Модуляція експресії аполіпопротеїну ciii (apociii)

Реферат: Винахід стосується способу попередження, зниження ризику виникнення, відстрочення, полегшення перебігу або лікування серцево-судинного захворювання, розладу, стану або його симптому за рахунок підвищення рівнів ЛПВЩ або покращення співвідношення ТГ і ЛПВЩ у ссавця, за яким проводять відбір ссавця, який цього потребує, та вводять ссавцю сполуку, націлену на АроСІІІ, де сполука містить модифікований олігонуклеотид, який містить або складається з послідовності SEQ ID NО: 3. UA 115309 C2 (12) UA 115309 C2 UA 115309 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Перелік послідовностей Дана заявка подана разом з Переліком послідовностей в електронному форматі. Перелік послідовностей наданий у вигляді файлу з назвою BIOL0130WOSEQ.TXT, створеного 27 квітня 2012 р. розміром 8 Кбайт. Інформація в електронному форматі Переліку послідовностей включена до даного опису шляхом посилання в повному обсязі. Галузь винаходу У даному описі запропоновані способи, сполуки і композиції для зменшення експресії мРНК і білка Аполіпопротеїну CIII (ApoCIII), і збільшення рівня ЛПВЩ або активності ЛПВЩ у тварини. Також, в даному описі запропоновані способи, сполуки і композиції інгібітору ApoCIII для зменшення пов'язаних з ApoCIII захворювань або станів у тварини. Рівень техніки Ліпопротеїни являють собою кулясті, міцелоподібні частинки, які складаються з неполярного ядра ацилгліцеридів і ефірів холестерину, оточених амфіфільним покриттям з білка, фосфоліпіду і холестерину. Ліпопротеїни класифікуються на 5 широких категорій на основі їх функціональних і фізичних властивостей: хіломікрони, ліпопротеїни дуже низької щільності (ЛПДНЩ), ліпопротеїни проміжної щільності (ЛППЩ), ліпопротеїни низької щільності (ЛПНЩ) і ліпопротеїни високої щільності (ЛПВЩ). Хиломікрони переносять харчові ліпіди з кишечнику до тканин. ЛПДНЩ, ЛППЩ і ЛПНЩ всі переносять триацилгліцериди і холестерин від печінки до тканин. ЛПВЩ переносять ендогенний холестерин від тканин до печінки Частинки ліпопротеїнів піддаються безперервній метаболічній обробці, і їх властивості та склад варіюють. Щільність ліпопротеїнів збільшується без збільшення діаметру частинки, оскільки щільність їх зовнішнього покриття менша, ніж щільність внутрішнього ядра. Білкові компоненти ліпопротеїнів відомі як аполіпопротеїни. Як мінімум, 9 аполіпопротеїнів поширені в значних кількостях серед різних ліпопротеїнів людини. Аполіпопротеїн C-III (ApoCIII) є компонентом ЛПВЩ і багатих на тригліцериди ліпопротеїнів (ТГ). Підвищення рівня ApoCIII пов'язане із гіпертригліцеридемією. Відповідно, ApoCIII відіграє роль в розвитку гіпертригліцеридемії, фактора ризику захворювання коронарних артерій (Davidsson et al., J. Lipid Res. 2005. 46: 1999-2006). ApoCIII уповільнює кліренс багатих на тригліцериди ліпопротеїнів, інгібуючи ліполіз як шляхом інгібування ліпопротеїнліпази, так і перешкоджаючи зв'язуванню ліпопротеїну з глікозаміноглікановою матрицею на поверхні клітини (Shachter, Curr. Opin. Lipidol., 2001, 12, 297-304). Ген, кодуючий людський аполіпопротеїн C-III (який також носить назву APOC3, APOC-III, ApoCIII і APO C-III), був клонований в 1984 р. трьома дослідницькими групами (Levy-Wilson et al., DNA, 1984, 3, 359-364; Protter et al., DNA, 1984, 3, 449-456; Sharpe et al., Nucleic Acids Res., 1984, 12, 3917-3932). Кодуюча послідовність переривається трьома інтронами (Protter et al., DNA, 1984, 3, 449-456). Ген ApoCIII людини розміщений приблизно через 2,6 тисячі пар основ у напрямку 3" по відношенню до гена аполіпопротеїну A-1, і ці два гени транскрибуються конвергентно (Karathanasis, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. А., 1985, 82, 6374-6378). Також клонований варіант аполіпопротеїну C-III людини з мутацією Thr74 до Ala74, виділений у хворого з надзвичайно високими рівнями аполіпопротеїну C-III в сироватці. Оскільки Thr74 Oглікозильований, мутант Ala74, таким чином, призводив до підвищення в сироватці рівнів ApoCIII без вуглеводного фрагмента (Maeda et al., J. Lipid Res., 1987, 28, 1405-1409). Інші варіанти або види поліморфізму, які модулюють експресію Apo CIII, були ідентифіковані пізніше. При деяких видах поліморфізму підвищується рівень ApoCIII. Підвищені рівні ApoCIII асоціюються з підвищеними рівнями тригліцеридів (ТГ) і такими захворюваннями, як серцевосудинне захворювання, метаболічний синдром, ожиріння і діабет (Chan et al., Int J Clin Pract, 2008, 62:799-809; Onat et al., Atherosclerosis, 2003, 168:81-89; Mendivil et al., Circulation, 2011, 124:2065-2072). П'ять видів поліморфізму ідентифіковані на ділянці промотору гена: C (у положенні -641 гена) до А, G (у положенні -630 гена) до А, делеція T (у положенні -625 гена), C (у положенні 482 гена) до T, і T (у положенні -455 гена) до C. Всі ці види поліморфізму знаходяться в нерівноважному зчепленні з поліморфізмом SstI на 3" нетрансльованій ділянці. Поліморфний сайт SstI розрізняє алелі S1 і S2, і алель S2 асоціюється з підвищеними рівнями тригліцеридів в плазмі (Dammerman et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. А., 1993, 90, 4562-4566). Промотор ApoCIII регулюється вниз інсуліном, і даний поліморфний сайт відміняє регуляцію інсуліном. Таким чином, потенційна надмірна експресія ApoCIII, яка призводить до втрати регуляції інсуліном, може бути фактором, сприяючим розвитку гіпертригліцеридемії, пов'язаної з алеллю S2 (Li et al., J. Clin. Invest., 1995, 96, 2601-2605). Поліморфізм T (у положенні -455 гена) до C пов'язаний з підвищенням ризику захворювання коронарних артерій (Olivieri et al., J. Lipid Res., 2002, 43, 1450-1457). Інші види поліморфізму гена ApoCIII людини, що пов'язаний із збільшенням 1 UA 115309 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 експресії ApoCIII та/або рівня тригліцеридів, включають: C (у положенні 1100) до T, C (у положенні 3175) до G, T (у положенні 3206) до G, C (у положеннях 3238) до G, і т. п. (Tilly et al., J. Lipid Res., 2003, 44:430-436; Waterworth et al., Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2000, 20:26632669; Petersen et al., N Engl J Med, 2010, 362:1082-1089). На додаток до інсуліну, ідентифіковані інші регулятори експресії гена ApoCIII. Елемент відповіді на "осиротілий" ядерний рецептор rev-erb альфа розміщений в положеннях від -23 до 18 гена, на ділянці промотору ApoCIII. Rev-erb альфа зменшує активність промотору ApoCIII (Raspe et al., J. Lipid Res., 2002, 43, 2172-2179). Ділянка промотору ApoCIII від положень з –86 по –74 гена розпізнається двома ядерними факторами CIIIb1 і CIIIB2 (Ogami et al., J. Biol. Chem., 1991, 266, 9640-9646). Експресія ApoCIII також регулюється вгору ретиноїдами, що діють через ретиноїдний рецептор X, і зміни в розповсюдженні ретиноїдного рецептора X впливають на транскрипцію ApoCIII (Vu-Dac et al., J. Clin. Invest., 1998, 102, 625-632). Показано, що білок специфічності 1 (Sp1) і ядерний фактор-4 (HNF-4) гепатоцитів діють синергетично для трансактивації промотору аполіпопротеїну C-III через сайт зв'язування з HNF-4 (Kardassis et al., Biochemistry, 2002, 41, 1217-1228). HNF-4 також діє в поєднанні з SMAD3-SMAD4 для трансактивації промотору ApoCIII (Kardassis et al., J. Biol. Chem., 2000, 275, 41405-41414). Трансгенні миші і миші з "нокаутованими" генами додатково визначили роль ApoCIII в ліполізі. Надмірна експресія ApoCIII у трансгенних мишей призводить до гіпертригліцеридемії і порушеного кліренсу ЛПДНЩ-тригліцеридів (de Silva et al., J. Biol. Chem., 1994, 269, 2324-2335; Ito et al., Science, 1990, 249, 790-793). Миші з "нокаутованими" генами та повною відсутністю білка ApoCIII продемонстрували значно знижені рівні холестерину і тригліцеридів в плазмі, в порівнянні з мишами дикого типу, і були захищені від гіпертригліцеридемії після вживання їжі (Maeda et al., J. Biol. Chem., 1994, 269, 23610-23616). Загальні рівні ApoCIII в плазмі ідентифіковані як основний детермінант тригліцеридів сироватки, і епідеміологічні дослідження продемонстрували, що ліпопротеїни ApoCIII і ApoB, що містять ApoCIII як компонент, є незалежними прогностичними факторами захворювання коронарних судин серця (Sacks et al., Circulation. 2000. 102: 1886-1892; Lee et al., Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2003. 23: 853-858). Дослідження також демонструють, що ApoCIII є ключовим детермінантом в кліренсі багатих на тригліцериди ліпопротеїнів та їх залишків при гіпертригліцеридемічних станах, включаючи вісцеральне ожиріння, інсулінорезистентність і метаболічний синдром (Mauger et al., J. Lipid Res. 2006. 47: 1212-1218; Chan et al., Clin. Chem. 2002. 278-283; Ooi et al., Clin. Sci. 2008. 114: 611-624). Гіпертригліцеридемія є загальною клінічною ознакою, пов'язаною з підвищеним ризиком кардіометаболічного захворювання (Hegele et al. 2009, Hum Mol Genet, 18: 4189-4194; Hegele and Pollex 2009, Mol Cell Biochem, 326: 35-43), а також випадками гострого панкреатиту в найтяжчих формах (Toskes 1990, Gastroenterol Clin North Am, 19: 783-791; Gaudet et al. 2010, Atherosclerosis Supplements, 11: 55-60; Catapano et al. 2011, Atherosclerosis, 217S: S1-S44; Tremblay et al. 2011, J Clin Lipidol, 5: 37-44). Приклади кардіометаболічних захворювань включають, не обмежуючись ними, діабет, метаболічний синдром/інсулінорезистентність і генетичні розлади, такі як родинна хіломікронемія, родинна комбінована гіперліпідемія і родинна гіпертригліцеридемія. Гіпертригліцеридемія є результатом підвищеного продукування та/або зниженого або сповільненого катаболізму багатих на тригліцериди ліпопротеїнів (ТГ): ЛПДНЩ і, меншою мірою, хіломікрон (ХМ). Наближені до ліміту високі рівні ТГ (150-199 мг/дл) широко поширені в загальній популяції і є загальним компонентом станів метаболічного синдрому/інсулінорезистентності. Це ж справедливо для високих рівнів ТГ (200-499 мг/дл), за винятком того, що по мірі підвищення рівнів ТГ в плазмі, базові генетичні фактори відіграють все більш і більш важливу етіологічну роль. Найвищі рівні ТГ (≥ 500 мг/дл) найчастіше асоціюються також з підвищеними рівнями ХМ і супроводжуються підвищеним ризиком гострого панкреатиту. Ризик панкреатиту розглядається як клінічно значущий, якщо рівень ТГ перевищує 880 мг/дл (> 10 ммоль), і Європейська Спільнота Атеросклерозу/Європейська Спільнота Кардіології (EAS/ESC) в директивах 2011 р. заявляють, що обов'язковими є дії з попередження гострого панкреатиту (Catapano et al. 2011, Atherosclerosis, 217S: S1-S44). Згідно директив EAS/ESC 2011, гіпертригліцеридемія є причиною приблизно 10 % всіх випадків панкреатиту, і розвиток панкреатиту може відбуватися при рівнях ТГ 440-880 мг/дл. На базі одержаних в ході клінічних досліджень доказів, які демонструють, що підвищені рівні ТГ є незалежним фактором ризику для атеросклеротичного ЗКС, директиви Панелі III Національної Освітньої Програми з Холестерину для Дорослих (NCEP 2002, Circulation, 106: 3143-421), а також Американської Діабетичної Асоціації (ADA 2008, Diabetes Care, 31: S12-S54) рекомендують цільовий рівень ТГ менше 150 мг/дл, з метою зниження ризику серцево-судинних захворювань. 2 UA 115309 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 У мишей з "нокаутованим" геном ApoCIII присутня нормальна кишкова абсорбція ліпідів і печінкова секреція триацилгліцеридів ЛПДНЩ, але швидкий кліренс триацилгліцеридів ЛПДНЩ і ефірів холестерину ЛПДНЩ з плазми, який, можливо, пояснює спостережувану гіполіпідемію (Gerritsen et al., J. Lipid Res. 2005. 46: 1466-1473; Jong et al., J. Lipid Res. 2001. 42: 1578-1585). Вказано, що частинки ЛПДНЩ з ApoCIII відіграють провідну роль в ідентифікації високого ризику захворювання коронарних судин серця при гіпертригліцеридемії (Campos et al., J. Lipid Res. 2001. 42: 1239-1249). Загальногеномне дослідження асоціацій виявило, що нульова мутація ApoCIII від природи зустрічається у населення ланкастерських аманітів і демонструє сприятливий профіль ліпідів і очевидний захист серця, без видимих шкідливих ефектів (Pollin et al., Science. 2008. 322: 1702-1705). У носіїв мутації спостерігаються нижчі рівні тригліцеридів і ЛПНЩ-холестерину в сироватці натщесерце і після вживання їжі, та вищі рівні ЛПВЩхолестерину. Клас ліпопротеїнів ЛПВЩ включає гетерогенну і полідисперсну популяцію частинок, які володіють найвищою щільністю і найменшим розміром (Havel and Kane. In: The Metabolic & Molecular Bases of Inherited Disease. 8th Edition. McGraw-Hill, New York, 2001:2705–16). ЛПВЩ є комплексом макромолекулярних ліпідів (холестерин, тригліцериди і фосфоліпіди) і білків (аполіпопротеїни (apo) і ферменти). Поверхня ЛПВЩ включає, головним чином, аполіпопротеїни А, C і E. Функція деяких із цих апопротеїнів полягає у спрямуванні ЛПВЩ від периферичних тканин до печінки. На рівні ЛПВЩ в сироватці можуть вплинути базові генетичні причини (Weissglas-Volkov and Pajukanta, J Lipid Res, 2010, 51:2032-2057). Епідеміологічні дослідження показали, що підвищені рівні ЛПВЩ захищають проти серцевосудинного захворювання або захворювання коронарних судин серця (Gordon et al., Am. J. Med. 1977. 62: 707-714). Такий вплив ЛПВЩ-холестерину не залежить від концентрацій тригліцеридів і ЛПНЩ-холестерину. У клінічній практиці, низькі рівні ЛПВЩ-холестерину в плазмі частіше асоціюються з іншими розладами, які збільшують вміст тригліцеридів в плазмі, наприклад, центральне ожиріння, інсулінорезистентність, цукровий діабет 2 типу і захворювання нирок (хронічна ниркова недостатність або нефротична протеїнурія) (Kashyap. Am. J. Cardiol. 1998. 82: 42U-48U). На цей час невідомо терапевтичних засобів прямої дії, які впливали б на функцію ApoCIII. Постульовано, що гіполіпідемічний ефект лікарських засобів класу фібратів здійснюється через механізм, де активований проліфератором пероксисом рецептор (PPAR), опосередковує витіснення HNF-4 з промотору аполіпопротеїну C-III, що веде до пригнічення транскрипції аполіпопротеїну C-III (Hertz et al., J. Biol. Chem., 1995, 270, 13470-13475). Гіполіпідемічні лікарські засоби класу статинів також знижують рівні тригліцеридів через невідомий механізм, який веде до підвищення рівнів мРНК ліпопротеїнліпази і зниження рівнів аполіпопротеїну C-III в плазмі (Schoonjans et al., FEBS Lett., 1999, 452, 160-164). Таким чином, залишається потреба, що давно відчувається, в додаткових засобах, здатних ефективно інгібувати функцію аполіпопротеїну C-III. Антисмислова технологія заявляє про себе як ефективний засіб зменшення експресії деяких генних продуктів і, таким чином, може бути унікально придатною для ряду сфер терапевтичного, діагностичного і дослідницького застосування з метою модуляції ApoCIII. Раніше нами були розкриті композиції і спосіб інгібування ApoCIII антисмисловими сполуками в US 20040208856 (патент США 7,598,227), US 20060264395 (патент США 7,750,141) і WO 2004/093783. У даній заявці ми розкриваємо несподіваний результат, який полягає в тому, що антисмислове інгібування ApoCIII приводить до підвищення рівнів ЛПВЩ і зниження рівнів тригліцеридів після вживання їжі. Такий результат буде придатним, наприклад, для лікування, попередження, відстрочення, зменшення або полегшення будь-якого одного або більше захворювань, таких як серцево-судинне захворювання (наприклад, захворювання коронарних судин серця або атерогенне захворювання). Наприклад, підвищені рівні тригліцеридів після вживання їжі (не натщесерце) ідентифіковані як значущий фактор ризику серцево-судинних захворювань (Bansal et al., JAMA, 2007, 298:309-16; Nordestgaard et al., JAMA, 2007, 298:299308). Також, в даній заявці інгібування експресії ApoCIII несподівано приводило до збільшення кліренсу хіломікрон і, таким чином, є важливим з точки зору запобігання хіломікронемії (Chait et al., 1992, Adv Intern Med. 1992, 37:249-73), дисліпідемічного стану, спричиненого неналежним кліренсом хіломікрон тригліцеридів. Тяжкі форми хіломікронемії можуть призводити до панкреатиту, загрожуючого життю стану. Шляхом інгібування кишкового ApoCIII було б зменшене інгібування ліпопротеїнліпази, і кліренс хіломікрон тригліцеридів був би збільшений, таким чином, попереджаючи панкреатит. Короткий опис винаходу У даному описі запропоновані способи підвищення рівнів ЛПВЩ шляхом введення тварині 3 UA 115309 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 сполуки, націленої на ApoCIII. У деяких варіантах пропонується спосіб попередження, лікування, полегшення, відстрочення