Лівообертаючий енантіомер (s)-alрha-етіл-2-оксо-1-пірролідінацетамід,що виявляє антигіпоксичну і антиішемічну активність

союз СОВЕТСКИХ СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ РЕСПУБЛИН (50 4 С 0 7 D 2 0 7 / 2 6 , А 61 К 3 1 / 4 0 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИИ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) (62) 3968802/23-04 3898053/23-04 (22) 25.10.85 (23) 14.05.85 (31) 8412357 (32) 15.05.84 (33) G B (46) 15.10,88, Бюл. № 38 6 и температура не превышает 25 С. Раствор перемешивают еще в течение 45 Найдено,%: С 5 6 , 7 1 ; Н 8,22; 20 мин и освободившийся Ы,-метилбенN 16,48. зиламин экстрагируют несколько раз Используема в этом синтезе рацебензолом (объемом в целом 18 л ) . мическую (+)-(£-этил-2-оксо-1-пирроЗатем водную фазу подкисляют до лидинуксусную кислоту получают вышерН 1,1 добавлением 3,2 л 6 н. соля50 описанным образом. ной кислоты. Образовавшийся осадок отфильтровывают, промывают водой и В колбу емкостью 20 л , содержащую высушивают. 3,65 кг (18,34 моль) (±.)-(этил)-о1этил-2-оксо~1-пирролидинацетата, в Фильтрат экстрагируют несколько течение 2 ч добавляют при температураз дихлор метан ом (объемом в делом 55 ре, не превышающей 60 С, раствор, с о 50 л ) . Органическую фазу высушивают держащий 788 г (19,7 моль) гидроксинад сульфатом натрия, фильтруют ее да натрия в 4,35 л воды. После окони выпаривают ее досуха при пониженчания добавления температуру смеси ном давлении. 1430392 4 доводят до 80°С и отгоняют образуюВьщеяенный продукт перекристаллищийся спирт до тех пор, пока темпезуется из 50 мл этилацетата. Таким ратура в среде не достигнет 100°С. образом получают 17,5 г (S)- еі-зтил-2Охлаждают до 0°С и в течение 2,5 ч оксо-I-пирролидинацетамида. Т.пл. s добавляют 1,66 л (19,80 моль) 12 н . П7°С; [otji : -90,0° (с = а ц е т о н ) . соляной кислоты. Отфильтровывают осаВыход 41%. док, промывают его 2 л толуола и пеП р и м е р З . Получение (S)-Nрекристаллизуют его из изопропилово[і-(амиНокаубонил)пропшГ]-4-хлорбутанго спирта. Таким образом получают 10 амида. 2,447 кг рацемической (+)-о£-этил-2345,6 г (2,5 мель) измельченного оксо-1-пирролидинуксуснои кислоты, карбоната калия и 138,5 г (1 моль) плавящейся при 155-156°С. Выход 78%. хлор гидра та (3)-2-амиро-бутанамііда Рассчитано,%: С 56,12; Н 7,65; смешивают с 2,5 л ацетонитрила, Реїї 8 , 1 4 . 15 ахционную смесь охлаждают до 0°С и в нее прикапывают раствор 129,2 г Найдено,%: С 5 5 , 8 2 ; Н 8,10; (1,2 моль) 4-хлорбутирилхлорида в 500 мл ацетонитрила. После добавлеІЇ 7,97. ния оставляют реакционную смесь стоять П р и м е р 2, Получение этил ( S)) р у ( 4- [і-(аминокарбонил)пропил]аминобути- 20 для повышения ее температуры до комнатной; удаляют нерастворимую часть рата. отфильтровыванием и фильтрат выпариК суспензии 47,75 г (0,345 моль) вают при пониженном давлении. Полухлоргидрата (Я)-2-аминобутанамида, ченный цеочищені-ь л остаток перемешиСи*-] р : + 2 6 , 1 ° ( с = 1 , метанол), в 400 мл вают в течение 30 мин в 1,2 л безводтплуола добавляют 143,6 мл (1,035 моль) ,0 ного эфира при .3-10^С. Осадок отфильтриэтиламина. Доводят смесь до 80°С тровывают, промывают его 2 раза и вводят в нее по каплям 67,2 г 225 мл эФира и высушивают его под ва(0,345 моль) этил-4-бромбутирата. куумом. Таким образом получают 162,7г Выдерживают реакционную среду при 8О°С в течение 10 ч , затем фильтруют 30 (S)-N-fj ~ (аминокаї-бонил) пропил J~4хлорбутйнамида. Т.