Спосіб отримання похідних дистаміцину а або їх гідрохлоридів

Изобретение касается гетероциклических веществ, в частности получения производных дистамицина А и их гидрохлоридов общей ф-лы RjR^N—A-C(OV -C=€H_C(O)j-NHr • CH 2 -CH 2 -C(NH^=NH,, где n = 3 или 4; A - - f O j " когда один из R( и R 4 • водород, а другой - a) -C(0)-N(N0-R g при R^ - С^—С^~ алкил или С^-С^-галоидалкил; б) - C ( 0 ) - ( C K 2 ) m - R 4 при га=0, R 4 ~ азиридинші или оксиранил; А когда R 4 =R^ - С 4 -С^-галоидалкил, к о торые обладают противоопухолевой и противовирусной активностью, что может быть использовано в медицине. Цель - создание новых активных и малотоксичных веществ указанного к л а с с а . Синтез ведут реакцией замещенной, аминокислоты или ее хлорангидрида с соответствующим 4-(N-HHTp03O-N-MeTKnуреидом) кислоты с последующим выделением целевого продукта либо в свободном виде, либо в виде гидрохлорид а . Новые соединения показывают значительную эффективность при наложении с репродуктивной активностью патогенных вирусов и защиту клеток от вирусных инфекций (в том числе и ДНК-вирусов) . I табл. 90 СО О) Изобретение относится к области получения новьк производных дистамицина А общей формулы где п = 3 или 4; А - радикал когда один из R, и R 2 - водород, а другой группа -CO-N-R^, в которой R2' і :K-A-C0-HN сн, п. N0 "R_ -C^-алкил, незамещенй ный или.замещенный атомом га 1528316 лоида, или группа -С0-R^, где т = 0, a R4 - азирип динил или оксиранил, или А - радикал 4 боксамидо/пиррол-2-карбоксамидо/про-, пионамидин, гидрохлорид. I стадия. Промежуточная 4-N,Nбис-/2-хлорэтил/аминотиофен-2-карбоновая кислота. Исходя из 1,74 г метил-4-нитротио"N фен-2-карбоксилата получают 0,90 г ме т ил-4-амино тиофе н-2-к а рбокс ила та, N S т . п л . 81-82°С. 10 Вводят 4 г холодной окиси этилена в растор 0,9 г метил-4-аминотиофени R.£ - одинаковые и означают где 2-карбоксилата в 12,5 мл 40%-ной водС,-С ^"алкил, з амещенный' ной уксусной кислоты при 5°С при п е г ало идом, ремешивании. Смесь выдерживают всю или их гидрохлоридов, обладающих п р о - ! t 5 ночь при комнатной температуре в з а тивоопухолевой и противовирусной а к паянной колбе, затем концентрируют тивностями. до малого объема и разбавляют 25 мл Целью изобретения является разраводы. Прибавляют твердый бикарбонат ботка на основе известных методов натрия и смесь экстрагируют этилацеспособа получения новых производных 20 татом. При выпаривании органического дистамицина А, обладающих ценными растворителя получают 1,3 г метилфармакологическими свойствами при /1\1,Н-бис/2-оксиэтил/аминотиофен-2низкой токсичности. карбоксилата в виде светпо-коричневоП р и м е р 1. \Ь -/1 -Кетнл-4-/ 1 го масла, которое затвердевает при 25 стоянии, г,пл. >68-69°С (из смеси метил-4-У1-метнл-4-t4-N p -метил-N' нитрозоуреидобензол/-!-карбоксами60:40 этипацетат:гексан). до!