початку або зниження ризику серцево-судинного захворювання, розладу або стану у тварини, що включає введення тварині сполуки, націленої на ApoCIII. Сполука, яку вводять тварині, попереджає, лікує, полегшує, відстрочує початок або знижує ризик серцевосудинного захворювання, розладу або стану шляхом підвищення рівнів ЛПВЩ в організмі тварини. У деяких варіантах пропонується спосіб зниження ризику серцево-судинного захворювання у тварини, що включає введення тварині терапевтично ефективної кількості сполуки, яка містить модифікований олігонуклеотид, що складається з 12-30 зв'язаних нуклеозидів, причому модифікований олігонуклеотид є комплементарним до нуклеїнової кислоти ApoCIII. У деяких варіантах нуклеїнова кислота ApoCIII є такою, як показано в SEQ ID NO: 1 або SEQ ID NO: 2. У деяких варіантах сполука містить модифікований олігонуклеотид, що складається з 12-30 зв'язаних нуклеозидів, в якому послідовність нуклеїнових основ містить, як мінімум, 8 суміжних нуклеїнових основ ISIS 304801 (SEQ ID NO: 3). У подальших варіантах сполука, яку вводять тварині, знижує ризик серцево-судинного захворювання шляхом підвищення рівнів ЛПВЩ. У деяких варіантах пропонується спосіб попередження, лікування, полегшення або зменшення, як мінімум, одного симптому серцево-судинного захворювання у тварини, що включає введення тварині терапевтично ефективної кількості сполуки, яка містить модифікований олігонуклеотид, що складається з 12-30 зв'язаних нуклеозидів, причому модифікований олігонуклеотид є комплементарним до нуклеїнової кислоти ApoCIII. У деяких варіантах нуклеїнова кислота ApoCIII є такою, як показано в SEQ ID NO: 1 або SEQ ID NO: 2. У деяких варіантах сполука містить модифікований олігонуклеотид, що складається з 12-30 зв'язаних нуклеозидів, в якому послідовність нуклеїнових основ містить, як мінімум, 8 суміжних нуклеїнових основ ISIS 304801 (SEQ ID NO: 3). У подальших варіантах сполука, яку вводять тварині, попереджає, лікує, полегшує або зменшує, як мінімум, один симптом серцевосудинного захворювання у тварини шляхом підвищення рівнів ЛПВЩ в організмі тварини. У деяких варіантах пропонується спосіб підвищення рівнів ЛПВЩ в організмі тварини шляхом введення тварині сполуки, що складається з ISIS 304801 (SEQ ID NO: 3) з метою підвищення рівнів ЛПВЩ в організмі тварини. У деяких варіантах пропонується спосіб попередження, лікування, полегшення або зменшення, як мінімум, одного симптому серцево-судинного захворювання у тварини шляхом введення тварині сполуки, що складається з ISIS 304801 (SEQ ID NO: 3) з метою попередження, лікування, полегшення або зменшення, як мінімум, одного симптому серцево-судинного захворювання у тварини шляхом підвищення рівнів ЛПВЩ в організмі тварини. У деяких варіантах пропонується спосіб підвищення рівнів ЛПВЩ в організмі тварини шляхом введення тварині модифікованого олігонуклеотиду, що містить послідовність SEQ ID NO: 3 (ISIS 304801) причому модифікований олігонуклеотид містить: сегмент проміжку, що складається з 10 зв'язаних дезоксинуклеозидів; сегмент 5" крила, що складається із 5 зв'язаних нуклеозидів; сегмент 3" крила, що складається із 5 зв'язаних нуклеозидів; причому сегмент проміжку розташований безпосередньо суміжним до і між сегментом 5" крила і сегментом 3" крила, і при цьому кожен нуклеозид кожного сегменту крила містить 2’-O-метоксиетилцукор, при тому, що кожен цитозин являє собою 5’-метилцитозин, і при цьому кожен міжнуклеозидний зв'язок являє собою фосфоротіоатний зв'язок, причому модифікований олігонуклеотид підвищує рівні ЛПВЩ у тварини. У деяких варіантах пропонується спосіб попередження, лікування, полегшення або зменшення, як мінімум, одного симптому серцево-судинного захворювання у тварини шляхом введення тварині модифікованого олігонуклеотиду, що містить послідовність ISIS 304801 (SEQ ID NO: 3) причому модифікований олігонуклеотид містить: сегмент проміжку, що складається з 10 зв'язаних дезоксинуклеозидів; сегмент 5" крила, що складається із 5 зв'язаних нуклеозидів; сегмент 3" крила, що складається із 5 зв'язаних нуклеозидів; причому сегмент проміжку розташований безпосередньо суміжним до і між сегментом 5" крила і сегментом 3" крила, і при цьому кожен нуклеозид кожного сегменту крила містить 2’-O-метоксиетилцукор, при тому, що кожен цитозин являє собою 5’-метилцитозин, і при цьому кожен міжнуклеозидний зв'язок являє собою фосфоротіоатний зв'язок, при цьому, модифікований олігонуклеотид попереджає, лікує, полегшує або зменшує, як мінімум, один симптом у тварини з серцево-судинним захворюванням шляхом підвищення рівнів ЛПВЩ в організмі тварини. У деяких варіантах пропонується спосіб підвищення рівнів ЛПВЩ в організмі тварини шляхом введення тварині сполуки, яка містить модифікований олігонуклеотид, що складається з 12-30 зв'язаних нуклеозидів, причому модифікований олігонуклеотид є комплементарним до 4 UA 115309 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 нуклеїнової кислоти ApoCIII, як показано в SEQ ID NO: 1 або SEQ ID NO: 2, з метою підвищення рівнів ЛПВЩ в організмі тварини. У деяких варіантах пропонується спосіб попередження, лікування, полегшення або зменшення, як мінімум, одного симптому серцево-судинного захворювання у тварини шляхом введення тварині сполуки, яка містить модифікований олігонуклеотид, що складається з 12-30 зв'язаних нуклеозидів, причому модифікований олігонуклеотид є комплементарним до нуклеїнової кислоти ApoCIII, як показано в SEQ ID NO: 1 або SEQ ID NO: 2, з метою попередження, лікування, полегшення або зменшення, як мінімум, одного симптому серцевосудинного захворювання у тварини шляхом підвищення рівнів ЛПВЩ в організмі тварини. У деяких варіантах пропонується спосіб зниження рівнів ТБХЕ шляхом введення тварині сполуки, націленої на ApoCIII. У деяких варіантах сполука містить модифікований олігонуклеотид, що складається з 12-30 зв'язаних нуклеозидів, послідовність нуклеїнових основ якого комплементарна до нуклеїнової кислоти ApoCIII. У деяких варіантах послідовність нуклеїнових основ містить, як мінімум, 8 суміжних нуклеїнових основ ISIS 304801 (SEQ ID NO: 3). У деяких варіантах сполука складається із нуклеїнових основ ISIS 304801 (SEQ ID NO: 3). У деяких варіантах пропонується спосіб підвищення рівня ApoA1, PON1, кліренсу жирів, кліренсу хіломікрон тригліцеридів, кліренсу тригліцеридів після вживання їжі або рівнів ЛПВЩ шляхом введення тварині сполуки, націленої на ApoCIII. У деяких варіантах сполука містить модифікований олігонуклеотид, що складається з 12-30 зв'язаних нуклеозидів, послідовність нуклеїнових основ якого комплементарна до нуклеїнової кислоти ApoCIII. У деяких варіантах послідовність нуклеїнових основ містить, як мінімум, 8 суміжних нуклеїнових основ ISIS 304801 (SEQ ID NO: 3). У деяких варіантах сполука складається з нуклеїнових основ ISIS 304801 (SEQ ID NO: 3). У деяких варіантах пропонується спосіб попередження, відстрочення або полегшення перебігу панкреатиту, який включає: (a) вибір тварини, що страждає або знаходиться в групі ризику панкреатиту, і (б) введення тварині сполуки, націленої на ApoCIII, і, при цьому, панкреатит попереджається, відстрочується, або його перебіг полегшується. У деяких варіантах пропонується спосіб попередження, відстрочення або полегшення перебігу панкреатиту, який включає: (а) вибір тварини, що страждає або знаходиться в групі ризику панкреатиту, і (б) введення тварині сполуки, націленої на ApoCIII, таким чином, збільшуючи кліренс хіломікрон, і, при цьому, панкреатит попереджається, відстрочується, або його перебіг полегшується. У деяких варіантах тварина страждає або знаходиться в групі ризику гіпертригліцеридемії. У деяких варіантах гіпертригліцеридемія відноситься до фредериксоновського типу II, IV або V. У деяких варіантах у тварини присутній генетичний дефект, що веде до гіпертригліцеридемії. У деяких варіантах генетичний дефект є гетерозиготним дефіцитом ліпопротеїнліпази або поліморфізмом ApoCIII. У деяких варіантах рівень тригліцеридів в організмі тварини становить  500 мг/дл, і присутній гетерозиготний дефіцит ліпопротеїнліпази. У деяких варіантах рівень тригліцеридів в організмі тварини знаходиться в інтервалі 100-200 мг/дл, 100-300 мг/дл, 100-400 мг/дл, 100-500 мг/дл, 200-500 мг/дл, 300-500 мг/дл, 400-500 мг/дл, 500-1000 мг/дл, 600-1000 мг/дл, 700-1000 мг/дл, 800-1000 мг/дл, 900-1000 мг/дл, 500-1500 мг/дл, 1000-1500 мг/дл, 100-2000 мг/дл, 150-2000 мг/дл, 200-2000 мг/дл, 300-2000 мг/дл, 400-2000 мг/дл, 500-2000 мг/дл, 600-2000 мг/дл, 700-2000 мг/дл, 800-2000 мг/дл, 900-2000 мг/дл, 10002000 мг/дл, 1100-2000 мг/дл, 1200-2000 мг/дл, 1300-2000 мг/дл, 1400-2000 мг/дл або 1500-2000 мг/дл. У деяких варіантах збільшення кліренсу хіломікрон збільшує кліренс тригліцеридів після вживання їжі та/або зменшує рівень тригліцеридів після вживання їжі. У деяких варіантах пропонується застосування сполуки, націленої на ApoCIII, з метою попередження, лікування, полегшення або зменшення, як мінімум, одного симптому серцевосудинного захворювання шляхом підвищення рівнів ЛПВЩ. У деяких варіантах пропонується застосування сполуки, націленої на ApoCIII, з метою підвищення рівнів ЛПВЩ в організмі тварини. У деяких варіантах пропонується застосування сполуки, націленої на ApoCIII, для одержання лікарського засобу, призначеного для підвищення рівнів ЛПВЩ в організмі тварини. У деяких варіантах пропонується застосування сполуки, націленої на ApoCIII, для одержання лікарського засобу, призначеного для покращення співвідношення ТГ до ЛПВЩ. Детальний опис винаходу Слід розуміти, що як вищевикладений загальний опис, так і наступний детальний опис є тільки ілюстративними і пояснюючими, і не обмежують заявленого винаходу. У даному описі застосування однини включає множину, якщо конкретно не вказано інше. В даному описі "або" 5 UA 115309 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 означає "та/або", якщо не вказано інше. Крім того, використання терміну "що включає", а також інших форм, таких як "включає" і "включений", не є обмежуючим. Також, такі терміни як "елемент" або "компонент" включають як елементи, так і компоненти, що містять одну одиницю, а також елементи і компоненти, які містять більш ніж одну субодиницю, якщо конкретно не вказано інше. Заголовки розділів, використовувані в даному описі, призначені тільки для організаційних цілей і не повинні інтерпретуватися як обмежуючі описаний об'єкт. Всі документи або частини документів, цитованих в даній заявці, зокрема, але не обмежуючись ними, патенти, патентні заявки, статті, книги і трактати, таким чином, явно включені шляхом посилання на частини документа, обговорюваного в даному описі, а також в повному обсязі. Визначення Якщо тільки не були запропоновані специфічні визначення, номенклатура, використовувана у зв'язку з методиками і методами аналітичної хімії, синтетичної органічної хімії та медичної і фармацевтичної хімії, описані в даному описі, є добре відомою і звичайно вживаною в даній галузі. Стандартні методи можуть застосовуватися для хімічного синтезу і хімічного аналізу. Якщо це дозволено, всі патенти, заявки, опубліковані заявки та інші публікації, номери доступу GENBANK і супровідна інформація щодо послідовностей, доступна через бази даних, такі як Національний центр біотехнологічної інформації (НЦБІ), та інші дані, на які є посилання в даному описі, включені шляхом посилання на частини документа, обговорюваного в даному описі, а також в повному обсязі. Якщо тільки не вказано інше, наступні терміни мають наступні значення: "2’-O-метоксиетил" (також 2’-МОЕ, 2’-O(CH2)2-OCH3 і 2’-O-(2-метоксиетил)) позначає Oметокси-етил-модифікацію положення 2" фурозильного кільця. 2’-O-Метоксиетилмодифікований цукор є модифікованим цукром. "2’-O-Метоксиетилнуклеотид" позначає нуклеотид, що містить 2’-O-метоксиетилмодифікований цукровий фрагмент. "3" Сайт-мішень" позначає нуклеотид нуклеїнової кислоти-мішені, комплементарний до крайнього 3’-нуклеотиду конкретної антисмислової сполуки. "5" Сайт-мішень" позначає нуклеотид нуклеїнової кислоти-мішені, комплементарний до крайнього 5’-нуклеотиду конкретної антисмислової сполуки. "5-Метилцитозин" позначає цитозин, модифікований метильною групою, приєднаною в 5" положенні. 5-Метилцитозин є модифікованою нуклеїновою основою. "Приблизно" означає в межах ±10 % значення. Наприклад, якщо вказано, що "маркер може бути збільшений приблизно на 50 %”, мається на увазі, що маркер може бути збільшений на 4555 %. "Активний фармацевтичний агент (засіб)” позначає субстанцію або субстанції у фармацевтичній композиції, які забезпечують терапевтичну дію при введенні індивідууму. Наприклад, в деяких варіантах антисмисловий олігонуклеотид, націлений на ApoCIII, є активним фармацевтичним агентом (засобом). "Активна ділянка-мішень" або "ділянка-мішень" позначає ділянку, на яку націлена одна або більше активних антисмислових сполук. "Активні антисмислові сполуки" позначають антисмислові сполуки, які знижують рівні нуклеїнової кислоти-мішені або рівні білка. "Супутнє введення" позначає супутнє введення двох агентів (засобів) в будь-якій формі, в якій фармакологічна дія обох виявляється в організмі хворого в один і той же час. Супутнє введення не вимагає введення обох засобів в одній фармацевтичній композиції, в одній лікарській формі або одним і тим же способом. Вплив обох агентів (засобів) не обов'язково виявляється в один і той же час. Ефект повинен тільки частково перекриватися протягом періоду часу, і не повинен мати однакову протяжність. "Введення" позначає доставку фармацевтичного агента (засобу) в організм індивідуума, і включає, не обмежуючись ними, введення медичним працівником і самостійне введення. "Агент (засіб)” позначає активну субстанцію, яка може забезпечити терапевтичну дію при введенні тварині. "Перший агент (засіб)” позначає терапевтичну сполуку за винаходом. Наприклад, перший агент може бути антисмисловим олігонуклеотидом, націленим на ApoCIII. "Другий агент (інший засіб)” позначає другу терапевтичну сполуку за винаходом (наприклад, другий антисмисловий олігонуклеотид, націлений на ApoCIII) та/або не-ApoCIII терапевтичну сполуку. "Полегшення" позначає зменшення, як мінімум, одного показника, ознаки або симптому пов'язаного захворювання, розладу або стану. Вираженість показників може визначатися суб'єктивними або об'єктивними засобами, які відомі фахівцям в даній галузі. "Тварина" позначає людину або тварину, зокрема, але не обмежуючись ними, миші, щури, 6 UA 115309 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 кролики, собаки, кішки, свині і негуманоїдні примати, в тому числі, але не обмежуючись ними, мавпи і шимпанзе. "Антисмислова активність" позначає будь-яку знайдену або вимірну активність, що відноситься до антисмислової гібридизації сполуки з нуклеїновою кислотою-мішенню. У деяких варіантах антисмислова активність являє собою зменшення кількості або експресії нуклеїнової кислоти-мішені або білка, кодованого такою нуклеїновою кислотою-мішенню. "Антисмислова сполука" позначає олігомерну сполуку, яка здатна гібридизуватися з нуклеїновою кислотою-мішенню за допомогою водневого зв'язку. У даному описі термін "антисмислова сполука" включає фармацевтично прийнятні похідні сполук, описаних в даному описі. "Антисмислове інгібування" позначає зниження рівнів нуклеїнової кислоти-мішені або рівнів білка-мішені у присутності антисмислової сполуки, комплементарної до нуклеїнової кислотимішені, в порівнянні з рівнями нуклеїнової кислоти-мішені або рівнями білка-мішені за відсутності антисмислової сполуки. "Антисмисловий олігонуклеотид" позначає одноланцюговий олігонуклеотид, що містить послідовність нуклеїнових основ, яка дозволяє гібридизацію з відповідною ділянкою або сегментом нуклеїнової кислоти-мішені. У даному описі термін "антисмисловий олігонуклеотид" включає фармацевтично прийнятні похідні сполук, описаних в даному описі. "ApoCIII" позначає будь-яку нуклеїнову кислоту або послідовність білка, кодуючу ApoCIII. Наприклад, в деяких варіантах ApoCIII включає послідовність ДНК, що кодує ApoCIII, послідовність РНК, транскрибовану із ДНК, кодуючої ApoCIII (зокрема, геномної ДНК, що містить інтрони та екзони), послідовність мРНК, що кодує ApoCIII, або пептидну послідовність, що кодує ApoCIII. "мРНК ApoCIII" позначає мРНК, кодуючу білок ApoCIII. "Білок ApoCIII" позначає будь-яку послідовність білка, що