Похідні імідазолу
Формула / Реферат
1. Сполука, вибрана із групи, яка складається з наступних сполук (А) і (Б):
(А) 3Н-імідазо[4,5-d][1,2,3]триазин-4,6(5Н, 7Н)-діон; та
(Б) 3-метил-3Н-імідазо[4,5-d][1,2,3]триазин-4,6(5Н, 7Н)-діон.
2. Сполука за п. 1, де сполука являє собою (А) 3Н-імідазо[4,5-d][1,2,3]триазин-4,6(5Н, 7Н)-діон.
3. Регулятор росту рослини, що містить сполуку за п. 1.
4. Спосіб регулювання росту рослини, що включає дію сполуки, вибраної із групи, яка складається з наступних сполук (А) і (Б):
(А) 3Н-імідазо[4,5-d][1,2,3]триазин-4,6(5Н, 7Н)-діон; та
(Б) 3-метил-3Н-імідазо[4,5-d][1,2,3]триазин-4,6(5Н, 7Н)-діон, на рослину.
5. Спосіб за п. 4, де рослина являє собою рослину сімейства Роасеае.
6. Спосіб за п. 4, де рослина являє собою рослину роду Oryza або роду Zoysia.
7. Спосіб одержання 3Н-імідазо[4,5-d][1,2,3]триазин-4,6(5Н, 7Н)-діону, що включає стадію:
надання можливості ксантиноксидазі діяти на 7Н-імідазо[4,5-d][1,2,3]триазин-4(3Н)-он до одержання 3Н-імідазо[4,5-d][1,2,3]триазин-4,6(5Н, 7Н)-діону,
або
що включає стадії:
екстрагування організму рослини для того, щоб приготувати екстракт; і
виділення 3Н-імідазо[4,5-d][1,2,3]триазин-4,6(5Н, 7Н)-діону із екстракту.
8. Спосіб за п. 7, де спосіб включає стадію:
надання можливості ксантиноксидазі діяти на 7Н-імідазо[4,5-d][1,2,3]триазин-4(3Н)-он до одержання 3Н-імідазо[4,5-d][1,2,3]триазин-4,6(5Н, 7Н)-діону.
9. Спосіб за п. 7, де спосіб включає стадії:
екстрагування організму рослини для того, щоб приготувати екстракт; і
виділення 3Н-імідазо[4,5-d][1,2,3]триазин-4,6(5Н, 7Н)-діону із екстракту.
10. Застосування сполуки, вибраної із групи, яка складається з наступних сполук (А) і (Б):
(А) 3Н-імідазо[4,5-d][1,2,3]триазин-4,6(5Н, 7Н)-діону; та
(Б) 3-метил-3Н-імідазо[4,5-d][1,2,3]триазин-4,6(5Н, 7Н)-діону,
для регулювання росту рослини.
11. Застосування за п. 10, де рослина являє собою рослину сімейства Роасеае.
12. Застосування за п. 10, де рослина являє собою рослину роду Oryza або роду Zoysia.
Текст
Реферат: Сполука, яка має дію регулювання росту рослини, вибрана із групи, яка складається з: (А) 3Німідазо[4,5-d][1,2,3]триазин-4,6(5Н,7Н)-діону; та (Б) 3-метил-3Н-імідазо[4,5-d][1,2,3]триазин4,6(5Н,7Н)-діону. UA 109939 C2 (12) UA 109939 C2 UA 109939 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 ОПИС Галузь техніки [0001] Даний винахід відноситься до похідної імідазолу. Рівень техніки [0002] У якості сполук, які регулюють ріст рослини, відомі, наприклад, фітогормони. Фітогормони походять із самих рослин, але фітогормони також можуть бути синтезовані як сполуки та застосовуються як сільськогосподарські хімічні речовини та активуючі речовини. У якості таких регулюючих ріст рослин сполук, у патентній літературі 1 – 4 описані похідні імідазолу. Наприклад, у патентній літературі 4, описаний 7H-імідазо[4,5-d][1,2,3]тріазин-4(3H)-он (інша назва: 2-азагіпоксантин, який надалі іноді згадується як "АГК"), і при цьому також описують, що АГК демонструє дію стимулювання росту або придушення росту рослин. Список посилань Патентна література [0003] Патентна література 1: викладена заявка на патент Японії № 63-104965 Патентна література 2: викладена заявка на патент Японії № 63-68570 Патентна література 3: викладена заявка на патент Японії № 4-210680 Патентна література 4: патент Японії № 4565018 Короткий опис винаходу Технічна проблема [0004] Існує потреба у сполуці, такій як АГК, яка може регулювати ріст рослини та при цьому може застосовуватись в якості сільськогосподарської хімічної речовини активуючої речовини для сільського господарства та садівництва. Таким чином, завданням цього винаходу є забезпечення нової сполуки, яка може регулювати ріст рослини. Вирішення проблеми [0005] У ході дослідження АГК, винахідники виявили метаболіт АГК, 3H-імідазо[4,5d][1,2,3]тріазин-4,6(5H, 7H)-діон (інша назва: 2-аза-8-оксо-гіпоксантин, який надалі іноді згадується як "АОГ"), який має дію регулювання росту рослин, подібну АГК. Додатково, винахідники синтезували 3-метил-3H-імідазо[4,5-d][1,2,3]тріазин-4,6(5H, 7H)-діон (який надалі іноді згадується як "3-метил-АОГ") із АОГ і виявили, що 3-метил-АОГ також має дію регулювання росту рослин. Із цієї причини, даний винахід забезпечує сполуку, вибрану із групи, яка складається із наступних сполук (А) і (Б): (А) 3H-імідазо[4,5-d][1,2,3]тріазин-4,6(5H, 7H)-діон; та (Б) 3-метил-3H-імідазо[4,5-d][1,2,3]тріазин-4,6(5H, 7H)-діон. [0006] Даний винахід також забезпечує регулятор росту рослини, що містить сполуку, вибрану із групи, яка складається із описаних вище сполук (А) і (Б). Сполука цього винаходу може ефективно застосовуватись в якості регулятора росту рослини, оскільки сполука може сильно стимулювати