пл. 118-123°С; горячей для удаления солей триэтилМ и : -18 (с-1, метанол). Выход г»чина. Фильтрат выпаривают при пони78,7%. же, ином давлении и получают 59 г маслянистого остатка, являющегося по суТаким образом, полученный сырой ществу продуктом моноалкилирования и 35 продукт пригоден для следующей стасодеі-жащего мало диалкилированного дии циклизации. Однако он может быть производного, очищен путем перемешивания в течение 1 ч в безводном зтилацетате, т.пл. Полученный в неочищенном состоя\/-\j-\12 l,[Kjj, : -22,2 (с=1, м е нии .родукт используется таким, ка40 танол) . кей е с т ь , без другой очистки, для получения (5)-с£гэтил-2-оксо-1 -пирПолучение (3)-ег.-этил-2-оксо-1~пирролидинацетамида путем циклизации. ролидинацетамида. Получение (5)-с£-этил-2-оксо-1-пирПри 0°С и в атмосфере азота в ролидинацетамида, 45 мл дихлорметана смешивают 6,2 г 54 г полученного выше неочищенного (0,03 моль) (Б)-Н-[і-(аминокарбонил) продукта растворяют в 125 мл толуола пропил]-4-хлорбутанамида и 0,484 г в присутствии 2 г 2-оксипиридина. (0,0015 моль) тетрабутиламмонийброСмесь выдерживают при 110 С в течение мида. Не превышая температуру 2 С в 12 ч . реакционной смеси, в течение 30 мин 50 Отфильтровывают при нагревании н е растворимую часть, затем фильтрат выпаривают при пониженном давлении. Остаток очищают путем хроматографии на колонке с 1,1 кг диоксида крем- 55 ния (диаметр колонны: 5 см; эпгоент : смесь этилацетата с метанолом к концентрированным аммиаком в объемных соотношениях 8 5 : 1 2 : 3 ) . добавляют 2,02 г (0,036 моль) порошкообразного гидроксида калия. Смесь перемешивают в течение I ч, ^атем добавляют в нее еще 0,1 г (0,0018 моль) измельченного гидроксида калия и перемешивают еще в течение 30 мин при о " с . Температуру повышают до комнатнсй. Удаляют нерастворившуюся часть фильтрацией и фильтрат концентрируют 1430392 6 ши в постепенно обедняемой кислоропри пониженном давлении. Полученный дом атмосфере. Учитывая особую чувстостаток перекристаллиэутот из 40 мл вительность нервной системы к такого этилацетата в присутствии 1,9 г моле, типа поражению (агрессии), полученкулярного сита 0,4 им, которое уданые в этом тесте результаты могут ляют горячей фильтрацией. Таким обраинтерпретироваться как величина созом получают 3,10 г (Я)-оС'этил-2-окпротивления нервной системы." Продуксо-1-пирролидинацетамида. Т.пл. ты, увеличивающие сопротивление жи" : - 9 0 , 1 ° ( с = 1 , ацетон), П6,7°С; выход 60,7%, 10 вотных, следовательно, пригодны для її р и м е р 4 . Получение ( З ) - э т и л лечения и предохранения от поражений 2-оксо-1-пирролидинацетамида,, типа гипоксии центральной нервной Этот пример иллюстрирует вариант системы. „ способа примера 3, в котором полученМетод. ный i n s i t u промежуточный 4-хлорбу~ 15 Прибор состоит из герметичной и танамид не выделяется. прозрачной камеры, имеющей высоту 37 см, глубину 39 см и ширину 97 см. К суспензии 69,25 г ( 0 , 5 моль) Коробка (камера) емкостью 140 л снабхлоргидрата (8)-2-аминобутанамида в жена 60-ю прозрачными отделениями 600 мл дихлорметала при комнатной температуре добавляют 84 г безводно- 20 (секциями) 6-10'10 см, позволяющими го сульфата натрия. Охлаждают до 0 С