5-(4-нітро-, (4-метокси), (3,4,5-триметокси)феніл)-4-аміно(н)-3-тіо-1,2,4-триазоли, що проявляють антиоксидантну активність

Реферат: 5-(4-нітро-, (4-метокси), (3,4,5-триметокси)феніл)-4-аміно(Н)-3-тіо-1,2,4-триазоли: 5-(4-нітрофеніл)-4-аміно-1,2,4-триазол-3-тіон формули: N O2N N N SH NH2 , 5-(4-метоксифеніл)-1,2,4-триазол-3-тіон формули: N H3CO NH SH N , 5-(3,4,5-триметоксифеніл)-1,2,4-триазол-3-тіон формули: UA 80686 U (12) UA 80686 U H3CO N H3CO H3CO NH SH N , що проявляють антиоксидантну активність. UA 80686 U 5 10 Корисна модель належить фармації, медицини та ветеринарії, та може бути використана у створенні нових біологічно активних сполук, а також оригінальних лікарських засобів у ряді похідних 1,2,4-триазолу і застосованою для фармакокорекції станів, що викликані наявністю вільних радикалів, які приводять до росту пухлин, а також ішемічної хвороби серця, цукрового діабету, ожиріння, тощо. Найактивнішими антиоксидантами є вітаміни А, С, Е, селен, рутин, кверцетин. Але застосування вітамінів може призвести до їх кумуляції в тканинах організму (вітаміни А і Е), що викликає діарею. Слід зазначити, що для отримання вираженого антиоксидантного ефекту необхідне довготривале застосування вищевказаних засобів в кількостях, які перевищують середні терапевтичні дози, що приводить до гіпервітамінозу, а також викликає алергічні реакції. Найбільш близьким аналогом речовин, що заявляються, по фармакологічному ефекту є токоферолу ацетат (вітамін Е), що має високу антиоксидантну активність (Машковский М.Д. Лекарственные средства. - X.: Торсинг, 1998. -Т. 2.-592 с. (с. 95-96)), він широко застосовується в медичній практиці і має формулу: CH3 O O H2 C H3 C O 15 20 H2 C H2 C CH3 C H CH3 H2 C CH3 (H2 C)2 C H CH3 CH3 . Дана речовина хоча і має антиоксидантну дію, однак її величина недостатньо висока. Крім того, даний препарат обмежено застосовують для лікування осіб, хворих на тяжкий кардіосклероз чи інфаркт міокарду. Прототипом для речовин, що заявляються, є 4-феніл-1,2,4-триазол-3-тіон, що виявляє антиоксидантну активність (Пат. України №43771; Заявл. 27.04.2009; Опубл. 25.08.2009, Бюл. № 16.) і має формулу: N N SH N 25 30 35 . Суттєві ознаки прототипу і корисної моделі, що збігаються, є такі: наявність в структурі циклічних органічних фрагментів ароматичного і гетероциклічного характеру; наявність у складі двовалентного атому сірки; молекули даних речовин містять атоми вуглецю, що мають ступінь окиснення -3,-2 і -1. Але прототип у порівнянні зі сполуками, що заявляються, менш активно пригнічує процеси вільнорадикального окиснення. Таким чином, прототип відповідно має менші показники антиоксидантної активності. В основу корисної моделі поставлено задачу створення нових біологічно активних сполук, що можуть знайти своє застосування як оригінальні лікарські засоби в ряду 1,2,4-триазолу і проявляють антиоксидантну активність. Поставлена задача вирішується тим, що 5-(4-нітрофеніл)-4-аміно-1,2,4-триазол-3-тіон містить при N4-aтомів ядра 1,2,4-триазолу аміногрупу, в положенні 5 ядра 1,2,4-триазолу нітрофенільний радикал, а також має в своєму складі двовалентний атом сірки і має формулу: N O2N N N SH NH2 сполука 1, 1 UA 80686 U 5-(4-метоксифеніл)-1,2,4-триазол-3-тіон містить при N5-атомі ядра 1,2,4-триазолу метоксифенільний радикал, а також має в своєму складі двовалентний