пиррол-2-карбоксамидо/пиррол-2-, Растворяют ],3 г бис-оксиэтиламикарбоксамидо/пиррол^2-карбоксами- ! нопроизводного в 1,96 мл оксихлорида до/пропионамидин, гидрохлорнд. фосфора и смесь кипятят с обратным Раствор 0,1 мл триэтиламина в I мл 30 холодильником в течение 45 мин. После диметилформамида ( М ) прибавляют в Д Ф выпаривания в вакууме темный остаток течение 5 мин к перемешиваемому растобрабатывают 7,75 мл концентрированвору 0,41 г N-деформилдистамицина в ной соляной кислоты при 100 С в тече2,5 мл Д Ф при комнатной температуре М ние 3 ч . Смесь охлаждают, прибавляют в атмосфере азота. Через 15 мин малы- -,,21 мл холодной воды и экстрагируют ми порциями прибавляют 0,17 г 4-(Nполученный раствор этилацетатом. Поснитрозо-К-метилурендо)бензойной кисле выпаривания органической растволоты и 0,16 г дициклогексилкарбодирителя и очистки твердого остатка имида. Реакционную смесь 2 ч перемехроматографией на колонке с силикашивают и прибавляют 25 мл этилового 40 гелем, элюируя смесью этилацетата и эфира. Твердый продукт, собранный метанола, получают 0,49 г 4 - N , N - 6 H C фильтрованием, очищают колоночной /2-хлорэтил/аминотиофен-2-карбоновой хроматографией на силикагеле смесями кислоты, т.пл, 135-137 °С (из смеси этилацетата, метанола и уксусной кис60:40 бензол:гексан)» лоты, получают 0,175 г целевого сое45 динения, т . п л . 205-210 С (с разложеII стадия. Целевое соединение. нием) , из изопропанола. Раствор 0,1 мл триэтиламина в 0,5 мл Д Ф прибавляют к раствору М Аналогично может быть получен 0,4 г деформилдистамицина дигидрохлоft-/1-метил-4-/1-метил-4-/1~метил-41 рида в 4,5 мл Д Ф при комнатной темМ [4-N'-/2-хлорэтил-М -нитрозоуреидо50 пературе в атмосфере азота. бензол/-! -карбоксамидо^ ^пиррол-2Смесь обрабатывают 0,23 г 4-N,Nкарбоксиамидо/пиррол-2-карбоксиамибис-/2-хлорэтил/аминотиофен-2-карбодо/пиррол-2-карбоксамидо/пропионаминовой кислоты и 0,77 г дициклогексилдин, гидрохлорид, т . п л . 182 С ( р а з карбодиимида малыми порциями. Полуложение) . 55 ченную в результате смесь перемешиваП р и м е р 2. р-/1-Метил-4-/1 ют всю ночь, затем фильтруют и выпаметил-4-/1-метил~4~[4-М,М-бисг/2ривают досуха в вакууме. Твердый о с хло рэ тил/амино тиофен~2-к арбоксамидо^]таток очищают хроматографией на силипиррол-2-карбоксамидо/пиррол~2-кар "О. и и "О. л 5 15283 16 аминобеизол-ї ^ кагеле, используя в качестве эглоента ( ( карбоксамидо/пиррол^-карбоксамидо/-' смесь ^ этилацета.та и этанола (9:1 и пиррол-2-карбоксамидо/пнррол-2-кар8:2 по объему). Получают 0,22 г целе-бок сам идо /пропионамидин, гидрохлорид; зого соединения, т.пл. І 99-204 °С ^-/1-метил-4-/1-метил-4-/1-метил(после перекристаллизации из изолро4-[з-Ы,Н-бис-/2-хлорэтил/амшюбензолпилового спирта)„ 1-карбоксамидоДпиргоп-2-карбоксамиАналогично могут быть получены до/пиррол-2-карбоксамидо/пиррол~2следующие соединения: карбоксамидо/пропионамидин,гидрохло[3-/1 -метил-4-/1-метил-4-/1 -метил1 0 рид; 4-^4-N,Н-бис-/2-хлорэтил/аминоимида~ ^-/1 -метшт-4-/] -метил-4—/ \ -метилзол-1-метил-2-карбоксамид 61 пиррол-24-^4-/оксираггкарбонііп/амннобензол-1 карбоксамидо/пнррол-2-карбоксами- , карбоксамидоі