Похідні хіназолону, що проявляють антиоксидантну активність

Похідні хіназолону, що проявляють антиоксидантну активність: R2 H Корисна модель належить до галузі медицини, а саме до фармакологічно активних речовин, що можуть використовуватися для створення засобів захисту ядерного хроматину від дії галогенотоксинів. Сполуки (1-3) загальної формули: R2 H отруєних галогенотоксином - тетрахлорметаном (ТХМ) тварин, проявляє антиоксидантну активність (приклади 3, 4). При цьому дибунол характеризується токсичністю (ЛД50) 890мг/кг (щури, per os), що є його недоліком. В основу корисної моделі поставлена задача: синтез нових хімічних сполук, які мають здатність до інгібування процесів перекисного окиснення ліпідів у ядерному хроматині, і які при цьому характеризуються низькою токсичністю. Ізольовані фракції ядерного хроматину, репресований (РХ) та, особливо його активна фракція - транскрипційно активний хроматин (TAX), є більш чутливою експериментальною моделлю за умов in vitro для виявлення антиоксидантної дії фізіологічно активних сполук [2]. Поставлена задача вирішується тим, що об'єкт корисної моделі - похідні хіназолону (1-3) мають здатність до інгібування процесів перекисного окиснення ліпідів у ядерному хроматині, та є значно менше токсичними, ніж прототип - дибунол. Об'єкт корисної моделі отримували в дві стадії. На першій стадії проводили хлорування відповідного урацилу хлороксидом фосфору, а на другій - проводили взаємодію утвореного в першій стадії відповідного 2,4-дихлорпіримідину з 2-аміно бензойною кислотою для сполуки 3 та з її метиловим естером для сполук 1, 2. Активність сполук (1-3) вивчали на ядерному хроматині клітин печінки інтактних та отруєних ТХМ щурах-самцях лінії Вістар віком 3 міс та масою 150-200г. Тетрахлорметан вводили в дозі 1 Cl R1 O де R'=CH3, R"=CH3COO(1); R'=H, R"=CH3COO- (2); R'=CH3, R"=COOH (3). Відомо, що галогеновмісні речовини викликають пошкодження ядерного геному клітини, порушення первинної структури ДНК тощо. Процеси ліпопероксидації є фізіологічно необхідними для нормального функціонування генома клітини. Гиперактивація цих процесів спричинює порушення структурно-функціонального стану ядерного хроматину [1]. Саме тому ефективними засобами захисту ядерного геному за умов дії галогенотоксинів є сполуки, що мають антиоксидантні властивості. До них належать такі, як дибунол (аналог корисної моделі). За найближчий аналог прийнято класичний фенольний антиоксидант - дибунол, який у ядерному хроматині клітин печінки як інтактних, так і Cl R1 (13) U . 50962 x H O x H (11) N N N N UA N N (19) N N 3 50962 ЛД50. Фракції РХ та TAX із клітин печінки виділяли за методикою [3]. Стан перекисного окислення ліпідів (ПОЛ) в хроматині оцінювали за швидкістю накопичення малонового діальдегіду (МДА) в системах НАДФН-залежного ПОЛ (НЗП), аскорбатзалежного ПОЛ (АЗП) і системі неініційованого контролю (НК) [4]. Визначали відсоток інгібування накопичення продуктів ПОЛ по відношенню до контролю (проби без додавання антиоксиданту). Приклади конкретного виконання. Приклад 1. Загальна методика синтезу похідних хіназолону. Стадія 1. Наважку 20г урацилу (або 5метилурацилу) в 80мл хлороксиду фосфору нагрівають до кипіння та утворення розчину, який кип'ятять ще 5 год. Надлишок хлороксиду фосфору відганяють, залишок виливають на лід та обробляють діетиловим етером, екстрагуючи відповідний 2,4-дихлорпіримідин. З екстракту упарюють розчинник, залишок сушать та кристалізують. 