атом сірки і має формулу: N SH H3CO 5 NH N сполука 2, 5-(3,4,5-триметоксифеніл)-1,2,4-триазол-3-тіон містить при N5-атомі ядра 1,2,4-триазолу триметоксифенільний радикал, а також має в своєму складі двовалентний атом сірки і має формулу: H3CO N H3CO NH SH N H3CO 10 15 20 25 30 35 40 45 50 сполука 3. Сполуку 1, що заявляється, отримують взаємодією 2-(4-нітробензоїл)гідразинокорботіону з гідразин гідратом та подальшою циклізацією утвореного N'-(гідразинокарбонотіоіл)-4нітробензогідразиду при температурі 100-105 °C. Приклад. В літрову колбу, обладнану змішувачем, холодильником, термометром завантажують 25,7 г (0,1 моль) 2-(4-нітробензоїл)гідразинокорботіону, 15 мл гідразин гідрату. Суміш при постійному перемішуванні нагрівають до 100 С, витримують 2 години (при 100-105 °C), охолоджують до 50 С, додають 5мл води та кислоти хлоридної до рН=7, залишають на 24 години. Осад відфільтровують, промивають водою і висушують на повітрі. Вихід складає 20,6 г (86 % в розрахунку на 2-(4-нітробензоїл)гідразинокорботіон). Жовта кристалічна речовина з Тпл. 220222 °C (з кислоти ацетатної), мало розчинна у воді, розчинна в органічних розчинниках. Знайдено, % С 40,37, Н 2,92, N 29,48, S 13,50. C8H7N5O2S. Вирахувано, % С 40,50, Н 2,97, N 29,52, S 13,52. -1 В ІЧ-спектрі сполуки, що заявляється наявні смуги поглинання -C=N-груп при 1527 см , C-S-1 -1 -1 групи при 607см , смуги коливання NH2-групи при 3563 см , при 1180 см наявна смуга поглинання, що характерна для тіокетонів, які містять групу C=S. Сполуку 2, що заявляється, отримують шляхом циклізації 2-(4метоксибензоіл)гідразинкарботіоаміду в лужному середовищі при температурі 100-105 °C. Приклад. В літрову колбу, обладнану змішувачем, холодильником, термометром завантажують 22 г (0,1 моль) 2-(4-метоксибензоіл)гідразинкарботіоаміду, 100 мл 10 % розчину натрій гідроксиду. Суміш при постійному перемішуванні нагрівають до 100 °C, витримують 1 годину (при 100105 °C), охолоджують до 50 С, додають кислоти ацетатної до рH=7, залишають на 24 години. Осад відфільтровують і висушують. Вихід складає 19,3 г (95 % в розрахунку на 2-(4метоксибензоіл)гідразинкарботіоамід). Біла кристалічна речовина з Тпл. 138-140 °C (із кислоти ацетатної), мало розчинна у воді, розчинна в органічних розчинниках. Знайдено, % С 52,08, Н 4,39, N 20,23, S 15,47. C9H9N3OS. Вирахувано, % С 52,16, Н 4,38, N 20,27, S 15,47. -1 В ІЧ-спектрах сполуки, що заявляється наявні смуги поглинання -C=N-груп при 1545 см , C-1 -1 S-групи при 618 см , смуги коливання фенільного кільця при 1611 см , валентні коливання -1 -1 ароматичних СН - груп при 3090 см , а також наявна смуга поглинання при 2845 см , характерна для ароматичної метоксигрупи. Сполуку 3, що заявляється, отримують шляхом циклізації 2-(3,4,5триметоксибензоіл)гідразинкарботіоаміду у в лужному середовищі при температурі 100-105 °C. Приклад. В трилітрову колбу, обладнану змішувачем, холодильником, термометром завантажують 28,5 г (0,1 моль) 2-(3,4,5-триметоксибензоіл)гідразинкарботіоамід у, 100 мл 10 % розчину натрій гідроксиду. Суміш при постійному перемішуванні нагрівають до 100 °C, витримують 1 годину (при 100-105 °C), охолоджують до 50 °C, додають кислоти ацетатної до рН=7, залишають на 24 години. Осад відфільтровують і висушують. Вихід складає 24,8 г (93 % в розрахунку на 2-(3,4,5 2 UA 80686 U 5 10 15 20 25 30 