ріст рослини. [0007] Даний винахід також забезпечує спосіб виготовлення АОГ, що містить надання можливості ксантиноксидазі діяти на АГК із одержанням АОГ. Застосовуючи зазначений спосіб виготовлення, є можливим легко одержувати АОГ при високому виході. [0008] Даний винахід також забезпечує спосіб виготовлення АОГ, що містить стадії: екстрагування організму рослини для того, щоб приготувати екстракт; і виділення АОГ із екстракту. Застосовуючи зазначений спосіб виготовлення, АОГ може бути одержаний без звертання до ферментативної реакції. Корисний ефект винаходу [0009] Відповідно до цього винаходу, забезпечують сполуку, яка може регулювати ріст рослини. Короткий опис графічних матеріалів [0010] Фігура 1 являє собою хроматограму, одержану в результаті хроматографії екстракту цойсії японської, вирощеної в ґрунті, у який додавали АГК. Фігура 2 являє собою хроматограму, одержану в результаті хроматографії екстракту рису, вирощеного в рідкому живильному середовищі, в яке додавали АГК. Фігура 3 являє собою діаграму, яка показує кристалічну структуру метаболіту АГК, визначену з використанням рентгеноструктурного аналізу. Фігура 4 являє собою графік, який показує вплив на ріст рису додавання до середовища АГК або АОГ. Фігура 5 являє собою (а) спектр тандемної мас-спектроскопії та (б) повний мас-спектр стандартного АОГ. Фігура 6 являє собою (а) спектр тандемної мас-спектроскопії та (б) повний мас-спектр екстракту кореня рису. 1 UA 109939 C2 5 Фігура 7 являє собою (а) спектр тандемної мас-спектроскопії та (б) повний мас-спектр екстракту кореня помідора. Фігура 8 являє собою графік, який показує вплив на ріст рису додавання до середовища АОГ або 3-метил-АОГ. Опис варіантів здійснення [0011] Даний винахід забезпечує (А) АОГ, тобто, 3H-імідазо[4,5-d][1,2,3]тріазин-4,6(5H, 7H)діон. АОГ являє собою сполуку, представлену наступною формулою (I). [0012] 10 [0013] АОГ може бути одержаний відповідно до реакції наступної формули (II) за допомогою надання ксантиноксидазі можливості діяти на АГК, тобто, 7H-імідазо[4,5-d][1,2,3]тріазин-4(3H)он. [0014] 15 [0015] Ксантиноксидазу, яку застосовують для виготовлення АОГ із АГК, особливо не обмежують, і при цьому можуть застосовувати ксантиноксидазу, яка походить, наприклад, зі маслянки. Для того щоб надати ксантиноксидазі можливість діяти, наприклад, на АГК, АГК розчиняють у реакційному розчиннику, у результаті чого одержують реакційну суміш, і при цьому ксантиноксидазу можуть додавати до реакційної суміші. Кількість ксантиноксидази, яку слід додавати, становить, але зокрема не обмежується ним, переважно 20-200 Од, більш переважно 50-200 Од, а також більш переважно 100-200 Од на 1 г АГК. Умови реакції особливо не обмежені, і є можливим давати ксантиноксидазі діяти, наприклад, у межах її оптимальних умов реакції. Наприклад, температура реакції становить переважно 20 – 35 °C, більш переважно 25 – 32 °C, а також ще більш переважно 28 – 30 °C. Наприклад, час реакції становить переважно 6-50 годин, більш переважно 24-50 годин, а також ще більш переважно 48-50 годин. У якості реакційного розчинника, хоча та зокрема не обмеженого ними, переважними є розчинники на основі води, такі як вода або буферний розчин, і при цьому в якості буферного розчину можуть застосовуватись, наприклад, забуферений фосфатом сольовий розчин, фосфатний буферний розчин, а також дистильована вода. Добавки, такі як активатори реакції, можуть бути додані до реакційної суміші. Можливо одержати АОГ відповідно до цього винаходу із реакційної суміші за допомогою виконання операцій, таких як екстрагування, випарювання, очищення, а також сушіння реакційної суміші за необхідності після завершення реакції. [0016] Також є можливим одержувати АОГ із організму рослини. Рослини особливо не обмежені, за умови, що вони виробляють АОГ, і можуть являти собою сперматофіти (насінні рослини), птеридофіти (папоротеподібні рослини), або бріофіти (мохи). Сперматофіти можуть бути голонасіннєвими рослинами або покритонасіннєвими рослинами, і покритонасіннєві рослини можуть бути однодольними або дводольними. [0017] Такі рослини зокрема включають рослини сімейства Poaceae, сімейства Solanaceae, сімейства Theaceae, сімейства Compositae, сімейства Rosaceae, а також сімейства Liliaceae. Серед зазначеного, з огляду на велику кількість виробленого АОГ, переважними є рослини сімейства Poaceae або сімейства Solanaceae. Рослини сімейства Poaceae включають рід Phyllostachys, рід Hordeum, рід Triticum, рід Oryza, рід Agrostis, рід Zoysia, рід Saccharum, а 20 25 30 35 40 2 UA 109939 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 також рід Zea. Серед зазначеного, рід Oryza є переважним, і рис (Oryza sativa) є більш