Спосіб одержання панкреотину з підшлункової залози

Изобретение относится к медицине, в частности к способу получения лекарственных средств. Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта с более высокой активностью. Для этого замороженные свиные поджелудочные железы размельчают, пропуская через мясорубку, и проводят ауто лиз при температуре (-2)~(+30)°С и рН 6,5-8,5. Параллельно через каждые 15 мин анализируют пробу на осаждение в 55-65%-ном водном изопропиловом спирте. При наличии скорости осаждения аутолиза 3-Ю мм в течение 1-3 мин прекращают аутолиз путем добавления изопропилового спирта до конечной концентрации 30-35%, затем проводят фильтрование через с и т е В полученный раствор добавляют изопропиловын спирт в конечной концентрации 55-65% при 20™24°С„ Полученный осадок промывают изопропиловым спиртом концентрацией 75-95%. Суспензию фильтруют на нуч--фильтре диаметром 40 см и отсасывают для просушивания в вакууме при 55 С и давлении 5 мбар» Способ позволяет повысить выход целевого продукта с более высокой активностью. 4 табл. Изобретение относится к медицине, в частности к способам получения лекарственных средств. Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта с более высокой активностью. П р и м е р 1„ 100 кг замороженных при низкой температуре свиных поджелудочных желез, пропущенных через волк-машину или через мясорубку, перемешивают в 250-литровом реакторе с раствором 100 г глюконата кальция в 20 л воды совместно с 200 г силиконового препарата, препятствующего ценообразованию. В зависимости от содержания свободного трипсина в железах добавляют в качестве средства, способствующего началу процесса, до 1 кг готового панкреатина, растворенного в 5 л воды. Это количество панкреатина устанавливают посредством "37° пробы на гидролиз". С этой целью отбирают из загруженной . партии 120 г исходного материала» После добавления 15 л 84%-кого изопропилового спирта замешивают раствор 1,3 кг бикарбоната натрия в 20 л воды. Оставляют стоять на ночь, причем температура возрастает примерно от 2 до 12 С, на следующее утро подогревают до 20 С к продолжают перемешивание при этой температуре. (53) 615.45(бЗб;яГ 195-68, І965. '* П р и м е р ы 9 - 1 2 , Аутолиз и осаждение смеси знзимов из водного аутолиэата осуществляют, как описано в примере 1. Чтобы определить влияние концентрации изопропилового спирта на процесс промывания, к пробам суспензии панкреатина добавляют изопропиловый спирт разной концентрации» Применяют по 1 л о с а д к а , полученного в р е з у л ь т а т е спивания сифоном отстоявшег о с я верхнего слоя жидкости , 1 л осадка с о о т в е т с т в у е т количеству приблизительно 200 г сухого панкреатина, К каждой пробе добавляют по 1 л и з о пропилового с п и р т а . Разные концентрации получают в р е з у л ь т а т е р а з б а в ления абсолютного изопропилового спирт а . Плотный фильтровальный осадок, полученный, как описано в примере 1 в р е з у л ь т а т е двухкратного промывания и отсасывания на нутче, подвергают высушиванию, как описано в примере 1, после чего определяют е г о активность и насыпной в е с . При применении только 65%-ного изопропилового спирта наблюд а е т с я небольшое уменьшение активност и . Несмотря на э т о к а ч е с т в о полученного в р е з у л ь т а т е продукта выше, чем к а ч е с т в о известных продуктов. Насыпной вес продукта уменьшается с увеличением концентрации изопропилового спирта. Результаты приведены в табл„ 3. Данные сравнения стабильности