пиррол-2-карбоксамидо/до/пиррбл-2-карбоксамидо/пропионами• пир,рол-2-карбоксамидо/пиррол-2-к ардин, гидрохлорид; ' ] 5 бок саміздо/пропионамидин, гидрохлорид; [}-/1-метил-4-/1-МЄТИЛ-4-/1-метил[}-/1-метил-4-/1 -метил-4-/I -метил4-Ц5-Ы,Ы-бис-/2-хлорэтил/аминоимида4-Г3-/оксирачкарбонил/аминобензол-1зол-1-метил-2-карбоксамидоі пиррол-2карбоксамидоі пиррол-2-карбоксамидо/карбоксамидо/ииррол-2-карбоксамицо/ пиррол-2-карбоксамидо/пропионамидин, 20 пиррол-2-карбоксамкдо/пиррол-2-карбоксамидо/пропионамидин,хлоргидрат; гидрохлорид; f)-j\ -меТИЛ-4-/1-метил-4-/1-метил[}-/1 -метил-4-/1 -метил-4-/ 1 -метил4- [4-/1 -азиридинкарбонил/аминобензол4~£4-1$,К-бис-/2-хлорэтил/аминотиазол1-карбоксамидоі пиррол-2-карбоксами2-карбоксамидоПпиррол-2~карбоксамидо/ пиррол-2-карбоксамидо/пиррол-2-кар25 до/пиррол-2-карбоксамидо/пиррол-2карбоксамидо/пропионамидип,гидрохло» боксамидо/пропионамидин, гидрохлорид; рид; Р~/1-метил-4-/1-метил-4-/1-метил[V-/,!-метил-4-/1 -метил-4-/1-ме тил4-Г5-К,М-бис-/2-хлорэтил/аминотиазол4-1]3-/1 -аз чридин/карбониламино бензол2-карбоксамидсПпиррол-2-карбоксамидо/пиррол-2-карбоксамидо/пиррол-2^ Q 1 -карбоксамидо"1пиррол-2-карбоксами|до/пиррол-2-карбоксамидо/пиррол-2карбоксамидо/пропионамидин.гидрохло'карбоксамидо/пропионамидин,гидрохлорид. П р и м е р З.Й -/І-Метил-4-/1рцц. метил-4-/1-MeTKn-4-[4~N,N-6Hc-/2В таблице приведены данные in. v i t хлорэтил/аминобензол-1 -карбоксамидо"! ro по противоопухолевой активности,, пиррол-2-карбоксамидо/пиррол-2-каротносящиеся к соединениям (Ь +/1 -метилбоксамидо/пиррол-2-карбоксамидо/про4-/1-метил-4-/1-метил-4-[4-N,К-биспионамидин, гидрохлорид. /2-хлорэтил/аминобензол-1-карбоксамидсЛ пиррол-2-карбоксамидо/пиррол-2Раствор 0,195 г бикарбоната наткарбоксамїщо/пиррол-2-карбоксамидо/рия в 3 мл воды прибавляют к охлаж40 пропионамрщин, гид,рохлорид (код FCE денному раствору 0,4 г деформилдис24517) и р-/1-метил-4-/J-метил-4-/1 тамицина в 21 мл этанола. К этой смеметил-4-Г4-М,К-бис-/2-хлорзтші/аминоси прибавляют по каплям раствор тиoфeн~2-кapбoкcaмидoJ пиррол-2-карО,32 г 4-Ы,М-бис-/2-хлорэтил/аминобоксамидо/пиррол-2-карбоксамидо/пирбёнзоилхлорида в 3 мл бензола. Смесь 45 рол-2-карбоксамидо/пропионамидин гидперемешивают 3 ч при 5 С, а затем рохлорид (код FCE 24690) по сравнению І 2 ч при комнатной температуре. дистамицином А. После выпаривания в вакууме полуПротивоопухолевая активность in чают твердый остаток 7 который хромаv i t r o была оценена с помощью цитотоктографируют на колонке с силикагелем, _п сикологического исследования, провоэлюируя смесями хлороформа и метанодимого на клетках murine Z 1210 лейла (9:1 и 7:3 по объему), получают кемии, Z-PAH устойчивых к лейкемии 0,22 г целевого продукта, т.пл. 295 С клетках и клетках Р388 лейкемии, а (с разложением), из изопропилового также на клетках HeZa. Клетки происспирта и этилового эфира. Аналогично получают следующие сое- 55 ходили из опухолей in vivo^H адаптировались в культуре клеток, Клетки динения: были использованы до десятого пассаft-/!