35 триметоксибензоіл)гідразинкарботіоамід). Біла кристалічна речовина з Тпл. 223-225 С (із кислоти ацетатної), мало розчинна у воді, розчинна в органічних розчинниках. Знайдено, % С 54,29, Н 4,03, N 23,78, S 18,07. CH13N3O3S. Вирахувано, % С 54,22, Н 3,98, N 23,71, S 18,09. -1 В ІЧ-спектрах сполуки, що заявляється наявні смуги поглинання -C=N-груп при 1545 см , C-1 -1 S-групи при 618 см , смуги коливання фенільного кільця при 1611 см , валентні коливання -1 -1 ароматичних СН - груп при 3090 см , а також наявна смуга поглинання при 2863 см , характерна для ароматично зв'язаної метоксигрупи. Дослідження антиоксидантної активності сполук, що заявляються, проводили in vitro методом неферментативного ініціювання вільнорадикального окислення, яку оцінювали за концентрацією ТБК-реактантів (ТБК - тіобарбітурова кислота). Реактиви та їх приготування: а) суспензія яєчних ліпопротеїдів - до 1 яєчного жовтка додають 1 л фосфатного буферного розчину с рН 7,4 (визначають за допомогою рН-метру); б) 20 % розчин трихлоретанової кислоти - 20 г трихлоретанової кислоти розчиняють в 80 г води очищеної; в) 0,8 % розчин тіобарбітурової кислоти - 800 мг тіобарбітурової кислоти поміщають в мірну колбу на 100 мл і доводять до мітки водою очищеною. г) 10 % розчин ферум (II) сульфату - 10 г ферум (II) сульфату розчиняють в 90 мл води очищеної. Хід проведення експерименту. До 4 мл суспензії яєчних ліпопротеїдів додають 0,5 мл розчину сполук 1-9 в димексиді в 3 концентрації 1-10- моль/л, 1 мл 10 % розчину ферум (II) сульфату. Суміш перемішують і витримують 1 годину при 37 °C в термостаті. До 1 мл суміші додають 1 мл 20 % розчину трихлоретанової кислоти і обертають в центрифузі 15 хв при 3000 об/хв. Надосадну рідину змішують з 1 мл 0,8 % розчину тіобарбітурової кислоти і поміщають на 1 годину в парову баню, після чого додають 4 мл бутанолу-1 і обертають в центрифузі 15 хв при 3000 об/хв. Відбирають 2 мл верхнього бутанольного шару і вимірюють його оптичну густину при довжині хвилі 532 нм. Контрольну пробу готували аналогічно, але без додавання досліджуваних сполук. В якості препарату порівняння використовували токоферолу ацетат, що вводили в аналогічних дозах. Антиоксидантну активність розраховували за формулою: Eконтроль  Е дослід AOA   100 % Еконтроль , де AOA - антиоксидантна активність, % Eконтроль - оптична густина контрольного розчину; Е дослід - оптична густина розчину, що містив досліджувані сполуки (або токоферолу ацетат). Результати антиоксидантної активності наведені в таблиці. Таблиця № з/п 1 2 3 4 5 Речовина Контроль 5-(4-нітрофеніл)-4-аміно-1,2,4-триазол-3-тіон (сполука 1) 5-(4-метоксифеніл)-1,2,4-триазол-3-тіон (сполука 2) 5-(3,4,5-триметоксифеніл)-1,2,4-триазол-3-тіон (сполука 3) Токоферолу ацетат (вітамін Е) ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 40 5-(4-нітро-, (4-метокси), (3,4,5-триметокси)феніл)-4-аміно(Н)-3-тіо-1,2,4-триазоли: 5-(4-нітрофеніл)-4-аміно-1,2,4-триазол-3-тіон формули: N O2N N N NH2 SH , 3 Е 0,110 0,012 0,012 0,011 0,023 АОА, % 89,1 89,1 90,0 79,0 UA 80686 U 5-(4-метоксифеніл)-1,2,4-триазол-3-тіон формули: N NH SH H3CO N , 5-(3,4,5-триметоксифеніл)-1,2,4-триазол-3-тіон формули: H3CO N H3CO NH SH N H3CO 5 , що проявляють антиоксидантну активність. Комп’ютерна верстка Л. Литвиненко Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 4