Таксани, спосіб їх одержання та лікарський препарат з цитотоксичною дією

1 Таксаны общей формулы І, обладающие фармакологической активностью, метоксикарбонил-7-эпитаксол по п 1 4 3'-Десфенил-3'-(4-пиридил)-2,3'-г\І-бис-дебензоил-З'-ІЧ-метоксикарбонилтаксол 5 3'-Десфенил-3'-(4-пиридил)-3'-М-дебензоил-3'-г\Іметоксикарбонил-10-дезацетилтаксол по п 1 6 Способ получения таксановых производных общей формулы I по пп 1-5, отличающийся тем, что спирт общей формулы II где R1 и R2 имеют вышеуказанные значения, и гидроксигруппы, содержащиеся в II необязательно защищены, подвергают взаимодействию с соединением общей формулы Ilia, Nib или Шс, 1 о о где Sk может представлять собой " 0C{0)CH0HCH{NHC0R3]—V О а) 7 м ' R1 представляет собой водород или С-і-С-ю ацил, R2 представляет собой (Х-ОН, R3 представляет собой С-і-С-юалкил, Хзамещенный фенил, алкоксигруппу, X представляет собой водород, галоген, -N3 или CN и гидроксигруппы в I могут быть далее функ ционально модифицированы путем этерифика ции, а также а , р и у-циклодекстриновые клат раты, а также соединения общей формулы I, за ключенные влипосомы 2 3'-Десфенил-3'-(4-пиридил)-3'-М-дебензоил-3'-г\І метоксикарбонилтаксол по п 1 3 3'-Десфенил-3'-(4-пиридил)-3'-М-дебензоил-3'-г\І где R имеет вышеуказанное значение, и X' может 49007 представлять собой гидрокси, О-алкил или галоген, и где свободные гидроксигруппы защищены путем этерификации или эстерификации, с получением соединений общей формулы І, в которых свободные гидроксигруппы могут быть далее функционально модифицированы путем этерификации 7 Лекарственный препарат, обладающий цитоток сическим действием, содержащий один или несколько соединений формулы I по пп 1-5, способных ингибировать полимеризацию и стабилизировать образовавшиеся микротрубочки 8 Лекарственный препарат по п 7, дополнительно включающий традиционные наполнители, носители и добавки Изобретение относится к фармакологически активным соединениям, которые обладают способностью оказывать влияние на процессы полимеризации и деполимеризации тубулина Ряд блокаторов митоза природного происхождения применяют в качестве противоопухолевых средств, либо подвергают в настоящее время клиническому тестированию Существуют различные классы таких блокаторов митоза, которые либо проявляют свое цитотоксическое действие посредством ингибирования полимеризации микротрубочек в веретенной системе(например, алкалоиды Винка(\/іпка alkaloids), колхицин), либо оказывают свое цитотоксическое действие посредством ГТФ-независимого повышения уровня полимеризации тубулина и предотвращения деполимеризации микротрубочек(например, таксол, TaKCOTepbi(taxoters)) Bioorg Med Chem Lett, (1994) 4(11), 1381 1384, ЕР-А-0 534 708 Angew Chem Int Ed Engl , (1994), 33(1), 15 44, WO-A-95 13 053 WO-A-95 19 994 J Pharm Sci , (1995), 84(10), 1223-1230, WO-A-96 00 724 Однако, соединения, описанные в WO-A-94 21 252, являются наиболее близкими в данной области Неожиданно было обнаружено, что соединения формулы I по данному изобретению по сравнению с таксолом и соединениями, известными в данной области, обладают выгодно отличающимся профилем активности Помимо очевидно повышенной стабильности микротрубочек, соединения формулы I оказывают дополнительное влияние на процесс полимеризации тубулина Таксаны по данному изобретению характеризуются общей формулой I Благодаря своим физико-химическим свойствам, остающимся непонятыми до сих пор, и как следствие свойств опухолевых клеток, блокаторы митоза обладают определенной селективностью по отношению к опухолевым клеткам, но все же они оказывают значительное цитотоксическое действие на нетрансформированные клетки Поиск более селективно действующих соединений, производство которых было бы легче наладить и которые, как соединения класса таксанов, способны ингибировать деполимеризацию микротрубочек, неожиданно привел к открытию сложных эфиров борнеола, как описано в немецком патенте №Р 4416374 6 и С 07 С35/30, 5 05 94(Шеринг АГ) и немецком патенте №19513040 5 С 07 ДЗОЗ/06, 29 03 95(Шеринг АГ) Структурные модификации соединений данного класса позволили обнаружить значительный потенциал для усовершенствования в отношении воздействия на микротрубочки Помимо прочего, выдающиеся результаты были получены с помощью