Спосіб діагностики апоптозу клітин у хворих на артеріальну гіпертензію з глюкометаболічними порушеннями

Реферат: Спосіб діагностики апоптозу імуноферментним методом. клітин включає визначення рівня FasR/FasL системи UA 77915 U (54) СПОСІБ ДІАГНОСТИКИ АПОПТОЗУ КЛІТИН У ХВОРИХ НА АРТЕРІАЛЬНУ ГІПЕРТЕНЗІЮ З ГЛЮКОМЕТАБОЛІЧНИМИ ПОРУШЕННЯМИ UA 77915 U UA 77915 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до медицини, а саме до внутрішніх хвороб, і може бути використаною для діагностики апоптозу клітин у хворих на артеріальну гіпертензію з глюкометаболічними порушеннями. Артеріальна гіпертензія (АГ), незважаючи на певний успіх у вивченні патогенезу, клініки та удосконалення лікування, залишається одним із розповсюджених та прогностично несприятливим серцево-судинним захворюванням на Україні та у всьому світі. Поширеність АГ вдвічі вища в осіб з цукровим діабетом (ЦД) щодо загальної популяції. При цьому АГ є основним фактором ризику розвитку серцево-судинних ускладнень у хворих на ЦД 2 типу, підвищуючи частоту розвитку ішемічної хвороби серця (ІХС), інсульту, ретинопатії та нефросклерозу. Так, поєднання АГ та ЦД підвищує ризик серцевих та цереброваскулярних ускладнень у середньому в 5-6 разів порівняно з хворими на АГ без ЦД [Горбась І.М. Програма профілактики та лікування артеріальної гіпертензії в Україні: підсумки виконання / І.М. Горбась // Здоров'я України.-2011. № 3 (18). - С. 32-34.]. Апоптоз - складний активний процес, в результаті якого здійснюється фізіологічно запрограмована загибель клітин при ембріогенезі та нормальній життєдіяльності тканин для підтримки клітинного гомеостазу організму. З іншого боку, апоптоз відіграє важливу роль при патологічних станах, які обумовлені впливом різноманітних ушкоджуючих факторів [Ковалева О.Н. Цитокины: общебиологические и кардиальные эффекты / О.Н. Ковалева, Т.Н. Амбросова, Т.В. Ащеулова, С.В. Демьянец. - Харьков, 2007.-226 с.]. Існує припущення, що висока концентрація циркулюючої глюкози призводить до порушення секреції інсуліну та функції β-клітин підшлункової залози при ЦД. У крайньому разі, один із цих ефектів може бути спричинений глюкозо-індукованим апоптозом β-клітин [McKenzie M.D. Glucose Induces Pancreatic Islet Cell Apoptosis That Requires the ВНЗ-Only Proteins Bim and Puma and Multi-BH Domain Protein Bax / M.D. McKenzie, E. Jamieson, E.S. Jansen [et al.] // Diabetes.2010. - Vol. 59 (3). - P. 644-652.]. Апоптотична загибель клітин контролюється взаємодією проапоптотичних та протиапоптотичних факторів. Одними з екзогенних факторів, які запускають апоптоз та використовуються як діагностичні маркери апоптозу, є рецептори смерті сімейства прозапального цитокіна - фактора некрозу пухлин-α (ФНП-α), до числа яких входять ФНП-Р1, Fas (Fibloblast associated), DR3 (Death Receptor 3), DR4, DR5, DR6 та інші. У випадку Fasзалежного апоптозу, рецептор Fas (FasR) індукує апоптотичний сигнал шляхом зв'язування зі своїм лігандом - Fas лігандом (FasL), так звана "FasR/FasL" система [Elmore S. Apoptosis: a review of programmed cell death / S. Elmore // Toxicol Pathol.-2007. - Vol. 35 (4). - P. 495-516.]. Даний спосіб діагностики апоптозу клітин є найбільш близьким до того, що заявляється, за технічною суттю і результатом, який може бути досягнутим, тому його вибрано як найближчий аналог. Основним недоліком способу - найближчого аналога є те, що він виявляє проапоптотичні фактори при патологічних станах та не доказує їх специфічності для окремих патологій, в тому числі для хворих на артеріальну гіпертензію з глюкометаболічними порушеннями. Крім того, відсутні кількісні значення проапоптотичних факторів для даного контингенту хворих. У зв'язку з вищевикладеним, в основу корисної моделі поставлено задачу підвищення точності діагностики апоптозу клітин у хворих на артеріальну гіпертензію з глюкометаболічними порушеннями шляхом оцінки плазматичного рівня маркерів апоптозу та їх кількісних значень. Задачу, яку поставлено в основу корисної моделі, вирішують тим, що у відомому способі діагностики апоптозу клітин, що включає визначення рівня FasR/FasL системи, згідно з корисною моделлю, у хворих на АГ з глюкометаболічними порушеннями визначають плазматичний рівень FasR та FasL імуноферментним методом і при