переважним. Рослини сімейства Solanaceae включають рід Lycopersicon, рід Solanum, рід Capsicum, рід Nicotiana, рід Datura, рід Physalis, а також рід Petunia. Серед зазначеного, рід Lycopersicon є переважним, і помідор (Solanum lycopersicum) є більш переважним. [0018] Рослини, до яких застосовують АГК, можуть застосовуватись в якості рослин для одержання АОГ. Коли до рослин застосовують АГК, то АОГ виробляється в якості метаболіту АГК. Зазначений АОГ може бути виділений із організму рослини. Якщо до рослин застосовують АГК, то із рослин одержують більше АОГ, ніж коли він звичайно виробляється рослинами. [0019] У якості способу одержання АОГ із організму рослини, може застосовуватись спосіб, що містить стадії екстрагування організму рослини для того, щоб приготувати екстракт; і виділення АОГ із екстракту. Спосіб виготовлення екстракту за допомогою екстрагування організму рослини включає, але зокрема не обмежується ним, наприклад, спосіб, у якому збирають орган рослини із організму рослини, що містить АОГ, орган рослини подрібнюють у порошок, і при цьому подрібнений у порошок орган екстрагують із використанням органічного розчинника, такого як етанол або ацетон для того, щоб одержати екстракт. Спосіб виділення АОГ із екстракту особливо не обмежений, але при цьому, наприклад, є можливим виділити АОГ відповідно до цього винаходу за допомогою виконання таких операцій, як випарювання, очищення, а також сушіння одержаного екстракту за необхідності. [0020] Орган рослини, що містить АОГ, може являти собою, але зокрема не обмежується ним, увесь організм рослини, або будь-що із коріння, стебел, листя, квітів, репродуктивні органи, а також насіння, і крім того, може являти собою культури клітин. Серед зазначеного, з огляду на вміст великої кількості АОГ, коріння є переважним. [0021] Даний винахід також забезпечує (Б) 3-метил-АОГ, тобто, 3-метил-3H-імідазо[4,5d][1,2,3]тріазин-4,6(5H, 7H)-діон. 3-метил-АОГ являє собою сполуку, представлену наступною формулою (III). [0022] [0023] 3-метил-АОГ може бути синтезований за допомогою метилування АОГ, а також 3метил-АОГ може бути синтезований, наприклад, у відповідності зі способом, описаним у Прикладах. [0024] Застосовуючи АОГ або 3-метил-АОГ, стає можливим регулювати ріст рослини. Ріст рослини в даному винаході особливо не обмежений, за умови, що він являє собою явище, яке включає звичайне диференціювання або проліферацію клітин рослини, а також включає не тільки розростання та збільшення органів, які становлять організми рослин, але також проростання із насіння, утворення квітки, а також зав'язування насіння. АОГ і 3-метил-АОГ можуть стимулювати або інгібувати ріст рослини, залежно від виду цільових рослин, концентрації АОГ або 3-метил-АОГ, а також від частини рослин, на які будуть впливати АОГ або 3-метил-АОГ. Таким чином, є можливим застосовувати регулятор росту рослини, що містить АОГ або 3-метил-АОГ, у якості стимулятора росту або інгібітор росту для різних органів рослин, залежно від цільових рослин і цілей. [0025] Цільові рослини особливо не обмежені, за умови, що вони являють собою рослини, які зазнають дії регулювання росту за допомогою АОГ або 3-метил-АОГ. Цільові рослини можуть являти собою сперматофіти, птеридофіти, або бріофіти, при цьому сперматофіти можуть бути голонасіннєвими рослинами або покритонасіннєвими рослинами, і покритонасіннєві рослини можуть бути однодольними або дводольними. [0026] Такі рослини зокрема включають рослини сімейства Poaceae, сімейства Solanaceae, сімейства Theaceae, сімейства Compositae, сімейства Rosaceae, а також сімейства Liliaceae. Серед зазначеного, з огляду на істотну дію регулювання росту за допомогою застосування АОГ, переважними є рослини сімейства Poaceae. Рослини сімейства Poaceae включають рід Phyllostachys, рід Hordeum, рід Triticum, рід Oryza, рід Agrostis, рід Zoysia, рід Saccharum, а також рід Zea. Серед зазначеного, рід Oryza або рід Zoysia є переважним. [0027] Цільовий орган рослини може являти собою, але зокрема не обмежується ними, 3 UA 109939 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 будь-що із такого як коріння, стебла, листя, квіти, репродуктивні органі, а також насіння, і, крім того, може являти собою культури клітин. Серед зазначеного, з огляду на істотну дію регулювання росту за допомогою застосування АОГ, коріння, стебла, листя, або насіння є переважними. [0028] Концентрація та спосіб нанесення АОГ або 3-метил-АОГ, які слід застосовувати до рослин, можуть вибиратись згідно обставинам, залежно від виду цільових рослин, їх органів, цілей, а також подібного. Наприклад, у випадку, коли цільова рослина являє собою рис (Oryza sativa), цільовий орган являє собою стебло, і при цьому