кодує ApoCIII. "Атеросклероз" позначає затвердіння артерій, що вражає великі і середнього розміру артерії, та характеризується присутністю жирових відкладень. Жирові відкладення мають назву "атером" або "бляшок", які складаються, в основному, із холестерину та інших жирів, кальцію і рубцевої тканини і ушкоджують вистилку артерій. "Біциклічний цукор" позначає фурозильне кільце, модифіковане з'єднанням містком двох негемінальних атомів кільця. Біциклічний цукор є модифікованим цукром. "Біциклічна нуклеїнова кислота" або "БНК" позначає нуклеозид або нуклеотид, в якому фуранозна частина нуклеозиду або нуклеотиду містить місток, що сполучає два вуглецеві атоми на фуранозному кільці, з утворенням в такий спосіб біциклічної системи кілець. "Кеп-структура" або "кінцевий кеп-фрагмент" позначає хімічні модифікації, які здійснені на будь-якому з кінців антисмислової сполуки. "Серцево-судинне захворювання" або "серцево-судинний розлад" позначає групу станів, пов'язаних із серцем, кровоносними судинами або кровообігом. Приклади серцево-судинних захворювань включають, не обмежуючись ними, аневризму, стенокардію, аритмію, атеросклероз, цереброваскулярне захворювання (інсульт), захворювання коронарних судин серця, гіпертензію, дисліпідемію, гіперліпідемію, гіпертригліцеридемію або гіперхолестеринемію. "Хімічно відмінна ділянка" позначає ділянку антисмислової сполуки, що деяким чином хімічно відрізняється від іншої ділянки такої ж антисмислової сполуки. Наприклад, ділянка, що містить 2’-O-метоксиетил-нуклеотид, хімічно відрізняється від ділянки, що містить нуклеотид без 2’-O-метоксиетил-модифікацій. "Химерна антисмислова сполука" позначає антисмислову сполуку, що містить, як мінімум, дві хімічно відмінних ділянки. "Холестерин" являє собою молекулу стероїду, знайдену в мембранах клітин всіх тканин тварини. Холестерин повинен транспортуватися в плазмі крові тварини ліпопротеїнами, включаючи ліпопротеїни дуже низької щільності (ЛПДНЩ), ліпопротеїни проміжної щільності (ЛППЩ), ліпопротеїни низької щільності (ЛПНЩ) і ліпопротеїни високої щільності (ЛПВЩ). "Холестерин плазми" позначає суму всіх ліпопротеїнів (ЛПДНЩ, ЛППЩ, ЛПНЩ, ЛПВЩ), етерифікованих та/або неетерифікованих в плазмі або сироватці. "Інгібітор абсорбції холестерину" позначає засіб, який гальмує абсорбцію екзогенного холестерину, що надходить із харчових продуктів. "Супутнє введення" має на увазі введення двох або більше агентів (засобів) індивідууму. Два або більше засобів можуть знаходитися в одній фармацевтичній композиції або можуть знаходитися в окремих фармацевтичних композиціях. Кожен із двох або більше засобів можна вводити одним і тим же або різними способами. Супутнє введення включає паралельне або послідовне введення. 7 UA 115309 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 "Комплементарність" позначає здатність до спаровування нуклеїнових основ першої нуклеїнової кислоти і другої нуклеїнової кислоти. У деяких варіантах комплементарність між першою і другою нуклеїновою кислотою може бути між двома ланцюгами ДНК, між двома ланцюгами РНК або між ланцюгами ДНК і РНК. У деяких варіантах деякі нуклеїнові основи на одному ланцюгу відповідають комплементарній основі, утворюючій водневий зв'язок, на іншому ланцюгу. У деяких варіантах всі нуклеїнові основи на одному ланцюгу відповідають комплементарній основі, утворюючій водневий зв'язок, на іншому ланцюгу. У деяких варіантах перша нуклеїнова кислота є антисмисловою сполукою, і друга нуклеїнова кислота є нуклеїновою кислотою-мішенню. У деяких з таких варіантів антисмисловий олігонуклеотид є першою нуклеїновою кислотою, і нуклеїнова кислота-мішень є другою нуклеїновою кислотою. "Суміжні нуклеїнові основи" позначають нуклеїнові основи, безпосередньо суміжні по відношенню одна до одної. "Обмежений етил" або "cEt" позначає біциклічний нуклеозид, що містить фуранозильний цукор, який містить метил(метиленокси) (4’-CH(CH3)-O-2") місток між вуглецевими атомами 4" і 2". "Перехресно-реагуючий" позначає олігомерну сполуку, націлену на одну послідовність нуклеїнової кислоти, яка може гібридизуватися з іншою послідовністю нуклеїнової кислоти. Наприклад, в деяких випадках антисмисловий олігонуклеотид, націлений на ApoCIII людини, може перехресно реагувати з ApoCIII миші. Чи буде олігомерна сполука перехресно реагувати з іншою послідовністю нуклеїнової кислоти, окрім її передбаченої мішені, залежить від ступеня комплементарності сполуки з нецільовою послідовністю нуклеїнової кислоти. Чим вище ступінь комплементарності між олігомерною сполукою та нецільовою нуклеїновою кислотою, тим вірогідніше олігомерна сполука буде перехресно реагувати з нуклеїновими кислотами. "Вилікування/лікування" позначає спосіб, який відновлює здоров'я, або призначене лікування захворювання. "Захворювання коронарних судин серця (ЗКС)” позначає звуження дрібних кровоносних судин, які поставляють кров і кисень до серця, що часто є результатом атеросклерозу. "Дезоксирибонуклеотид" позначає нуклеотид, що містить водень в положенні 2" цукрової частини нуклеотиду. Дезоксирибонуклеотиди можуть бути модифіковані будь-яким з різноманітних замісників. "Цукровий діабет" або "діабет" є синдромом, що характеризується порушеним метаболізмом і аномально високим рівнем цукру в крові (гіперглікемія), що є результатом недостатніх рівнів інсуліну або зниженої чутливості до інсуліну. Характерні симптоми включають надмірне продукування сечі (поліурія) за рахунок високих рівнів глюкози в крові, надмірну спрагу і підвищене споживання рідини (полідипсія) для компенсації збільшеного сечовипускання, затуманення зору в результаті дії високого рівня глюкози в крові на оптичні структури ока, нез'ясовну втрату маси і летаргію. "Діабетична дисліпідемія" або "діабет 2 типу з дисліпідемією" позначає стан, що характеризується діабетом 2 типу, зниженням рівнів ЛПВЩ-Х, підвищенням рівнів тригліцеридів і підвищенням вмісту щільних частинок ЛПНЩ маленького розміру. "Розбавлювач" позначає інгредієнт в композиції, який не володіє фармакологічною активністю, але необхідний або бажаний з фармацевтичної точки зору. Наприклад, розбавлювач в ін'єкційній композиції може бути рідиною, наприклад, сольовим розчином. "Дисліпідемія" позначає розлад метаболізму ліпідів та/або ліпопротеїнів, зокрема, надмірне продукування або дефіцит ліпідів та/або ліпопротеїнів. Дисліпідемія може виявлятися підвищенням рівня ліпідів, таких як хіломікрони, холестерин і тригліцериди, а також ліпопротеїнів, таких як холестерин ліпопротеїнів низької щільності (ЛПНЩ). Прикладом дисліпідемії є хіломікронемія. "Одиниця лікарської форми" позначає форму, в якій доставляється фармацевтичний агент, наприклад, таблетка, пігулка або інша одиниця лікарської форми, відома з рівня техніки. У деяких варіантах одиниця лікарської форми є флаконом, що містить ліофілізований антисмисловий олігонуклеотид. У деяких варіантах одиниця лікарської форми є флаконом, що містить ресуспендований антисмисловий олігонуклеотид. "Доза" позначає вказану кількість фармацевтичного засобу, що доставляється за одне введення або у вказаний період часу. У деяких варіантах дозу можна вводити у вигляді одного, двох або більше болюсів, таблеток або ін'єкцій. Наприклад, в деяких варіантах, якщо бажане підшкірне введення, бажана доза вимагає об'єму, який важко адаптувати до однієї ін'єкції, тому дві або більше ін'єкцій можуть здійснюватися для доставки бажаної дози. У деяких варіантах фармацевтичний засіб вводять інфузією протягом тривалого періоду часу або безперервно. Дози можуть бути вказані як кількість фармацевтичного засобу на годину, день, тиждень або 8 UA 115309 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 місяць. Дози також можуть бути вказані як мг/кг або г/кг. "Ефективна кількість" або "терапевтично ефективна кількість" позначає кількість активного фармацевтичного засобу, достатню для досягнення бажаного фізіологічного результату у індивідуума, який потребує засобу. Ефективна кількість може варіювати від одного індивідуума до іншого, в залежності від стану здоров'я і фізичного стану індивідуума, який підлягає лікуванню, таксономічної групи індивідуумів, які підлягають лікуванню, складу композиції, оцінки медичного стану індивідуума та інших відповідних факторів. "Система Фредериксона" використовується для класифікації первинних (генетичних) причин дисліпідемії на декілька підгруп або типів. Типи дисліпідемії, які можуть піддаватися корекції шляхом лікування сполуками, розкритими в даному описі, включають, не обмежуючись ними, фредериксоновський тип II, IV і V. "Фредериксоновський тип I" існує в декількох формах: тип 1a являє собою дефіцит ліпопротеїнліпази в результаті дефіциту ЛПНЩ або модифікованого apoC-II; тип Ib являє собою родинний дефіцит апопротеїну CII, стан, спричинений нестачею активатора ліпопротеїнліпази; і тип Ic являє собою хіломікронемію за рахунок циркулюючого інгібітору ліпопротеїнліпази. Тип I є рідкісним розладом, який звичайно присутній в дитинстві. Він характеризується вираженим підвищенням вмісту хіломікрон і надзвичайно високими рівнями ТГ (завжди значно перевищуючими 1000 мг/дл, і нерідко досягаючими 10 000 мг/дл або вище) з епізодами болю в животі, рецидивуючого гострого панкреатиту, шкірними ксантомами, що супроводжуються висипаннями, і гепатоспленомегалією. У хворих рідко розвивається атеросклероз, можливо, через те, що частинки ліпопротеїнів в плазмі занадто великі, щоб проникнути в інтиму артерій (Nordestgaard et al., J Lipid Res, 1988, 29:1491-1500; Nordestgaard et al., Arteriosclerosis, 1988, 8:421-428). Тип I звичайно спричиняється мутаціями гена ЛПНЩ або гена кофактора apoC-II, що призводить до нездатності уражених індивідуумів продукувати функціонально активні ЛПНЩ. Такі мутації у хворих гомозиготні або складові гетерозиготні. Поширеність становить приблизно 1 на 1 000 000 в загальній популяції, і набагато вища в Південній Африці і Східному Квебеку в результаті "ефекту засновника". Хворі відповідають мінімально або не відповідають на лікарські засоби для зниження рівня ТГ (Tremblay et al., J Clin Lipidol, 2011, 5:37-44; Brisson et al., Pharmacogenet Genom, 2010, 20:742-747) і, таким чином, використовується обмеження жиру в раціоні до 20 г/добу або менше, щоб контролювати симптоми даного рідкісного розладу. "Фредериксоновський тип II" є найпоширенішою формою первинної гіперліпідемії. Він додатково класифікується на тип IIa і тип IIb, в основному, в залежності від того, чи присутнє підвищення рівнів ЛПДНЩ на додаток до рівнів холестерину ЛПНЩ (ЛПНЩ-Х). Тип IIa (родинна гіперхолестеринемія) може бути спорадичним (за рахунок дієтичних факторів), полігенним або дійсно родинним в результаті мутації в гені рецептора ЛПНЩ на хромосомі 19 (0,2 % популяції) або гені аполіпопротеїну B (ApoB) (0,2 %). Родинну форму характеризують сухожильні ксантоми, ксантелазма і раннє серцево-судинне захворювання. Поширеність даного захворювання становить близько 1 на 500 для гетерозигот і 1 на 1 000 000 для гомозигот. Тип IIb (також відомий як комбінована родинна гіперліпопротеїнемія) є змішаною гіперліпідемією (високі рівні холестерину і ТГ), спричиненою підвищенням рівнів ЛПНЩ-Х і ЛПДНЩ. Високі рівні ЛПДНЩ є результатом надмірного продукування субстратів, зокрема, ТГ, ацетил-КоА, і збільшення синтезу B-100. Вони також можуть бути спричинені зменшенням кліренсу ЛПНЩ. Поширеність в популяції становить близько 10 %. "Фредериксоновський тип III" (також відомий як дисбеталіпопротеїнемія) є захворюванням видалення ремнанта або захворюванням широкої бети (Fern et al., J Clin Pathol, 2008, 61:1174118). Воно виникає за рахунок багатих на холестерин ЛПДНЩ (β-ЛПДНЩ). Звичайно, у хворих з таким станом підвищені рівні холестерину і ТГ в плазмі через сповільнений кліренс залишків хіломікрон і ЛПДНЩ (наприклад, ЛППЩ). Сповільнений кліренс є результатом дефекту аполіпопротеїну E (apoE). Нормально функціонуючий apoE, що міститься на ремнантах, дозволив би зв'язування з рецептором ЛПНЩ і видалення з кровотоку. Акумуляція залишків у уражених індивідуумів може призводити до ксантоматозу і раннього захворювання коронарних та/або периферичних судин. Найпоширенішою причиною типу III є наявність генотипу apoE E2/E2. Його поширеність оцінена як приблизно 1 на 10 000. "Фредериксоновський тип IV" (також відомий як родинна гіпертригліцеридемія) – аутосомальний домінантний стан, присутній приблизно у 1 % населення. Рівні ТГ підвищуються в результаті надмірного продукування ЛПДНЩ печінкою або гетерозиготного дефіциту ЛПНЩ, але вони майже завжди нижчі за 1000 мг/дл. Рівні холестерину в сироватці звичайно знаходяться в межах норми. Розлад є гетерогенним, і на фенотип значно впливають фактори зовнішнього середовища, особливе споживання вуглеводів та етанолу. 9 UA 115309 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 "Фредериксоновський тип V" включає високі рівні ЛПДНЩ і хіломікрон. Він характерний для носіїв варіантів гена ЛПНЩ з втратою функції, пов'язаної з активністю ЛПНЩ, як мінімум, 20 % (тобто, частковий дефіцит ЛПНЩ в порівнянні з фредериксоновським типом I). У таких суб'єктів плазма схожа на молоко і присутня тяжка гіпертригліцеридемія через хіломікрони і ЛПДНЩ. Рівні ТГ незмінно вищі за 1000 мг/дл, і рівні загального холестерину завжди підвищені. Звичайно присутній низький рівень ЛПНЩ-Х. Це також асоціюється з підвищеним ризиком гострого панкреатиту, непереносимості глюкози і гіперурикемії. Симптоми, загалом, присутні в дорослому житті (> 35 років) і, хоча поширеність відносно низька, такі суб'єкти зустрічаються набагато частіше, ніж суб'єкти з гомозиготною або складовою гетерозиготною недостатністю ЛПНЩ. "Повністю комплементарний" або "100 % комплементарність" означає, що кожній нуклеїновій основі в послідовності нуклеїнових основ першої нуклеїнової кислоти відповідає комплементарна нуклеїнова основа в другій послідовності нуклеїнових основ другої нуклеїнової кислоти. У деяких варіантах перша нуклеїнова кислота є антисмисловою сполукою, і друга нуклеїнова кислота є нуклеїновою кислотою-мішенню. "Химерний олігонуклеотид" позначає химерну антисмислову сполуку, в якій внутрішня ділянка, що містить численні нуклеозиди, які підтримують розщеплення РНКазою H, розташована між зовнішніми ділянками, що містять один або більше нуклеозидів, причому нуклеозиди, що складають внутрішню ділянку, хімічно відрізняються від нуклеозиду або нуклеозидів, що складають зовнішні ділянки. Внутрішня ділянка може мати назву "проміжку" або "сегменту проміжку", і зовнішні ділянки можуть носити назву "крил" або "сегментів крила.” "Розширена проміжком" позначає химерну антисмислову сполуку, що містить антисмисловий сегмент проміжку довжиною 12 або більше суміжних 2’-дезоксирибонуклеозидів, розташований між і безпосередньо суміжний до сегментів 5" і 3" крила, що містить від 1 до 6 нуклеозидів. "Глюкоза" є моноцукром, використовуваним клітинами в ролі джерела енергії і запальної проміжноїсполуки. "Глюкоза плазми" позначає наявність глюкози в плазмі. "Ліпопротеїн високої щільності-Х (ЛПВЩ-Х)” позначає холестерин, зв'язаний з частинками ліпопротеїну високої щільності. Концентрація ЛПВЩ-Х в сироватці (або плазмі) звичайно визначається в мг/дл або нмоль/л. "ЛПВЩ-Х" і "ЛПВЩ-Х в плазмі" позначають ЛПВЩ-Х в сироватці і плазмі, відповідно. "Інгібітор ГМГ-КоА редуктази" позначає засіб, який діє шляхом інгібування ферменту ГМГКоА редуктази, такий як аторвастатин, розувастатин, флувастатин, ловастатин, правастатин і симвастатин. "Гібридизація" позначає відпал комплементарних молекул нуклеїнових кислот. У деяких варіантах комплементарні молекули нуклеїнових кислот включають антисмислову сполуку і нуклеїнову кислоту-мішень. "Гіперхолестеринемія" позначає стан, що характеризується підвищеним рівнем холестерину або циркулюючого (у плазмі) холестерину, ЛПНЩ-холестерину і ЛПДНЩ-холестерину, відповідно до директив Звіту експертної панелі Національної Освітньої Програми з Холестерину (NCEP) на тему Виявлення, оцінка, лікування підвищеного рівня холестерину у дорослих (див., Arch. Int. Med. (1988) 148, 36-39). "Гіперліпідемія" або "гіперліпемія" являє собою стан, що характеризується підвищеними рівнями ліпідів в сироватці або циркулюючих (у плазмі) ліпідів. Даний стан виявляється аномально високою концентрацією жирів. Ліпідні фракції в кровотоку являють собою холестерин, ліпопротеїни низької щільності, ліпопротеїни