Ванкорезміцин (варіанти), штам amycolatopsis виду hil-006734, dsm 12216, що його продукує, та фармацевтична композиція, яка має антибіотичну активність

1. Ванкорезміцин, сполука формули: 2 70974 1 3 70974 4 вважаються небезпечними і смертельними. Тому азоту і, необов'язково, живильні неорганічні солі були початі інтенсивні дослідження для того, щоб і/або мікроелементи, з наступним виділенням вказнайти структурно відмінний клас сполук, які діють заної сполуки й очищенням звичайними методами. проти таких резистентних до ванкоміцину і тейкопМутанти і варіанти мікроорганізму ST101170 ланіну штамів. Наприклад, метилсульфоміцин І, також можуть бути здатні синтезувати сполуки циклічний тіопептид, описаний у ранніх джерелах відповідно до даного винаходу. Такі мутанти мо[публікація європейського патенту №0818539 з жуть бути отримані відомими методами за доподатою подачі 11 липня 1996] як антибіотик, який могою фізичних засобів, наприклад, опромінення, діє проти резистентних до ванкоміцину і тейкоплатакого як опромінення ультрафіолетовими або ніну штамів. рентгенівськими променями, або хімічних мутагеВ даний час виявлено, що нова сполука, нанів, таких як етилметилансульфонат (ЕМС), 2звана ванкорезміцином, має антибіотичну дію. гідрокси-4-метокси-бензофенон (МОБ) або NТаким чином, даний винахід стосується ванкорезMeтил-N'-ніpo-N-нітрозогуанідин (МННГ). міцину, сполуки формули: Відбір придатних мутантів і варіантів, які можуть утворювати сполук у відповідно до даного винаходу, може підтверджуватися визначенням біологічної дії сполук, акумульованих у бульйоні культури, наприклад, тестуванням на антибактеріальну дію. Живильне середовище переважно містить джерела вуглецю, азоту і живильні неорганічні солі. Джерелами вуглецю є, наприклад, крохмаль, глюкоза, сахароза, декстрин, фруктоза, патоки, гліцерин, лактоза або галактоза, переважно, крохмаль. Джерелами азоту є, наприклад, соєве борошно, горіхове борошно, дріжджовий екстракт, м'я сний екстракт, пептон, солодовий екстракт, рідина, і його фармацевтично прийнятних солей і поодержувана при вимочуванні кукурудзи, желатин хідних, таких як складні ефіри, прості ефіри й очеабо казаміонові кислоти, переважно пептон і дріжвидні хімічні еквіваленти, включаючи всі стереоджовий екстракт. Живильними неорганічними соізомерні форми і всі таутомерні форми. лями є, наприклад, динатрійфосфат, дикалійфосВанкорезміцин має молекулярну формулу фат, хлорид натрію, хлорид кальцію, карбонат C71H126N2O 21 (MB 1343,80) і може бути охарактерикальцію, нітрат калію, сульфат амонію або сульзований за допомогою одного або більше фізикофат магнію, переважно, карбонат кальцію, хлорид хімічних і спектральних властивостей, представнатрію і сульфат магнію. лених нижче, таких як дані 1Н ЯМР спектроскопії і 13 Культивацію HIL-006734 можна проводити при дані С ЯМР спектроскопії, обидва спектри предтемпературі від 25 до 35°С і рН від 6,0 до 8,0. Пеставлені в таблиці 2. реважно, HIL-006734 культивують при температурі Ванкорезміцин може бути описаний як новий 30°С(±1°С) і рН 7,0. антибіотик, який діє проти резистентних до ванкоКультивацію HIL-006734 переважно проводять міцину і тейкопланіну штамів. Ванкорезміцин має протягом 60-96 годин, у цьому випадку одержують не описану дотепер структур у, яка має групу тетоптимальний вихід антибіотика відповідно до дарамової кислоти в положенні 3 ацильного замісниного винаходу. Особливо переважно проводити ка з високо насиченим киснем довгим алкільним культивацію ферментацією протягом 68-96 годин в