метою є збільшення довжини стебла, то є переважним вирощувати рослину із використанням рідкого живильного середовища, у якому АОГ розчиняють до одержання 5-2000 мкМ у нормальному рідкому живильному середовищі. У цьому випадку, концентрація АОГ у рідкому живильному середовищі більш переважно становить 100 - 1500 мкМ, а також ще більш переважно 500-1000 мкМ. У випадку, коли цільова рослина являє собою Oryza sativa, цільовий орган являє собою корінь, і при цьому метою є збільшення довжини кореня, то є переважним вирощувати рослину із використанням рідкого живильного середовища, у якому АОГ розчиняють до одержання 50-2000 мкМ у нормальному рідкому живильному середовищі. У цьому випадку, концентрація АОГ у рідкому живильному середовищі більш переважно становить 250-1500 мкМ, а також ще більш переважно 500-1000 мкМ. У випадку, коли цільова рослина являє собою Oryza sativa, цільовий орган являє собою насіння, і при цьому метою є збільшити розмір або кількість насіння для того, щоб збільшити вихід насіння, то є переважним вирощувати рослину із використанням рідкого живильного середовища, у якому АОГ розчиняють до одержання 5-1000 мкм у нормальному рідкому живильному середовищі. У якості альтернативи, у випадку, коли метою є збільшити вихід насіння Oryza sativa, також є переважним вирощувати Oryza sativa у ґрунті із застосуванням живильного середовища, у якому АОГ розчиняють до одержання 5-500 мкм. [0029] У випадку застосування 3-метил-АОГ, наприклад, коли цільова рослина являє собою Oryza sativa, цільовий орган являє собою корінь, і при цьому метою є збільшення довжини кореня, є переважним вирощувати рослину із використанням рідкого живильного середовища, у якому 3-метил-АОГ розчиняють до одержання 50-1000 мкМ у нормальному рідкому живильному середовищі. У цьому випадку, концентрація 3-метил-АОГ у рідкому живильному середовищі більш переважно становить 200-500 мкМ. [0030] Регулятор росту рослини, що містить АОГ або 3-метил-АОГ відповідно до цього винаходу, на додачу до АОГ або 3-метил-АОГ може містити бактерициди, речовини проти цвілі, інсектициди, або сполуки, що володіють дією регулювання росту рослини, інші, ніж АОГ або 3метил-АОГ. Крім того, регулятор може містити відомі добавки для складання препаративної форми. У якості таких добавок для препаративної форми можливо застосовувати, але зокрема не обмежуючись ними, наприклад, допоміжні речовини, емульгуючі речовини, а також зволожуючі речовини. Типи виду регулятора росту рослини відповідно до цього винаходу можуть являти собою, але зокрема не обмежуються ними, наприклад, емульсії, змочувальні порошки, розчинні у воді порошки, розчини, гранули, порошки, мікрокапсули, фуміганти, речовини для окурювання, аерозолі, рідинно-текучі речовини, пасти, таблетки, покриваючі речовини, речовини для розпилення наднизького об'єму, маслянисті речовини, а також комплексні добрива, і при цьому споживачі можуть їх вибирати згідно обставинам, залежно від виду цільових рослин, їх органів, цілей, а також подібного. Регулятор росту рослини в зазначених видах може бути виготовлений за допомогою застосування відомих способів. Приклади [0031] Тут і далі, даний винахід описаний більш конкретно з посиланням на Приклади, але цей винахід вказаними Прикладами не обмежується. [0032] (Приклад 1. Детектування метаболіту АГК цойсії японської) Цойсію японську (Agrostis stolonifera) протягом 30 днів вирощували на контрольній ділянці нормального агарового середовища (100 мл) і на ділянці агарового середовища з АГК, до якої додавали 1 мМ АГК (100 мл). Збільшення пагонів цойсії японської на ділянці з АГК було явно активізоване, у порівнянні зі збільшенням пагонів цойсії японської на контрольній ділянці. Пагони та коріння вирощеної цойсії японської збирали, екстрагували із використанням етанолу, та екстракт пагонів і екстракт коріння піддавали високоефективній рідинній хроматографії зі зверненими фазами (ВЕРХ зі зверненими фазами). Умови дослідження були наступними. Колонка: колонка Develosil C30-UG-5 (розмір 4,6 × 250 мм), швидкість потоку: 0,5 мл/хвилину, рухлива фаза: градієнтне елюювання 2 % метанолу в 0,05 % трифтороцтової кислоти (рідина A) протягом 12 хвилин; 2-100 % метанолу в рідині A протягом 120 хвилин; 100 % метанолу протягом 20 хвилин, детектування: встановлення поглинання при УФ 254 нм. Хроматограма, 4 UA 109939 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 одержана за допомогою хроматографічного дослідження, показана на Фігурі 1. Із елюату екстракту пагонів із ділянки з АГК (Фігура 1 (б)) пік АГК не був детектований, але пік метаболіту АГК був детектований. Із елюату екстракту кореня із ділянки з АГК (Фігура 1(в)) були детектовані піки АГК і