дуже низької щільності, хіломікрони і тригліцериди. Фредериксоновська класифікація гіперліпідемії базується на характері ТГ і багатих на холестерин ліпопротеїнових частинок, що визначається електрофорезом або ультрацентрифугуванням і звичайно використовується для характеристики первинних причин гіперліпідемії, такої як гіпертригліцеридемія (Fredrickson and Lee, Circulation, 1965, 31:321-327; Fredrickson et al., New Eng J Med, 1967, 276 (1): 34–42). "Гіпертригліцеридемія" позначає стан, що характеризується підвищеними рівнями тригліцеридів. Його етіологія включає первинні (тобто, генетичні причини) і вторинні фактори (інші базові причини, такі як діабет, метаболічний синдром/інсулінорезистентність, ожиріння, низький рівень фізичної активності, куріння сигарет, надмірне споживання спиртного і раціон з високим вмістом вуглеводів), або, найчастіше, комбінацію обох (Yuan et al. CMAJ, 2007, 176:1113-1120). "Ідентифікація" або "вибір тварини з метаболічним або серцево-судинним захворюванням" позначає ідентифікацію або вибір суб'єкта, схильного або страждаючого на діагностоване метаболічне захворювання, серцево-судинне захворювання або метаболічний синдром; або 10 UA 115309 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 ідентифікацію чи вибір суб'єкта, у якого присутній будь-який із симптомів метаболічного захворювання, серцево-судинного захворювання або метаболічного синдрому, зокрема, але не обмежуючись ними, гіперхолестеринемія, гіперглікемія, гіперліпідемія, гіпертригліцеридемія, гіпертензія, підвищена інсулінорезистентність, знижена чутливість до дії інсуліну, вища за норму маса тіла та/або вищий за норму вміст жиру в організмі або будь-яка їх комбінація. Така ідентифікація може бути здійснена в будь-який спосіб, зокрема, не обмежуючись ними, стандартними клінічними тестами або оцінкою, такими як вимірювання рівня холестерину в сироватці або кровотоку (плазмі), вимірювання рівня глюкози в сироватці крові або кровотоку (плазмі), вимірювання рівня тригліцеридів в сироватці або кровотоку (плазмі), вимірювання артеріального тиску, вимірювання вмісту жиру в організмі, вимірювання маси тіла, і т. п. "Покращений результат серцево-судинного захворювання" позначає зменшення частоти серцево-судинних катастроф або зниження їх ризику. Приклади серцево-судинних катастроф включають, не обмежуючись ними, смерть, повторний інфаркт, інсульт, кардіогенний шок, набряк легенів, зупинку серця і порушення ритму передсердь. "Безпосередньо суміжний" означає відсутність проміжних елементів між безпосередньо суміжними елементами, наприклад, між ділянками, сегментами, нуклеотидами та/або нуклеозидами. "Підвищення рівня ЛПВЩ" або "збільшення концентрації ЛПВЩ" позначає підвищення рівня ЛПВЩ у тварини після введення, як мінімум, однієї сполуки за винаходом, в порівнянні з рівнем ЛПВЩ у тварини, що не одержувала сполуки. "Індивідуум" або "суб'єкт" або "тварина" позначає людину або тварину, вибрану для лікування або терапії. "Індукувати", "інгібувати", "потенціювати", "підвищувати", "збільшувати", "зменшувати", "знижувати" або подібні терміни позначають кількісні відмінності між двома станами. Наприклад, "кількість, ефективна для інгібування активності або експресії ApoCIII" означає, що рівень активності або експресія ApoCIII в обробленому зразку відрізнятиметься від рівня активності або експресії ApoCIII в необробленому зразку. Такі терміни застосовуються, наприклад, до рівнів експресії та рівнів активності. "Інгібування експресії або активності" позначає зменшення або блокаду експресії або активності РНК або білка, і необов'язково вказує на повну відсутність експресії або активності. "Інсулінорезистентність" визначається як стан, при якому нормальні кількості інсуліну недостатні для одержання нормальної реакції на інсулін жирових клітин, клітин м'язів і печінки. Інсулінорезистентність в жирових клітинах призводить до гідролізу тригліцеридів, які зберігаються, що збільшує вміст вільних жирних кислот в плазмі крові. Інсулінорезистентність в м'язі зменшує захоплення глюкози, тоді як інсулінорезистентність в печінці зменшує зберігання глюкози, при цьому обидва ефекти сприяють підвищенню вмісту глюкози в крові. Високі рівні інсуліну і глюкози в плазмі внаслідок інсулінорезистентності часто призводять до метаболічного синдрому і діабету 2 типу. "Чутливість до дії інсуліну" є мірою того, наскільки ефективно індивідуум утилізує глюкозу. Індивідуум з високою чутливістю до інсуліну ефективно утилізує глюкозу, тоді як індивідуум з низькою чутливістю до інсуліну неефективно утилізує глюкозу. "Міжнуклеозидний зв'язок" позначає хімічний зв'язок між нуклеозидами. "Внутрішньовенне введення" позначає введення у вену. "Зв'язані нуклеозиди" позначають суміжні нуклеозиди, які зв'язані між собою. "Знижуючий рівень ліпідів" означає зменшення рівня одного або більше ліпідів в організмі суб'єкта. "Підвищуючий рівень ліпідів" означає підвищення рівня ліпідів (наприклад, ЛПВЩ) в організмі суб'єкта. Зниження рівня ліпідів або підвищення рівня ліпідів може відбуватися при введенні однієї або більше доз в часі. "Лікарський засіб для зниження рівня ліпідів" або "агент для зниження рівня ліпідів" позначає схему лікування, що проводиться суб'єкту для зниження рівня одного або більше ліпідів в організмі суб'єкта. У деяких варіантах лікарський засіб для зниження рівня ліпідів вводять з метою зниження рівня одного або більше із ТБХЕ, ApoB, загального холестерину, ЛПНЩ-Х, ЛПДНЩ-Х, ЛППЩ-Х, не-ЛПВЩ-Х, тригліцеридів, щільних частинок ЛПНЩ невеликого розміру і Lp(a) в організмі суб'єкта. Приклади лікарського засобу для зниження рівня ліпідів включають статини, фібрати, інгібітори мікросомального білка-переносника тригліцеридів. "Ліпопротеїн", наприклад, ЛПДНЩ, ЛПНЩ і ЛПВЩ, позначає групу білків, які знайдені в сироватці, плазмі і лімфі та є важливими для транспорту ліпідів. Хімічний склад кожного ліпопротеїну відрізняється, зокрема, для ЛПВЩ характерне вище співвідношення білка проти ліпіду, тоді як для ЛПДНЩ характерне нижче співвідношення білка проти ліпіду. 11 UA 115309 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 "Ліпопротеїн низької щільності-холестерин (ЛПНЩ-Х)” позначає холестерин, який переносять частинки ліпопротеїну низької щільності. Концентрація ЛПНЩ-Х в сироватці (або плазмі) звичайно визначається в мг/дл або нмоль/л. "ЛПНЩ-Х сироватки" і "ЛПНЩ-Х плазми" позначає ЛПНЩ-Х в сироватці і плазмі, відповідно. "Основні фактори ризику" позначають фактори, які сприяють високому рівню ризику конкретного захворювання або стану. У деяких варіантах основні фактори ризику захворювання коронарних судин серця включають, не обмежуючись ними, куріння сигарет, гіпертензію, низький рівень ЛПВЩ-Х, родинний анамнез захворювання коронарних судин серця, вік та інші фактори, розкриті в даному описі. "Метаболічний розлад" або "метаболічне захворювання" позначає стан, що характеризується зміною або розладом метаболічної функції. "Метаболічний" і "метаболізм" являють собою терміни, добре відомі з рівня техніки, і, загалом, включають цілий ряд біохімічних процесів, які відбуваються в живому організмі. Метаболічні розлади включають, не обмежуючись ними, гіперглікемію, переддіабетичний стан, діабет (типу 1 і типу 2), ожиріння, інсулінорезистентність, метаболічний синдром і дисліпідемію внаслідок діабету 2 типу. "Метаболічний синдром" позначає стан, що характеризується набором ліпідних і неліпідних факторів ризику серцево-судинного захворювання метаболічного походження. У деяких варіантах метаболічний синдром виявляють за наявності будь-якого із 3-х наступних факторів: об'єм талії більше 102 см у чоловіків або більше 88 см у жінок; рівень тригліцеридів сироватки, як мінімум, 150мг/дл; рівень ЛПВЩ-Х менше 40 мг/дл у чоловіків або менше 50 мг/дл у жінок; артеріальний тиск, як мінімум, 130/85 мм рт. ст; і рівень глюкози в крові натщесерце, як мінімум, 110 мг/дл. Ці показники можуть бути легко виміряні в клінічній практиці (JAMA, 2001, 285: 24862497). "Розузгодження" або "некомплементарна нуклеїнова основа" позначає випадок, коли нуклеїнова основа першої нуклеїнової кислоти не здатна паруватися з відповідною нуклеїновою основою другої або цільової нуклеїнової кислоти (нуклеїнової кислоти-мішені). "Змішана дисліпідемія" позначає стан, що характеризується підвищеним рівнем холестерину і підвищеним рівнем тригліцеридів. "Модифікований міжнуклеозидний зв'язок" позначає заміни або будь-яку модифікацію природного міжнуклеозидного зв'язку. Наприклад, фосфоротіоатний зв'язок є модифікованим міжнуклеозидним зв'язком. "Модифікована нуклеїнова основа" позначає будь-яку нуклеїнову основу, окрім аденіну, цитозину, гуаніну, тимідину або урацилу. Наприклад, 5-метилцитозин є модифікованою нуклеїновою основою. "Немодифікована нуклеїнова основа" позначає пуринові основи аденін (A) і гуанін (G), та піримідинові основи тимін (T), цитозин (C) і урацил (U). "Модифікований нуклеозид" позначає нуклеозид, що містить, як мінімум, один модифікований цукровий фрагмент та/або модифіковану нуклеїнову основу. "Модифікований нуклеотид" позначає нуклеотид, що містить, як мінімум, один модифікований цукровий фрагмент, модифікований міжнуклеозидний зв'язок та/або модифіковану нуклеїнову основу. "Модифікований олігонуклеотид" позначає олігонуклеотид, що містить, як мінімум, один модифікований нуклеотид. "Модифікований цукор" позначає заміщення або модифікацію природного цукру. Наприклад, 2’-O-метоксиетил-модифікований цукор є модифікованим цукром. "Мотив" позначає зразок хімічно відмінних ділянок в антисмисловій сполуці. "Природний міжнуклеозидний зв'язок" позначає 3'-5' фосфодіефірний зв'язок. "Природний цукровий фрагмент" позначає цукор, знайдений в ДНК (2’-H) або РНК (2’-OH). "Нуклеїнова кислота" позначає молекули, що складаються з мономірних нуклеотидів. Нуклеїнова кислота включає рибонуклеїнові кислоти (РНК), дезоксирибонуклеїнові кислоти (ДНК), одноланцюгові нуклеїнові кислоти (олДНК), двохланцюгові нуклеїнові кислоти (длДНК), малі інтерферувальні рибонуклеїнові кислоти (міРНК) та мікроРНК (мікроРНК). Нуклеїнова кислота також може містити комбінацію цих елементів в одній молекулі. "Нуклеїнова основа" позначає гетероциклічний фрагмент, здатний паруватися з основою іншої нуклеїнової кислоти. "Комплементарність нуклеїнових основ" позначає нуклеїнову основу, здатну паруватися з іншою нуклеїновою основою. Наприклад, в ДНК аденін (A) комплементарний до тиміну (T). Наприклад, в РНК аденін (A) комплементарний до урацилу (U). У деяких варіантах комплементарна нуклеїнова основа позначає нуклеїнову основу антисмислової сполуки, здатну паруватися з нуклеїновою основою її нуклеїнової кислоти-мішені. Наприклад, якщо нуклеїнова основа в певному положенні антисмислової сполуки здатна утворювати водневий зв'язок з 12 UA 115309 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 нуклеїновою основою в певному положенні нуклеїнової кислоти-мішені, то олігонуклеотид і нуклеїнова кислота-мішень розглядаються як комплементарні за вказаною парою нуклеїнових основ. "Послідовність нуклеїнових основ" позначає порядок суміжних нуклеїнових основ, незалежно від будь-якої модифікації цукру, зв'язку або нуклеїнової основи. "Нуклеозид" позначає нуклеїнову основу, сполучену із цукром. "Міметичний нуклеозид" включає структури, використовувані для заміни цукру або цукру і основи, і, необов'язково, зв'язки, в одному або більше положень олігомерної сполуки; наприклад, міметичний нуклеозид, що містить морфоліно, циклогексеніл, циклогексил, тетрагідропіраніл, біцикло або трицикло міметичні цукри, такі як нефуранозні цукрові одиниці. "Нуклеотид" позначає нуклеозид, що містить фосфатну групу, ковалентно приєднану до цукрової частини нуклеозиду. "Міметичний нуклеотид" включає структури, використовувані для заміни нуклеозиду і зв'язку в одному або більше положеннях олігомерної сполуки, наприклад, такі як пептиднуклєїнові кислоти або морфолінові групи (морфолінові групи, приєднані за допомогою -N(H)-C(=O)-O- або іншого нефосфодіефірного зв'язку). "Олігомерна сполука" або "олігомер" позначає полімер із зв'язаних мономірних субодиниць, які здатні гібридизуватися з ділянкою молекули нуклеїнової кислоти. У деяких варіантах олігомерні сполуки являють собою олігонуклеозиди. У деяких варіантах олігомерні сполуки являють собою олігонуклеотиди. У деяких варіантах олігомерні сполуки являють собою антисмислові сполуки. У деяких варіантах олігомерні сполуки являють собою антисмислові олігонуклеотиди. У деяких варіантах олігомерні сполуки являють собою химерні олігонуклеотиди. "Олігонуклеотид" позначає полімер із зв'язаних нуклеозидів, кожен з яких може бути модифікованим або немодифікованим, незалежно один від одного. "Парентеральне введення" позначає введення за допомогою ін'єкції або інфузії. Парентеральне введення включає підшкірне введення, внутрішньовенне введення, внутрішньом'язове введення, внутрішньоартеріальне введення, внутрішньочеревинне введення або інтракраніальне введення, наприклад, інтратекальне або інтрацеребровентрикулярне введення. Введення може бути безперервним, хронічним, короткочасним або переривчастим. "Пептид" позначає молекулу, утворену з'єднанням, як мінімум, двох амінокислот амідним зв'язком. Пептид позначає поліпептиди і білки. "Фармацевтичний агент (засіб)” позначає субстанцію, яка забезпечує терапевтичний ефект при введенні індивідууму. Наприклад, в деяких варіантах антисмисловий олігонуклеотид, націлений на ApoCIII, є фармацевтичним агентом (засобом). "Фармацевтична композиція" або "композиція" позначає суміш субстанцій, придатних для введення індивідууму. Наприклад, фармацевтична композиція може містити один або більше активних інгредієнтів і фармацевтичний носій, такий як стерильний водний розчин. "Фармацевтично прийнятний носій" позначає засіб або розбавлювач, який не впливає негативно на структуру сполуки. Деякі з таких носіїв дають можливість фармацевтичним композиціям набувати форми, наприклад, таблеток, пігулок, драже, капсул, рідин, гелів, сиропів, рідких або густих суспензій і пастилок для прийому суб'єктом всередину. Деякі з таких носіїв дають можливість фармацевтичним композиціям набувати форми для ін'єкцій, інфузій або місцевого нанесення. Наприклад, фармацевтично прийнятний носій може бути стерильним водним розчином. "Фармацевтично прийнятне похідне" або "солі" включають похідні сполук, описаних в даному описі, такі як сольвати, гідрати, ефіри, проліки, поліморфи, ізомери, мічені ізотопами варіанти, фармацевтично прийнятні солі та інші похідні, відомі в даній галузі. "Фармацевтично прийнятні солі" позначають фізіологічно і фармацевтично прийнятні солі антисмислових сполук, тобто, солі, які зберігають бажану біологічну активність материнської сполуки і не здійснюють додатково небажаної токсичної дії. Термін "фармацевтично прийнятна сіль" або "сіль" включає сіль, одержану з фармацевтично прийнятними нетоксичними кислотами або основами, зокрема, неорганічними або органічними кислотами та основами. "Фармацевтично прийнятні солі" сполук, описаних в даному описі, можуть бути одержані за способами, відомими з рівня техніки. Огляд фармацевтично прийнятних солей див. у Stahl and Wermuth, Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002). Натрієві солі антисмислових олігонуклеотидів є придатними і добре відомі для терапевтичного введення людині. Відповідно, в одному з варіантів сполуки, описані в даному описі, знаходяться у формі натрієвої солі. "Фосфоротіоатний зв'язок" позначає зв'язок між нуклеозидами, в якому фосфодіефірний 13 UA 115309 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 зв'язок модифікований шляхом заміни одного з атомів кисню, що не утворюють місток, на атом сірки. Фосфоротіоатний зв'язок є модифікованим міжнуклеозидним зв'язком. "Частина" позначає деяку кількість суміжних (тобто, зв'язаних) нуклеїнових основ нуклеїнової кислоти. У деяких варіантах частина є деякою кількістю суміжних нуклеїнових основ нуклеїнової кислоти-мішені. У деяких варіантах частина є деякою кількістю суміжних нуклеїнових основ антисмислової сполуки. "Попереджати" означає відстрочувати або попереджати появу або розвиток захворювання, розладу або стану протягом періоду часу від декількох хвилин до невизначеного часу. Попереджати також означає знижувати ризик розвитку захворювання, розладу або стану. "Проліки" означає терапевтичний