Спосіб одержання солі сульфоаденозіл-l-метіоніна

союз советских СОЦИАЛИСТ!-ИЕОЧИХ РЕСПУБЛИК С 12 N 1/06 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ПО ИЗОБРЕТЕН!ПРИ ГННТ СССР t (J»6) 15.12.89. Бюл. № i 6 * (71) Биорисерч С.п.A. {IT) (72) Федерико Геннари ^1Т) (53) 615.^5 (088.8) (5і*) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СОЛИ ОУЛЬФОАДР НОЗИЛ-Ъ-МЕТМОНИНА (57) Изобретение относится к химикофармацевтической промышленности. Исходные дрожжи обогащают сулофоаденозил-Ь-метИонином. Клетки лизируют, Лизат очищают ультрафильтрацией через мембраны с пределом пор IQ^JO тон, пропускают через колонку со слабокислотной ионообменной смолой, Элюат пропускают через колонку с амберлитом со скоростью 0,2-1,0 объе.и жидкости в ] ч нэ оЪъем сиолы и промывают через колонку с амберл'11см. Затем промываю^ pacTBOpjM дисупьфоиоаой кислоты до исчезновения целевого продукта из элюата, Рэстзор подают в устройство обратного осмос з плоского типа, где использованы полиамидные обессоливающие мембраны. Получен иый раствор высушисаюг распыпеиием при 1ЙО-200 С. Растворимость целевого продукта повышается о 10 г>с*з. Изобретение относится к химикофармэцевтической промышленности и касается способа получения вещества общей формулы: сульфоаденозил-1.-метионин n'(CH a ) m - (SO 3 H Z ) ,где п=1 до 2, т=3 до 12. Целью изобретения является повышение растворимости целевого продукта по сравнению с аналогом. П р и м е р 1. Получение 0^2 н, растворов дигульфокислоі общей формулы (CH^'tSO-jH)^ 75 л дистиллированной воды, 20 л 95%-ного этанола и 5 л н-бутанола добавляют к 21,6 кг (100 моль) l,*tдибромбутанз. Добавляют 26fk6 кг (210 моль) безводного сульфита натрия и смесь нагревают с обратным холодильником в течение 3 дней. По окончании реакции добавляют 20 л дистиллированной воды и смесь перего няют до тех пор, пока полностью не удалят спирты. Смесь разбавляют ворой до конечного объема 60 л и нагревают до тех пор, пока не происходит полного растворения. Полученную двунатриевую сопь 1 ^ бутандисульфокислоты оставляют кристаллизоваться в течение ночи при k С Продукт отфильтровывают и промывают 10 л воды. Маточные растворы концентрируют под вакуумом до объема 20 л и оставляют кристаллизоваться а іечение но^и при h С. Продукт отфильтровывают и промывают Ц л воды. Крисаплическую массу от двух фильтрований повторно суспендируют в 50 л воды и растворяют в горячих условиях. Раствор оставляю-? кристаллизоваться в течение ночи при ^°С. Продукт отфильтровывают и промывают 5 л воды. Натриевую соль оуіан (21) (22) (5D (32) 389865^/28-^ 15.05.85 20938 A/8'. 16.05.8** - > t (33) I T 1530!00 дисульфокислоты высушивают под вакуумом. Последующую фракцию продукта получают путем концентрирования маточных растворов до 10 л и выдерживания их для кристаллизации в течение ночи при *»°С с последующим отфильтровыванием продукта и сушки его под вакуумом. Таким образом получаю? 2Ь,2 кг JQ двунатриевой соли-1 ,*4-бутандисульфокислоты, моногидрата (90 моль, 90%ный молярный выход). Рассчитано, %: С 17,1, Н 3,6, S 22,9. fs C^H^OgC^Naj H 2 0 Найдено, %: С 17,1, Н 3,7, S 22,9. Готовят колонку, содержащую 200 л смолы Amberlite IR 120, предварительно^ активированной 6 н. раствором НС1 до тех пор, пока из элюата не исчез ион Na , и промывают ее дистиллированной водой до тех пор, пока из элюата не исчез ион С1~ . 