метаболіту АГК. Вважається, що це відбувається тому, що АГК у середовищі, іншому, ніж метаболіт АГК у корінні, є присутнім у невеликій кількості в елюаті екстракту кореня. Ні піка АГК, ні піка метаболіту АГК не було детектовано із елюатів екстрактів пагонів і екстрактів коріння контрольної ділянки (Фігура 1(а) і (в)). [0033] (Приклад 2. Детектування метаболіту АГК рису) Рис (Oryza sativa) вирощували на контрольній ділянці нормального рідкого живильного середовища та на ділянці живильного середовища з АГК, до якого додавали АГК, до досягнення 0,2 мМ у нормальному рідкому живильному середовищі на протязі 14 днів. Збільшення пагонів рису на ділянці з АГК було явно активізоване, у порівнянні зі збільшенням пагонів рису на контрольній ділянці. Пагони та коріння вирощеного рису збирали, екстрагували та аналізували з використанням ВЕРХ зі зверненими фазами, як у Прикладі 1. Хроматограма, одержана за допомогою використання хроматографії, показана на Фігурі 2. На ділянці з АГК, пік АГК не був детектований ані із елюату екстракту пагону, ані із елюату екстракту кореня, але пік метаболіту АГК був детектований (Фігура 2(б) і (г)). Із елюатів екстрактів пагонів і екстрактів коріння контрольної ділянки (Фігура 2(а) і (в)) не було детектовано ані піка АГК, ані піка метаболіту АГК. [0034] (Приклад 3. Виділення метаболіту АГК) Рис (Oryza sativa) вирощували на контрольній ділянці нормального рідкого живильного середовища та на ділянці живильного середовища з АГК, до якого додавали АГК, до досягнення 1 мМ, у нормальному рідкому живильному середовищі на протязі 20 днів. Пагони (360 г) вирощеного рису збирали та екстрагували з використанням етанолу. Розчинну в етанолі фракцію випарювали в умовах зниженого тиску та екстрагували з використанням дихлорметану. Нерозчинну в дихлорметані фракцію екстрагували з використанням етанолу з одержанням розчинної в етанолі фракції (9,8 г). Розчинну в етанолі фракцію піддавали хроматографії із силікагелем (наповнювач: 350 г силікагелю 60 N, розмір колонки: 4 × 60 см) і послідовно елюювали з використанням сумішей дихлорметану:метанолу = 9:1, 7:3, 5:5 з одержанням восьми фракцій. Серед зазначеного, фракцію 3 (288 мг) послідовно очищали за допомогою ВЕРХ (колонка: колонка Develosil C30-UG-15/30, розмір: 50 × 500 мм, швидкість потоку: 25 мл/хв, рухлива фаза: 5 % метанолу, детектування: УФ 310 нм) і ВЕРХ (колонка: колонка Develosil C30-UG-5, розмір: 20 × 250 мм, швидкість потоку: 5 мл/хвилину, рухлива фаза: 10 % метанолу, детектування: УФ 310 нм), до виділення наприкінці 10,5 мг метаболіту АГК. [0035] (Приклад 4. Визначення структури з використанням рентгеноструктурного аналізу) Рентгеноструктурний аналіз здійснювали на виділеному метаболіті АГК у такий спосіб. Дослідження рентгенівської дифракції на монокристалах здійснювали з використанням SPring-8 (структурний аналіз на пучку монокристалів BL02B1). Умови дослідження були наступними. 2 довжина хвилі: 0,8260 (4) Å, розмір пучка: довжина 140 x ширина 159 мкм , потік фотонів: 1,81 × 8 3 2 10 фотонів/сек, і щільність потоку фотонів: 8,13 × 10 фотонів/сек/мкм . Фігура 3 являє собою діаграму, яка показує кристалічну структуру метаболіту АГК, одержану за допомогою рентгенівської кристалографії. У результаті рентгенівської кристалографії було підтверджено, що виділений метаболіт АГК являв собою 3H-імідазо[4,5-d][1,2,3]тріазин-4,6(5H, 7H)-діон (інша назва: 2-аза-8-оксо-гіпоксантин, "АОГ"), що має структуру формули (I). [0036] (Приклад 5. Виготовлення АОГ) АОГ одержували за допомогою надання можливості ксантиноксидазі діяти на АГК у такий спосіб. В 1 л забуференого фосфатом сольового розчину (10 мМ, pH 7,4), на додаток розчиняли 137 мг АГК, додавали 25 мг ксантиноксидази (що походить зі маслянки, 0,28 Од/мг), і при цьому одержану суміш залишали відстоятися при температурі 30 °C. До суміші, додавали 25 мг ксантиноксидази три рази кожні 24 години. Після останнього додавання, суміш залишали відстоятися протягом наступних 24 годин. Тобто, загалом, 100 мг ксантиноксидази давали діяти на 137 мг АГК протягом 96 годин. У результаті, за допомогою використання дослідження ВЕРХ (колонка Develosil C30-UG-5 (розмір 4,6 × 250 мм), швидкість потоку: 0,5 мл/хвилину, рухлива фаза: градієнтне елюювання 2 % метанолу в 0,05 % трифтороцтової кислоти (рідина A) протягом 12 хвилин; 2-100 % метанолу в рідині A протягом 120 хвилин; 100 % метанолу протягом 120 хвилин; детектування: поглинання при УФ 254 нм) було підтверджено, що АГК був повністю перетворений в АОГ. Продукт очищали за допомогою використання флеш 5 UA 109939 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 хроматографії ОДСгелем (октадецилсилікагель) (наповнювач: 350 г ОДСгелю, розмір