ланцюгом, заміщеним аміноцукором. Пошук, проумовах занурення, наприклад, у колбах, які струведений у хімічній літературі, показав, що ванкошуються, а також у лабораторних ферментерах. резміцин є новою сполукою. Ніякі інші сполуки не Розвиток ферментації й утворення ванкорезміцину мають структурних особливостей ванкорезміцину. може бути визначений за допомогою рідинної Ванкорезміцин одержують культивуванням міхроматографії високого тиску (РХВТ) і визначенкроорганізму, позначеного як культура №HILням біологічної активності бульйону культури про006734 (далі позначена як HIL-006734). Цей мікроти видів Staphylicocci і Enterococci відомим метоорганізм, використовуваний для одержання ванкодом мікробної дифузії на чашках з агаром. резміцину, виділений зі зразка грунту, зібраного в Переважною культурою є Staphylococcus aureus Національному парку, Боривлі, Мумбай, Індія. Мік3066, яка являє собою штам, резистентний до мероорганізм HIL-006734 належить до ряду Actinoтициліну, β-лактамового антибіотику, відомому в mycetales, рід Amycolatopsis, і поміщений 4 червня літературі, і Enterococcus faecium (E. faecium VR1998р. у Німецькій колекції мікроорганізмів і клі1), який є резистентним до ванкоміцину. Ванкоретинних культур (DSMZ - Deutsche Sammlung von зміцин є присутнім у фільтраті культури й у міцелії, Mikroorganismen und Zellkulturen Gmb), Braunі може бути виділений відомими методами видіschweig, Germany, і має вхідний номер DSM лення. Таким чином, він може бути виділений з №12216. фільтрату культури екстрагуванням розчинником, Таким чином, даний винахід далі стосується який не змішується з водою, таким як етилацетат, до способу одержання нової сполуки за назвою дихлорметан, хлороформ або бутанол при рН 5-8, ванкорезміцин з amycolatopsis виду HIL-006734, або за допомогою гідрофобної хроматографії з його мутантів і варіантів, при аеробних умовах у використанням полімерних смол, таких як «Diaion живильному середовищі, яка містить одне або HP-20®» (Mitsubishi Chemical industries Limited, більше джерел вуглецю й одне або більше джерел 5 70974 6 Japan), «Amberlite XAD®» (Rohm and Haas Хімічні еквіваленти можуть являти собою стаIndustries U.S.A.), активованого вугілля, або іонобільні комплекси з іонами металів, наприклад, меобмінної хроматографії при рН 5-8. Переважним талів перехідної групи, таких як La3+, Sm 3+, Eu3+, методом є екстрагування етилацетатом. Активний Gd3+, які є типовими для похідних тетрамінової матеріал також може бути виділений з міцелію кислоти і можуть бути отримані за методами, опиекстрагуванням розчинником, який змішується з саними у літературі (К. Tanaka et al., Chem. Pharm. водою, таким як метанол, ацетон, ацетонітрил, нBull. 1979, 27, 1901. К. Matsuo, Chem, Pharm, Bull. пропанол або ізо-пропанол, або розчинником, який 1980, 28, 2494). не змішується з водою, таким як етилацетат, дихПодвійні зв'язки алкільного бічного ланцюга лорметан, або хлороформ бутанол при рН 5-8, і можуть бути відновлені за методиками, представпереважним методом є екстрагування етилацеталеними у літературі, наприклад, у P.N. R ylander, том. Концентрація і ліофілізація екстрактів дає «Hydrogenation Methods», Academic Press, New активний неочищений матеріал. Антибіотик ванкоYork (1985), розділ 2, або можуть бути гідрогалорезміцин відповідно до даного винаходу, напригеновані за методиками, описаними Н.