засіб, що одержаний в неактивній формі, і який перетворюється на активну форму (тобто, лікарський засіб) в організмі або його клітинах під дією ендогенних ферментів або інших хімічних речовин або умов. "Підвищення" означає збільшення кількості. Наприклад, підвищення рівнів ЛПВЩ в плазмі означає збільшення кількості ЛПВЩ в плазмі. "Співвідношення ТГ до ЛПВЩ" позначає рівні ТГ відносно рівнів ЛПВЩ. Поширеність високих рівнів ТГ та/або низьких рівнів ЛПВЩ пов'язують з поширеністю серцево-судинних захворювань, результатів і смертності. "Покращення співвідношення ТГ до ЛПВЩ" позначає зниження рівнів ТГ та/або підвищення рівнів ЛПВЩ. "Зниження" означає зменшення до меншого ступеня, розміру, кількості або числа. Наприклад, зниження рівнів тригліцеридів в плазмі означає зменшення кількості тригліцеридів в плазмі. "Ділянка" або "цільова ділянка (ділянка-мішень)” визначається як частина нуклеїнової кислоти-мішені, що містить, як мінімум, одну структуру, володіє функцією або характеристикою, яка піддається ідентифікації. Наприклад, цільова ділянка може містити 3" нетрансльовану область, 5" нетрансльовану область, екзон, інтрон, з'єднання екзон/інтрон, кодуючу ділянку, ділянку ініціації трансляції, ділянку закінчення трансляції або іншу визначену ділянку нуклеїнової кислоти. Структурно визначені ділянки для ApoCIII можуть бути одержані за номером доступу із баз даних послідовностей, таких як НЦБІ, і така інформація включена до даного опису шляхом посилання. У деяких варіантах цільова ділянка може містити послідовність від 5" сайта мішені одного сегменту-мішені в межах ділянки-мішені до 3" сайта мішені іншого сегменту-мішені в межах ділянки-мішені. "Рибонуклеотид" позначає нуклеотид, що містить гідроксигруппу в положенні 2" цукрової частини нуклеотиду. Рибонуклеотиди можуть бути модифіковані будь-яким із різноманітних замісників. "Другий агент (інший засіб)” або "другий терапевтичний агент (інший терапевтичний засіб)” позначає засоби, які можуть застосовуватися в комбінації з "першим агентом (засобом)”. Другий терапевтичний агент може включати, не обмежуючись ними, міРНК або антисмисловий олігонуклеотид, зокрема, антисмислові олігонуклеотиди, націлені на ApoCIII. Другий агент може також включати анти-ApoCIII антитіла, інгібітори пептиду ApoCIII, засоби для зниження рівня холестерину, засоби для зниження рівня ліпідів, засоби для зниження рівня глюкози і протизапальні засоби. "Сегменти" визначені як більш маленькі суб-частини ділянок в межах нуклеїнової кислоти. Наприклад, "цільовий сегмент (сегмент-мішень)” позначає послідовність нуклеотидів нуклеїнової кислоти-мішені, на яку націлена одна або більше антисмислових сполук. "5" Сайт" мішені позначає крайній 5" нуклеотид сегменту-мішені. "3" сайт" мішені позначає крайній 3" нуклеотид сегменту-мішені. "Скорочені" або "вкорочені" версії антисмислових олігонуклеотидів або нуклеїнових кислотмішеней, описаних в даному описі, включають делецію одного, двох або більше нуклеозидів. "Побічні ефекти" позначають фізіологічні реакції, пов'язані з лікуванням, окрім бажаних ефектів. У деяких варіантах побічні ефекти включають реакції в місці ін'єкції, аномальні результати печінкових проб, порушення функції нирок, токсичність для печінки, токсичність для нирок, аномалії центральної нервової системи, міопатії і нездужання. Наприклад, підвищені рівні амінотрансферази в сироватці можуть указувати на токсичність для печінки або порушення функції печінки. Наприклад, підвищення рівня білірубіну може указувати на токсичність для печінки або порушення функції печінки. "Одноланцюговий олігонуклеотид" позначає олігонуклеотид, який не гібридизується із комплементарним ланцюгом. "Такий, що специфічно гібридизується" позначає антисмислову сполуку, що володіє достатнім ступенем комплементарності до нуклеїнової кислоти-мішені, щоб здійснювати бажану дію, при демонстрації мінімальної або відсутності дії на нецільові нуклеїнові кислоти, в умовах, 14 UA 115309 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 в яких бажане специфічне зв'язування, тобто, у фізіологічних умовах у випадку аналізів in vivo і терапевтичного застосування. "Статин" позначає засіб, який інгібує активність ГМГ-КоА редуктази. "Підшкірне введення" позначає введення безпосередньо під шкіру. "Суб'єкт" позначає людину або тварину, вибрану для лікування або терапії. "Симптом серцево-судинного захворювання або розладу" позначає феномен, який виникає в результаті і супроводжує серцево-судинне захворювання або розлад, а також служить вказівкою на нього. Наприклад, стенокардія; біль у грудях; задишка; серцебиття; слабкість; запаморочення; нудота; підвищення потовиділення; тахікардія; брадикардія; аритмія; мерехтіння передсердь; набряк нижніх кінцівок; ціаноз; втомленість; слабкість; оніміння обличчя; оніміння кінцівок; кульгавість або м'язові спазми; здуття живота; або гарячка є симптомами серцево-судинного захворювання або розладу. "Націлювання" або "націлений" позначає процес конструювання і селекції антисмислової сполуки, яка специфічно гібридизується із нуклеїновою кислотою-мішенню і здійснює бажаний ефект. "Нуклеїнова кислота-мішень (цільова нуклеїнова кислота)", "РНК-мішень (цільова РНК)" і "транскрипт РНК-мішень (цільовий трансикрипт РНК)” всі позначають нуклеїнову кислоту, на яку можуть бути націлені антисмислові сполуки. "Терапевтична модифікація способу життя" позначає модифікацію раціону і способу життя, мета якої полягає в зниженні вмісту жиру/маси жирової тканини та/або рівня холестерину. Така модифікація може знижувати ризик розвитку захворювання серця, і може включати рекомендації з дієтичного споживання загальної добової кількості калорій, загального жиру, насичених жирів, поліненасичених жирів, ненасичених жирів, вуглеводів, білків, холестерину, нерозчинних волокон, а також рекомендації щодо фізичної активності. "Лікувати" позначає введення сполуки за винаходом з метою зміни або покращення перебігу захворювання, розладу або стану. "Тригліцерид" або "ТГ" позначає ліпід або нейтральний жир, що складається з гліцерину, з'єднаного з трьома молекулами жирних кислот. "Діабет 2 типу" (також відомий як "цукровий діабет 2 типу", "цукровий діабет, тип 2", "діабет 2 типу", "інсуліннезалежний діабет (ІНЗСД)”, "пов'язаний з ожирінням діабет" або "діабет зрілого віку") являє собою метаболічний розлад, який, перш за все, характеризується інсулінорезистентністю, відносним дефіцитом інсуліну та гіперглікемією. "Немодифікований нуклеотид" позначає нуклеотид, що складається з природних нуклеїнових основ, цукрових фрагментів і міжнуклеозидних зв'язків. У деяких варіантах немодифікований нуклеотид являє собою РНК нуклеотид (тобто, β-D-рибонуклеозиди) або ДНК нуклеотид (тобто, β-D-дезоксирибонуклеозид). "Сегмент крила" позначає один або декілька нуклеозидів, модифікованих таким чином, щоб надати олігонуклеотиду такі властивості, як підвищена інгібувальна активність, підвищена спорідненість зв'язування з нуклеїновою кислотою-мішенню або стійкість до розкладу нуклеазами in vivo. Деякі варіанти У деяких варіантах пропонується спосіб зниження рівнів ApoCIII в організмі тварини шляхом введення тварині сполуки, націленої на ApoCIII, таким чином, знижуючи рівні ApoCIII. У деяких варіантах рівні ApoCIII знижуються в печінці або тонкому кишечнику. У деяких варіантах пропонується спосіб підвищення рівнів ЛПВЩ та/або покращення співвідношення ТГ до ЛПВЩ у тварини шляхом введення тварині сполуки, причому сполука націлена на ApoCIII і підвищує рівні ЛПВЩ та/або покращує співвідношення ТГ до ЛПВЩ. У деяких варіантах пропонується спосіб попередження, відстрочення або полегшення перебігу серцево-судинного захворювання, розладу, стану або його симптому у тварини, що включає введення тварині сполуки, націленої на ApoCIII, причому сполука, яку вводять тварині, попереджає, лікує або полегшує перебіг серцево-судинного захворювання, розладу, стану або симптому у тварини шляхом підвищення рівнів ЛПВЩ в організмі тварини та/або покращення співвідношення ТГ до ЛПВЩ. У деяких варіантах пропонується спосіб попередження, відстрочення або полегшення перебігу панкреатиту у тварини, що включає введення тварині сполуки, націленої на ApoCIII, причому сполука, яку вводять тварині, попереджає, лікує або полегшує перебіг панкреатиту у тварини шляхом підвищення рівнів ЛПВЩ в організмі тварини та/або покращення співвідношення ТГ до ЛПВЩ. У деяких варіантах панкреатит є гострим панкреатитом. У деяких варіантах пропонується спосіб попередження, лікування, полегшення, відстрочення початку або зниження ризику серцево-судинного захворювання, розладу або 15 UA 115309 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 стану у тварини, який включає введення тварині сполуки, націленої на ApoCIII, причому сполука попереджає, лікує, полегшує, відстрочує початок або знижує ризик серцево-судинного захворювання, розладу або стану у тварини шляхом підвищення рівнів ЛПВЩ в організмі тварини та/або покращення співвідношення ТГ до ЛПВЩ. У деяких варіантах пропонується спосіб зниження рівнів ТБХЕ шляхом введення тварині сполуки, націленої на ApoCIII. У деяких варіантах пропонується спосіб підвищення рівня ApoA1, PON1, кліренсу жирів, кліренсу хіломікрон тригліцеридів та/або рівнів ЛПВЩ шляхом введення тварині сполуки, націленої на ApoCIII. У деяких варіантах пропонується спосіб покращення співвідношення ТГ до ЛПВЩ. У деяких варіантах нуклеїнова кислота ApoCIII являє собою будь-яку із послідовностей, що містяться в GENBANK, номер доступу NM_000040.1 (включена до даного опису як SEQ ID NO: 1), і GENBANK, номер доступу NT_033899.8 вкорочена від нуклеотиду 20262640 до 20266603 (включена до даного опису як SEQ ID NO: 2). У деяких варіантах сполука, націлена на ApoCIII, є модифікованим олігонуклеотидом. У подальших варіантах модифікований олігонуклеотид включає послідовність нуклеїнових основ, що містить, як мінімум, 8 суміжних нуклеїнових основ ISIS 304801 (SEQ ID NO: 3). У деяких варіантах модифікований олігонуклеотид є, як мінімум, на 80 %, як мінімум, на 85 %, як мінімум, на 90 %, як мінімум, на 95 %, як мінімум, на 98 % або, як мінімум, на 100 % комплементарним до SEQ ID NO: 1 або SEQ ID NO: 2. У деяких варіантах модифікований олігонуклеотид складається з одноланцюгового модифікованого олігонуклеотиду. У деяких варіантах модифікований олігонуклеотид складається з 12-30 зв'язаних нуклеозидів. У деяких варіантах модифікований олігонуклеотид складається з 20 зв'язаних нуклеозидів. У деяких варіантах сполука містить, як мінімум, один модифікований міжнуклеозидний зв'язок. У деяких варіантах міжнуклеозидний зв'язок являє собою фосфоротіоатний міжнуклеозидний зв'язок. У деяких варіантах сполука містить, як мінімум, один нуклеозид, що містить модифікований цукор. У деяких варіантах, як мінімум, один модифікований цукор є біциклічним цукром. У деяких варіантах, як мінімум, один модифікований цукор містить 2’-O-метоксиетил. У деяких варіантах сполука містить, як мінімум, один нуклеозид, що містить модифіковану нуклеїнову основу. У деяких варіантах модифікована нуклеїнова основа являє собою 5метилцитозин. У деяких варіантах сполука містить модифікований олігонуклеотид, що містить: (i) сегмент проміжку, що складається із зв'язаних дезоксинуклеозидів; (ii) сегмент 5" крила, що складається із зв'язаних нуклеозидів; (iii) сегмент 3" крила, що складається із зв'язаних нуклеозидів, причому сегмент проміжку розташований безпосередньо суміжним до і між сегментом 5" крила і сегментом 3" крила, і при цьому кожен нуклеозид кожного сегменту крила містить модифікований цукор. У деяких варіантах сполука містить модифікований олігонуклеотид, що містить: (i) сегмент проміжку, що складається з 8-12 зв'язаних дезоксинуклеозидів; (ii) сегмент 5" крила, що складається з 1-5 зв'язаних нуклеозидів; (iii) сегмент 3" крила, що складається з 1-5 зв'язаних нуклеозидів, причому сегмент проміжку розташований безпосередньо суміжним до і між сегментом 5" крила і сегментом 3" крила, і при цьому кожен нуклеозид кожного сегменту крила містить 2’-O-метоксиетилцукор, при тому, що кожен цитозин являє собою 5’-метилцитозин, і при цьому кожен міжнуклеозидний зв'язок являє собою фосфоротіоатний зв'язок. У деяких варіантах сполука містить модифікований олігонуклеотид, що включає: (i) сегмент проміжку, що складається з 10 зв'язаних дезоксинуклеозидів; (ii) сегмент 5" крила, що складається із 5 зв'язаних нуклеозидів; (iii) сегмент 3" крила, що складається із 5 зв'язаних нуклеозидів, причому сегмент проміжку розташований безпосередньо суміжним до і між сегментом 5" крила і сегментом 3" крила, і при цьому кожен нуклеозид кожного сегменту крила містить 2’-O-метоксиетилцукор, при тому, що кожен цитозин являє собою 5’-метилцитозин, і при цьому, кожен міжнуклеозидний зв'язок являє собою фосфоротіоатний зв'язок. У деяких варіантах модифікований олігонуклеотид містить послідовність нуклеїнових основ, що містить, як мінімум, 8 суміжних нуклеїнових основ послідовності нуклеїнових основ ISIS 304801 (SEQ ID NO: 3). У деяких варіантах пропонується спосіб зниження ризику серцево-судинного захворювання у тварини шляхом введення тварині терапевтично ефективної кількості сполуки, яка містить модифікований олігонуклеотид, що складається з 12-30 зв'язаних нуклеозидів, причому 16 UA 115309 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 модифікований олігонуклеотид є комплементарним до нуклеїнової кислоти ApoCIII, і при цьому модифікований олігонуклеотид підвищує рівні ЛПВЩ та/або покращує співвідношення ТГ до ЛПВЩ. У деяких варіантах нуклеїнова кислота ApoCIII є будь-якою із SEQ ID NO: 1 або SEQ ID NO: 2. У деяких варіантах модифікований олігонуклеотид є, як мінімум, на 80 %, як мінімум, на 85 %, як мінімум, на 90 %, як мінімум, на 95 %, як мінімум, на 98 % або, як мінімум, на 100 % комплементарним до SEQ ID NO: 1 або SEQ ID NO: 2. У подальших варіантах модифікований нуклеотид містить, як мінімум, 8 суміжних нуклеїнових основ послідовності нуклеїнових основ ISIS 304801 (SEQ ID NO: 3). У деяких варіантах пропонується спосіб попередження, лікування, полегшення або зменшення, як мінімум, одного симптому серцево-судинного захворювання у тварини, що включає введення тварині терапевтично ефективної кількості сполуки, яка містить модифікований олігонуклеотид, що складається з 12-30 зв'язаних нуклеозидів і комплементарний до нуклеїнової кислоти ApoCIII. У деяких варіантах нуклеїнова кислота ApoCIII є будь-якою із SEQ ID NO: 1 або SEQ ID NO: 2. У деяких варіантах модифікований олігонуклеотид є, як мінімум, на 80 %, як мінімум, на 85 %, як мінімум, на 90 %, як мінімум, на 95 %, як мінімум, на 98 % або, як мінімум, на 100 % комплементарним до SEQ ID NO: 1 або SEQ ID NO: 2. У подальших варіантах сполука, яку вводять тварині, попереджає, лікує, полегшує або зменшує, як мінімум, один симптом серцево-судинного захворювання шляхом підвищення рівнів ЛПВЩ та/або покращення співвідношення ТГ до ЛПВЩ. У подальших варіантах модифікований олігонуклеотид містить, як мінімум, 8 суміжних нуклеїнових основ ISIS 304801 (SEQ ID NO: 3). У подальших варіантах симптоми серцево-судинного захворювання включають, не обмежуючись ними, стенокардію; біль у грудях; задишку; серцебиття; слабкість; запаморочення; нудоту; підвищене потовиділення; тахікардію; брадикардію; аритмію; мерехтіння передсердь; набряк нижніх кінцівок; ціаноз; втомленість; слабкість; оніміння обличчя; оніміння кінцівок; кульгавість або м'язові спазми; здуття живота; або гарячку. У деяких варіантах пропонується спосіб підвищення рівнів ЛПВЩ та/або покращення співвідношення ТГ до ЛПВЩ у тварини шляхом введення тварині сполуки, що складається з послідовності нуклеїнових основ ISIS 304801 (SEQ ID NO: 3). У подальших варіантах пропонується спосіб попередження, лікування, полегшення або зменшення, як мінімум, одного симптому серцево-судинного захворювання у тварини шляхом введення тварині сполуки, що складається з послідовності нуклеїнових основ ISIS 304801 (SEQ ID NO: 3), таким чином, підвищуючи рівні ЛПВЩ та/або покращуючи співвідношення ТГ до ЛПВЩ у тварини. У деяких варіантах пропонується спосіб підвищення рівнів ЛПВЩ та/або покращення співвідношення ТГ до ЛПВЩ у тварини шляхом введення тварині модифікованого олігонуклеотиду, що містить послідовність ISIS 304801, причому модифікований олігонуклеотид містить: (i) сегмент проміжку, що складається з 10 зв'язаних дезоксинуклеозидів; (ii) сегмент 5" крила, що складається із 5 зв'язаних нуклеозидів; (iii) сегмент 3" крила, що складається із 5 зв'язаних нуклеозидів, причому сегмент проміжку розташований безпосередньо суміжним до і між сегментом 5" крила і сегментом 3" крила, і при цьому кожен нуклеозид кожного сегменту крила містить 2’-O-метоксиетилцукор, при тому, що кожен цитозин являє собою 5’метилцитозин, і при цьому кожен міжнуклеозидний зв'язок являє собою фосфоротіоатний зв'язок. У деяких варіантах пропонується спосіб попередження, лікування, полегшення або зменшення, як мінімум, одного симптому серцево-судинного захворювання у тварини шляхом введення тварині модифікованого олігонуклеотиду, що містить послідовність ISIS 304801 (SEQ ID NO: 3), причому модифікований олігонуклеотид сполуки включає: (i) сегмент проміжку, що складається з 10 зв'язаних дезоксинуклеозидів; (ii) сегмент 5" крила, що складається із 5 зв'язаних нуклеозидів; (iii) сегмент 3" крила, що складається із 5 зв'язаних нуклеозидів, причому сегмент проміжку розташований безпосередньо суміжним до і між сегментом 5" крила і сегментом 3" крила, і при цьому кожен нуклеозид кожного сегменту крила містить 2’-Oметоксиетилцукор, при тому, що кожен цитозин являє собою 5’-метилцитозин, і при цьому кожен міжнуклеозидний зв'язок являє собою фосфоротіоатний зв'язок. У деяких варіантах пропонується спосіб підвищення рівнів ЛПВЩ та/або покращення співвідношення ТГ до ЛПВЩ у тварини шляхом введення тварині сполуки, яка містить модифікований олігонуклеотид, що складається з 12-30 зв'язаних нуклеозидів, причому модифікований олігонуклеотид є комплементарним до нуклеїнової кислоти ApoCIII. У деяких варіантах нуклеїнова кислота ApoCIII є будь-якою із SEQ ID NO: 1 або SEQ ID NO: 2. У деяких варіантах модифікований олігонуклеотид є, як мінімум, на 80 %, як мінімум, на 85 %, як мінімум, на 90 %, як мінімум, на 95 %, як мінімум, на 98 % або, як мінімум, на 100 % комплементарним до SEQ ID NO: 1 або SEQ ID NO: 2. 