Композиції барвників in vivo, спосіб їх виробництва, способи використання для визначення диспластичної тканини, спосіб аналізу методом рхвт

1 Композиція барвника IN VIVO, яка містить (A) конформаційні ізомери толуїдинового синього О (ТСО), та (B) N-деметильовані ПОХІДНІ зазначених ізомерів, причому відношення загальної площі ПІКІВ 254 нм (РХВТ) рідинної хроматографії високого тиску, що відповідають названим ізомерам, до загальної площі ПІКІВ, що відповідають зазначеним Nдеметильованим похідним, становить, принаймні, 6 1 2 Композиція барвника IN VIVO, яка містить (A) першу групу складових, що включає конформаційні ізомери толуїдинового синього О, у яких метильна група знаходиться у -2 позиції циклу, їх N-деметильовані ПОХІДНІ та їх N.N-деметильовані ПОХІДНІ, та (B) другу групу складових, що включає конформаційні ізомери толуїдинового синього О, у яких метильна група знаходиться в -4 позиції циклу, їх N-деметильовані ПОХІДНІ та їх N.N-деметильовані ПОХІДНІ, причому відношення загальної площі ПІКІВ 254 нм РХВТ, що відповідають зазначеній першій групі, до загальної площі ПІКІВ, ЩО відповідають зазначеній другій групі, становить, принаймні, 2,5 1 3 Композиція барвника IN VIVO, яка включає конформаційні ізомери толуїдинового синього О, де ізомер з метильною групою в -2 позиції циклу (пік 8) становить, принаймні, 58% загального вмісту органічного барвника в зазначеній композиції 4 Спосіб визначення диспластичной тканини етап нанесення барвника IN VIVO, який включає (A) конформаційні ізомери толуїдинового синього О, та (B) N-деметильовані ПОХІДНІ зазначених ізомерів, причому відношення загальної площі ПІКІВ 254 нм РХВТ, що відповідають названим ізомерам, до загальної площі ПІКІВ, ЩО відповідають зазначеним N-деметильованим похідним, становить, принаймні, 6 1, в рідкому носи на внутрішньоротові тканини людини 5 Спосіб виробництва толуїдинового синього О, який складається з таких етапів (A) окиснення N.N-диметил-р-фенілендіаміну в першій реакційній суміші з утворенням першого проміжного продукту 2-аміно-5диметиламшофеніл тюсульфокислоти, (B) окиснення зазначеного першого проміжного продукту та конденсація продукту окиснення в другій реакційній суміші О-толуїдином з утворенням другого проміжного продукту - індамінтюсульфокислоти, (C) окиснення зазначеного другого проміжного продукту для замикання його індамшового циклу з утворенням продукту реакції, що містить ТСО, розчиненого в третій реакційній суміші, (D) введення комплексоутворювального реагенту в названу третю реакційну суміш з утворенням ТСО-комплексного продукту, розчиненого в зазначеній третій реакційній суміші, (E) осадження зазначеного ТСО-комплексного продукту з названої третьої реакційної суміші, та (F) відділення названого ТСО-комплексного продукту, що містить конформаційні ізомери ТСО та його N-деметильовані та N.N-деметильовані ПОХІДНІ, від зазначеної третьої реакційної суміші, вдосконалений процес, який включає введення зазначеного комплексоутворювального агента до реакційної суміші до утворення названої третьої реакційної суміші 6 Спосіб за п 5, при якому температуру реакційних сумішей підтримують на рівні, що не перевищує приблизно 10°С 7 Спосіб за п 5, при якому рН реакційних сумішей підтримують в межах близько 2,8 - 3,8 в першій реакційній суміші, близько 3,1 - 4,1 - в другій реакційній суміші та близько 3,0 - в третій реакційній суміші 8 N-деметильована похідна одного з конформаційних ізомерів толуїдинового синього О 9 N, N-деметильована похідна одного з конформаційних ізомерів толуїдинового синього О 10 Спосіб аналізу методом рідинної хромато О (О 00 48969 графи високого тиску, продукту-барвника толуїдинового синього О, який включає утворення рухомої фази, утворення розчину проби ТСО, врівноваження проби ТСО, врівноваження колонки РХВТ з потоком рухомої фази, та впорскування розчину проби в колонку РХВТ, ~ вдосконалення, що стосується ідентифікації складових барвників проби, а також КІЛЬКІСНОГО аналізу та визначення чистоти зазначеної проби, яке полягає в утворенні зазначеної рухомої фази, як