амилазы и липазы у панкреатина, приготовленного по известному и предлагаемому способам, представлены в табл о 4 . П р и м е р 5 . Поступают а н а л о г и ч но примеру 1, но б е з добавки и з о п р о панола,, Конца а у т о л и з а достигают ч е р е з 2,5 ч . Активность амилазы 83% при нагрузочной потере 5% и а к т и в Табл„ 4 показывает, ч т о у панкреа45 н о с т ь липазы 80% при нагрузочной п о т и н а , полученного известными способат е р е 15%. ми, потеря при н а г р у з к е сильно возраст а е т по мере увеличения активности., П р и м е р 6 . Поступают а н а л о г и ч Что к а с а е т с я п а н к р е а т и н а , изготовленно примеру 1, добавляя 3 л пропанола. Конца аутолиза при этом достигают ч е - JQ ного по предложенному способу^, то н е смотря на существенно высокую энзим*" р е з 2 , 7 5 ч . Активность амилазы 88% ную а к т и в н о с т ь , он отличается при н а при нагрузочной потере около 5%, а г р у з к е наименьшей п о т е р е й , липазы 88% при нагрузочной п о т е р е 10%„ П р и м е р 7 . Поступают а н а л о г и ч но примеру 1, но добавляют 10 л и з о - ^ Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я п р о п а н о л а . Конца а у т о л и з а достигают ч е р е з 3 ч . Активность амилазы 93% Способ получения панкреатина и з ( н а г р у з о ч н а я потеря 5%) и липазы 88% поджелудочной железы путем проведения ( н а г р у з о ч н а я потеря 8%), аутолиза при комнатной температуре, 8 1644712 С ОрГаКИЧЄСКИН рителем, удаления осадка фильтрацией, промывания его органическим растворителем и высушивания, о т л и ч а ю , щ и й с я тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта с более высокой активностью, аутолиз проводят в реакторе при рН 6,5-8,5 и температуре (-2)-(+30) С, при этом одновре- JQ менно анализируют пробу, азятую из реактора, на осаждение в 55-65%-ном водном иэопропиловом спирте и, как только в пробе достигается скорость осаждения выпавшего в осадок аутоли- J5 зата 3-10 мм в течение 1-3 мин, прекращают аутолиз в реакторе путем добавления изопропилового спирта до конечной концентрации 30-35%, затем после фильтрации в полученный раствор 20 вновь добавляют иэопропиловый спирт до концентрации 55-65% при 20-24 С, полученный осадок промывают 75-95%-ным ИЗиирОиИлОоЫМ СнИр і Ой, а ошиушвапис проводят в среде азота при давлении 5 мбар. Т а б л и ц а Продолжительность аутолиза при 20 е С, 1 Значение аутолиза мм/0,5 мин мм/1 0 0 1,00 2,00 2,50 2,75 3,00 3,25 3,50 3,75 4,00 мин мм/ /3 мин 0 0 0 1 4 0 о о 3 6 10 18 20 1 3 5 9 14 0 1 10 18 20 20 20 Т а б л и ц а 2 Пример РН Аутолиз % С^Н?ОН 2 3 4 °С 10 10 6,5 6,5 7,0 7,0 8,5 8,5 30 30 -2 -2 15 15 о о 20 20 Испытание, мм/мин 3 10 3 10 3 10 30 30 32 32 35 35 Промывание + + сушка, Осаждение с э н т он I °с z с н он 5 7 30 30 10 10 15 15 65 65 55 55 60 60 Т а б л и ц а З Пример 9 1 0 ** 1 2 Промывная жидкость (% изопропилового спирта) 65 75 85 95 75 93 ,6 90 ,3 85 93, 5 90, 5 95 93 ,6 90 ,4 Активность, FiP=E/r: Амилаза Липаза Протеаза Насыпной вес, г/100 мл • 65 84, 3 72, 3 5, 3 5 5 5 .6 Выход (амилаза) 88 85 91 89 94 91 Т а б л и ц а 4 Способ Амилаза : Липаза • , К • -' ИсходПотеря ИсходПотеря ная акпри наная акпри нативность, груэке, % тивность, грузке, % FiP-E/мг FiP-E/мг Известный 43 , 1 57 Л 51 ,0 6 43' 93 ,6 3 1 Предлагаемый Редактор ОЛЭрковецкая 41 •-.;• 40,7 37,0 43,3 7 14 31 90,3 6 Составитель Л.Конюхова Техред М.Дидык Корректор, 0,Ципле Заказ 1249 Тираж 460 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101