принимать 60 мышей, по отдельности. и добавляют 115 г измельченного гидВентилятор обеспечивает там перемероксида к а л и я , з а т е м 8 , 1 г (0,025 мопь) шивание атмосферы, которая циркулирутетрабутиламмонийбромида, растворен ет среди отделений секций через ного в 100 мл дихлорметана. При хоро- 25 решетчатое перекрытие. Камера снабжена устройством для подачи азота с шем перемешивании при 0 С прикапывают постоянным дебитом и отверстием, сораствор 77,5 г 4-хлорбутилхлорида в общающимся с окружающим воздухом. 100 мл дихлорметана. После протекаЖивотными являются мыши ( р о д Ш К і ) , ния реакции в течение 5 ч, добавляют еще 29 г измельченного гидроксида ка- 30 самцы, весом по 20-22 г. Они подвергаются натощак бодрствованию до опы-" лия. Спустя 2 ч реакционную смесь та. Эксперимент осуществляется на фильтруют на hyflo-cel и фильтрат выследующий день и одновременно на трех паривают при пониженном давлении. Осгруппах из 20 мышей; контрольная таток (93,5 г) диспергируют в 130 мл горячего толуола в течение 45 мин. %$ группа получает воду (25 мг/кг) перорально, а две другие группы, каждая Отфильтровывают и выпаривают при пониперорально, получают испытуемый проженном давлении. Остаток (71,3 г) радукт. Спустя 25 мин после введения створяют при нагревании в 380 мл животных размещают как придется в этилацетата, к которому добавлено отделениях, так, чтобы ни одна из 23 г молекулярного сита 0,4 нм в виде 40 трех групп животных не была локалипорошка. Эту смесь доводят до темпезована в предпочтительном месте клетратуры кипения с обратным холодильки. ником и фильтруют горячей. После .охлаждения фильтрата кристаллизуется Спустя 30 мин после введения кацелевой продукт. Таким образом полу- 45 меру закрывают и туда впускают азот чают 63г (3)-с^-этил-2-оксо-1-пирроли— с постоянным дебитом (7,750 л технидинацетамида. Т.шт. 117 С ^ ческого азота в минуту) в течение -91,3°(с=1, ацетон). Выход 74,1%. примерно 37 мин; атмосфера содержит Фармакологические испытания. тогда 3,7% кислорода. Рацемический с^ -этил-2-оксо-1-пирКоробка (клетка) остается закрыролидинацетамид (продукт А) и (S)-etтой вплоть до критического момента, этил-2-оксо-1-пирролидинацетамид когда не наблюдается более, чем трое (продукт В) были подвергнуты фармавыживших из 2G контрольных животных. кологическим тестам.В этот момент клетку открывают и ту55 да попадает окружающий воздух. НесЗащита по отношению к гипоксии (мышь). колькими моментами позднее пересчитыПринцип теста состоит в измерении вают выживших в каждой группе животных. возможностей выживания организма мы 1430392 зывают- Эта операция проводится одновременно на контрольных животных и на обработанных животных. Через 1 ч после введения испытуемого продукта или плацебо снова вводят интраперитонеально в той же дозе либо испытуемый продукт (обработанным животным), либо плацебо (контрольным животным). Спустя 5 ч после первого введения третий раз инъекцируют дозу либо испытуемого продукта (вьочивтим обработанным животным), либо плацебо (выжившим контрольным животным). Спустя 20 ч после первого введения у всех животных под анестезией ча счет пентобарбитала проверяют эффективность лигатуры путем сечения сонных артеРезультаты. 