колонки: 4 × 60 см, рухлива фаза: вода, вода/метанол = 9:1) до виділення 120 мг АОГ (вихід 78,4 %). За допомогою часу утримання ВЕРХ, довжиною хвилі поглинання, і мас-спектрометрією було підтверджено, що виділена речовина являла собою АОГ. [0037] (Приклад 6. Вплив АОГ на рис) Стерилізованому насінню рису (Nipponbare) (Oryza sativa L. cv. Nipponbare) давали проростати при температурі 28 °C протягом трьох днів. Пророщене насіння (чотири насінини на пробірку) вирощували в пробірці, у яку додавали контрольне рідке живильне середовище або живильне середовище, до якого додавали АГК або АОГ, для досягнення різних концентрацій, і залишали при температурі 28 °C протягом тижня. Застосовували АОГ, який був одержаний у відповідності зі способом Прикладу 5. Контрольне рідке живильне середовище містило 0,5 мМ NH4NO3, 0,3 мМ Na2HPO4, 0,15 мМ K2SO4, 0,2 мМ MgCl2, 0,1 мМ CaCl2, 23 мкМ Feетилендіамінтетраоцтової кислоти (Fe-ЕДТК), 25 мкМ H3BO3, 4,5 мкМ MnSO4, 0,15 мкМ CuSO4, 0,35 мкМ ZnSO4, а також 0,05 мкМ Na2MoO4. Як і у випадку рідких живильних середовищ, що містять АГК або АОГ, до описаних вище контрольних рідких живильних середовищ додавали АГК або АОГ, так що кінцева концентрація становила 50 мкМ, 200 мкИ або 1000 мкМ. Рідке живильне середовище заміняли новим рідким живильним середовищем через день. Після вирощування, вимірювали довжину пагонів і коріння. Заміряне збільшення пагонів і коріння показано на Фігурі 4. Було підтверджено, що АОГ, аналогічно АГК, активізує збільшення пагонів і коріння залежно від концентрації, та що АОГ являв собою метаболіт АГК (на Фігурі 4, "Кон" означає контроль. «*» вказує значення P < 0,05 і «**» вказує значення P < 0,01. n=11.). [0038] (Приклад 7. Виділення АОГ із рису) Рис (Oryza sativa) вирощували методом гідропоніки, з використанням нормального рідкого живильного середовища для рису протягом двох місяців, і коріння (52 г) збирали. Після того, як коріння подрібнювали в порошок за допомогою міксера, подрібнене в порошок коріння екстрагували з використанням етанолу та ацетону, і потім екстракт випарювали до сухого стану для того, щоб одержати екстракт кореня (340 мг). Зазначений екстракт розчиняли в розчиннику (95 % ацетонітрилу та 0,05 % мурашиної кислоти) для того, щоб довести його до концентрації, що становить 10 мг/мл, і одержаний розчин аналізували з використанням рідинного хроматографа з тандемним мас-спектрометром (ЖХ-МС/МС). Еталонний стандарт АОГ має пік при часі утримання, який становить 2,5 хвилин, з використанням ЖХ, пік молекулярної маси, що становить 152,0[M-H]- був детектований з повного мас-спектра при зазначеному часі утримання, і пік фрагментного іона молекулярної маси, що становить 97, був детектований зі спектра тандемної мас-спектроскопії. Аналогічно еталонному стандарту АОГ, екстракт кореня рису має пік при часі утримання, який становить 2,5 хвилин, при використанні ЖХ, пік молекулярної маси, що становить 152,0[M-H]- був детектований з повного мас-спектра при зазначеному часі утримання, і пік фрагментного іона молекулярної маси, що становить 97, був детектований із МС/МС спектра. Оскільки такий же пік молекулярної маси, як і в еталонного стандарту АОГ, був детектований з екстракту рису, то було підтверджено, що коріння рису містило ендогенний АОГ. Спектр тандемної мас-спектроскопії (а) і повний мас-спектр (б) еталонного стандарту АОГ показано на Фігурі 5. Спектр тандемної мас-спектроскопії (а) і повний мас-спектр (б) екстракту кореня рису також показано на Фігурі 6. Кількість АОГ, що міститься в корінні рису, яка була розрахована на підставі градуювального графіка та площі піка АОГ, становила приблизно 2,5 нг на 52 г коріння рису. Умови дослідження ЖХ-МС/МС і використовуване устаткування є наступними. [0039] (Частина ЖХ) Насос: LC-20AD (компанія SHIMADZU CORPORATION) Колонка: PC HILIC (розмір: 2,0 мм х 100 мм, компанія Shiseido Co., Ltd.) Швидкість потоку: 0,2 мл/хвилину об'єм, що вводиться: 10 мкл (Частина МС/МС) Мас-спектрометр: LTQ ORBITRAP DISCOVERY (тип із іонним уловлювачем, режим визначення негативно заряджених іонів, компанія THERMO SCIENTIFIC) [0040] (Приклад 8. Виділення АОГ із помідора) Помідор (Solanum lycopersicum) вирощували методом гідропоніки, з використанням нормального рідкого живильного середовища для помідорів протягом двох місяців, і коріння (17 6 UA 109939 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 г) збирали. Після того, як коріння подрібнювали в порошок за допомогою міксера, подрібнене в порошок коріння екстрагували з використанням етанолу та ацетону, потім екстракт випарювали до сухого стану, і звільняли від розчинної в дихлорметані частини для того, щоб одержати екстракт кореня (4,7 мг). Зазначений