классической эстерификации данных борнеолов кислотой типа Sk-H По проведении синтеза описанных здесь производных таксола, в которых изосериновая цепь таксола замещена Sk, целью явилось исследование возможности достигать повышенной стабильности микротрубочек путем применения соединений данного класса по сравнению с применением таксола Далее, в следующих документах описаны соединения, проявляющие фармакологическую активность WO-A-94 21 252 где Sk может представлять собой R1 может представлять собой водород или d С-юацил, R может представлять собой а-ОН, R3 может представлять собой d-Сюалкил, Хзамещенный фенил, d-Сюалкокси, X может представлять собой водород, галоген, -ІЧз или -CN, и свободные гидроксигруппы в I могут быть далее функционально модифицированы путем этерификации или эстерификации, а также их а-, 0>- и у-циклодекстриновые клатраты, а также соединения общей формулы I, заключенные в липосомы 49007 Под алкильной группой R подразумевают алкильные группы с неразветвленной или разветвленной цепью, содержащие от 1 до Юатомов углерода, такие как, например, метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, трет-бутил, пентил, изо-пентил, неопентил, гептил, гексил и децил Предпочтительными являются алкильные группы, содержащие от 1 до 4атомов углерода Ацильные и алкоксигруппы, содержащиеся в R1 и R3 соответственно, из общей формулы I, содержат от 1 до Юатомов углерода, причем предпочтительными являются метокси-, этокси-, пропокси-, изопропокси- и трет-бутоксигруппы, соответственно Галоген в обозначении X представляет собой фтор, хлор, бром или йод Предпочтительными соединениями общей формулы I являются 3'-десфенил-3'-(4-пиридил)-3'-г\І-дебензоил-3'N-метокси-карбонилтаксол, 3'-десфенил-3'-(4-пиридил)-3'-г\І-дебензоил-3'|\|-метокси-карбонил-7-эпитаксол, 3'-десфенил-3'-(4-пиридил)-2,3'-г\І-бисдебензоил-З'-ІЧ-метоксикарбонилтаксол и 3'-десфенил-3'-(4-пиридил)-3'-г\І-дебензоил-3'N-метокси-карбонил-Ю-дезацетилтаксол Изобретение относится также к способу получения борнеольных производных формулы I, причем данный способ характеризуется тем, что спирт общей формулы II где R1 и R2 определены здесь выше, и гидроксигруппы, содержащиеся в II, необязательно защищены, взаимодействует с соединением общей формулы Ilia, Nib или Ніс где R определен здесь выше, и X' может представлять собой гидрокси, 0-алкил или галоген, и где свободные гидроксигруппы защищены путем этерификации или эстерификации, с получением соединений общей формулы І, в которых свободные гидроксигруппы могут быть далее функционально модифицированы путем этерификации, эстерификации В целях осуществления эстерификации спиртовой функциональной группы в соединении II проводят депротонирование с помощью основания, такого как, например, гидрид мета лла(например, гидрид натрия), алкоголят щелочного металла(например, метанолят натрия, третбутанолят калия), гексаметилдисилазан щелочного металла(например, гексаметилдисилазан натрия), 1,5-диазабицикло[4 3 0]нон-5-ен(ДБН), 1,8диазабицикло[5 4 0]ундец-7-ен(ДБУ), триэтиламин, 4-(диметиламино)-пиридин(ДМАП) или 1,4диазабицикло[2 2 2]октан(ДАБЦО), и проводят реакцию с производным карбоновой кислоты общей формулы III в инертном растворителе, таком как, например, дихлорметан, диэтиловый эфир или тетрагидрофуран, при температуре от -70°С до +50°С Предпочтительной является реакция с гидридом натрия в качестве основания, циклическим амидом кислоты в качестве производного карбоновой кислоты и тетрагидрофураном в качестве растворителя при температуре от -10°С до +25°С Свободные гидроксигруппы в соединении I могут быть далее функционально модифицированы в соответствии с методиками, известными специалистам в данной области, например путем этерификации или эстерификации Например, свободные гидроксигруппы могут быть переведены в форму пиридиниевых солей физиологически переносимых кислот, в форму фосфатов и их солей с физиологически переносимыми основаниями или в форму их сложных эфиров или в форму сложных и простых эфиров водорастворимых полимеров Также могут быть получены простые и сложные эфиры соединений, которые сами по себе способны оказывать ингибирующий эффект на опухоль Биологические эффекты и область применения новых производных таксола Новые соединения формулы