17 UA 115309 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 У деяких варіантах пропонується спосіб попередження, лікування, полегшення або зменшення, як мінімум, одного симптому серцево-судинного захворювання у тварини шляхом введення тварині сполуки, яка містить модифікований олігонуклеотид, що складається з 12-30 зв'язаних нуклеозидів, причому модифікований олігонуклеотид є комплементарним до нуклеїнової кислоти ApoCIII і підвищує рівні ЛПВЩ у тварини. У деяких варіантах нуклеїнова кислота ApoCIII є будь-якою із SEQ ID NO: 1 або SEQ ID NO: 2. У деяких варіантах модифікований олігонуклеотид є, як мінімум, на 80 %, як мінімум, на 85 %, як мінімум, на 90 %, як мінімум, на 95 %, як мінімум, на 98 % або, як мінімум, на 100 % комплементарним до SEQ ID NO: 1 або SEQ ID NO: 2. У деяких варіантах пропонується спосіб зниження рівнів ТБХЕ шляхом введення тварині сполуки, націленої на ApoCIII. У деяких варіантах сполука містить модифікований олігонуклеотид, що складається з 12-30 зв'язаних нуклеозидів, причому модифікований олігонуклеотид є комплементарним до нуклеїнової кислоти ApoCIII. У деяких варіантах нуклеїнова кислота ApoCIII є будь-якою із SEQ ID NO: 1 або SEQ ID NO: 2. У деяких варіантах модифікований олігонуклеотид є, як мінімум, на 80 %, як мінімум, на 85 %, як мінімум, на 90 %, як мінімум, на 95 %, як мінімум, на 98 % або, як мінімум, на 100 % комплементарним до SEQ ID NO: 1 або SEQ ID NO: 2. У деяких варіантах сполука містить модифікований олігонуклеотид, що складається з 12-30 зв'язаних нуклеозидів, і включає послідовність нуклеїнових основ, що містить, як мінімум, 8 суміжних нуклеїнових основ ISIS 304801 (SEQ ID NO: 3). У деяких варіантах сполука складається з нуклеїнових основ ISIS 304801 (SEQ ID NO: 3). У деяких варіантах пропонується спосіб підвищення рівня ApoA1, PON1, кліренсу жирів, кліренсу хіломікрон тригліцеридів та/або рівнів ЛПВЩ шляхом введення тварині сполуки, націленої на ApoCIII. У деяких варіантах сполука містить модифікований олігонуклеотид, що складається з 12-30 зв'язаних нуклеозидів, причому модифікований олігонуклеотид є комплементарним до нуклеїнової кислоти ApoCIII. У деяких варіантах нуклеїнова кислота ApoCIII є будь-якою із SEQ ID NO: 1 або SEQ ID NO: 2. У деяких варіантах модифікований олігонуклеотид є, як мінімум, на 80 %, як мінімум, на 85 %, як мінімум, на 90 %, як мінімум, на 95 %, як мінімум, на 98 % або, як мінімум, на 100 % комплементарним до SEQ ID NO: 1 або SEQ ID NO: 2. У деяких варіантах сполука містить модифікований олігонуклеотид, що складається з 12-30 зв'язаних нуклеозидів, і включає послідовність нуклеїнових основ, що містить, як мінімум, 8 суміжних нуклеїнових основ ISIS 304801 (SEQ ID NO: 3). У деяких варіантах сполука складається з нуклеїнових основ ISIS 304801 (SEQ ID NO: 3). У деяких варіантах тварина є людиною. У деяких варіантах серцево-судинне захворювання є аневризмою, стенокардією, аритмією, атеросклерозом, цереброваскулярним захворюванням, захворюванням коронарних судин серця, гіпертензією, дисліпідемією, гіперліпідемією, гіпертригліцеридемією або гіперхолестеринемією. У деяких варіантах дисліпідемія є хіломікронемією. У деяких варіантах тварина знаходиться в групі ризику панкреатиту. У деяких варіантах зниження рівнів ApoCIII в печінці та/або тонкому кишечнику попереджає панкреатит. У деяких варіантах підвищення рівнів ЛПВЩ та/або покращення співвідношення ТГ до ЛПВЩ попереджає панкреатит. У деяких варіантах зниження рівнів ApoCIII в печінці та/або тонкому кишечнику збільшує кліренс тригліцеридів після вживання їжі. У деяких варіантах підвищення рівнів ЛПВЩ та/або покращення співвідношення ТГ до ЛПВЩ збільшує кліренс тригліцеридів після вживання їжі. У деяких варіантах зниження рівнів ApoCIII в печінці та/або тонкому кишечнику знижує рівень тригліцеридів після вживання їжі. У деяких варіантах підвищення рівнів ЛПВЩ та/або покращення співвідношення ТГ до ЛПВЩ знижує рівень тригліцеридів після вживання їжі. У деяких варіантах зниження рівнів ApoCIII в печінці та/або тонкому кишечнику покращує співвідношення ЛПВЩ до ТГ. У деяких варіантах сполуку вводять парентерально. В інших варіантах парентеральне введення є підшкірним введенням. У деяких варіантах сполуку вводять разом з другим засобом. У деяких варіантах другий засіб є засобом для зниження рівня глюкози. У деяких варіантах другий засіб є засобом для зниження рівнів ЛПВЩ, ТГ або холестерину. У певних варіантах сполуку і другий засіб вводять паралельно або послідовно. У деяких варіантах сполука знаходиться у формі солі. У подальших варіантах сполука додатково включає фармацевтично прийнятний носій або розбавлювач. У деяких варіантах пропонується застосування сполуки, націленої на ApoCIII, для одержання лікарського засобу для зниження рівнів ApoCIII у тварини. У деяких варіантах пропонується застосування сполуки, націленої на ApoCIII, для зниження рівнів ApoCIII у 18 UA 115309 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 тварини. У деяких варіантах рівні ApoCIII знижуються в печінці або тонкому кишечнику. У деяких варіантах пропонується застосування сполуки, націленої на ApoCIII, для одержання лікарського засобу для попередження, лікування, полегшення або зменшення, як мінімум, одного симптому серцево-судинного захворювання, шляхом підвищення рівнів ЛПВЩ та/або покращення співвідношення ТГ до ЛПВЩ. У деяких варіантах пропонується застосування сполуки, націленої на ApoCIII, для попередження, лікування, полегшення або зменшення, як мінімум, одного симптому серцево-судинного захворювання, шляхом підвищення рівнів ЛПВЩ та/або покращення співвідношення ТГ до ЛПВЩ. У деяких варіантах пропонується застосування сполуки, націленої на ApoCIII, для підвищення рівнів ЛПВЩ та/або покращення співвідношення ТГ до ЛПВЩ у тварини. У деяких варіантах пропонується застосування сполуки, націленої на ApoCIII, для одержання лікарського засобу для підвищення рівнів ЛПВЩ та/або покращення співвідношення ТГ до ЛПВЩ у тварини. У деяких варіантах сполука є, як мінімум, на 80 %, як мінімум, на 85 %, як мінімум, на 90 %, як мінімум, на 95 %, як мінімум, на 98 % або як мінімум, на 100 % комплементарною до послідовності нуклеїнової кислоти ApoCIII. У деяких варіантах нуклеїнова кислота ApoCIII представлена будь-якою з SEQ ID NO: 1 або SEQ ID NO: 2. У деяких варіантах сполука є модифікованим олігонуклеотидом. У деяких варіантах модифікований олігонуклеотид містить послідовність нуклеїнових основ, що містить, як мінімум, 8 нуклеїнових основ ISIS 304801 (SEQ ID NO: 3). У деяких варіантах модифікований олігонуклеотид містить послідовність нуклеїнових основ ISIS 304801 (SEQ ID NO: 3). У деяких варіантах пропонується застосування сполуки, націленої на ApoCIII, для одержання лікарського засобу для лікування тварини, яка страждає на панкреатит або схильна до ризику панкреатиту. У деяких варіантах пропонується застосування сполуки, націленої на ApoCIII, для лікування тварини, яка страждає на панкреатит або схильна до ризику панкреатиту. У деяких варіантах пропонується застосування сполуки, націленої на ApoCIII, для одержання лікарського засобу для зниження рівнів ApoCIII в печінці та/або тонкому кишечнику. У деяких варіантах пропонується застосування сполуки, націленої на ApoCIII, для зниження рівнів ApoCIII в печінці та/або тонкому кишечнику. У деяких варіантах пропонується застосування сполуки, націленої на ApoCIII, для одержання лікарського засобу для попередження панкреатиту. У деяких варіантах пропонується застосування сполуки, націленої на ApoCIII, для попередження панкреатиту. У деяких варіантах пропонується застосування сполуки, націленої на ApoCIII, для одержання лікарського засобу для зниження рівнів ApoCIII в печінці та/або тонкому кишечнику тварини з гіпертригліцеридемією. У деяких варіантах пропонується застосування сполуки, націленої на ApoCIII, з метою зниження рівнів ApoCIII в печінці та/або тонкому кишечнику тварини з гіпертригліцеридемією. У деяких варіантах пропонується застосування сполуки, націленої на ApoCIII, для одержання лікарського засобу для підвищення кліренсу тригліцеридів після вживання їжі. У деяких варіантах пропонується застосування сполуки, націленої на ApoCIII, з метою підвищення кліренсу тригліцеридів після вживання їжі. У деяких варіантах пропонується застосування сполуки, націленої на ApoCIII, для одержання лікарського засобу для зниження рівня тригліцеридів після вживання їжі. У деяких варіантах пропонується застосування сполуки, націленої на ApoCIII, з метою зниження рівня тригліцеридів після вживання їжі. Антисмислові сполуки Олігомерні сполуки включають, не обмежуючись ними, олігонуклеотиди, олігонуклеозиди, аналоги олігонуклеотидів, міметики олігонуклеотидів, антисмислові сполуки, антисмислові олігонуклеотиди і міРНК. Олігомерна сполука може бути "антисмисловою" по відношенню до цільової нуклеїнової кислоти, і це означає, що сполука здатна до гібридизації з цільовою нуклеїновою кислотою за допомогою водневого зв'язку. У деяких варіантах антисмислова сполука містить послідовність нуклеїнових основ, яка, при написанні в напрямку від 5" до 3", включає зворотну комплементарність цільового сегменту до цільової нуклеїнової кислоти, на яку вона націлена. У деяких з таких варіантів, антисмисловий олігонуклеотид містить послідовність нуклеїнових основ, яка, при написанні в напрямку від 5" до 3", включає зворотну комплементарність цільового сегменту до цільової нуклеїнової кислоти, на яку вона націлена. У деяких варіантах довжина антисмислової сполуки, націленої на нуклеїнову кислоту ApoCIII, становить 12-30 нуклеотидів. Іншими словами, довжина антисмислової сполуки становить 12-30 зв'язаних нуклеїнових основ. В інших варіантах антисмислова сполука містить модифікований олігонуклеотид, що складається з 8-80, 10-80, 12-50, 15-30, 18-24, 19-22 або 20 зв'язаних нуклеїнових основ. У деяких з таких варіантів антисмислова сполука містить модифікований олігонуклеотид довжиною 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37,38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 19 UA 115309 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 або 80 зв'язаних нуклеїнових основ, або в інтервалі, визначеному будь-якими двома із згаданих вище значень. У деяких варіантах антисмислова сполука є антисмисловим олігонуклеотидом. У деяких варіантах антисмислова сполука містить скорочений або вкорочений модифікований олігонуклеотид. У скороченому або вкороченому модифікованому олігонуклеотиді один або більше нуклеозидів можуть бути видалені з 5" кінця (5" вкорочення), один або більше нуклеозидів можуть бути видалені з 3" кінця (3" вкорочення) або один або більше нуклеозидів можуть бути видалені із центральної частини. Альтернативно, видалені нуклеозиди можуть бути розподілені в модифікованому олігонуклеотиді, наприклад, в антисмисловій сполуці один нуклеозид видалений з 5" кінця і один нуклеозид видалений з 3" кінця. Якщо один додатковий нуклеозид присутній в подовженому олігонуклеотиді, додатковий нуклеозид може бути розташований в центральній частині, на 5" або 3" кінці олігонуклеотиду. Якщо присутні два або більше додаткових нуклеозидів, додаткові нуклеозиди можуть бути суміжними по відношенню один до одного, наприклад, в олігонуклеотиді, що містить два нуклеозиди, доданих до центральної частини, до 5" кінця (5" додавання) або, альтернативно, до 3" кінця (3" додавання) олігонуклеотиду. Альтернативно, додаткові нуклеозиди можуть бути розподілені в антисмисловій сполуці, наприклад, в олігонуклеотиді, що містить один нуклеозид, доданий до 5" кінця, і одну субодиницю, додану до 3" кінця. Можна збільшити або зменшити довжину антисмислової сполуки, такої як антисмисловий олігонуклеотид, та/або ввести розузгодження основ без втрати активності. Наприклад, в Woolf et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:7305-7309, 1992) серія антисмислових олігонуклеотидів довжиною 13-25 нуклеїнових основ була перевірена щодо здатності індукувати розщеплення цільової РНК в моделі ін'єкції ооциту. Антисмислові олігонуклеотиди довжиною 25 нуклеїнових основ з 8 або 11 розузгодженнями основ поблизу кінців антисмислових олігонуклеотидів були здатні спрямовувати специфічне розщеплення цільової мРНК, хоча і меншою мірою, ніж антисмислові олігонуклеотиди, які не містили розузгоджень. Також, цільове специфічне розщеплення було досягнуте з використанням антисмислових олігонуклеотидів довжиною 13 нуклеїнових основ, зокрема, що містять 1 або 3 розузгодження. Gautschi et al (J. Natl. Cancer Inst. 93:463-471, March 2001) продемонстрували здатність олігонуклеотиду, на 100 % комплементарного до мРНК bcl-2, і такого, що містить 3 розузгодження bcl-xL мРНК, зменшувати експресію як bcl-2, так і bcl-xL in vitro та in vivo. До того ж, даний олігонуклеотид продемонстрував високу протипухлинну активність in vivo. Maher і Dolnick (Nuc. Acid. Res. 16:3341-3358,1988) перевірили серію тандемних антисмислових олігонуклеотидів довжиною 14 нуклеїнових основ, і антисмислових олігонуклеотидів довжиною 28 і 42 нуклеїнових основи, що складаються з послідовності 2-х або 3-х тандемних антисмислових олігонуклеотидів, відповідно, щодо їх здатності зупиняти трансляцію дигідрофолатредуктази людини в аналізі на ретикулоцитах кролика. Кожен із трьох антисмислових олігонуклеотидів довжиною 14 нуклеїнових основ окремо міг перешкодити трансляції, хоча на нижчому рівні, ніж антисмислові олігонуклеотиди довжиною 28 або 42 нуклеїнових основи. Мотиви антисмислової сполуки У деяких варіантах антисмислові сполуки, націлені на нуклеїнову кислоту ApoCIII, містили хімічно модифіковані субодиниці, організовані в патерни або мотиви, для забезпечення таких властивостей антисмислових сполук, як підвищена інгібувальна активність, підвищена спорідненість зв'язування з цільовою нуклеїновою кислотою або стійкість до розщеплення нуклеазами in vivo. Химерні антисмислові сполуки звичайно містять, як мінімум, одну модифіковану ділянку, щоб забезпечити підвищений опір розщепленню нуклеазою, збільшення захоплення клітиною, збільшення спорідненості зв'язування з цільовою нуклеїновою кислотою та/або підвищення інгібувальної активності. Друга ділянка химерної антисмислової сполуки необов'язково може служити субстратом для клітинної ендонуклеази РНКази H, яка розщеплює ланцюг РНК в дуплексі РНК:ДНК. Антисмислові сполуки, що