Спосіб готування еквівалента шкіри, що полягає у створенні його з життєздатних культивованих in vitro кератиноцитів на підкладці, виготовленій з колагенового гелю

Пропонований спосіб відноситься до біології, а саме до біотехнології, і може бути використаний для лікування шкірних дефектів різної етіології. Для лікування різних шкірних дефектів, таких як опіки, трофічні і діабетичні виразки, післяопераційні рани, застосовуються способи, засновані на трансплантації культивованих in vitro кератиноцитів [1, 2, 5]. Найбільш близьким аналогом пропонованого способу є спосіб готування еквівалента шкіри з використанням культивованих in vitro кератиноцитів, перенесених на підкладки, що складаються з полімерних плівок різного типу [З]. В основі методу - одержання кератиноцитів шкіри за стандартною методикою з використанням трипсину і діспази і культивування їх в умовах in vitro з використанням бессироваткова живильного середовища Keratinocyte Growth Medium. Для переносу на плівки використовують кератиноцити 1, 2 і 3 пасажів. Плівки являють собою комерційні полімерні ранові покриття Opsite, Opsite IV 3000, Omiderm, Tegaderm, Biobrane. Недоліками даного способу є непроникність застосовуваних плівок для мікроскопії, що утр удняє контроль клітинної культури, токсичний ефект різного ступеня, що робиться плівками на клітинну культуру. Крім того, полімери, застосовувані для виготовлення підкладок є синтетичними і не надають стимулюючого впливу на процес репарації та не можуть бути піддані біодеградації. В основу пропонованого способу поставлена задача спростити візуальну оцінку стану культури, виключити токсичний вплив, що робиться застосовуваними підкладками на культивовані клітки, замінити синтетичний матеріал на більш фізіологічний, що піддається біодеградації. Поставлена задача зважується за рахунок виготовлення підкладки з колагенового гелю. Колагеновий гель має достатній ступінь прозорості для візуального контролю клітинної культури і не робить токсичного впливу на культивовані клітки. Колаген у нормі зустрічається в людському організмі і може бути підданий повної біодеградації у рані. Крім того, колаген 1-го типу, як основна складова частина гелю, бере участь у підготовці ранового ложа, регулює хімічний склад рані, сприяє міграції і проліферації кліток, бере участь у новотворі капілярів, запобігає рубцюванню. Спосіб використовується таким чином. Виготовлення колагенового гелю роблять за стандартною методикою [4]. Всі операції роблять на крижаній лазні. Готовий гель при температурі 37°С приймає желеобразну консистенцію через 20-40 хвилин. Одержання культури кератиноцитів здійснюється стандартним способом [1, 2]. Для переносу на колагеновий гель використовуються кератиноцити 1-3 пасажів. Суспензію кератиноцитів у живильному середовищі наносять на колагеновий гель із рахунку 25-50тис. клітин на 1см 2 колагенового гелю. Кератиноцити, нанесені на підкладку, культивують у CO2 інкубаторі в стандартних умовах не менш 1 доби. Джерела інформації прийняті до уваги: 1. Васильєв А.В., Логинов Л.П., Смирнов С.В. и др. применение выращенных аллогенных эпидермальных пластов для лечения обожженных. / Травматология и ортопедия Росии. -1994. -№1. - С.34-39. 2. Мала хов С.Ф., Парамонов Б.А., Емельянов А.В. и др. Новые подходы к лечению тяжелых ожогов: трансплантация выращенных в культуре кератиноцитов. /Военно-медицинский журнал. -№9. -1997. -С.16-19. 3. Andrew G. Тау, Phan Toan Thang at al. Cultured subconfluent keratinocytes on mound polymer dressing in the treatment of bums and chronic wounds. / Wounds. - 2000. - 12(5). - P.123-129. 4. Bell E., Ehriich H.P., Buttle D.J., Nacatsuzi T. Living tissue formed in vitro and accepted as skin equivalent tissue of full thickness. / Science. -1981. -Vol. 211. -№4486. -P. 1052-1054. 5. Donnersmarck G.H., Muhlbauer W. Et al. Die Verwendung von Keratinozytenkulturen in der Schwerbrandverletztenbehandlung - bisherige Erfahrungen, Ausblicke zur weiteren Entwicklung./ Unfallchirurg. -1995. 98. -P. 229-232.