I являются ценными лекарственными средствами Они воздействуют на тубулин путем вмешательства в процесс полимеризации тубулина и стабилизации образовавшихся микротрубочек и, таким образом, способны оказывать фазоспецифичное воздействие на клеточное деление Данное воздействие особенно сильно сказывается на быстрорастущих опухолевых клетках, на рост которых существенное влияние оказывают межклеточные регуляторные механизмы Активные ингредиенты данного типа, в принципе, являются подходящими для лечения заболеваний, при которых могут иметься терапевтические показания для воздействия на процесс клеточного деления В качестве примера могут быть упомянуты лечение злокачественных опухолей, малярии, лечение заболеваний, вызываемых грамотрицательными бактериями, а также лечение заболеваний центральной и периферической нервной системы, в основе которых лежат excitotoxic механизмы, такое как, например, лечение острых нейродегенеративных состояний, таких как повышение внутричерепного давления(агізе), например в результате инсульта или травматического повреждения головного мозга, лечение хронических нейродегенеративных заболеваний, включая болезнь Альцгеймера, а также лечение бокового амиотрофического склероза В качестве примеров применения в лечении 49007 злокачественных опухолей может быть упомянуто, например, применение в лечении злокачественных опухолей яичника, желудка, толстой кишки, предстательной железы, молочной железы, легкого, мягких тканей головы и шеи, меланобластомы и острых лимфолейкозов и миелолейкозов Вообще, соединения по данному изобретению могут быть применены либо сами по себе, либо, в целях достижения аддитивного или синергического эффекта, в сочетании с другими действующими началами и классами соединений, которые могут быть применены в требующемся курсе лечения При рассмотрении лечения опухолей в качестве примера могут быть упомянуты сочетания с комплексами платины, такими как, например, цисплатин и карбоплатин, внедряющимися соединениями, например, из класса антрацикдинов, такими как, например, доксорубицин, или из класса антрапиразолов, такими как, например, С1-941, соединениями, которые действуют натубулин, например из класса алкалоидов Винка, такими как, например, винкристин и винбластин, или из нового класса сложных эфиров борнеола, описанных в Р 4416374 6 и 19513040 5, или из класса макролидов, такими как, например, ризоксин, или с другими соединениями, такими как, например, колхицин, комбретастатин А-4 и эпотилон А и В, ингибиторами ДНК-топоизомеразы, такими как, например, камптотецин, этопозид, топотекан и тенипозид, фолатными или пиримидиновыми антиметаболитами, такими как, например, лометрексол и гемцитубин, алкилирующими ДНК соединениями, такими как, например, адозелезин и дистамицин А, ингибиторами факторов роста(например, ингибиторами PDGF, EGF, TGFb, EGF), такими как, например, антагонисты соматостатина, сурамиHa(suramm), бомбезина, ингибиторами тирозиновой протеинкиназы или протеинкиназ А и С, такими как, например, эрбстатин, генистеин, стауроспорин, илмофозин и 8-С1цАМФ, антигормональными средствами из класса антигестагенных средств, такими как, например, мифепристон, онапристон, или из класса антиэстрогенных средств, такими как, например, тамоксифен, или из класса антиандрогенных средств, такими как, например, ципротеронацетат, соединениями, подавляющими метастазирование, например из класса эйкозаноидов, такими как, например, РСЬ, PGEi, б-оксо-PGEi И ИХ стойкие производные(например, илопрост, цикапрост, берапрост), антагонистами ионов Са2+, такими как, например, верапамил, галопамил, флунаризин, дилтиазем, нифедипин и нимодипин, нейролептическими средствами, такими как, например, хлорпромазин, трифлуоперазин, тиоридазин и перфеназин, местно-анестезирующими средствами, такими как, например, карбанилат-Са7, цинхокаин, карбанилат-Саз, артикаин, карбанилат, лидокаин, соединениями, подавляющими рост сосудов, 8 такими как, например, анти-VEGF антитела, эндостатин В, интерферон-а, AGM 1470, и ингибиторами клеточной пролиферации при псориазе, саркоме Капоши и нейробластоме Данное изобретение относится также к лекарственным средствам на основе соединений общей формулы I, которые являются фармацевтически приемлемыми, что означает, что