, 1226, 1172, 1085, 1043, 881, 656, 579, 443 2.12 (4Н,СН2), 3.05 (3Н,СН3), 2.82-291 d (4Н,СН2), 3.54-3.56-3.601 (4H,CH), 3.83 (2Н,СН2), 5.76 m (OH). 33.235, 51.296, 63.159, 68.599, 70.198, 70.360, 71.123 С 42.30.; Н 7.05.; N 4.49; О 46.15. С 42.85; Н 6.93.; N4.93.; 301 312 Таблиця 2 Показники вуглеводного і ліпідного 1 група обміну при алоксановому діабеті на (інтактні тварини) 7 добу Число тварин, що вижили (%) 100 Маса тіла (г) 200±15 Добовий вжиток води (мл) 18±2 Глюкоза крові (ммоль/л) 4,3±0,1 Інсулін 5,2±0,2 Загальні ліпіди (г/л) 9,8±0,2 Холестерин (моль/л) 1,3±0,3 Трігліцеріди (моль/л) 2,3±0,1 В-ліпопротеїди (г/л) 2,0±0,3 Глюкоза сечі (моль/л) 1,1±0,1 Сума кетонових тіл сечі (ммоль/л) 2 група (0,9% розчин NaCl-контроль) 5 (20%) 160±10 32±5 18,5±1,5 1,2±0,1 19,3±0,8 8,2±0,2 3,0±0,2 2,5±0,1 5,4±0,3 5 3 група (1-дезокси-1-Nметіламонія-D-глюцитола сукцинат) 23 (92%) 195±5* 23±3# 4,5±0,1# 6,7±0,1*# 9,5±0,2*# 1,4±0,1* 1,4±0,2* 2,1±0,1# 1,5±0,1*# 0,5 Примітка: * відмінності з групою контролю достовірні при * р