значеннях FasL 6,8 нг/мл і більше, a FasR 8,01 нг/мл і більше діагностують апоптоз клітин. Технічний результат корисної моделі обумовлений тим, що встановлені плазматичні маркери апоптозу β-клітин панкреатичної тканини та їх кількісна оцінка. Спосіб виконують наступним чином: у хворих на АГ з глюкометаболічними порушеннями визначають плазматичний рівень FasR та FasL імуноферментним методом. При значеннях FasL 6,8 нг/мл і більше, a FasR 8,01 нг/мл і більше діагностують апоптоз клітин. Ефективність способу доведена експериментально. Відповідно до поставленої задачі дослідження, пацієнти були розділені залежно від рівня апоптотичних маркерів у плазмі крові: FasL та FasR. Тертилі за рівнем FasL становили 6,4 пг/мл та 6,8 пг/мл, таким чином виділено тертильні групи: 1 групу з інтервалом значень менше 6,4 пг/мл, 2 групу з інтервалом значень 0,4-6,7 пг/мл, 3 групу з інтервалом значень 6,8 пг/мл і більше (табл. 1). 60 1 UA 77915 U Таблиця 1 Характеристика пацієнтів з АГ за тертильними групами рівня FasL Пацієнти, n (%) АГ АГ та ЦД 2 типу Абдомінальне ожиріння Нормальна маса тіла Надмірна маса тіла Ожиріння 1 ступеня Ожиріння 2 ступеня Ожиріння 3 ступеня Інсулінорезистентність Гіперглікемія Гіперінсулінемія 5 10 Групи за тертилями рівня FasL 1 група, n=23 2 група, n=36 3 група, n=45 23 (31,5 %) 34 (46,6 %) 16 (21,9 %) 0 2 (6,5 %) 29 (93,5 %) 19 (24,4 %) 27 (34,6 %) 32 (41,0 %) 8 (36,4 %) 5 (22,7 %) 9 (40,9 %) 15 (34,9 %) 11(25,6 %) 17 (39,5 %) 4 (17,4 %) 10 (43,5 %) 9 (39,1 %) 5 (22,7 %) 8 (36,4 %) 9 (40,9 %) 0 2 (66,7 %) 1 (33,3 %) 12 (34,3 %) 9 (25,7 %) 14 (40,0 %) 5 (20,8 %) 1 (4,2 %) 18 (75,0 %) 8 (30,8 %) 10 (38,5 %) 8 (30,8 %) Як видно з табл. 1, простежується тенденція зростання частоти глюкометаболічних порушень паралельно зростанню плазматичного рівня FasL. Так, у 3 тертильній групі з максимальним плазматичним рівнем FasL відзначено максимальний відсоток пацієнтів на АГ з супутнім ЦД 2 типу, абдомінальним ожирінням, нормальною та надмірною масою тіла, ожирінням 2 ступеня, IP, гіперглікемією. При проведенні порівняльної характеристики у тертильних групах за рівнем FasL встановлено, що вік пацієнтів 2 та 3 групи достовірно перевищував вік пацієнтів 1 групи (табл. 2). Антропометричні параметри, такі як окружність талії (ОТ), маса тіла, ІМТ (індекс маси тіла); рівень систолічного артеріального тиску (CAT), діастолічного артеріального тиску (ДАТ), тривалість АГ у 2 тертильній групі перевищували аналогічні показники 1 та 3 групи, однак ці відмінності виявилися недостовірними (р>0,05). Разом з тим, показники вмісту глюкози та НЬ АІс характеризувалися максимальними значеннями у пацієнтів 3 групи з максимальним рівнем FasL в плазмі крові хворих на АГ. 15 Таблиця 2 Антропометричні, гемодинамічні, вуглеводні показники пацієнтів з АГ, розподілених за тертилями рівня FasL, Me (LQ; UQ) Показники Вік, років ОТ, см Маса тіла, кг Зріст, м 2 ІМТ, кг/м CAT, мм рт. ст ДАТ, мм рт. ст Тривалість АГ, років -1 ЧСС, с Інсулін, мкОД/мл Глюкоза, ммоль/л НЬАIc, % НОМА FasL, пг/мл Групи за тертилями рівня FasL 1 група, n=23 2 група, n=36 3 група, n=45 54 (41; 64) 61 (50; 67)* 60 (49; 69)* 100 (82; 113) 102 (88;121) 100 (84; 116) 82 (70; 96) 89 (70; 115) 85 (66; 100) 1,71 (1,62; 1,77) 1,71 (1,58; 1,82) 1,66 (1,54; 1,79) 28,73 (23,92; 35,44) 31,05 (24,91; 37,98) 28,34 (23,31; 37,38) 140 (120; 180) 155 (120; 195) 150 (130; 190) 90 (80; 100) 93 (80; 105) 90 (80; 105) 5,00 (2,00; 15,00) 10 (3; 25) 8,00 (2,00; 19,00) 80 (68; 92) 80 (65; 92) 85 (76; 96)** 12,47 (7,30; 30,18) 8,63 (7,50; 26,67) 9,02 (7,50; 22,63) 4,79 (4,00; 6,09) 4,68 (3,90; 5,13) 5,20 (4,30; 7,40)** 5,84 (4,10;7,75) 5,94 (4,10; 7,98) 7,00 (4,10; 9,70) 2,87 (1,39; 8,40) 1,81 (1,34; 6,10) 2,24 (1,54; 5,40) 6,20 (6,10; 6,30) 6,53 (6,40; 6,70)* 7,50 (6,80; 8,23)* ** 2 UA 77915 U Продовження таблиці 2 Показники FasR, пг/мл Групи за тертилями рівня FasL 1 група, n=23 2 група, n=36 3 група, n=45 7,70 (7,30; 8,10) 7,60 (7,30; 8,01) 8,20 (7,50; 8,58)* ** Примітки: ОТ - окружність талії; ІМТ - індекс маси тіла; CAT - систолічний артеріальний тиск; ДАТ діастолічний артеріальний тиск; ЧСС - частота серцевих скорочень; НОМА - індекс інсулінорезистентності. 1. * - відмінності відносно 1 тертильної групи вірогідні при р