соединения нетоксичны в применяемых концентрациях, необязательно в сочетании с традиционными наполнителями, носителями и добавками Соединения по данному изобретению могут быть переработаны в соответствии с методиками галеновой фармации, известными сами по себе, в фармацевтические препараты для энтерального, чрескожного, парентерального или местного применения Они могут быть применены в форме таблеток, драже, желатиновых капсул, гранул, суппозиториев, имплантатов, стерильных водных и масляных растворов для инъекций, суспензий или эмульсий, мазей, кремов и гелей Таким образом, данное изобретение относится также к применению соединений по данному изобретению в получении лекарственных препаратов Активный(е) ингредиент(ы) может быть смешан с наполнителями, которые являются принятыми в галеновой фармации, такими как, например, гуммиарабик, тальк, крахмал, маннитол, метил целлюлоза, лактоза, поверхностно-активные вещества, такие как Tweens или Myrj, стеарат магния, водные или неводные носители, производные парафинов, увлажняющие и диспергирующие средства, эмульгаторы, консерванты и корригенты для придания вкуса(например, эфирные масла) Таким образом, данное изобретение относится также к фармацевтическим композициям и лекарственным препаратам, которые в качестве активного ингредиента содержат, по крайней мере, одно соединение по данному изобретению Разовая доза содержит приблизительно от 0,1 до 100мг активного(ых) ингредиента(ов) Дозировка соединений по данному изобретению у людей составляет приблизительно от 0,1 до 1000мг в сутки Описание фигур На Фиг 1 показан ход изменения поглощения как функции времени и температуры (З1десфенил-3'-(4-пиридил)-3'-М-дебензоил-3'-г\1метоксикарбонилтаксол, Прикладной пример 2) На Фиг 2 показан ход изменения поглощения как функции времени и температуры (З1десфенил-3'-(4-пиридил)-3'-М-дебензоил-3'-г\1метоксикарбонил-7-эпитаксол, Прикладной пример 3) На ФигЗ показан ход изменения поглощения как функции времени и температуры (З1десфенил-3'-(4-пиридил)-2,3'-г\1-бисдебензоил-3'N-метоксикарбонилтаксол, Прикладной пример 4) На Фиг 4 показан ход изменения поглощения как функции времени и температуры (З1десфенил-3'-(4-пиридил)-3'-М-дебензоил-3'-г\1метоксикарбонил-10-дезацетилтаксол, Прикладной пример 5) Следующие Примеры служат для дальнейшего разъяснения способа получения соединений по данному изобретению 49007 Пример 1 3'-Десфенил-3'-(4-пиридил)-3'-І\І-дебензоил-3'N-метоксикарбонилтаксол 8,6мкл 1М раствора фторида тетрабутиламмония в тетрагидрофуране добавляют при 3°С в атмосфере сухого аргона к раствору 3,1мг(2,9мкмоль) соединения, полученного в соответствии с Примером 1а, в 0,5мл безводного тетрагидрофурана и реакционную смесь перемешивают в течение ЗОминут Смесь выливают в насыщенный раствор гидрокарбоната натрия и проводят экстракцию путем добавления дихлорметана, органический экстракт концентрируют и остаток очищают по методу хроматографии на половине пластинки для аналитической тонкослойной хроматографии В качестве подвижной фазы применяют этилацетат, а в качестве элюента применяют смесь дихлорметана и метанола Выделяют 0,4мг(0,5мкмоль, 17%) указанного в заголовке соединения 1 Н - NMR(CDCl3) d = 1 16(31-1), 1 25(ЗН), 170(31-1) 175(11-1), 184(31-1), 190(11-1), 2 26(31-1), 2 25 - 2 38(2Н), 2 38(31-1), 2 48(1 Н), 2 56(1 Н), 3 62(ЗН), 3 81 (1Н), 4 19(11-1), 4 31 (1Н), 4 40(1 Н), 4 71 (1Н), 4 95(1 Н), 5 37(1 Н), 5 66(1 Н), 5 69(1 Н), 6 28 (1Н), 6 31 (1Н), 7 40(2Н), 7 51(21-1) 7 61 (1Н) 8 11(21-1), 8 66(2Н) ррт Пример 1а 2'-Триизопропилсилил-3'-десфенил-3'-(4пиридил)-3'-г\І-дебензоил-3'-г\І-метоксикарбонил-7триэтилсилилтаксол 12мг приблизительно 60% дисперсии гидрида натрия добавляют при 3°С в атмосфере сухого аргона к раствору 4,2мг(6,0мкмоль) и 11,4мг соединений, полученных в соответствии с Примерами 16 и 1в, в 0,1мл безводного тетрагидрофурана и смесь нагревают до 30°С и перемешивают в течение ЗОминут Смесь вновь охлаждают до 3°С, добавляют 30% водную уксусную кислоту и несколько раз проводят экстракцию путем добавления диэтилового эфира Объединенные органические экстракты промывают насыщенным раствором хлорида натрия и сушат над сульфатом магния После фильтрования и удаления растворителя остаток очищают по методу