екстракт розчиняли в розчиннику (95 % ацетонітрилу, 0,05 % мурашиної кислоти) для того, щоб довести його до концентрації, що становить 10 мг/мл, і одержаний розчин аналізували з використанням ЖХ-МС/МС, як у Прикладі 7. Умови дослідження та використовуване для аналізу устаткування були такими ж, як у Прикладі 7. У результаті цього, екстракт кореня помідора, аналогічно еталонному стандарту АОГ, має пік при часі утримання, який становить 2,5 хвилин, при використанні ЖХ, пік молекулярної маси, що становить 152,0[M-H]- був детектований з повного мас-спектра при зазначеному часі утримання, і пік фрагментного іона молекулярної маси, що становить 97, був детектований зі спектра тандемної мас-спектроскопії. Таким чином, було підтверджено, що коріння помідорів також містило ендогенний АОГ. Спектр тандемної мас-спектроскопії (а) і повний мас-спектр (б) екстракту кореня помідора показано на Фігурі 7. Кількість АОГ, що міститься в корінні помідора, яка була розрахована на підставі градуювального графіка та площі піка АОГ, становила приблизно 0,1 нг, або менше, на 17 г коріння помідора, що було менше, ніж у випадку рису. [0041] (Приклад 9. Вплив АОГ на вирощування рису в ґрунті (вирощування в горщиках)) Рис (Nipponbare) (Oryza sativa L. cv. Nipponbare) висівали 29-го квітня 2011 року, і всю вирощену розсаду 7-го червня пересаджували в горщики (1/5000 горщиків), наповнені ґрунтом, що включає добриво, що містить N (1440 мг), P 2O5 (12 мг), K2O (760 мг) і CaO (806 мг), і вирощували в ґрунті у вегетаційному будиночку (28 °C) при будь-якому із семи видів описаних далі умов вирощування (1) - (7), аж до 24-го вересня. Подачу води здійснювали за допомогою забезпечення двох літрів водопровідної води або водопровідної води, до якої щотижня додавали АОГ (дивись нижче). Умови вирощування (1) Водопровідну воду забезпечували під час вирощування в горщиках. (2) Водопровідну воду, до якої додавали АОГ так, що кінцева концентрація становила 50 мкМ, забезпечували протягом двох тижнів (від 7-го червня до 20-го червня) під час стадії посадки. Водопровідну воду забезпечували в інший період часу. (3) Водопровідну воду, до якої додавали АОГ так, що кінцева концентрація становила 50 мкМ, забезпечували протягом двох тижнів (від 4-го липня до 17-го липня) під час фази кущіння. Водопровідну воду забезпечували в інший період часу. (4) Водопровідну воду, до якої додавали АОГ так, що кінцева концентрація становила 50 мкМ, забезпечували протягом двох тижнів (від 25-го липня до 7-го серпня) під час стадії поверхневого підживлення для формування мітелок. Водопровідну воду забезпечували в інший період часу. (5) Водопровідну воду, до якої додавали АОГ так, що кінцева концентрація становила 50 мкМ, забезпечували протягом двох тижнів (від 15-го серпня до 28-го серпня) під час стадії поверхневого підживлення для дозрівання. Водопровідну воду забезпечували в інший період часу. (6) Водопровідну воду, до якої додавали АОГ так, що кінцева концентрація становила 5 мкМ, забезпечували під час вирощування в горщиках. (7) Водопровідну воду, до якої додавали АОГ так, що кінцева концентрація становила 50 мкМ, забезпечували під час вирощування в горщиках. Неочищений рис та організми рослин, вирощені в ґрунті, сушили при температурі 30 °C протягом 15 днів, і визначали масу неочищеного рису (як масу однієї рослини, так і масу 100 зерен неочищеного рису), довжину мітелки, довжину стебла, кількість мітелок, кількість відростків, а також масу наземної частини. Результати показано в Таблиці 1. Внаслідок того, що протягом усього часу застосовували АОГ, кількість мітелок і маса наземної частини були більш високими, ніж в контрольних рослин. Крім того, внаслідок застосування АОГ на стадії поверхневого підживлення під час фази формування мітелок або пізніше, маса неочищеного рису однієї рослини була більш високою, ніж в контрольних рослин (У Таблиці 1, чисельні значення вказують середні значення ± припустиме відхилення. "Підвищений рівень" вказує підвищений рівень (%) щодо контрольних рослин. «*» вказує значення P < 0,05. Кількість зразків (горщиків) = 6.). [0042] 7 UA 109939 C2 [Таблиця 1] Контроль Неочищений рис Маса неочищеного рису (г/рослину) Підвищений рівень (%) Маса неочищеного рису (г/100 зерен) Організм рослини Кількість відростків Довжина мітелки (см) Довжина стебла (см) кількість мітелок Підвищений рівень (%) Наземна частина (г) Підвищений рівень (%) 50 мкМ АОГ Стадія посадки 50 мкМ АОГ Фаза кущення 50 мкМ АОГ Стадія поверхневого підживлення для формування мітелок 41,7±10,9 46,6±9,43 42,3±12,2 53,7±3,59* 12 29 5 10 15 20 2,11±0,07 2,12±0,12 2,12±0,07 31,3±3,30 25,3±1,91 95,3±7,45 26,5±4,76 34,6±2,70 23,5±1,61 97,1±12,1 27,8±4,26 