25 25,2 кг двунатриевой соли-1',^-бута нди сульфокислот ы, моногидрата растворяют в 300 л воды и подают в головную часть колонны. Собирают элюат, содержащий 1,4-бутандисульфокислоту, gn и колонку промывают водой до тех пор, пока значение рН элюата не достигло Ц. Элюат разбавляют до конечного объема 900 л, чтобы получить 0,2 н. раствор 1 ,4-бутандисульфокислоты, которую используют для получения соотвегству- 5 ющей соли сульфоаденозил-Ь-метионина. Действуя аналогично, но используя 20^2 кг 1,3~дибромпропана в качестве исходного материала, получают 900 л 0,2 н. раствора 1,3-пропандисульфо- 40 кислоты. Используя 23 кг 1,5~дибромпентана, получают 900 л 0,2 н. раствора 1,5пентандисульфокислоты. Используя 2h,h кг 1.5-Дибромогек- 45 сана, получают 900 л 0,2 н. раствора 1,6-гександисульфокислоты. Используя 27,2 кг \,8-дибромоктана, получают 900 л 0,2 н. раствора 50 1 ,8-октандисульфокислоты. Используя 30 кг 1,10-дибромодекана, получают У00 л 0,2 н. раствора 1,1 0-декандисульфокислоты. П р и м е р 2. Получение corrtt сульфоаденозил-Ъ-метионин 1,5 (1 ,^-бутандисульфоната). 220 л эгилацетата и 220 л воды добавляют при окружающей температуре A к 1800 кг дрожжей, обогащенных сульфоаденозил-Ь-метионином (6,88 г/кг) по способу Шленка. После энергичного перемешивания в течение S0 мин добавляют 1000 л 0,35 н. раствора серной кислоты и перемешивание продолжают еще в течение 1,5 ч. Смесь фильтруют через вращающийся фильтр, который промывают водой, чтобы получить 2800 л раствора, содержащего *4,*t0 г/л сульфоаденозил-Ь-метионина, что равно У9,5% от количества, присутствующего в исходном материале. Раствор сульфоэденозил-Ь-метионинаполученный таким образом (рН 2,5), подают в установку ультрафильтрации, где используют трубчатые мембраны с задержкой 10000. Проникающий поток, прошедший через мембраны, собирают в подходящем сосуде, в то время как концентрат непрерывно рециркулируют до конечного объема 200 л. В этом месте добавляют дистиллированную воду и продолжают рециркулирование до тех пор, пока полностью не экстрагируют сульфоаденозил-Ь-метионин. Получают 3500 л лизата, значение рН которого доводят до рН 5 путем добавления 2 н. раствора NaOH. Готовят колонку, содержащую Й00 л смолы Amberlite CG 50 в Н* форме, которую тщательно промывают дистиллированной водой. Лизат пропускают через колонку смолы со скоростью 800 л/ч, которую поддерживают постоянной в течение всей процедуры. Затем последовательно пропускают 400 л дистиллированной воды, 3200 л 0,1 моль/л уксусной кислоты и 400 л дистиллированной воды. Сульфоаденозил-Ь-метионин элюируют 800 л 0,2 н. раствора 1,4-бутандисульфокислоты. 