композиції, що включає розчинну у воді сіль органічної кислоти Цей винахід стосується нових композицій біологічних барвників, які адаптовано для локального застосування in vivo у людей Зокрема, цей винахід розглядає нові Толуїдинові сині О ("ТСО") барвники, продукти, що містять у певних пропорціях ТСО та ПОХІДНІ ТСО легко проводити тест як частину інших стандартних стоматологічних маніпуляцій і, отже, виявити та/або окреслити підозрілі ділянки, коли симптоми у пацієнтів ще не виявляються або коли диспластичні патологічні зміни ще настільки малі, що можуть залишитися непоміченими за звичайного візуального обстеження Як тільки протоколом Mashberg виявлено диспластичну патологічну зміну, що підозрюється, можна взяти зразок для біопсії та провести гістологічне дослідження для визначення того, чи є патологічна зміна злоякісною або передраковою Набори для проведення цього тесту, що включають попередньо змішані забарвлюючий та промивальний розчини у необхідній КІЛЬКОСТІ та концентрації, ліцензовано Zila, Inc та є комерційне доступними в Канаді у Germiphene, Inc під товарним знаком ORASCAN™ та у Великобританії й Австралії у Stafford-Miller Ltd під товарним знаком "ORASCREEN®" Було виявлено, що вміст органічного барвника в раніше відомих ТСО продуктах, які звичайно були комерційне доступними, залежно від постачальника, був низьким Як правило, загальна площа ПІКІВ 254нм РХВТ (див процес РХВТ в Прикладі 3), що представляли конформаційні ізомери ТСО в зазначених продуктах, ВІДПОВІДНО ДО попереднього стану технологи, становила лише близько = 2%75% від загальної площі ПІКІВ 254НМ РХВТ, що відповідали усім ТСО компонентам та компонентам, стосовним до ТСО, тобто двом конформаційним ізомерам ТСО плюс до шести компонентів, стосовних до ТСО На Фіг 1 піки 7 та 8 РХВТ відповідають двом конформаційним ізомерам ТСО (зображені тут як сіль хлористоводневої кислоти) ВІДПОВІДНО ДО ІНШОГО аспекту, цей винахід сто сується нових методів виробництва ТСО композицій, включаючи названі нові ТСО продукти Ще в одному аспекті цей винахід стосується m vivo методів використання зазначених нових ТСО композицій для підтвердження або спростування припущення про те, що розглядувана тканина є диспластичною, тобто аномальною Ще в одному додатковому аспекті винахід стосується композицій, in vivo діагностичних методів їх використання та процесів їх виробництва, коли їх спеціально пристосовано для виявлення внутрішньоротової тканини, яка, як припускається, є диспластичною, особливо, ракової або передракової тканини РІЗНІ варіанти втілення цього винаходу та його практика стануть очевидними для фахівців у цій галузі з поданого далі докладного опису, що він має розглядатись у зв'язку з пунктами формули винаходу та малюнками, де Фіг 1 - графік 254нм РХВТ, який зображує піки, що є характерними для раніше відомих та комерційне доступних композицій ТСО продуктів, Фіг 2 - графік 254нм РХВТ, який зображує піки, що є характерними для типових композицій ТСО продуктів ВІДПОВІДНО до цього винаходу, та Фіг 3 - блок-схема процесу, яка зображує відкритий мною процес виробництва ТСО продуктів, включаючи й нові композиції ТСО продуктів ВІДПОВІДНО до цього винаходу Причиною більшості внутрішньоротових патологічних змін є травми Однак, ІНШІ внутрішньоротові патологічні зміни є диспластичними пухлинами, деякі з яких - доброякісні, а ІНШІ - або ракові, або передракові Крім того, багато які з диспластичних патологічних змін є малими за розміром, отже при звичайному візуальному обстеженні лікардантист, який практикує, може їх не помітити Відомим Є in VIVO діагностичний тест, що дозволяє виявити та окреслити внутрішньоротову тканину, що м досліджують на диспластичність Цей скринінг-тест взагалі описано в Патенті Сполучених Штатів 4,321,251, виданому Mashberg, та Патенті Сполучених Штатів 5,372,801, виданому Tucci et al Нещодавно були розроблені набори, що дозволять лікарям, які практикують, швидко й (і) Пік 8 (II) Пік 7 Піки 5 та 6 РХВТ були ідентифіковані як Nдеметильовані ПОХІДНІ ДВОХ конформаційних ізо мерів ТСО 48969 (III) Пік Є