2,4Дихлорпіримідин - вихід 13г (48,9%); 2,4-дихлор-5метилпіримідин - вихід 18,81г (73%). Стадія 2. У реактор (з мішалкою, зворотним холодильником, термометром) поміщають 0,01гмоль відповідного 2,4-дихлорпіримідину та 0,02гмоль 2-амінобензойної кислоти в 100мл нбутанолу (або її метилового естеру). Кип'ятять протягом 4 год. Осад відфільтровують, сушать, кристалізують. 2-(2'-Карбометоксифеніламіно)-3-метил-6Нпіримідо[2,1-в]хіназолін-6-ОН, гідрохлорид (1): вихід 2,67г (80%), Тпл.256-258°С (з розкл.), Rf 0,62 (пропанол-оцтова кислота-вода=4:1:1). 2-(2'Карбометоксифеніламіно)-6Н-піримідо[2,1в]хіназолін-6-он, гідрохлорид (2): вихід 2,70г (70%), Тпл 254-256°С (з розкл.), Rf 0,47 (пропанол-оцтова Показник НЗП АЗП НК НЗП АЗП НК 4 кислота-вода=4:1:1). 2-(2'-Карбоксифеніламіно)-3метил-6Н-піримідо[2,1-в]хіназолін-6-ОН, гідрохлорид (3): вихід 2,87г (75%), Тпл 289-292°С (з розкл.), Rf 0,52 (пропанол-оцтова кислота-вода=4:1:1). Елементний аналіз сполук (1-3) відповідає розрахованому. Приклад 2. Визначення параметрів гострої токсичності сполук (1-3) та дибунолу було проведено на білих нелінійних мишах масою (20±2)г. Для проведення статистичної обробки кожний експеримент був повторений 5 разів. Термін спостереження після введення сполук (1-3) та дибунолу складав 14 діб.Розрахунок показника гострої токсичності був проведений за модифікованим методом Лічфілда-Вілкоксона. Порівняння величин гострої токсичності вказує, що сполуки (1-3) є понад 2,8 рази менше токсичні, ніж дибунол (табл.1). Таблиця 1 Показники гострої токсичності сполук (1-3) у порівнянні з дибунолом Сполука 1 2 3 Дибунол ЛД50, мг/кг (per os) >2500 >2000 >2000 890 Приклад 3 Швидкість накопичення МДА in vitro у фракціях хроматину печінки інтактних щурів при додаванні досліджених сполук у концентрації 10-5М % інгібування швидкості накопичення МДА по відношенню до контролю # Дибунол 1 2 3 РХ 83,68 87,14 90,63 91,47 81,94 76,40 100,18 105,25 74,03 97,32 69,58 77,00 TAX 85,35 87,23 83,29 89,70 78,12 78,12 84,73 121,12 81,56 64,13* 78,68 88,83 Примітки в цій та наступній таблиці: 1. # - контроль для всіх показників прийнято за 100 %. 2. * - р ≤ 0,05 по відношенню до контролю. Приклад 4 Швидкість накопичення МДА in vitro у фракціях хроматину печінки отруєних ТХМ (1 ЛД50) щурів при додаванні досліджених сполук у концентрації 10-5М 5 Показник НЗП АЗП НК НЗП АЗП НК 50962 6 % інгібування швидкості накопичення МДА по відношенню до контролю # Дибунол 1 2 3 РХ 83,98 80,99 80,33 85,29 76,82 86,34 93,05 95,82 104,60 83,80 88,23 95,74 TAX 91,28 98,89 87,00 95,02 69,75* 83,16 66,06* 94,43 88,39 55,44* 80,85 66,43* Сполуки (1-3) проявляють у фракціях TAX більший ефект, ніж дибунол, а у фракціях РХ ефект близький до дибунолу. Джерела інформації 1. Губский Ю.И., Левицкий Е.Л., Жила В.А., Литошенко А.Я. Молекулярные механизмы повреждения фракционированного хроматина печени тетрахлорметаном // Вопр. мед. хим. - 1992. - Т. 38, № 3. - С. 54-58. 2. Левицкий Е.Л., Губский Ю.И. Свободнорадикальные повреждения ядерного генетическо Комп’ютерна верстка А. Крулевський го аппарата клетки // Укр. биохим. журн. - 1994. - Т. 66, № 4. - С. 18-33. 3. Чихиржина Г.И., Бубякина В.В., Шварцман А.Л. и др. Распределение активних последовательностей в хроматине печени крыс при фрагментации ДНК-азами // Молекулярная биология. 1987. - Т. 21, № 1. - С. 125-131. 4. Губский Ю.И., Левицкий Е.Л. Механизмы перекисного окисления липидов фракций хроматина печени крыс // Биополимеры и клетка. - 1993. - Т. 9, № 5. - С. 34-43. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601