О. House у клад, може бути виділений з неочищеного матері«Modern Synthetic Reactions», WA Benjymin, Inc., алу в такий спосіб: New York (1972), стор. 446-452. Пдроксильовані Фракціонуванням з використанням кожної з похідні можуть бути отримані реакцією подвійних наступних методик: хроматографія з нормальною зв'язків з такими реагентами, як OsO4, як описано фазою (з використанням окису алюмінію або двов літературі, наприклад, у Chem. Rev. 1980, 80, окису кремнію у якості нерухомої фази і елюєнтів, 187. таких як петролейний ефір, етилацетат, метиленПохідні також можуть бути утворені перетвохлорид, ацетон, хлороформ, метанол або їхні комренням подвійних зв'язків у епоксиди за допомобінації, з додаванням амінів, таких як NEt3), хромагою окислювання, наприклад, МСРВА, такими як тографія з оберненою фазою (з використанням описані в Advanced Organic Synthesis, 4th Edition, J. подібних до силікагелю диметилоктадецилсилілMarch, John Wiiey&Sons., 1992. силікагеля, також названого RP-18, або диметилоВанкорезміцин має антибактеріальну дію. Міктилсилілсилікагеля, також названого RP-8 з обонімальні інгібуючі концентрації ванкорезміцину ротною фазою у якості нерухомої фази, і елюєнтів, проти широкого спектра бактерій представлені в таких як вода, буфери, а саме, фосфат, ацетат, Таблиці 3 нижче. Ванкорезміцин і його фармацевцитрат (рН 2-8) і органічні розчинники, такі як метично прийнятні солі і похідні можуть вводитися танол, ацетонітрил, ацетон, тетрагідрофуран або тваринам, переважно, ссавцям, і, зокрема, людині, комбінації цих розчинників), гельпроникаюча хроу виді лікарських засобів з них у чистому виді, у матографія з використанням смол, таких як сумішах один з одним і у виді фармацевтичних композицій, які дозволяють парентеральне ввеâSephadex LH-20 (Pharmacia Chemical Industries, дення. Отже, даний винахід також стосується ванSweden), TSKgel âToyopearl HW (TosoHaas, Tosoh корезміцину і його фармацевтично прийнятних Corporation, Japan) у розчинниках, таких як метасолей і похідних для використання у якості лікарнол, хлороформ, ацетон, етилацетат або їхні комських засобів і використання ванкорезміцину і його бінації, або âSephadex G1-0 і G-25 у воді; або профармацевтично прийнятних солей і похідних для титочної хроматографії з використанням одержання лікарських засобів, які мають антибакдвофазної системи елюєнтів, складеної з двох або теріальну дію. Даний винахід також стосується більше розчинників, таких як вода, метанол, етафармацевтичних композицій, які містять ефективнол, ізо-пропанол, н-пропанол, тетрагідрофуран, ну кількість ванкорезміцину і/або одну або більше ацетон, ацетонітрил, метиленхлорид, хлороформ, з його фармацевтично прийнятних солей і/або етилацетат, петролейний ефір, бензол і толуол. Ці похідних, разом з фармацевтично прийнятним методики можуть бути використані неодноразово носієм. або може бути використане сполучення різних Ванкорезміцин може вводитися перорально, методик. Кращою методикою є хроматографія на внутрішньом'язево, або внутрішньовенно відповідсилікагелі з оберненою фазою (RP-18). но до інших способів введення. Фармацевтичні Сполука ванкорезміцин може бути перетворекомпозиції, які містять ванкорезміцин або його фана у фармацевтично прийнятні солі і похідні, такі рмацевтично прийнятну сіль або похідне разом з як складні ефіри і прості ефіри, та інші очевидні іншими фармацевтично активними речовинами, хімічні еквіваленти, які усі включені в обсяг даного можуть бути отримані змішуванням активних сповинаходу. Солі і похідні можуть бути отримані сталук з одним або більше фармакологічно стерпниндартними методами, відомими фахівцям у даній ми допоміжними агентами і/або