хроматографии на двух пластинках для аналитической, тонкослойной хроматографии В качестве подвижной фазы применяют смесь н-гексана и этилацетата, а в качестве элюента применяют смесь дихлорметана и метанола Выделяют 3,7мг(3,4мкмоль, 57%) указанного в заголовке соединения 1 Н - NMR(CDCl3) d = 0 60(6Н), 0 80 -1 02(30Н), 125(61-1), 170(31-1), 191(11-1), 2 03(ЗН), 2 14(11-1), 2 20(ЗН), 2 36(1 Н), 2 49(ЗН), 2 53(1 Н), 3 54(ЗН), 3 84(11-1), 4 18(11-1), 4 30(1 Н), 4 49(1 Н), 4 85(1 Н), 4 93(1 Н), 5 30(1 Н), 5 60(1 Н), 5 70(1 Н), 6 32(1 Н), 6 47(1 Н), 7 28(2Н), 7 49(2Н), 7 59(1 Н), 8 13(21-1), 8 64(2Н) ррт Пример 16 7-Триэтилсилилбаккатин III 21мкл Триэтилхлорсилана и 10,3мг имидазола добавляют при 3°С в атмосфере сухого аргона к раствору 3,7мг(6,3мкмоль) хроматографически очищенного баккатина IllfCalbio - chem Corp) в 0,3мл безводного диметилформамида и реакци 10 онную смесь перемешивают в течение одного часа Смесь выливают в насыщенный раствор гидрокарбоната натрия и несколько раз проводят экстракцию путем добавления диэтилового эфира с последующей промывкой насыщенным раствором хлорида натрия и объединенные органические экстракты концентрируют Остаток, полученный после фильтрования и удаления растворителя, очищают по методу хроматографии на половине пластинки для аналитической тонкослойной хроматографии В качестве подвижной фазы применяют смесь н-гексана и этилацетата, а в качестве элюента применяют смесь дихлорметана и метанола Выделяют 3,0мг(5,6мкмоль, 88%) указанного в заголовке соединения 1 Н - NMR(CDCI) d = 0 59(6Н), 0 92(9Н), 106(31-1), 120(31-1), 162(11-1), 169(31-1), 188(11-1), 2 04(1 Н), 2 19(61-1), 2 28(2Н), 2 29(31-1), 2 53(1 Н), 3 88(11-1), 4 14(11-1), 4 31 (1Н), 4 50(1 Н), 4 83(1 Н), 4 98(1 Н), 5 63(1 Н), 6 47(1 Н), 7 49(2Н), 7 61 (1Н), 8 11(2Н)ррт Пример 1в (3R, 4S)-1 -(Метоксикарбонил)-Зтриизопропилсилилокси-4-(4-пиридил)-2азетидинон 573мг 4-диметиламинопиридина и 193мкл метилового эфира хлормуравьиной кислоты добавляют при 3°С в атмосфере сухого аргона к раствору 250мг(0,78ммоль) соединения, полученного в соответствии с Примером 1 г, в 10мл безводного дихлорметана и реакционную смесь нагревают до 23°С и перемешивают в течение еще 16часов Смесь выливают в насыщенный раствор хлорида аммония, несколько раз проводят экстракцию путем добавления диэтилового эфира с последующей промывкой насыщенным раствором хлорида натрия и объединенные органические экстракты концентрируют Остаток, полученный после фильтрования и удаления растворителя, очищают по методу хроматографии на приблизительно 150мл мелкопористого силикагеля, применяя в качестве подвижной фазы смесь н-гексана и этилацетата Выделяют 251 мг(0,66ммоль, 85%) указанного в заголовке соединения 1 H-NMR(CDCI3) d = 0 82 - 1 07(21 Н), З 82(ЗН), 5 11 (1Н) 5 26(1 Н), 7 23(2Н), 8 61 (2Н) ррт Пример 1г (3R, 43)-3-Триизопропилсилилокси-4-(4пиридил)-2-азетидинон Раствор 67,Зг цериевого нитрата аммония в 700мл воды добавляют при 3°С в атмосфере аргона к раствору 17,2г(40,3ммоль) соединения, полученного в соответствии с Примером 1д, в 384мл безводного ацетонитрила и реакционную смесь перемешивают в течение ЗОминут Смесь выливают в насыщенный раствор гидрокарбоната натрия, несколько раз проводят экстракцию путем добавления этилацетата и объединенные органические экстракты промывают 1% раствором гидроксида натрия и сушат над сульфатом магния Остаток, полученный после фильтрования и удаления растворителя, очищают по методу хроматографии на приблизительно 800мл мелкопористого силикагеля, применяя в качестве подвижной фазы смесь н-гексана и этилацетата Выделяют 11 49007 7,89г(24,6ммоль, 61%) указанного в заголовке соединения 1 H-NMR(CDCl3) d = 0 78 - 1 07(21 Н), 4 81(1Н), 5 23(1 Н), 6 39(1 Н), 7 28(2Н), 8 59(2Н) ррт Пример 1д (3R, 43)-1-(4-Метоксифенил)-3-триизопропилсилилокси-4-(4-пиридил)-2-азетидинон Раствор 12,6мл перегнанного непосредственно перед этим диизопропиламина в 70мл безводного тетрагидрофурана охлаждают до -30°С в атмосфере сухого аргона, добавляют 37,6мл 2,4М раствора н-бутиллития в н-гексане и смесь нагревают до 0°С Через ЗОминут смесь охлаждают до 78°С, к ней по каплям добавляют раствор 22,1г(56,6ммоль) (1R, 23)-2-фенил-1-циклогексилтриизопропилсилилоксиацетата, полученного в соответствии с