800 л полученного таким образом элюата содержит приблизительно 10 кг сульфоаденозил-Ь-метионина. Готовят колонку, содержащую 400 л смолы Amberlite XA h, которую предварительно активируют 800 л 0,1 н. раствора NaOH и 800 л 0,1 н. раствора HfcSC^s а затем тщательно промывают дистиллированной водой. Ранее полученный раствор сульфоаденозил-Ь-метионинз пропускают через колонку со скоростью 200 л/ч, 5 1530100 Сульфоадеиозил-Ьпричем скорость поддерживают постоянметионин ной в течение seer о процесса. Затем 1,3~Пропандисульчерез нее пропускают *t00 л 0,02 н. фокислота раствора 1,^-бутандисульфокислоты. З,3 Собирают элюат, содержащий сульфоаде0,2 соответствующий соли сульфоаденозилнозил-Ь-метионин (примерно 1000 л, L-метионин 1,5 (1»3~пропандисульфосодержащих 10 кг сульфоаденозил-Lнат). метионина). Раствор, полученный таким Продукт имеет вид кристаллического образом, подают в устройство обратно- ) 0 белого порошка, который растворим го осмоса плоского типа, где испольs воде до 30 вес.% с образованием зованы полиамидные обессоливающие бесцветного растаора и не растворим мембраны. В этом устройстве раствор в обычных органических растворителях. сульфоаденозил-Ъ-метионина концентриТонкослойная хроматография показыруют до 80 л, содержащих 9.9 кг суль- 15 вает, что продукт не содержит никаких фоаденозил-Ь-метионина. Добавляют примесей. 5 л 2 н. раствора бутандисульфокислоты. Раствор, полученный таким обраРассчитано, %: N 11,9; С 33,2; зом, подают в распылительную осушительную установку, в которую подают 20 воздух при 160 С. Сухой продукт неНайдено, %: N П , 9 ; С 33,1, прерывно выводят их установки. Н Ультрафиолетовый спектр продукта Получают 18 кг порошкообразного показывает максимум поглощения (в бупродукта, имеющего при анализе сле25 фере при рН k) при 258,5 нм с Е 1 < Г в = дующий состав, %\ Сульфоаденозил-LП р и м е р 4. Получение соли сульметионин фоаденозил-Ь-метионин»1,5 (1,5-пентан1,^-Бутандисульдисульфоната). фокислота Следуют методике примера 2, но ис0,2 Зо пользуют 1,5-пентандисульфокислоту соответствующий соли сульфоаденозилвместо 1,^-бутандисупьфокисяоты. ПоL-метионин. 1,5 (1,^-бутандисульфолучают 18,5 кг порошка, который при нат) . анализе показывает следующий состав, Продукт имеет вид кристаллического белого порошка, который растворим в 35 Сульфоаденозилводе до 30' вес.% с образованием бесL-метионин 53,3 цветного раствора и не растворим в 1,5'Пентадисульфообычных органических растворителях. кислота С помощью тонкослойной хроматогра0,2 фии найдено, что продукт не содержит соответствующий соли сульфоаденозилкаких-либо примесей. L-метионинЧ,5 (1,5-пентандисульфоРассчитано, %\ N 11^6; С 3і»,7, ната). Н 5,1. c H N s< Продукт имеет форму кристалличесi5 2 I 6°5 b5C< 1 H f O o 6 s i кого белого порошка, который раствоНайдено, %\ N 11,5; С З М ; 45 рим в воде до 30 вес.% с образованием Н 5,1. бесцветного раствора и не растворим Ультрафиолетовый спектр продукта в обычных органических растворителях. показывает максимум поглощения (в Тонкослойная хроматография показыбуфере при рН к) при 258,5 нм с Е = вает, что продукт не содержит никаких % 50 приМесей. -193. П р и м е р 3. Получение соли Рассчитано, %: N 11,3, С 36,2, сульфоаденозил-Ь-метионин •!,5 (1,3" Н5^. пропандисульфоната). C A N 6 ° ? S '• Ь 5 C j H ^ S , , Следуют методике примера 2, но Найдено, %: N 11 ,*», С 3 6 , 2 , используют 1,3-пропандисульфбкислоту 55 Н 5,3. вместо 1,^-бутандисульфокислоты. Ультрафиолетовый спектр продукта Получают 17,^5 кг порошка, кото(в буфере рН * ) показывает максимум t .