-метил-4-/1-метил-4-/1-меткпжа. Цитотоксичность определена путем 1528316 подсчета выжитых -клеток через 4 ч где п после обработки и 48 ч роста на не А содержащей лекаре1^а среде. Для кле = ток HeZa использован тест пл икгибированию колоний. Процент роста клеток на обработанных культурах сравнивается с таковым для контроля. Величины LD50 (дозы, ингибирующие 50% клеточного роста по отношению к контролю) «п рассчитаны по кривым доза - ответ. Предлагаемые соединения также показали значительную эффективность при наложении с репродуктивной актив- ^ ностью патогенных вирусов и защиту клеток тканей от вирусных инфекций. Так, они показывают активность против ДНК-вирусов таких, как, например,герпес (например, герпес симплекс и r e p - 20 пес зостер), РНК-вирусов таких, как риновкрусы и аденовирусы, и против ретровирусов таких, как саркома~вирусы, Вирусы герпес, коксаки (coxsachie) 25 и ресг.ираторно-сенцитиальные были испытаны в жидкой среде по следующей методике. Серийные двукратные разбавления соединений от 200 до 1 ,5 мкг/мл распределены в дубликатах 0, 1 мл/лунку З О в 96 лунках микроплат для культуры ткани. Сразу же добавляются клеточные суспензии (2-10 клеток/мл), зараженные примерно 5'1(T5TCLD5O вирус/клетку в 0,1 мл/лунку. После 3-5 дней ин- ,_ кубации при 37 С в 5%-ном СО^ культуры клеток оценивают при наблюдении под микроскопом и определяют минимальную ингибирующую концентрацию, которая определяет уменьшение цито- 4 Q патического эффекта по сравнению с зараженными контролями. Ф о р м у л а когда один из R( и R e - водород, а другой группа - C 0 - N - R , S B которой \ * N0 R^ - С(-Сф~алкил, незамещенный или замещенный атомом га c лоида или группа ~ O(CH 2 ) m -R где m = 0, a R^ - азириді-шкл или оксиранил, или А - радикал или % А СИ, где R . и - одинаковые и о з н а ч а ю т С ^-С^-алкил, замещенный г а л о и д о м , или их г и д р о х л о р и д о в , о т л и ч а ю щ и й с я т е м , ч т о с о е д и н е н и е общей формулы С0-М-І{ 3 п где п - имеет указанные значения, подвергают взаимодействию с соединением общей формулы и з о б р е т е н и я Способ получения производных д к е гакицина А общей формулы Ъ 3 или 4; радикал ;N-A-C0- HN ~O-C0--NH—СНг-СНг-( I 45 где X - гчцроксил или гачоген; R , R, и А имеют указанные-значения р с последующим выделением целевого 50 продукта в свободном виде или в виде гидрохлорида. 528316 10 LD^j, мкг/мл Соединение ZI 210 *• | 21210/РАМ*|рз88** I HeZa Дистамицин A FCE 24517 FCE 24690 і 98 0,985 1,365 1 36 0 ,430 0 ,985 25 0,21 0,22 3, 9 014 о, 037 о, * Цитотоксичность оценена через 4 ч после обработки. * * Цитотоксичность оценена через 48 ч после обработки, ~*< * It-It Тест по икгибированию колонии проводили через 24 ч после обработки. Редактор О.Юрковецкая Составитель И.Бочарова Техред М.Дидык Корректор Э.Лончакова Заказ 7519/58 Тираж 352 Подписное В И П Государственного комитета по изобретениям и открытиям при Г Н С С НИИ К Т СР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д . 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101