методикой, аналогичной таковой, описанной в Tetrahedron, т 48, №34, с 6985 7012, 1992, в 70мл безводного тетрагидрофурана и смесь перемешивают в течение Зчасов Затем добавляют раствор 15,6г (73,5ммоль) альдимина, полученного в соответствии с Примером 1е, в 150мл безводного тетрагидрофурана и смесь нагревают до 23°С в течение 16часов Смесь выливают в насыщенный раствор хлорида аммония, несколько раз проводят экстракцию путем добавления этилацетата с последующим промыванием насыщенным раствором хлорида натрия и объединенные органические экстракты концентрируют Остаток, полученный после фильтрования и удаления растворителя, очищают по методу хроматографии на приблизительно 1,8л мелкопористого силикагеля, применяя в качестве подвижной фазы смесь н-гексана и этилацетата Выделяют 17,2г(40,3ммоль, 71%) указанного в заголовке соединения 1 H-NMR(CDCI3) d = 0 82 - 1 12(21 Н), З 76(ЗН), 5 12(11-1), 5 29(1 Н), 6 80(2Н), 7 19 - 7 30(4Н), 8 60(2Н) ррт Пример 1е |\1-(4-Метоксифенил)-(4-пиридил)альдимин 7,8мл пиридин-4-альдегида и 8,4г сульфата магния добавляют в атмосфере сухого аргона к раствору 10г(81,1 ммоль) 4-анизидина в 120мл безводного дихлорметана и смесь перемешивают при 23°С в течение 4часов Остаток, полученный после фильтрования и удаления растворителя, перекристаллизовывают из н-гексана Выделяют 15,9г(74,9ммоль, 92%) указанного в заголовке соединения 1 H-NMR(CDCI33) d = 3 83(ЗН), 6 95(2Н), 7 29(2Н), 7 73(2Н), 8 47(1 Н), 8 73(2Н) ррт Пример 2 3'-Десфенил-3'-(4-пиридил)-3'-г\І-дебензоил-3'|\1-метоксикарбонил-7-эпитаксол(А) и З'-десфеиил3'-(4-пиридил)-2,3'-М-бис-дебензоил-3'-г\Іметоксикарбонилтаксол(Б) 42мкл 1М раствора фторида тетрабутиламмония в тетрагидрофуране добавляют при 3°С в атмосфере сухого аргона к раствору 15мг (13,9мкмоль) соединения, полученного в соответствии с Примером 1а, в 0,5мл безводного тетрагидрофурана и реакционную смесь перемешивают в течение ЗОминут при 3°С, нагревают до 23°С и перемешивают в течение еще ЗОминут Смесь 12 вышивают в насыщенный раствор гидрокарбоната натрия, проводят экстракцию путем добавления дихлорметана, органический экстракт концентрируют и остаток очищают по методу хроматографии на двух пластинках для аналитической тонкослойной хроматографии В качестве подвижной фазы применяют смесь этилацетата и метанола, а в качестве элюента применяют смесь дихлорметана и метанола Выделяют 3,8мг(4,7мкмоль, 34%) указанного в заголовке соединения А, 2,4мг (3,4мкмоль, 25%) указанного в заголовке соединения Б, а также 1,2мг(1,5мкмоль, 11%) соединения, описанного в Примере 1 1 H-NMR(CDCI3,) of A d = 1 18(31-1) 1 23(ЗН), 168(31-1) 171(11-1) 180(11-1) 183(31-1), 2 15 2 48(4Н) 2 21(31-1) 2 49(31-1), 3 56(ЗН) 3 71 (1Н) 3 92(11-1) 4 37(2Н) 4 63(1 Н), 4 71 (1Н) 4 91 (1Н) 5 37(1 Н) 5 67(1 Н) 5 76(1 Н) 6 34(1 Н) 6 81 (1Н) 7 33(2Н), 7 51(2Н) 7 61 (1Н) 8 16(21-1) 8 63(2Н) ррт Пример 3 3'-Десфенил-3'-(4-пиридил)-3'-г\1-де6ензоил-3'N-метокси карбон и л-10-дезацетилтаксол 20,4мкл 4Н соляной кислоты добавляют в атмосфере сухого аргона к раствору 9,0мг (10,2мкмоль) соединения А, полученного в соответствии с Примером За, в 0,8мл этанола и 0,2мл тетрагидрофурана и реакционную смесь перемешивают при 23°С в течение одного часа Добавление соляной кислоты повторяют еще дважды, каждый раз после одночасового периода перемешивания, добавляют насыщенный раствор гидрокарбоната натрия, проводят экстракцию путем добавления дихлорметана, органический экстракт концентрируют и остаток очищают по методу хроматографии на двух пластинках для аналитической тонкослойной хроматографии В качестве подвижной фазы применяют смесь этилацетата и этанола, а в качестве элюента применяют смесь дихлорметана и метанола Выделяют 6,5мг (8,5мкмоль, 83%) указанного в заголовке соединения 1 H-NMR(CDCI3) d = 1 13(31-1), 1 24(ЗН), 1 78(ЗН), 1 83(ЗН), 1 73 - 1 96(ЗН), 2 25(2Н), 2 37(ЗН), 2 60(1 Н), 3 62(ЗН), 3 92(11-1), 4 14 4 28(2Н), 4 20(1 Н), 4 32(1 Н), 4 69(1 Н), 4 94(1 Н) 5 21 (1Н), 5 36(1 Н), 5 68(1 Н) 5 83(1 Н), 6 30(1 Н), 7 34(2Н), 7 50(2Н), 7 62(1 Н), 8 10(21-1), 8 61(21-1) ррт Пример За 3'-Десфенил-3'-(4-пиридил)-3'-г\1-дебензоил-3'|\1-метоксикарбонил-7-триэтилсилил-10дезацетилтаксол(А) и 3'-Десфенил-3'-(4-пиридмл)2,3' -М-бис-дебензомл-З'-М-метоксикарбонил-"/триэтилсилил-Ю-дезацедилтаксол(Б) Проводят реакцию 25мг(23мкмоль) сырого продукта, полученного в соответствии с Примером 36, при -10°С, аналогичную таковой из Примера 1, и после завершения и очистки, выделяют 9,0мг(10,2мкмоль, 44%) указанного в заголовке соединения А, 2,5мг(3,2мкмоль, 14%) указанного в заголовке соединения Б, а также 2,2мг(2,9мкмоль, 12%) указанного в заголовке соединения из Примера 3 1 H-NMR(CDCI3) of A d = 0 43 - 0 67(6Н), 13 49007 0 94(9H), 113(31-1), 124(31-1) 170(11-1), 176(31-1), 187(31-1), 193(11-1), 2 24(2Н), 2 36(31-1), 2 48(1 Н), 3 62(ЗН), 3 87(11-1), 4 18(11-1), 4 29(1 Н), 4 34(1 Н), 4 68(1 Н), 4 91 (1Н), 5 12(11-1), 5 36(1 Н), 5 63(1 Н), 5 77(1 Н), 6 29(1 Н), 7 33(2Н), 7 49(2Н), 7 60(1 Н), 8 10Ґ2Н) 8 60(2Н) ррт f H-NMR(CDCI3) of В d = 0 45 - 0 64(6Н), 0 94(9Н), 1 02(ЗН), 1 25(4Н), 1 67(1 Н), 1 72(ЗН), 1 82(ЗН), 188 - 2 12(21-1), 2 18(41-1), 2 47(1 Н), 3 50(11-1), 3 67(11-1), 3 70(ЗН), 3 90(11-1), 4 26(1 Н), 4 30(1 Н), 4 59(1 Н), 4 61 (1Н), 4 66(1 Н), 4 91 (1Н), 5 03(1 Н), 5 27(1 Н), 5 65(1 Н), 6 25(1 Н), 7 32(2Н), 8 62(2Н) ррт Пример 36 2'-Триизопропилсилил-3'-десфенил-3'-(4-пиридил)-3'-г\І-дебензоил-3'-г\І-метоксикарбонил-7-триэтилсилил-10-дез-ацетилтаксол 0,23мл гидроксида гидразиния добавляют в атмосфере сухого аргона к раствору 25мг (23,2мкмоль) соединения, полученного в соответствии с Примером 1а, в 1,2мл этанола и смесь перемешивают при 23°С в течение 24часов Смесь выливают в насыщенный раствор хлорида аммония, несколько раз проводят экстракцию путем добавления этилацетата, а сушку осуществляют над сульфатом магния Остаток, полученный после фильтрования и удаления растворителя, применяют в дальнейшей реакции без очистки Выделяют 22мг(макс 21мкмоль, макс 91%) указанного в заголовке соединения, которое все еще содержит небольшие количества исходного продукта Следующие Прикладные примеры подтверждают биологическую активность соединений по данному изобретению без ограничения их практического приложения данными Примерами Прикладной пример 1 Выделение и очистка тубулина Из непосредственно перед этим вскрытых коровьих черепов удаляют головной мозг коровы(каждый массой ЗЗОг) и транспортируют в ледяном буфере РМ4 - М Каждый головной мозг освобождают от мозговых оболочек и всех тромбов и гомогенизируют в достаточном объеме буфера РМ4 - М в холодном помещении Гомогенат 2 коровьих головных мозгов доводят до общего объема 1,0литра суммарным количеством в 500мл буфера и подвергают первому центрифугированию(ротор GSA, 15минут, 4°С, 6500д) С поверхности супернатанта снимают пленку жира, фильтруют через 4 слоя тонкого муслина, переносят в уравновешенные центрифужные пробирки(420мл) и вновь центрифугируют(ротор Ті 45, 96000д, 75минут, 4°С) Супернатант отделяют от осадка с помощью пипетки и фильтруют через 6 слоев тонкого муслина и добавляют 50мМ раствор ГТФ в 0,01 М бикарбонатном буфере/ФБР с получением конечной концентрации 1мМ Первоначально полимеризацию проводят в уравновешенных, центрифужных пробирках в течение 45минут на водяной бане, нагретой до 37°С Образовавшиеся микротрубочки выделяют путем центрифугирования(ротор Ті 45, 27°С, 96000д, бОминут)/ супернатант осторожно удаляют с помощью пипетки и очень нежный опалесцирующий осадок осторожно 14 отделяют от стенки шпателем Затем к осадку добавляют 40мл холодного буфера РМ с последующей гомогенизацией с применением небольшого стеклянного гомогенизатора - ступки и инкубацией в течение ночи(от 12 до 16часов) на льду в уравновешенных центрифужных пробирках в холодном помещении Продукт деполимеризации удаляют путем центрифугирования в роторе Ті 60(4°С, 96000д, бОминут) и супернатант разбавляют буфером РМ8 - М в пропорции 1 1, инкубируют в уравновешенных центрифужных пробирках в течение 45минут и центрифугируют вновь(ротор Ті 45, 27°С, 96000д, бОминут) Супернатант осторожно удаляют с помощью пипетки и очень нежный опалесцирующий осадок осторожно отбирают в 20мл холодного буфера РМ, осторожно гомогенизируют с применением небольшого стеклянного гомогенизатора - ступки и инкубируют на льду в течение ЗОминут При повторном центрифугировании(ротор Ті 60, 4°С, 96000д, бОминут) получают препарат тубулина, содержание белка в котором определяют по Пирсу(Реагсе) или с помощью фотометрических измерений при 280нм При определении содержания белка применяют разведения выделенного материала в буфере РМ 1 10, 1 20 и 1 40 Буфер РМ обладает собственным значением экстинкции и вычитается как нулевое значение из определенного значения содержания белка Выделенный материал разбавляют буфером РМ до требуемой концентрации белка (2м г/мл) Прикладной пример 2 Биологический эффект 3'-десфенил-3'-(4-пиридил)-3'-г\І-дебензоил-3'-г\Іметоксикарбонилтаксола натубулин Измерение уровня полимеризации тубулина и деполимеризации микротрубочек проводят по методу фотометрии Перед измерением препарат тубулина, полученный в соответствии с Прикладным примером 1, оттаивают и дегазируют в течение 15минут Фотометр настраивают на длину волны 350нм Змкл раствора/образца, бмкл ГТФ(конечная концентрация 0 - 25мкмоль/л) и 291 мкл препарата тубулина(2мг белка/мл) отбирают с помощью пипетки в сухую и чистую кювету(10мм) Образец осторожно перемешивают(избегая образования пузырьков воздуха), немедленно помещают в кюветодержатель и процедуру измерения начинают при 37°С Как только достигается максимальный уровень полимеризации (контрольный растворитель и таксол 1Е 5моль/л через 20минут), стимулируют начало деполимеризации путем снижения температуры до 15°С Процедуру измерения прекращают по завершении процесса деполимеризации и ход изменения поглощения представляют в графической форме как функцию времени и температуры(смотри Фиг 1) Из Фигуры ясно видно, что таксол ускоряет полимеризацию тубулина по сравнению с контролем и подавляет деполимеризацию, тогда как соединение по данному изобретению З'-десфенил3'-(4-пиридил)-3'-М-дебензоил-3'-г\Іметоксикарбонилтаксол ингибирует полимеризацию и стабилизирует образовавшиеся микротру 49007 15 бочки заметно лучше, чем таксол Прикладной пример 3 Биологический эффект 3'-десфенил-3'-(4пиридил)-3'-г\І-дебензоил-3'-г\І-метоксикарбонил-7эпитаксола натубулин 3'-Десфенил-3'-(4-пиридил)-3'-г\І-дебензоил-3'|\|-метоксикарбонил-7-эпитаксол вызывает гораздо более выраженное ускорение процесса полимеризации тубулина и стабилизирует образовавшиеся микротрубочки заметно лучше, чем таксол Результаты показаны на Фиг 2 Прикладной пример 4 Биологический эффект 3'-десфенил-3'-(4пиридил)-2,3'-г\І-бис-дебензоил-3'-г\Іметоксикарбонилтаксола натубулин 3'-Десфенил-3'-(4-пиридил)-2,3'-г\І-бисдебензоил-З'-ІЧ-метоксикарбонилтаксол вызывает гораздо более выраженное ускорение процесса полимеризации тубулина и стабилизирует образовавшиеся микротрубочки заметно лучше, чем таксол Результаты показаны на Фиг 3 Прикладной пример 5 Биологический эффект 3'-десфенил-3'-(4-пиридил)-3'-г\1-дебензоил-3'-г\1-метоксикарбонил-10дезацетилтаксола натубулин 3'-Десфенил-3'-(4-пиридил)-3'-г\І-дебензоил-3'N-метоксикарбонил-Ю-дезацетилтаксол не отличается оттаксола в плане воздействия на процесс полимеризации тубулина, но он стабилизирует образовавшиеся микротрубочки существенно лучше, чем таксол Результаты показаны на Фиг 4 Прикладной пример 6 Антипролиферативный эффект на опухолевые клеточные линии 3'-десфенил-3'-(4-пиридил)-3'-г\І-дебензоил-3'|\|-метокси-карбонилтаксола(1), :твор образец 16 3'-десфенил-3'-(4-пиридил)-3'-г\І-дебензоил-3'|\|-метокси-карбонил-7-эпитаксола(2), 3'-десфенил-3'-(4-пиридил)-2,3'-г\І-бисдебензоил-3'-І\І-метоксикарбонилтаксола(3) и 3'-десфенил-3'-(4-пиридил)-3'-г\І-дебензоил-3'|\|-метокси-карбонил-10-дезацетилтаксола(4) Клетки линии карциномы молочной железы MDA MB 435(5000 клеток/лунку) помещают на планшеты для микротитрования(сутки 0, среда RPMI, 1% заменимых аминокислот, 1% пирувата, 10% околоплодной сыворотки теленка) На 1 сутки проводят добавление соединения в нескольких концентрациях Антипролиферативный эффект оценивают на 3 сутки, применяя метод МТТ По нему определяют значения ICso - Результаты приведены в Таблице 1 Таблица 1 1С50 для клеток MDA MB 435 [нМ] 2,0 0,8 8000 60 3 Соединение 1 2 3 4 Та ксол (ко нтрол ь) 3'-Десфенил-3'-(4-пиридил)-3'-г\І-дебензоил-3'N-метоксикарбонилтаксол проявляет активность, сходную с таковой таксола, тогда как З'-десфенил3'-(4-пиридил)-3'-М-дебензоил-3'-г\Іметоксикарбонил-7-эпитаксол проявляет существенно повышенную ингибирующую активность по сравнению с таксолом Ма'очемЯ раствор ' м к е а л Маточный раствор образец Уoнё^нэв ионие^трааия Э*СО дасо < 0