рый при анализе показывает следующий поглощения при 258,5 нм с Е(»/о=188. состав, %: н М. 8 1530100 Ультрафиолетовый спектр продукта П р и м е р 5. Получение соли суль(в буфере рН k) показывает максимум фоаденозил-1,-метионин И ,5 (1,6-гексанпоглощения при 258,5 нм с Е^7=173". дисульфоната). П р и м е р 7. Получение соли Следуют методике примера 2, но сульфоаденозил-Ь-метионин 1,5 (1 ,10используют 1,6-гександисульфокислоту декандисульфоната). вместо 1 ,*»-бутандисульфокислоты. ПоСледуют методике примера 2, но лучают 19 кг порошка, который при 1,10-декандисульфокислоту используют анализе дает следующий состав, %: Сульфоаденозил-L10 вместо 1,^-бутандисульфокислоты. Получают 21 кг порошка, который при метионин 51,8 анализе дает следующий состав, %: 1,6-ГександисульфоСульфоаденозил-Lкислота 18 * метионин ^6,8 Н£0 0,2 1,Т 0-Декандисульсоответствующий соли сульфоаденозил- 15 фокислога 53 Ь-метионин*1,5 (1,6-гександисульфоН^О 0,2 ната). соответствующий соли сульфоаденозилПродукт имеет вид кристаллического L-метионин «.1,5 (1,1 0-декандисульфонабелого порошка, который растворим в воде до 30 вес Л с образованием 20 та). Продукт имеет вид кристаллического бесцветного раствора и не растворим белого порошка, который растворим в в обычных органических растворителях. воде до 20 вес.% с образованием Тонкослойная хроматография показыбесцветного раствора и не раст.ворим вает, что продукт не содержит никаких 25 в обычных органических растворителях. примесей. Тонкослойная хроматография показыN ТО, С 37,6; Рассчитано, вает, что продукт свободен от какихН 5,6. либо примесей. C H O S Рассчитано, %: N 9,8; С *»2,3,' Найдено, \ N 10,8, С 37,5, 30 Н 6,5. Н 5,6. Ультрафиолетовый спектр продукта 6S 4 Н а й д е н о , %: N У , 9 ; С k2,k; H 6 , 5 . С k2,k; (в буфере рН к) показывает максимум Ультрафиолетовый спектр продукта поглощения при 258,5 нм с E f ^=i82. (в буфере рН ^t) показывает максимум П р и м е р 6. Получение соли сульфоаденозил-Ь-метионин 1,5 (1,8- 35 при 258,5 нм с Е, 7 =1б4. Положительный эффект заключается октандисульфоната). в повышении растворимости по сравнеСледуют методике примера 2, но нию с аналогами, поскольку полученные '1,8-октандисульфокислоту используют соединения в 10 раз более растворимы. вместо 1,^-бутандисульфокислоты. Получают 20 кг порошка, который при 40 Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я анализе дает следующий состав, %: I Сульфоаденозил-LСпособ получения соли сульфоаденометионин зил-£-метионина общей формулы 1,8-0ктандисульфокислота 50,5 45 где п - 1 . . . 2 ; Нг0 0,2 m - 3...12, Продукт имеет вид кристаллического заключающийся в том, что добавляют белого порошка, который растворим культуры дрожжей Saccharomyces Cereв воде до 30 вес.% с образованием бесцветного раствора и не растворим 50 v i s i a l , Torulopsic u t i l i s , Candida u t i l i s к целевому продукту, лизируют в обычных органических растворителях. .клетки раствора аоды и этилэцетата Тонкослойная хроматография показыпри соотношении 1:1, затем 0,35 н. вает, что продукт свободен от какихсерной кислоты, очищают лиззт ультралибо примесей. фильтрацией через мембраны с пределом Рассчитано, %\ N 10,^; С 40,0*, 55 пор 10000 дальтон, пропускают лизат Н 6,0. через колонку со слабокислотной ионообменной смолой в Н-форме при рН 3,5~ Найдено, %: Ю,