30,9±3,67 26,2±1,03 94,5±4,63 23,0±5,44 31,6±3,60 24,5±1,61 90,2±6,15 30,5±4,50 116±23,8 125±21,2 112±30,0 134±16,5 50 мкМ АОГ Стадія поверхневого підживлення для дозрівання Неочищений рис Маса неочищеного рису (г/рослину) Підвищений рівень (%) Маса неочищеного рису (г/100 зерен) Організм рослини Кількість відростків Довжина мітелки (см) Довжина стебла (см) кількість мітелок Підвищений рівень (%) Наземна частина (г) Підвищений рівень (%) 2,19±0,06 5 мкМ АОГ Весь час 50 мкМ АОГ Весь час 53,2±2,61* 59,3±2,27* 58,2±3,76* 28 2,18±0,08 42 2,13±0,09 40 2,15±0,16 31,4±3,91 24,0±2,07 92,8±3,98 28,8±4,67 37,9±3,71* 24,5±2,24 89,7±6,40 32,8±2,48* 24 151±6,19* 30 35,7±4,15* 24,4±1,96 92,3±5,64 32,7±4,03* 23 147±9,63* 27 131±13,3 [0043] (Приклад 10. Вплив АОГ на вирощування рису в ґрунті (вирощування в полі)) Використовували рис (Nipponbare) (Oryza sativa L. cv. Nipponbare) і вирощували його в полі в такий спосіб. У якості умов вирощування, було встановлено п'ять видів з (1) - (5). Рис (Nipponbare)(Oryza sativa L. cv. Nipponbare) висівали в ящик для розсади 29-го квітня 2011 року, і забезпечували загальну кількість 15 літрів водопровідної води або водопровідної води, до якої додавали АОГ, протягом двох тижнів з 24-го травня, у той час як вирощувалась розсада в ящику для розсади. 7-го червня, усю вирощену розсаду пересаджували в поле. Щільність посадки встановлювали відповідно до міжрядного простору, який становив 30 см, і ширини міжрядь, яка становила 15 см (три області вирощування 3 × 3,3 м на одну ділянку). 7-го червня на ділянку подавали 50 л водопровідної води, або водопровідної води, до якої додавали АОГ, у якості основного добрива. Вирощування продовжували, і в якості поверхневого підживлення для формування мітелок, 25-го липня на ділянку подавали 50 л водопровідної води, або водопровідної води, до якої додавали АОГ. 12-го жовтня збирали організми рослин. Умови вирощування (1) Водопровідну воду застосовували в якості рідкого живильного середовища під час вирощування розсади, основного добрива, і поверхневого підживлення для формування 8 UA 109939 C2 5 10 15 20 25 мітелок. (2) Водопровідну воду, до якої додавали АОГ так, що кінцева концентрація становила 0,5 мМ, забезпечували в якості рідкого живильного середовища під час вирощування розсади. Водопровідну воду застосовували як основне добриво, а також як поверхневе підживлення для формування мітелок. (3) Водопровідну воду, до якої додавалиАОГ так, що кінцева концентрація становила 1,0 мМ, забезпечували в якості рідкого живильного середовища під час вирощування розсади. Водопровідну воду застосовували як основне добриво та поверхневе підживлення для формування мітелок. (4) Водопровідну воду, до якої додавали АОГ так, що кінцева концентрація становила 0,5 мМ, забезпечували в якості основного добрива. Водопровідну воду застосовували в якості рідкого живильного середовища під час вирощування розсади та поверхневого підживлення для формування мітелок. (5) Водопровідну воду, до якої додавали АОГ так, що кінцева концентрація становила 0,5 мМ, забезпечували в якості поверхневого підживлення для формування мітелок. Водопровідну воду застосовували в якості рідкого живильного середовища під час вирощування розсади та в якості основного добрива. Неочищений рис сушили, і визначали загальну масу неочищеного рису, масу лушпиння, масу непросіяного неочищеного рису та просіяного неочищеного рису, на 10 організмів рослин, а також масу тисячі зерен. Результати показано в Таблиці 2. Внаслідок застосування АОГ, загальна маса неочищеного рису, маса лушпиння, маса непросіяного неочищеного рису, а також просіяного неочищеного рису були більш високими, ніж в контрольних рослин (У Таблиці 2, чисельні значення вказують середні значення ± припустиме відхилення. "Підвищений рівень" вказує підвищений рівень (%) щодо контрольних рослин. «*» вказує значення P 15 < 0.05.). [0044] [Таблиця 2] На 10 рослин Контроль Загальна маса (г) Маса лушпиння (г) Маса непросіяного неочищеного рису (г) Маса просіяного неочищеного рису (г) Підвищений рівень (%) Маса тисячі зерен (г) 604±52,8 260±28,3 208±24,2 0,5 мМ АОГ Під час вирощування розсади 630±71,4 283±35,0* 227±28,9* 201±24,6 218±29,0* 221±19,5* 23,6±0,5 8,9 23,0±0,5* 10,2 23,5±0,3 На 10 рослин Загальна маса (г) Маса лушпиння (г) Маса непросіяного неочищеного рису (г) Маса просіяного неочищеного рису (г) Підвищений рівень (%) Маса тисячі зерен (г) 30 35 1,0 мМ АОГ Під час вирощування розсади 638±59,6* 284±24,4* 228±20,1* 644±49,5* 288±23,9* 230±19,7* 0,5 мМ АОГ Поверхневе підживлення при формуванні мітелок 643±54,1* 279±24,9* 224±20,9* 222±19,8* 215±20,7* 10,5 23,5±0,6 7,2 23,4±0,5 0,5 мМ АОГ Основне добриво [0045] (Приклад 11. