Похідні біснафталіміду та їх фармацевтично прийнятні кислотно-адитивні солі, фармацевтична композиція з цитотоксичною активністю, яка їх містить

1. Производные биснафталимида общей формулы (I): C2 (54) ПОХІДНІ БІСНАФТАЛІМІДУ ТА ЇХ ФАРМАЦЕВТИЧНО ПРИЙНЯТНІ КИСЛОТНО-АДИТИВНІ СОЛІ, ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ З ЦИТОТОКСИЧНОЮ АКТИВНІСТЮ, ЯКА ЇХ МІСТИТЬ 42733 Поставленная задача решается предлагаемыми производными биснафталимида общей формулы (I): В первую группу предпочтительных производных биснафталимида общей формулы (I) входят соединения, у которых радикалы X, X' X" и X'" идентичны или различны и выбраны из группы, включающей нитро, амино, NH-низший ацил, галоген. Во вторую группу предпочтительных производных биснафталимида общей формулы (I) входят соединения, у которых по крайней мере один из радикалов X, X', X" и X'" означает амино или NH-низший ацил. В третью группу предпочтительных производных биснафталимида общей формулы (I) входят соединения, у которых радикалы Х и X" означают водород, X' и X'" - группу NHCOCH3, и остаток -ANR-B-NR-D- - означает группу -СН(СН3)-CH2-NHCH2-CH2-NH-CH2-CH(CH3)-. В четвертую группу предпочтительных производных биснафталимида общей формулы (I) входят соединения, у которых радикалы X, X', X" и X'" означают водород, а остаток -A-NR-B-NR'-O- группу -CH2-CH2-NH-CH2-CH2-CH2-NH-CH2-СН2-. Симметричные соединения настоящего изобретения можно синтезировать путем реакции нафталевого ангидрида формулы II с половиной эквивалента полиамина формулы III в органическом растворителе, таком как диоксан, этанол, ДМФ и др., в пределах температур от -20°С до температуры кипения растворителя по следующей схеме: , (I) где: X, X', X" и X'" идентичны или различны и выбраны из группы, включающей водород, нитро, амино, NH-низший ацил, гидроксил, галоген, алкил с 1-6 атомами углерода, или Х и X' или X" и X'" могут образовывать этиленовый мостик, связанный с атомами углерода в положениях 4 и 5 циклической системы; R и R' - Н, алкил с 1-4 атомами углерода; А и D одинаковые или различные и означают группу –CH2-CH2-, которая может быть замещена алкилом с 1-4 атомами углерода; В - группа -(СН2)n-, где n равно 3 или 4 и где один атом водорода может быть заменен алкильной группой с 1-4 атомами углерода, и их фармацевтически приемлемыми кислотно-аддитивными солями. лять фильтрованием. Соли свободного основания можно также получать путем подкисления суспензии свободного основания в этиловом спирте, дихлорометане, диэтловом эфире и т.д., подходящей минеральной или органической кислотой и собирая таким способом полученный твердый продукт фильтрованием. Другие кислоты для образования соли известны из уровня техники. 1,8-нафталевые ангидриды формулы II и соответствующие полиамины формулы III коммерчески доступны или могут быть получены по методам, известным из литературы. Разветвленные полиамины могут быть синтезированы и включены в биснафталимиды данного изобретения, используя необходимые доли этого ангидрида, согласно методам, описанным в вышеуказанном патенте США 5,206,249. Изобретение также относится к фармацевтической композиции с цитотоксической активностью, содержащей помимо фармацевтически приемлемого носителя соединения вышеприведенной общей формулы (I) или их фармацевти Твердое вещество фильтруют из реакционной смеси, или реакционную смесь упаривают досуха при пониженном давлении, и остаток очищают общепринятыми способами, такими, как кристаллизацией или с помощью хроматографии. Асимметричные соединения могут быть синтезированы по общеизвестной защите одной из концевых аминогрупп полиамина (III) пока идет конденсация его с эквивалентом ангидрида. Конденсацию полученного продукта с другим эквивалентом ангидрида производят после удаления защитной группы, блокирующей амин. Соединения, содержащие мостиковые разветвленные звенья, т.е. где А и/или В имеют алкиловый заместитель, можно получать, согласно методам, описанным в патенте США № 5,206,249. Биснафталимиды, полученные вышеописанным образом, используются как таковые, или могут быть подкислены подходящей минеральной или органической кислотой, чтобы получить фармацевтически приемлемую соль, например, метансульфонат или ацетат, которую можно выде 2 42733 гц, 4Н); 8,73 (д, J=7,4 гц, 4Н). Элементарный анализ для C31H28N4О4: рассчитано: С 71,50; Н 5,42; N 10,76. Найдено: С 71,20; Н 5,48; N 10,59. Т.пл. ацетата 134°С. Т.пл. метансульфоната 215°С. Пример 2 N,N'-бис[2-(4-xлop-1,8-нафталимидо)этил]1,3-диаминопропан. Смесь 4 г (17 ммоль) 4-хлор-1,8-нафталевого ангидрида и 1,3 г (8,5 ммоль) N,N’-бис(2-аминоэтил)-1,3-диаминопропана в 40 мл диоксана нагревают с обратным холодильником в течение пяти часов. Выпавший осадок фильтруют, промывают, высушивают и перекристаллизовываю из толуола. Получают 2,9 г (59%) N,N'-бис[2-(4хлоро-1,8-нафталимидо)этил]-1,3-диаминопропана.Т.пл. 151°С (толуол). 1Н-ЯМР (CF3COOD) d=2,54 (с, 2Н); 3,57 (т, J=7,4 гц, 4Н); 3,86 (с, 4Н); 4,81 (с, 4Н); 8,00 (д, J=7,9 гц, 2Н); 8,04 (д, J=8,6 гц, 2Н); 8,62 (д, J=8,0 гц, 2Н); 8,78 (д, J=7,3 гц, 2Н); 8,90 (д, J=8,2 гц, 2Н). Элементарный анализ для C31H26N4О4Cl2: рассчитано С 63,16; Н 4,44; N 9,50. Найдено: С 62,89; Н 4,49; N 9,20. Пример 3 N,N'-биc[2-(3-нитpo-1,8-нафталимидо)этил]1,3-диаминопропан. Получают аналогично примеру 1. Выход 64%. Т.пл. 215°С (ДМФ). Пример 4 N,N'-бис[2-(4,5-диметилен-1,8-нафталимидо)этил]-1,3-диаминопропан. Получают аналогично примеру 1. Выход 51%. Т.пл. 209°С (толуол). Пример 5 N,N'-бис[2-(2-гидрокси-1,8-нафталимидо)этил]-1,3-диаминопропан. Получают аналогично примеру 1. Выход 29%. Т.пл. 103°С (этанол). Пример 6 N,N'-бис[2-(3-гидрокси-1,8-нафталимидо)этил]-1,3-диаминопропан. Получают аналогично примеру 1. Выход 75%. Т.пл. 207°С (ДМФ). Пример 7 N,N'-бис[2-(4-гидрокси-1,8-нафталимидо)этил]-1,3-диаминопропан. Получают аналогично примеру 1. Выход 38%. Т.пл. 196°С (этанол). Пример 8 N,N'-бис[2-(2-метил-1,8-нафталимидо)этил]1,3-диаминопропан. Получают аналогично примеру 1. Выход 45%. Т.пл. 220°С (этанол). Пример 9 N,N'-биc[2-(3-aмино-1,8-нафталимидо)этил]1,3-диаминопропан. Получают аналогично примеру 1. Выход 72%. Т.пл. 200°С (смесь ДМФ и Н2О). Пример 10 N,N'-бис[2-(3-ацетиламино-1,8-нафталимидо)этил]-1,3-диаминопропан. Получают аналогично примеру 1. Выход 63%. Т.пл. 240°С (смесь ДМФ и Н20). Пример 11 N,N'-биc[2-(4-нитpo-1,8-нафталимидо)этил]1,3-диаминопропан. Получают аналогично примеру 1. Выход 32%. Т.пл. 162°С (толуол). чески приемлемые соли в эффективном количестве. Цитотоксическая активность предлагаемых соединений определялась с помощью стандартной методологии, используемой при анализе приросших линий клеток, как, например, осуществляемый в микрокультурах (МТТ) тест с применением тетразолиевого соединения. Детали этого опыта опубликованы (см. Аllеу, МС и др., Cancer Research 48, стр. 589-601, 1988). Экспоненциально растущие культуры клеток рака, таких, как, клетки НТ-29 рака толстой кишки или LX-1 рака легких использовали для приготовления культур, выращиваемых в микротитровальных пластинках. Клетки высеивали в количестве по 5000-20,000 клеток на ячейку в 96-ячейковую пластинку (в 150 мкл среды) и выращивали в течение ночи при температуре 37°С. Добавляли исследуемые соединения в 10-кратном разбавлении, варьирующее от 10-4 м до 10-10 м. Затем клетки инкубировали на 48-72 часов. Чтобы определить количество жизнеспособных клеток в каждой ячейке, добавляли 50 мкл раствора, концентрацией 3 мг/мл. бромида 3-(4,5-диметилтриазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия в солевом растворе. Получаемую смесь инкубировали при 37°С в течении 5 часов, и затем в каждую ячейку добавляли 50 мкл 25%-го додецилсульфата натрия, рН 2. После инкубации в течение ночи, поглощение при 550 нм каждной ячейки измеряли на стандартном приборе-счетчике, применяемом в случае осуществления иммуноферментного твердофазного анализа. Средние процентные значения активности исследуемых соединений по четырем ячейкам (+/- стандартное отклонение) расчитывают по следующему уравнению: где: А означает активность исследуемых соединений. Концентрация исследуемого соединения в моль, обеспечивающая 50%-ное торможение роста клеток обозначается как IC50. В данном опыте IC50 соединений примеров 1, 4, 9 и 17 составляет 2х10-8 моль, 7х10-10 моль, 2х10-8 моль и 2x10-8 моль, соответственно. Получение предлагаемых соединений поясняется последующими примерами, где части и проценты даны относительно веса, если не указано по-иному. Пример 1 N,N'-бис[2-(1,8-нафталимидо)этил]-1,3-диаминопропан. Смесь 4 г (20 ммоль) 1,8-нафталевого ангидрида и 1,6 г (10 ммоль) N,N'-бис(2-аминоэтил)1,3-диаминопропана в 40 мл диоксана нагревают с обратным холодильником в течение пяти часов. Выпавший осадок фильтруют, промывают, высушивают и перекристаллизовывают из толуола. Получают 3 г (58%) N,N'-бис[2-(1,8-нафталимидо)этил]-1,3-диаминопропана. Т.пл. 160°С (толуол). 1Н-ЯМР (CF3COOD) d=2,54 (м, 2Н); 3,58 (т, J=7,5 гц, 4Н); 3,86 (т, J=4,9 гц, 4Н); 4,83 (т, J=4,8 гц, 4Н); 7,93 (т, J=7,4 гц, 4Н); 8,48 (д, J=8,3 3 42733 1 г (1.9 ммоль) N,N'-биc[2-(1,8-нaфтaлимидo)этил]-1,3-диaминonpoпaнa, 0,2 г (3,8 ммоль) гидроокиси калия и 15 мг тетрабутиламмонийбромида перемешивают в кольбе и получаемую смесь подают на 15 минут в ультразвуковую ванну. Затем в смесь добавляют 800 мг (5,8 ммоль) n-бутилбромида и реакционную смесь нагревают при 80°С в течение 8 часов. Продукт экстрагируют дихлорметаном, концентрируют и хромотографируют в колонке. Получают 0,48 г (40%) N,N'-бис[2-(1,8-нафталимидо)этил]-N,N'-дибутил1,3-диаминопропана. Т.пл. 245°С (этанол). 1 Н ЯМР (CF3COOD) d=1,08 (т, J=7,0 гц, 6Н); 1,57 (м, 4Н); 1,95 (м, 4Н); 2,87 (м, 2Н); 3,60 (м, 4Н); 3,92 (м, 8Н), 4,88 (м, 4Н); 7,90 (м, 4Н); 8,47 (т, J=7,4 гц, 4Н); 8,74 (м, 4Н). Пример 17 N,N'-бис[2-(1,8-нафталимидо)этил]-1,4-диаминобутан. Данное соединение получают аналогично примеру 1, используя вместо N,N'-бис(2-аминоэтил)-1,3-диаминопропана N,N'-биc(2-aминоэтил)-1,4-диамино-бутан. Выход 30%. Т.