містять мотив химерного нуклеотиду, вважаються химерними антисмисловими сполуками. У химерному нуклеотиді внутрішня ділянка, що містить численні нуклеотиди, яка підтримує розщеплення РНКазою H, розташована між зовнішніми ділянками, що містять численні нуклеотиди, які з хімічної точки зору відрізняються від нуклеозидів внутрішньої ділянки. У випадку антисмислового олігонуклеотиду, що містить мотив химерного нуклеотиду, сегмент проміжку, загалом, служить субстратом для розщеплення ендонуклеазою, 20 UA 115309 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 тоді як сегменти крила включають модифіковані нуклеозиди. У деяких варіантах ділянки химерного нуклеотиду диференційовані за видами цукрових фрагментів, кожен з яких містить відмінну ділянку. Види цукрових фрагментів, які використовуються для диференціації ділянок химерного нуклеотиду, можуть в деяких варіантах включати β-D-рибонуклеозиди, β-Dдезоксирибонуклеозиди, 2’-модифіковані нуклеозиди (такі 2’-модифіковані нуклеозиди можуть включати, серед іншого, 2’-MOE і 2’-O-CH3), і модифіковані біциклічним цукром нуклеозиди (такі модифіковані біциклічним цукром нуклеозиди можуть включати такі, що містять місток 4’-(CH2)nO-2", в якому n=1 або n=2). Переважно, кожна відмінна ділянка містить однорідні залишки цукру. Мотив крило-проміжок-крило часто описують як "X-Y-Z", причому "X" представляє довжину ділянки 5" крила, "Y" представляє довжину проміжку, і "Z" представляє довжину ділянки 3" крила. В даному описі химерний нуклеотид, описаний як "X-Y-Z", має таку конфігурацію, що сегмент проміжку розташований безпосередньо суміжним до кожного із сегменту 5" крила і сегменту 3" крила. Таким чином, відсутні проміжні нуклеотиди між сегментом 5" крила і сегментом проміжку або сегментом проміжку і сегментом 3" крила. Будь-яка із антисмислових сполук, описаних в даному описі, може містити мотив химерного нуклеотиду. У деяких варіантах X і Z є однаковими; в інших варіантах вони різні. У переважному варіанті довжина Y складає від 8 до 15 нуклеотидів, довжина X, Y або Z може становити 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 або більше нуклеотидів. Таким чином, химерні нуклеотиди включають, не обмежуючись ними, наприклад, 5-10-5, 4-8-4, 4-12-3, 4-12-4, 3-14-3, 2-13-5, 2-16-2, 1-18-1, 3-10-3, 2-10-2, 1-10-1, 2-8-2, 6-8-6, 5-8-5, 1-8-1, 2-6-2, 2-13-2, 1-8-2, 2-8-3, 3-10-2, 1-18-2 або 2-18-2. У деяких варіантах антисмислова сполука як мотив "химерного крила" має конфігурацію крила-проміжку або проміжку-крила, тобто конфігурацію X-Y або Y-Z, як викладено вище для конфігурації химерного нуклеотиду. Таким чином, конфігурації химерного крила включають, не обмежуючись ними, наприклад, 5-10, 8-4, 4-12, 12-4, 3-14, 16-2, 18-1, 10-3, 2-10, 1-10, 8-2, 2-13 або 5-13. У деяких варіантах антисмислові сполуки, націлені на нуклеїнову кислоту ApoCIII, містять мотив химерного нуклеотиду 5-10-5. У деяких варіантах антисмислова сполука, націлена на нуклеїнову кислоту ApoCIII, містить розширений проміжком мотив. Цільові нуклеїнові кислоти, цільові ділянки і послідовності нуклеотидів Нуклеотидні послідовності, які кодують ApoCIII, включають, не обмежуючись ними, наступні: GENBANK номер доступу NM_000040.1 (включена до даного опису як SEQ ID NO: 1) і GENBANK номер доступу NT_033899.8 вкорочена від нуклеотиду 20262640 до 20266603 (включена до даного опису як SEQ ID NO: 2). Слід розуміти, що послідовність, сформульована в кожній SEQ ID NO в Прикладах, які містяться в даному описі, є незалежною від будь-якої модифікації цукрового фрагмента, міжнуклеозидного зв'язку або нуклеїнової основи. Як такі, антисмислові сполуки, визначені SEQ ID NO, незалежно можуть містити одну або більше модифікацій цукрового фрагмента, міжнуклеозидного зв'язку або нуклеїнової основи. Антисмислові сполуки, описані номером Isis (Isis No) показують комбінацію послідовності нуклеїнових основ і мотиву. У деяких варіантах цільова ділянка є структурно визначеною ділянкою нуклеїнової кислотимішені. Наприклад, цільова ділянка може містити 3" UTR, 5" UTR, екзон, інтрон, з'єднання екзон/інтрон, кодуючу ділянку, ділянку ініціації трансляції, ділянку закінчення трансляції або іншу визначену ділянку нуклеїнової кислоти. Структурно визначені ділянки для ApoCIII можуть бути одержані за номером доступу із баз даних послідовностей, таких як НЦБІ, і така інформація включена до даного опису шляхом посилання. У деяких варіантах цільова ділянка може містити послідовність від цільового сайта 5" одного цільового сегменту в межах цільової ділянки до цільового сайта 3" іншого цільового сегменту в межах цільової ділянки. У деяких варіантах "цільовий сегмент" є меншою частиною цільової ділянки в межах нуклеїнової кислоти. Наприклад, цільовий сегмент може бути послідовністю нуклеотидів нуклеїнової кислоти-мішені, на яку націлена одна або більше антисмислових сполук. "Цільовий сайт 5" ” позначає розташований на 5’-кінці нуклеотид цільового сегменту. "Цільовий сайт 3" ” позначає розташований на 3’-кінці нуклеотид цільового сегменту. Цільова ділянка може містити один або більше цільових сегментів. Множинні цільові сегменти в межах цільової ділянки можуть частково перекриватися. Альтернативно, вони можуть не перекриватися. У деяких варіантах цільові сегменти в межах цільової ділянки розділені не більше ніж приблизно 300 нуклеотидами. У деяких варіантах цільові сегменти в межах цільової ділянки розділені кількістю нуклеотидів, яка складає не більше ніж або не більше ніж приблизно 250, 200, 150, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 або 10 нуклеотидів на 21 UA 115309 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 цільовій нуклеїновій кислоті або є інтервалом, визначеним будь-якими двома з попередніх значень. У деяких варіантах цільові сегменти в межах цільової ділянки розділені не більше ніж або не більше ніж приблизно 5 нуклеотидами на цільовій нуклеїновій кислоті. У деяких варіантах цільові сегменти є суміжними. Передбачувані цільові ділянки, визначені інтервалом, що містить початок нуклеїнової кислоти, який є будь-яким із цільових 5" сайтів або цільових 3" сайтів, наведені в даному описі. Націлювання включає визначення, як мінімум, одного цільового сегменту, з яким гібридизується антисмислова сполука таким чином, щоб здійснювати бажаний вплив. У деяких варіантах бажаний вплив є зниженням рівнів нуклеїнової кислоти-мішені мРНК. У деяких варіантах бажаний вплив являє собою зниження рівнів білка, кодованого нуклеїновою кислотою-мішенню, або фенотипову модифікацію, пов'язану з нуклеїновою кислотою-мішенню. Придатні сегменти-мішені можуть бути знайдені в межах 5" UTR, кодуючої ділянки, 3" UTR, інтрону, екзону або з'єднання екзон/інтрон. Сегменти-мішені, що містять старт-кодон або стопкодон, також є придатними сегментами-мішенями. Придатний сегмент-мішень може специфічно виключати деяку структурно визначену ділянку, таку як старт-кодон або стоп-кодон. Визначення придатних сегментів-мішеней може включати порівняння послідовності нуклеїнової кислоти-мішені з іншими послідовностями в геномі. Наприклад, алгоритм BLAST може застосовуватися для ідентифікації ділянок подібності між різними нуклеїновими кислотами. Таке порівняння може попередити відбір послідовностей антисмислових сполук, які здатні гібридизуватися неспецифічним чином з іншими послідовностями, окрім вибраної нуклеїнової кислоти-мішені (тобто, нецільовими послідовностями). Може існувати варіація активності (наприклад, що визначається за відсотковим зменшенням рівнів нуклеїнової кислоти-мішені) антисмислових сполук в межах активної ділянки-мішені. У деяких варіантах зниження рівнів мРНК ApoCIII вказує на інгібування експресії ApoCIII. Зниження рівнів білка ApoCIII може вказувати на інгібування експресії мРНК мішені. Далі, фенотипові модифікації можуть вказувати на інгібування експресії ApoCIII. Наприклад, підвищення рівнів ЛПВЩ, зниження рівнів ЛПНЩ або зниження рівнів тригліцеридів знаходяться серед фенотипових модифікацій, які можна аналізувати щодо інгібування експресії ApoCIII. Інші фенотипові показання, наприклад, симптоми, пов'язані із серцево-судинним захворюванням, також можна оцінювати; наприклад, стенокардію; біль у грудях; задишку; серцебиття; слабкість; запаморочення; нудоту; підвищене потовиділення; тахікардію; брадикардію; аритмію; мерехтіння передсердь; набряк нижніх кінцівок; ціаноз; втомленість; слабкість; оніміння обличчя; оніміння кінцівок; кульгавість або м'язові спазми; здуття живота; або гарячку. Гібридизація У деяких варіантах відбувається гібридизація між антисмисловою сполукою, розкритою в даному описі, і нуклеїновою кислотою ApoCIII. Найбільш розповсюджений механізм гібридизації включає участь водневого зв'язку (наприклад, Watson-Crick, Hoogsteen або утворення зворотного водневого зв'язку Hoogsteen) між комплементарними нуклеїновими основами молекул нуклеїнової кислоти. Гібридизація може відбуватися в різних умовах. Суворі умови залежать від послідовності і визначаються природою та складом молекул нуклеїнової кислоти, які підлягають гібридизації. Способи визначення того, чи здатна послідовність до специфічної гібридизації з нуклеїновою кислотою-мішенню, добре відомі в даній галузі (Sambrooke and Russell, Molecular Cloning: А Laboratory Manual, 3rd Ed., 2001). У деяких варіантах антисмислові сполуки, запропоновані в даному описі, здатні специфічно гібридизуватися з нуклеїновою кислотою ApoCIII. Комплементарність Антисмислова сполука і нуклеїнова кислота-мішень комплементарні одна до одної, коли достатня кількість нуклеїнових основ антисмислової сполуки може утворювати водневий зв'язок з відповідними нуклеїновими основами нуклеїнової кислоти-мішені, таким чином, щоб здійснювати бажаний ефект (наприклад, антисмислове інгібування нуклеїнової кислоти-мішені, такої як нуклеїнова кислота ApoCIII). Антисмислова сполука може гібридизуватися з одним або більше сегментів нуклеїнової кислоти ApoCIII, таким чином, що проміжні або суміжні сегменти не беруть участь в процесі гібридизації (наприклад, петлева структура, розузгодження або структура "шпильки"). У деяких варіантах антисмислові сполуки, запропоновані в даному описі або вказана їх частина є на або, як мінімум, на 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % або 100 % комплементарними до нуклеїнової кислоти ApoCIII, ділянки-мішені, сегменту-мішені або вказаної їх частини. Відсоток комплементарності антисмислової сполуки до нуклеїнової кислоти-мішені може бути 22 UA 115309 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 визначений із застосуванням шаблонних способів. Наприклад, антисмислова сполука, в якій 18 із 20 нуклеїнових основ антисмислової сполуки комплементарні до ділянки-мішені, і таким чином, будуть специфічно гібридизуватися, представлятимуть 90 % комплементарність. У даному прикладі, решта некомплементарних нуклеїнових основ можуть бути згруповані або перемежатися комплементарними нуклеїновими основами, і необов'язково повинні бути суміжними по відношенню одна до одної або до комплементарних нуклеїнових основ. Як така, антисмислова сполука довжиною 18 нуклеїнових основ, що містить 4 (чотири) некомплементарні нуклеїнові основи, оточена двома ділянками повної комплементарності з нуклеїновою кислотою-мішенню, володіє загальною комплементарністю з нуклеїновою кислотою-мішенню 77,8 %, і, таким чином, знаходиться в межах контексту даного винаходу. Відсоток комплементарності антисмислової сполуки з ділянкою нуклеїнової кислоти-мішені може бути визначений шаблонним застосуванням програм BLAST (пошукові інструменти для базового локального вирівнювання) і програм PowerBLAST, відомих з рівня техніки (Altschul et al., J. Mol. Biol., 1990, 215, 403-410; Zhang and Madden, Genome Res., 1997, 7, 649-656). Відсоток гомології, ідентичність послідовностей або комплементарність можуть бути визначені, наприклад, за допомогою програми Gap (Wisconsin Sequence Analysis Package, Version 8 for Unix, Genetics Computer Group, University Research Park, Madison Wis.), з використанням значень, встановлених за умовчанням, де застосовується алгоритм Smith і Waterman (Adv. Appl. Math., 1981, 2, 482-489). У деяких варіантах антисмислові сполуки, запропоновані в даному описі, або вказані їх частини є повністю комплементарними (тобто, на 100 % комплементарними) до нуклеїнової кислоти-мішені або вказаної її частини. Наприклад, антисмислова сполука може бути повністю комплементарною до нуклеїнової кислоти ApoCIII або ділянки-мішені або сегменту-мішені або її послідовності-мішені. В даному описі "повністю комплементарний" має на увазі, що кожна нуклеїнова основа антисмислової сполуки здатна до точного парування основ з відповідними нуклеїновими основами нуклеїнової кислоти-мішені. Наприклад, антисмислові сполуки довжиною 20 нуклеїнових основ повністю комплементарні до послідовності-мішені, довжина якої становить 400 нуклеїнових основ, до тих пір, поки в нуклеїновій кислоті-мішені присутня відповідна частина довжиною 20 нуклеїнових основ, яка повністю комплементарна до антисмислової сполуки. "Повністю комплементарний" також може використовуватися з посиланням на вказану частину першої та/або другої нуклеїнової кислоти. Наприклад, частина довжиною 20 нуклеїнових основ антисмислової сполуки довжиною 30 нуклеїнових основ може бути "повністю комплементарною" до послідовності-мішені довжиною 400 нуклеїнових основ. Частина довжиною 20 нуклеїнових основ олігонуклеотиду довжиною 30 нуклеїнових основ є повністю комплементарною до послідовності-мішені, якщо послідовність-мішень містить відповідну частину довжиною 20 нуклеїнових основ, причому кожна нуклеїнова основа комплементарна до частини антисмислової сполуки довжиною 20 нуклеїнових основ. В той же час, повнорозмірні антисмислові сполуки довжиною 30 нуклеїнових основ можуть бути або не бути повністю комплементарними до послідовності-мішені, в залежності від того, чи будуть решта 10 нуклеїнових основ антисмислової сполуки також комплементарними до послідовностімішені. Некомплементарна(і) нуклеїнова(і) основа(и) може бути розташована на 5" кінці або на 3" кінці антисмислової сполуки. Альтернативно, некомплементарна(і) нуклеїнова(і) основа(и) може бути розташована у внутрішньому положенні антисмислової сполуки. Якщо присутні дві або більше некомплементарних нуклеїнових основ, вони можуть бути суміжними (тобто, зв'язаними) або несуміжними. В одному з варіантів некомплементарна нуклеїнова основа розташована в сегменті крила антисмислового олігонуклеотиду химерного нуклеотиду. У деяких варіантах антисмислові сполуки, які містять кількість нуклеїнових основ, що дорівнює або менше 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 або 20, включають не більше 4, не більше 3, не більше 2 або не більше 1 некомплементарної(их) нуклеїнової(их) основи(ов) відносно нуклеїнової кислоти-мішені, такої як нуклеїнова кислота ApoCIII або вказана її частина. У деяких варіантах антисмислові сполуки, які містять дорівнює або менше 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 або 30 нуклеїнових основ, містять не більше 6, не більше 5, не більше 4, не більше 3, не більше 2 або не більше 1 некомплементарної(их) нуклеїнової(их) основи(ов) відносно нуклеїнової кислоти-мішені, такої як нуклеїнова кислота ApoCIII або вказана її частина. Антисмислові сполуки, запропоновані в даному описі, також включають комплементарні до частини нуклеїнової кислоти-мішені. В даному описі "частина" позначає деяку кількість суміжних (тобто, зв'язаних) нуклеїнових основ в межах ділянки або сегменту нуклеїнової кислоти-мішені. "Частина" може також позначати деяку кількість суміжних нуклеїнових основ антисмислової 23 UA 115309 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 сполуки. У деяких варіантах антисмислові сполуки комплементарні до частини сегменту-мішені довжиною, як мінімум, 8 нуклеїнових основ. У деяких варіантах антисмислові сполуки комплементарні до частини сегменту-мішені довжиною, як мінімум, 10 нуклеїнових основ. У деяких варіантах антисмислові сполуки комплементарні до частини сегменту-мішені довжиною, як мінімум, 12 нуклеїнових основ. У деяких варіантах антисмислові сполуки комплементарні до частини сегменту-мішені довжиною, як мінімум, 15 нуклеїнових основ. Також передбачені антисмислові сполуки, які комплементарні до частини сегменту-мішені довжиною, як мінімум, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 