наповнювачами, області. Солі, такі як солі натрію і калію, напритакими як, наприклад, наповнювачі, емульгатори, клад, можуть бути о тримані обробкою ванкорезмізмазуючі агенти, смакові добавки, барвники або цину придатними натрієвими або калієвими оснобуферні речовини, і перетворенням суміші в привами. датну фармацевтичну препаративну форму, таку Складні ефіри і прості ефіри можуть бути як, наприклад, таблетки, таблетки з оболонкою, отримані за методами, представленими у літеракапсули, гранули, порошки, емульсії, суспензії або турі, наприклад, у Ad vanced Organic Synthesis, 4 th розчини, які підходять для парентерального ввеEdition, J. March, John Wiley&Sons., 1992. дення. Аміногрупа цукрової частини може бути алкіПриклади допоміжних агентів і/або наповнюлована або ацетильована, наприклад, хлорангідвачів, які можуть бути згадані, включають трагант, ридами за стандартними методиками, відомими лактозу, тальк, агар-агар, полігліколі, етанол і вофа хівцям у даній галузі те хніки. 7 70974 8 ду. Придатними і переважними для парентераль006734 за допомогою дротової петлі та інкубують ного введення є суспензії і розчини у воді. Також при температурі 28°С(±1°С) доти, поки не буде можливо вводити активні речовини як такі, без видний гарний ріст. Культури, які виросли в лунносіїв або розріджувачів, у придатній формі, наках, зберігають у холодильнику при температурі приклад, у капсулах. +8°С. Як це прийнято, галенові препаративні форми Одержання гліцеринового робочого посіву і спосіб введення, а також дозування, котрі підхоКомпозиція середовища дять для кожного конкретного випадку, залежать Дріжджовий екстракт 4,0г від видів, які піддаються лікуванню, і форми відпоРозчинний крохмаль 15,0г відного захворювання або стану, і можуть бути К2НРО4 1,0г оптимізовані за методами, відомими у даній галузі MgSO4 х7Н2 О 0,5г техніки. У середньому, добова доза активної споДемінералізована вода 1 літр луки для пацієнта вагою приблизно 75кг складає з, рН 7,0 принаймні, 0,001мг до, принаймні, 10мг, переважОписане вище середовище розподіляють у кіно аж до 1,0мг. лькостях 100мл у 300мл колби Ерленмейєра й Далі представлені ілюстративні приклади відавтоклавують при температурі 121°С протягом 20 повідно до даного винаходу, які не обмежують хвилин. Колби охолоджують до кімнатної темперайого обсяг. тури і засівають описаним вище скошеним агаром. Приклад 1 Інкубування проводять протягом п'яти днів на роВиділення культури №HIL-006734 з грунту таційному шейкері зі швидкістю 180об/хв і при теа) композиція живильного ізоляційного серемпературі 28°С. 1,5мл отриманої культури змішудовища ють з 1,5мл гліцерину (99%) і зберігають при Кукур удзяний крохмаль 10,0г температурі -20°С. Казеїн 1,0г Приклад 3 Пептон 1,0г Ферментація культури №HIL-006734 у колбах, М'ясний екстракт 1,0г які струшуються К2НРО4 0,5г Композиція посівного середовища Порошкоподібний агар 13,0г Глюкоза 15,0г Демінералізована вода 1,0літр Соєве борошно 15,0г рН 7,5 Рідина від вимочування кукурудзи 5,0г b) Культивування грунту і виділення СаСО3 2,0г 10г грунту, зібраного з Національного парку, NaCI 5,0г Боривлі, Бомбей, Індія, додають до 90мл стериліДемінералізована вода 1 літр зованої води в 250мл колбі Ерленмейєра, яку РН 6,8-7,0 струшують протягом 2 годин на ротаційному шейСередовище може бути використане з або без кері (220об/хв). Отриману суспензію ґрунту послірідини, одержуваної при вимочуванні кукурудзи. довно розбавляють 10 разів аж до 10-5. Після Описане вище середовище розподіляють у кіостаннього розведення 1мл суспензії поміщають у лькостях 100мл у 500мл колби Ерленмейєра й центр стерильної скляної чашки Петрі (діаметр автоклавують протягом 20хв. Колби охолоджують 15см), у яку вливають приблизно 50мл описаного до кімнатної температури і кожну колбу засівають вище ізоляційного середовища, до якого додано повною петлею описаної вище вирощеної культу25мкг/мл амфотерицину В в якості протигрибковори в лунках з приклада 2 і струшують на ротаційго агенту, і охолодженого до температури 45°С, і ному шейкері протягом 72 годин зі швидкістю чашку як слід обертають. Суміші суспензії ґрунту і 240об/хв при температурі 27°С(±1°С) з одержансередовища дають осісти та інкубують при темпеням посівної культури. ратурі 28°С(±1°С) протягом 7 днів. Чашку Петрі Композиція робочого середовища періодично спостерігають і HIL-006734 (культуру Глюкоза 20,0г №Y-9439786) виділяють зі зростаючих мікрооргаСоєве борошно 10,0г нізмів. СаСО3 0,2г Приклад 2 СоСІ2.6Н2О 0,001г Збереження культури №HIL-006734 Демінералізована вода 1 літр Композиція підтримуючого середовища HILрН 6,8 006734 зберігають у наступному середовищі: або Солодовий екстракт 10,0г Крохмаль 10,0г Глюкоза 4,0г Глюкоза 10,0г Дріжджовий екстракт 4,0г Гліцерин 99% 10,0г Актидіол 0,05г Рідина від вимочування Порошковий агар 13,0 кукурудзи 2,5г Демінералізована вода 1 літр Пептон 5,0г рН 7,0-7,5 Дріжджовий екстракт 2,0г Після ретельного розчинення інгредієнтів при NaCI 1,0г нагріванні, отриманий розчин розподіляють у проСаСОз 3,0г бірки і стерилізують при температурі 121°С протяДемінералізована вода 1 літр гом 20 хвилин. Пробірки охолоджують і дозволярН 7,2(до стерилізації) ють застигати у скошеному положенні. Скошені Робоче середовище розподіляють у кількостях агари засівають штрихом культивованої HIL100мл у 500мл колби Ерленмейєра й автоклаву 9 70974 10 ють при температурі 121°С протягом 20хв. Колби Бульйон з культурою (60 літрів) збирають і охолоджують до кімнатної температури і засівають центрифугують для відділення міцелію (2,5кг) і описаною вище посівною культурою (2%об/об). фільтрату культури (50 літрів, рН 7,3). Міцелій ексФерментацію проводять на ротаційному шейкері зі трагують метанолом (2χ20 літрів) і активні екстрашвидкістю 240об/хв і при температурі 27°С(±1°С) кти поєднують і концентрують при зниженому тиспротягом 48 годин. Одержання антибіотику визнаку з одержанням 70г неочищеного матеріалу. чають тестуванням біологічної активності проти S. Фільтрат культури (50 літрів, рН7,3) доводять до aureus 3066 і Ent. faecium VR-1 з використанням рН5,5 додаванням 2н соляної кислоти і пропускаметоду дифузії в лунках за відомою методикою. ють через колонку âDiaion HP-20 (2,5 літри). КоПриклад 4 лонку промивають водою (10 літрів) з наступним Культивування культури № HIL-006734 у ферпромиванням 15 літрами метанолу: води (1:1). ментерах Виявлено, що активна сполука присутня в 15 літОдержання посівної культури в колбах, які рах метанолу: води (3:1) і 30 літрах метанолових струшуються. елюатів. Перевірка ступеня очищення проводитьПосівне середовище з приклада 3 розподіляся у вигляді біологічного тестування проти S. ють у кількостях 150мл у 1000мл колби Ерленaureus 3066 і Ent. faecium VR-1. Активні елюати мейєра й автоклавують при температурі 121°С поєднують і концентрують з одержанням 15г непротягом 20хв. Посівну культуру вирощують у даочищеного матеріалу. Об'єднаний неочищений них колбах як описано в прикладі 3. матеріал неодноразово хроматографують на коФерментація в промисловому масштабі лонке âSephadex LH-20 (2,5смх90см) у метанолі й Композиція робочого середовища активні фракції поєднують і концентрують. ОтриГлюкоза 20,0г маний концентрат хроматографують на колонке Соєве борошно 10,0г âToyopearl TSK HW 40F (6смх35см) у метанолі. СаСО3 0,2г Активні фракції поєднують і концентрують при СоСІ2.6Н2О 0,001г зниженому тиску з одержанням 3г напівочищеного Демінералізована вода 1 літр матеріалу. Кінцеве очищення проводять за допорН 7,0 могою препаративної ВЕРХ із використанням наабо ступних умов: Крохмаль 10,0г Напівочищений матеріал піддають кінцевому Глюкоза 10,0г очищенню за допомогою препаративної ВЕРХ на Гліцерин 99% 10,0г 25мм´250мм Hibar-Lichrospher RP-18 (10мк із виРідина від вимочування користанням 67,5:32,5 метанол:фосфатний буфер кукурудзи 2,5г (0,01М, рН6,5) у якості елюєнту зі швидкістю потоПептон 5,0г ку 23мл/хв і визначенням при 220нм). Дріжджовий екстракт 2,0г Активні елюати поєднують і концентрують при NaCI 1,0г зниженому тиску для видалення розчинника і потім СаСО3 3,0г знесолюють на колонке âDiaion HP-20 (50мол), Демінералізована вода 1 літр елюйованою ацетонітрилом: водою (80:20), і конрН 7,2 (до стерилізації) центрують при зниженому тиску, і ліофілізують з 20 літрів робочого середовища в 22 літровому одержанням 70мг очищеної сполуки. ферментері (у двох ферментерах) і 9 літрів робоПриклад 6 чого середовища в 12 літровому ферментері (у Виділення й очищення ванкорезміцину двох ферментерах) разом з 1мл (/10 літровий феБульйон з культурою (200 літрів) збирають і рментер) âDesmophen у якості протиспінювача центрифугують для відділення міцелію і фільтрату стерилізують in situ протягом 40хв при температурі культури. Міцелій цілком екстрагують метанолом 121°С, охолоджують до температури 27°С(±1°С) і (30-40л) і екстракт концентрують 1:10 з одержанзасівають 1,5 літрами (/22 літровий ферментер) ням безбарвного осаду, який фільтрують з одерабо 0,75 літра (/12 літровий ферментер) посівною жанням 30-50г неочищеного матеріалу. Отримакультурою, описаною вище. ний матеріал очищають ВЕРХ: Ферментацію проводять при наступних пара1) Колонка: Fractogel TSK-HW 40 (4л, метрах: 500´100мм) Температура 27°С(±1°С) Елюент: метанол Перемішування 200об/хв Потік: 20мл/хв Аерація 15л/хв/22л. ферментер Визначення: 204 і 236нм 10л/хв/12л. ферментер Активні фракції елююють через 125хв. Об'єдЧас збору 64 години нані фракції концентрують при зниженому тиску і Одержання антибіотика визначають тестувансушать виморожуванням. ням біологічної активності проти S. aureus 3066 і 2) Колонка: Silica Gel 60 (Merck); Erimatech Ent. faecium VR-1 і ВЕРХ аналізу. Кінцевий рН бу(300´20мм, 100мл) льйону з культурою 7,0-7,5. Бульйон з культурою Елюєнт: збирають і центрифугують, і антибіотик виділяють і А) ди хлорметан : метанол 9:1 очищають з фільтрату культури і міцелію за метоB) дихлорметан : метанол 3:1+1% триетиламін дикою прикладів 5 або 6. C) метанол Приклад 5 Виділення й очищення ванкорезміцину 11 70974 Градієнт: хв %А %В %С 0 100 0 0 23 100 0 0 24 0 100 0 51 0 100 0 52 0 0 100 93 0 0 100 Швидкість потоку: 25мл/хв Визначення: 236 і 288нм Фракції, які містять ванкорезміцин, елюють через 32хв. Об'єднані фракції концентрують при зниженому тиску і сушать виморожуванням. Вихід двох колонок, які очищають, складає 50%. Фізико-хімічні і спектральні властивості ванкорезміцину дані в таблицях 1 і 2 і мінімальні інгібуючі концентрації (МІК) проти різних бактерій перераховані в таблиці 3. Фіг.1 та 2 відносяться до таблиці 1. На Фіг.1 показане визначення ванкорезміцину за допомогою рідинної хроматографії високого тиску, і на Фіг.2 показаний спектр абсорбції ультрафіолету ванкорезміцином в метанолі. Таблиця 1 Зовнішній вигляд Розчинність Температура плавлення [ a ]D ТСХ (тонкошарова хроматографія): біла тверда речовина метанол, ДМСО 141-143°С -13° (з 0,2, метанол) Rf: 0,6 [силікагелева пластина (виріб 12 №5554, Ε Merck); н-бутанол:метанол:вода (4:1:2)] РХВТ (рідинна Час утримання: 14,70хв. LiChrocart хроматографія ви- [Колонка: сокого (250мм´4мм) RP Select В (5мк; Елюєнт: градієнт 0,1% тиску) водяної ортофосфорної кислоти (рН 2,5) до ацетонітрилу за 20 хв; швидкість потоку: 1мл/хв; визначення: 220 нм]. Відповідний графік на Фіг.1 або: Колонка: Purospher Star RP.18e (Merck), 55´4мм, 3мкм Елюєнт: ацетонітрил/0,01% фосфорна кислота (85%) Градієнт: час %ацетонітрил 0,00 5,0 3,00 95,0 5,00 95,0 6,00 5,0 10,00 5,0 Потік: 2мл/хв Температура: 40°С Визначення: 210нм, 254, 280, 320, 380 tR:2,19xB ЕРІ-МС (Мас1342 (М-Н) спектрометрія з електророзпилюваною іонізацією) ВД-БША-МС (Мас спектрометрія високого розділення з бомбардуванням швидкими атомами - мас спектр) Молекулярна формула УФ/ВС 1343,89142 (М+Н)+ [розрахована для C71H127N2 O21 1343,889915 (М+Н)+] C71H127N2O 21 метанол, lmах (log ε) = 234нм (4,39), 280 (4,29) (фігура 2) КВr, ν = 3384см -1 (ш), 2934 (м), 1674 (м), 1616 (с), 1456 (с), 1381 (м), 1064. (фігура 3) див. таблицю 2 див. таблицю 2 ІК 1 НЯМР С Я МР 13 Таблиця 2 1 Н и 13С Я МР спектроскопічні дані ванкорезміцину в MeOD при 300К 1 1 2 3 4 5 6 7 8 2 Н 0,85 0,97 1,86 3,40 1,69 0,77 3,53 1,65 1 3 C 14,76 20,83 31,20 82,19 39,54 13,64 80,19 36,40 13 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 0,86 1,43 1,43 3,74 1,60/1,54 3,75 1,57/1,38 1,49/1,16 1,94 0,92 3,86 4,59 3,83 2,48 12,75 31,20 36,52 72,03 44,90 72,03 36,61 30,18 38,60 15,04 81,67 103,48 72,03 57,61 13 70974 14 Продовження табл.2 1 24 25 26 27 28 29 ЗО 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 2 3,08 3,21 1,27 1,52/1,42 3,96 1,49 3,79 4,31 6,61 1,82 4,20 1,14 5,36 1,67 3,98 1,63 0,88 3,58 1,48 1,62/1,32 1,55/1,32 3,79 1,73 0,77 3,40 1,61 0,85 1,54/1,33 1,61/1,44 3,77 1,67/1,62 3,90 2,29 5,75 1,82 3,22 5,35 3,07 1,09 1,09 3 75,08 74,66 18,29 39,35 65,82 42,39 72,47 73,26 142,09 138,52 12,75 206,04 41,01 17,77 128,35 138,72 12,75 80,53 41,30 8,10 73,85 36,52 23,51 33,36 75,08 42,71 11,91 77,82 36,28 12,70 31,34 36,28 71,83 44,53 71,28 37,53 129,78 141,66 13,98 195,36 174,52 27,78 136,51 183,80 100,31 116,05 26,50 24,46 24,46 Таблиця 3 Організм, який підлягає тестуванню Staphylococcus aureus 209P S. aureus 20240 S. aureus E-710 S. aureus SG511 S. aureus 3066 S. warned 6563 II (2) S. aureus E-712 S. aureus 20424 S. aureus Chantot 31153 S. aureus Wein 11 S. aureus Wein 12 S. aureus 503(Mers) S. aureus Brussel 4115 S. aureus MLS-16 S. haemolyticus 809 S. epidermidis 825 S. epidermidis 823 S. epidermidis 607 S. epidermidis 5747 IW Enterococcus faecalis ATCC 29212 Ent. Faecalis D 21777 Ent. Faecalis D 23241 Ent. Faecalis D 756 Ent. Faecalis D 26777 Ent. Faecalis D 7F Ent. Faecium D-65 Ent. Faecium 5601 (H) Ent. Faecium P-1 Ent. Faecium P-2 Ent. Faecium VR-1 Ent. hirae 55 Ent. Durans 4939H Escherichia coli 9632 E. coli super sen. 2231 Pseudomonas aeruginosa M35 ΜIК (мкг/мл) 0,05 0,05 0,10 0,05 0,10 0,10 0,10 0,10 0,05 0,05 0,05 0,025 0,05 0,39 0,05 0,10 0,20 0,10 0,10 0,39 0,39 0,39 0,39 0,39 0,39 0,39 0,39 0,39 0,39 0,39 0,39 0,39 >100 >100 >100 15 Комп’ютерна в ерстка Л. Купенко 70974 Підписне 16 Тираж 37 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601