20 рий ниже ее. Отмечают число выживших животных как среди обработанных жиВ табл.1 даются результаты, полувотных, так и также среди контрольченные для возрастающих доз продукных животных. Для каждой дозы испытов А и В. туемого продукта число выживших среВыводы. ди животных, обработанных продуктом, В этом тесте левовращающий энанти- 25 сравнивают с числом выживших среди омер (продукт В) повышает выживание контрольных животных. Различие выраживотных, лишенных кислорода, начиная жает защитную активность продукта по с дозы 0,032 ммоль/кг. Рацемат (проотношению к летальности, вызванной дукт А) проявляет подобную активность только начиная с 0,32 ммоль/кг (1-ая 30 одновременной лигатурой (перевязкой) обеих сонных артерий. Статистическое эффективная доза) и, следовательно, значение (Р) этого различия оценивав 10 раз менее активен, чем левоврается тестом Brandt Snedecor. щающий энантиомер. Защита по отношению к церебральРезультаты. ной ишемии (крысы). В табл.2 представлены результаты, Электроэнцелографические контроли полученные для возрастающих доз пропоказали, что лигатура (перевязка) дуктов А и В. обеих сонных артерий вместе у крысы Выводы. вызывает постоянную церебральную ишеИз данных табл.2 видно, что рацемию: кривая электроэнцелограммы сплю- 40 мат (продукт А) активен только начищивается и становится даже изоэлекная с дозы 0,64 ммоль/кг. Напротив, трической (электрическое молчание). левовращающий энантиомер (продукт В) Метод, защищает животных от летальности, Самцы крыс Вистар весом по 250 вызванной одновременной лигатурой обе350 мг анестезируются пентобарбита- 45 их сонных артерий, начиная лом, вводимым интраперитонеальио в 0,16 моль/кг,, и следовательно, окадозе 50 мг/кг (0,5 мл/100 г ) . Немедзывается в 4 раза более активным, ленно после анестезии животным ввочем рацемат. дят интраперитонеально по 0,5 мл/ /100 г испытуемого продукта, раствоТоксичность. ренного в изотоническом растворе хлоВ табл.3 даются для продуктов А и рида натрия (обработанные животные), В Л Д 5 Р внутривенно и в мг/кг, опреили только изотонический раствор хлоделенные у самца мыпш и самца крысы. рида натрия или плацебо (контрольные Из данных табл.3 следует, что леживотные). 55 вовращающий энантиомер (продукт В) I является как и рацемат (продукт А) Спустя примерно 20 мин обе сонные очень мало токсичным и токсическая артерии вместе обнажают и спустя доза находится выше активной дозы. около 10 мин их одновременно перевяДля каждой дозы испытуемого продукта эксперименты повторяют 1 или 2 раза и результаты обобщают для получения минимума 40 (или 60) обработанных дозой продукта животных и 40 (или 60) соответствующих контрольных животных. Для каждой дозы испытуемого продукта число выживших животных из обработанных продуктом животных сравнивают с числом выживших животных из контрольных животных. Разница между этими числами выражает защитную активность продукта по отношению к ги- 15 поксии, вызванной лишением кислорода. Статистическое значение (Р) этой разницы оценивается тестом Fischer-Lates. 9 Ф о р м у л а 10 1430392 и з о б р е т е н и я Лев о вращающий энантиомер этил-2-оксо-1-пирролидинацєтамид,проявляющий антнгипоксическую и антиишемическут активность. (S)-oC Т а б л и ц а Испытуе- Доза пемый про- рорально дукт ммоль/кг Число выживших животных 1 Р контроль обработанные 0,032 12/60 16/60 S N • 0,1 8/60 7/60 N • S 0,16 12/60 12/60 N S 0,32 10/60 30/60