або більше нуклеїнових основ або з довжиною в інтервалі, визначеному будь-якими двома із цих значень. Ідентичність Антисмислові сполуки, запропоновані в даному описі, також можуть володіти певним відсотком ідентичності з конкретною послідовністю нуклеотидів, SEQ ID NO або послідовністю сполуки, представленої конкретним номером Isis або його частиною. В даному описі антисмислова сполука ідентична послідовності, розкритій в даному описі, якщо вона володіє такою ж здатністю паруватися з нуклеїновими основами. Наприклад, РНК, яка містить урацил замість тимідину в розкритій послідовності ДНК, вважалася б ідентичною послідовності ДНК, оскільки як урацил, так і тимідин паруються з аденіном. Також передбачаються вкорочені і подовжені версії антисмислових сполук, описаних в даному описі, а також сполуки, що містять неідентичні основи відносно антисмислових сполук, запропонованих в даному описі. Не ідентичні основи можуть бути суміжними по відношенню одна до одної або розподілені в антисмисловій сполуці. Відсоток ідентичності антисмислової сполуки обчислюють згідно кількості основ з ідентичним паруванням основ відносно послідовності, з якою її порівнюють. У деяких варіантах антисмислові сполуки або їх частини є, як мінімум, на 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % або 100 % ідентичними одній або більше антисмислових сполук або SEQ ID NO або їх частин, розкритих в даному описі. Модифікації Нуклеозид є комбінацією основ і цукрів. Частина нуклеїнової основи (також відомої як основа) нуклеозиду звичайно є фрагментом гетероциклічної основи. Нуклеотиди являють собою нуклеозиди, які додатково містять фосфатну групу, ковалентно з'єднану з цукровою частиною нуклеозиду. Для тих нуклеозидів, які містять пентофуранозильний цукор, фосфатна група може бути з'єднана з 2', 3' або 5' гідроксильними фрагментами цукру. Олігонуклеотиди утворюються за допомогою ковалентного зв'язку суміжних нуклеозидів один з одним, щоб сформувати лінійний полімерний олігонуклеотид. В межах структури олігонуклеотиду, фосфатні групи звичайно називають утворюючими міжнуклеозидні зв'язки олігонуклеотиду. Модифікації антисмислових сполук включають заміни або модифікації міжнуклеозидних зв'язків, цукрових фрагментів або нуклеїнових основ. Модифіковані антисмислові сполуки часто є переважними в порівнянні з природними формами завдяки бажаним властивостям, таким як, наприклад, збільшене захоплення клітиною, підвищена спорідненість до нуклеїнової кислотимішені, підвищена стабільність у присутності нуклеаз або збільшена інгібувальна активність. Хімічно модифіковані нуклеозиди також можуть використовуватися для підвищення спорідненості зв'язування скороченого або вкороченого антисмислового олігонуклеотиду з нуклеїновою кислотою-мішенню. Таким чином, порівнянні результати часто можуть бути одержані з використанням коротших антисмислових сполук, які містять такі хімічно модифіковані нуклеозиди. Модифіковані міжнуклеозидні зв'язки Природний міжнуклеозидний зв'язок між РНК і ДНК являє собою 3'-5' фосфодіефірний зв'язок. Антисмислові сполуки, що містять один або більше модифікованих, тобто, неприродних міжнуклеозидних зв'язків, часто є переважними в порівнянні з антисмисловими сполуками, що містять природні міжнуклеозидні зв'язки, завдяки бажаним властивостям, наприклад, таким як збільшене захоплення клітиною, підвищена спорідненість до нуклеїнових кислот-мішеней і підвищена стабільність у присутності нуклеаз. Олігонуклеотиди, що містять модифіковані міжнуклеозидні зв'язки, містять міжнуклеозидні зв'язки, які зберігають атом фосфору, а також міжнуклеозидні зв'язки, які не містять атома фосфору. Характерні фосфоровмісні міжнуклеозидні зв'язки, включають, не обмежуючись ними, фосфодіефіри, фосфотриефіри, метилфосфонати, фосфорамідат і фосфоротіоати. Способи одержання фосфоровмісних і не фосфоровмісних сполук добре відомі. У деяких варіантах антисмислові сполуки, націлені на нуклеїнову кислоту ApoCIII, містять один або більше модифікованих міжнуклеозидних зв'язків. У деяких варіантах модифіковані міжнуклеозидні зв'язки являють собою фосфоротіоатні зв'язки. У деяких варіантах кожен міжнуклеозидний зв'язок антисмислової сполуки є міжнуклеозидним фосфоротіоатним зв'язком. 24 UA 115309 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Модифіковані цукрові фрагменти Антисмислові сполуки за винаходом необов'язково можуть містити один або більше нуклеозидів, в яких цукрова група модифікована. Такі нуклеозиди з модифікованими цукрами можуть забезпечувати антисмисловим сполукам підвищену стійкість до нуклеази, підвищену спорідненість зв'язування або деяку іншу переважну біологічну властивість. У деяких варіантах нуклеозиди містять хімічно модифіковані фрагменти рибофуранозного кільця. Приклади хімічно модифікованих рибофуранозних кілець включають, не обмежуючись ними, додавання груп замісників (зокрема, 5' і 2' груп замісників, з'єднання містком не гемінальних атомів кільця для утворення біциклічних нуклеїнових кислот (БНК), заміну кисневого атома рибозильного кільця на S, N(R) або C(R1)(R2) (кожен з R, R1 і R2 незалежно являє собою H, C1-C12 алкіл або захисну групу) та їх комбінації. Приклади хімічно модифікованого цукру включають 2'-F-5'метилзаміщений нуклеозид (див. Міжнародну заявку PCT WO 2008/101157, опубліковану 8/21/08 відносно інших розкритих 5',2'-бісзаміщених нуклеозидів) або заміну кисневого атома рибозильного кільця на S, з подальшим заміщенням в 2'-положенні (див. опубліковану патентну заявку США US2005-0130923, опубліковану 16 червня 2005 р.) або, альтернативно, 5'-заміщені БНК (див. Міжнародну заявку PCT WO 2007/134181, опубліковану 11/22/07, в якій ЛНК заміщена, наприклад, групою 5'-метил або 5'-вініл). Приклади нуклеозидів, що містять модифіковані цукрові фрагменти, включають, не обмежуючись ними, нуклеозиди, що містять групи замісників 5'-вініл, 5'-метил (R або S), 4'-S, 2'F, 2'-OCH3, 2’-OCH2CH3, 2’-OCH2CH2F і 2'-O(CH2)2OCH3. Замісник в положенні 2" також може бути вибраний із алілу, аміно, азидо, тіо, O-алілу, O-C1-C10 алкілу, OCF3, OCH2F, O(CH2)2SCH3, O(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn) і O-CH2-C(=O)-N(Rl)-(CH2)2-N(Rm)(Rn), в яких кожен з Rl, Rm і Rn незалежно являє собою H або заміщений або незаміщений C1-C10 алкіл. В даному описі "біциклічні нуклеозиди" позначають модифіковані нуклеозиди, що містять біциклічний цукровий фрагмент. Приклади біциклічних нуклеозидів включають, не обмежуючись ними, нуклеозиди, що містять місток між атомами 4' і 2' рибозильного кільця. У деяких варіантах антисмислові сполуки, запропоновані в даному описі, включають один або більше біциклічних нуклеозидів, що містять місток 4’-2". Приклади таких сполучених містком 4’-2" біциклічних нуклеозидів включають, не обмежуючись ними, сполуки однієї з формул: 4'-(CH2)-O-2' (ЛНК); 4'(CH2)-S-2'; 4'-(CH2)2-O-2' (ЕНК); 4'-CH(CH3)-O-2' і 4'-CH(CH2OCH3)-O-2' (та їх аналоги, див. патент США 7,399,845, виданий 15 липня 2008 р.); 4'-C(CH3)(CH3)-O-2' (та його аналоги, див. опубліковану Міжнародну заявку WO/2009/006478, опубліковану 8 січня 2009 р.); 4'-CH2N(OCH3)-2' (та його аналоги, див. опубліковану Міжнародну заявку WO/2008/150729, опубліковану 11 грудня 2008 р.); 4'-CH2-O-N(CH3)-2' (див. опубліковану патентну заявку США US2004-0171570, опубліковану 2 вересня 2004 р.); 4'-CH2-N(R)-O-2', в якій R являє собою H, C1C12 алкіл або захисну групу (див. патент США 7,427,672, виданий 23 вересня 2008 р.); 4'-CH2C(H)(CH3)-2' (див. Chattopadhyaya et al., J. Org. Chem., 2009, 74, 118-134); і 4'-CH2-C(=CH2)-2' (та його аналоги, див. опубліковану Міжнародну заявку WO 2008/154401, опубліковану 8 грудня 2008 р.). Додаткові звіти, пов'язані з біциклічними нуклеозидами, також можна знайти в опублікованій літературі (див., наприклад: Singh et al., Chem. Commun., 1998, 4, 455-456; Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630; Wahlestedt et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. А., 2000, 97, 56335638; Kumar et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222; Singh et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039; Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc., 2007, 129(26) 8362-8379; Elayadi et al., Curr. Opinion Invest. Drugs, 2001, 2, 558-561; Braasch et al., Chem. Biol., 2001, 8, 1-7; і Orum et al., Curr. Opinion Mol. Ther., 2001, 3, 239-243, патенти США 6,268,490; 6,525,191; 6,670,461; 6,770,748; 6,794,499; 7,034,133; 7,053,207; 7,399,845; 7,547,684; і 7,696,345; патентні публікації США US2008-0039618; US2009-0012281; патенти США серійний номер 60/989,574; 61/026,995; 61/026,998; 61/056,564; 61/086,231; 61/097,787; і 61/099,844; опубліковані міжнародні заявки PCT WO 1994/014226; WO 2004/106356; WO 2005/021570; WO 2007/134181; WO 2008/150729; WO 2008/154401; і WO 2009/006478. Кожен з вищезгаданих біциклічних нуклеозидів може бути одержаний таким, що включає одну або більше стереохімічних конфігурацій цукру, зокрема, наприклад α-L-рибофураноза і β-D-рибофураноза (див. міжнародну заявку PCT/DK98/100393, опубліковану 25 березня 1999 р. як WO 99/14226). У деяких варіантах біциклічні цукрові фрагменти нуклеозидів БНК включають, не обмежуючись ними, сполуки, що містять, як мінімум, один місток між положеннями 4' і 2" пентофуранозильного цукрового фрагменту, причому такі містки незалежно містять 1 або від 2 до 4 зв'язаних груп, незалежно вибраних із -[C(Ra)(Rb)]n-, -C(Ra)=C(Rb)-, -C(Ra)=N-, -C(=O)-, C(=NRa)-, -C(=S)-, -O-, -Si(Ra)2-, -S(=O)x- і -N(Ra)-; в яких: 25 UA 115309 C2 5 10 15 20 25 30 x дорівнює 0, 1 або 2; n дорівнює 1, 2, 3 або 4; кожен з Ra і Rb незалежно являє собою H, захисну групу, гідроксил, C 1-C12 алкіл, заміщений C1-C12 алкіл, C2-C12 алкеніл, заміщений C2-C12 алкеніл, C2-C12 алкініл, заміщений C2-C12 алкініл, C5-C20 арил, заміщений C5-C20 арил, гетероциклічний радикал, заміщений гетероциклічний радикал, гетероарил, заміщений гетероарил, C5-C7 аліциклічний радикал, заміщений C5-C7 аліциклічний радикал, галоген, OJ1, NJ1J2, SJ1, N3, COOJ1, ацил (С(=O)-H), заміщений ацил, CN, сульфоніл (S(=O)2-J1) або сульфоксил (S(=O)-J1); і кожний з J1 і J2 незалежно являє собою H, C1-C12 алкіл, заміщений C1-C12 алкіл, C2-C12 алкеніл, заміщений C2-C12 алкеніл, C2-C12 алкініл, заміщений C2-C12 алкініл, C5-C20 арил, заміщений C5-C20 арил, ацил (С(=O)-H), заміщений ацил, гетероциклічний радикал, заміщений гетероциклічний радикал, C1-C12 аміноалкіл, заміщений C1-C12 аміноалкіл або захисну групу. У деяких варіантах місток біциклічного цукрового фрагмента являє собою -[C(Ra)(Rb)]n-, [C(Ra)(Rb)]n-O-, -C(RaRb)-N(R)-O- або –C(RaRb)-O-N(R)-. У деяких варіантах місток являє собою 4'-CH2-2', 4'-(CH2)2-2', 4'-(CH2)3-2', 4'-CH2-O-2', 4'-(CH2)2-O-2', 4'-CH2-O-N(R)-2' і 4'-CH2-N(R)-O-2'-, причому кожен з R незалежно являє собою H, захисну групу або C1-C12 алкіл. У деяких варіантах біциклічні нуклеозиди додатково визначені за ізомерною конфігурацією. Наприклад, нуклеозид, що містить місток 4’-2" метилен-окси, може знаходитися в α-L конфігурації або у β-D конфігурації. Раніше, α-L-метиленокси (4’-CH2-O-2") РНК був введений в антисмислові олігонуклеотиди, які демонстрували антисмислову активність (Frieden et al., Nucleic Acids Research, 2003, 21, 6365-6372). У деяких варіантах біциклічні нуклеозиди включають, не обмежуючись ними, (А) α-Lметиленокси (4’-CH2-O-2") БНК, (Б) β-D-метиленокси (4’-CH2-O-2") БНК, (В) етиленокси (4’(CH2)2-O-2") БНК, (Г) аміноокси (4’-CH2-O-N(R)-2") БНК, (Д) оксиаміно (4’-CH2-N(R)-O-2") БНК, і (Е) метил (метиленокси) (4’-CH(CH3)-O-2") БНК, (Ж) метилен-тіо (4’-CH2-S-2") БНК, (З) метиленаміно (4’-CH2-N(R)-2") БНК, (І) метил карбоциклічний (4’-CH2-CH(CH3)-2") БНК, і (К) пропілен карбоциклічний (4’-(CH2)3-2") БНК, як показано нижче. у яких Bx є фрагментом основи, і R незалежно являє собою H, захисну групу або C1-C12 алкіл. У деяких варіантах запропоновані біциклічні нуклеозиди Формули I: 26 UA 115309 C2 5 10 15 20 25 30 у яких: Bx є фрагментом гетероциклічної основи; -Qa-Qb-Qc- являє собою -CH2-N(Rc)-CH2-, -C(=O)-N(Rc)-CH2-, -CH2-O-N(Rc)-, -CH2-N(Rc)-O- або -N(Rc)-O-CH2; Rc являє собою C1-C12 алкіл або захисну групу для аміногрупи; і кожний з Ta і Tb незалежно являє собою H, захисну групу для гідроксигрупи, групу кон'югата, реакційноздатну фосфоровмісну групу, фосфоровмісний фрагмент або ковалентне приєднання до середовища основи. У деяких варіантах запропоновані біциклічні нуклеозиди Формули II: у яких: Bx є фрагментом гетероциклічної основи; кожний з Ta і Tb незалежно являє собою H, захисну групу для гідроксигрупи, групу кон'югата, реакційноздатну фосфоровмісну групу, фосфоровмісний фрагмент або ковалентне приєднання до середовища основи; Za являє собою C1-C6 алкіл, C2-C6 алкеніл, C2-C6 алкініл, заміщений C1-C6 алкіл, заміщений C2-C6 алкеніл, заміщений C2-C6 алкініл, ацил, заміщений ацил, заміщений амід, тіол або заміщений тіо. В одному з варіантів кожна із заміщених груп незалежно ємоно- або полізаміщеною групами замісників, незалежно вибраними з галогену, оксо, гідроксилу, OJ c, NJcJd, SJc, N3, °C(=X)Jc і NJeC(=X) NJcJd, причому кожний з Jc, Jd і Je незалежно являє собою H, C1-C6 алкіл або заміщений C1-C6 алкіл, і X являє собою O або NJc. У деяких варіантах запропоновані біциклічні нуклеозиди Формули III: у яких: Bx є фрагментом гетероциклічної основи; кожний з Ta і Tb незалежно являє собою H, захисну групу для гідроксигрупи, групу кон'югата, реакційноздатну фосфоровмісну групу, фосфоровмісний фрагмент або ковалентне приєднання до середовища основи; Zb являє собою C1-C6 алкіл, C2-C6 алкеніл, C2-C6 алкініл, заміщений C1-C6 алкіл, заміщений C2-C6 алкеніл, заміщений C2-C6 алкініл або заміщений ацил (С(=O)-). У деяких варіантах запропоновані біциклічні нуклеозиди Формули IV: 27 UA 115309 C2 5 10 15 20 25 30 35 у яких: Bx є фрагментом гетероциклічної основи; кожний з Ta і Tb незалежно являє собою H, захисну групу для гідроксигрупи, групу кон'югата, реакційноздатну фосфоровмісну групу, фосфоровмісний фрагмент або ковалентне приєднання до середовища основи; Rd являє собою C1-C6 алкіл, заміщений C1-C6 алкіл, C2-C6 алкеніл, заміщений C2-C6 алкеніл, C2-C6 алкініл або заміщений C2-C6 алкініл; кожний з qa, qb, qc і qd незалежно являє собою H, галоген, C1-C6 алкіл, заміщений C1-C6 алкіл, C2-C6 алкеніл, заміщений C2-C6 алкеніл, C2-C6 алкініл або заміщений C2-C6 алкініл, C1-C6 алкоксил, заміщений C1-C6 алкоксил, ацил, заміщений ацил, C1-C6 аміноалкіл або заміщений C1C6 аміноалкіл; У деяких варіантах запропоновані біциклічні нуклеозиди Формули V: у яких: Bx є фрагментом гетероциклічної основи; кожний з Ta і Tb незалежно являє собою H, захисну групу для гідроксигрупи, групу кон'югата, реакційноздатну фосфоровмісну групу, фосфоровмісний фрагмент або ковалентне приєднання до середовища основи; кожний з qa, qb, qe і qf незалежно являє собою водень, галоген, C1-C12 алкіл, заміщений C1C12 алкіл, C2-C12 алкеніл, заміщений C2-C12 алкеніл, C2-C12 алкініл, заміщений C2-C12 алкініл, C1C12 алкокси, заміщений C1-C12 алкокси, OJj, SJj, SOJj, SO2Jj, NJjJk, N3, CN, C(=O)OJj, C(=O)NJjJk, C(=O)Jj, O-C(=O)NJjJk, N(H)C(=NH) NJjJk, N(H)C(=O)NJjJk або N(H)C(=S)NJjJk; або qe і qf разом являють собою =C(qg)(qh); кожний з qg і qh незалежно являє собою H, галоген, C1-C12 алкіл або заміщений C1-C12 алкіл. Синтез і одержання мономерів метиленокси (4’-CH2-O-2") БНК аденіну, цитозину, гуаніну, 5метил-цитозину, тиміну і урацилу, разом з їх олігомеризацією, і властивості розпізнавання нуклеїнової кислоти описані (Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630). БНК та їх одержання також описані у WO 98/39352 і WO 99/14226. Аналоги метиленокси (4’-CH2-O-2") БНК і 2'-тіо-БНК також були одержані (Kumar et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222). Також описане одержання замкнених аналогів нуклеозиду, що містять олігодезоксирибонуклеотидні дуплекси як субстрати для полімераз нуклеїнових кислот (Wengel et al., WO 99/14226). До того ж, синтез 2'-аміно-БНК, нового, конформаційно обмеженого олігонуклеотидного аналога з високою спорідненістю, описаний в рівні техніки (Singh et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039). Крім того, раніше були одержані 2'-аміно- і 2'-метиламіно-БНК, і повідомлялося про термічну стабільність їх дуплексів з комплементарними РНК і ДНК. У деяких варіантах пропонуються біциклічні нуклеозиди Формули VI: 28