пл. 186°С (смесь толуола и nгептана). Пример 18 N,N'-биc[2-(4-бромо-1,8-нафталимидо)этил]1,3-диаминопропан. Получают аналогично примеру 1. Выход 58%. Т.пл. 182°С (этанол). Предлагаемая фармацевтическая композиция иллюстрируется следующими препаратами. Таблетки: ингредиенты мг; соединение примера 1 (в виде ацетата) 10; D-маннитол 40; поливинилпирролидон 12; микрокристаллическая целлюлоза 20; натрий-карбоксиметиловый крахмал 10; высокодисперсная кремневая кис2; лота талк 4; стеарат магния 2; 100 Таблетки изготовляют по известной технологии. Раствор для внутривенного введения. 30 г соединения примера 1 в виде метансульфоната поглощают в 150 л физиологического раствора поваренной соли, после чего рН доводят до 6. Полученный раствор подвергают стерильной фильтрации и затем по 250 мл наполняют в емкости, которые подают в автоклав. Пример 12 N,N'-бис[2-(4,5-диметил-1,8-нафталимидо)этил]-1,3-диаминопропан. Получают аналогично примеру 1. Выход 74%. Т.пл. 205°С (толуол). Пример 13 N,N'-биc[2-(3-бромо-1,8-нафталимидо)этил]1,3-диаминопропан. Получают аналогично примеру 1. Выход 20%. Т.пл. 100°С (смесь толуола и циклогексана). Пример 14 N,N'-бис[2-(1,8-нафталимидо)этил]-N,N'-диметил-1,3-диаминопропан. 2 г (3,8 ммоль) N,N'-бис[2-(1,8-нафталимидо)этил]-1,3-диаминопропана растворяют в 10 мл муравьиной кислоте и к получаемому раствору добавляют 4 мл формальдегида. Реакционую смесь нагревают с обратным холодильником в течение четырех часов, муравьиную кислоту отделяют в вакууме и получаемый остаток нейтрализуют бикарбонатом натрия. Полученное твердое вещество фильтруют и перекристаллизовывают из этанола. Получают 1 г (47%) N,N'-бис[2(1,8-нафталимидо)этил]-N,N'-диметил-1,3-диаминопропана. Т.пл. 133°С (этанол). 1Н-ЯМР (CF3-COOD) d=2,70 (м, 2Н); 3,32 (с, 6Н); 3,63 (м, 2Н); 3,89 (м, 6Н); 4,85 (м, 4Н); 7,90 (м, 4Н); 8,43 (д, J=8,2 гц, 2Н); 8,47 (д, J=8,2 гц, 2Н); 8,71 (д, J=8 гц, 4Н). Элементарный анализ для C33H32N4О4: рассчитано С, 72,24; Н, 5,87; N, 10,21. Найдено: С, 72,07; Н, 5,72; N, 10,25. Пример 15 N,N'-бис[2-(1,8-нафталимидо)этил]-N,N'-диэтил-1,3-диаминопропан. 2 г (3,8 ммоль) N,N'-бис[2-(1,8-нафталимидо)этил]-1,3-диаминопропана растворяют в 50 мл уксусной кислоты и медленно добавляют 3,6 г (96 ммоль) борогидрида натрия. Раствор нагревают при температуре 50-55°С в течение 10 часов. Реакционную смесь охлаждают и реакцию прекращают с помощью 25 мл воды и получаемый раствор экстрагируют метиленхлоридом. Экстрагент высушивают и растворитель удаляют в вакууме. Остаточное масло хроматографируют в колонке, в результате чего получают 1 г (45%) N,N'-бис[2-(1,8-нафталимидо)этил]-N,N'-диэтил-1,3-диаминопропана. Т.пл. 106°С (этанол). 1 Н ЯМР (CF3COOD) d=1,54 (т, J=7,1 гц,6Н); 2,70 (м, 2Н); 3,75 (м, 8Н); 3,86 (м, 4Н); 4,82 (м, 4Н); 7,86 (тt, J=7,8 гц, 8Н); 8,38 (д, J=2,9 гц, 2Н); 8,42 (д, J=3,0 гц, 2Н); 8,66 (д, J=7,4 гц, 4Н). Пример 16 N,N'-бис[2-(1,8-нафталимидо)этил]-N,N'-дибутил-1,3-диаминопропан. 4 42733 __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2002 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 50 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 5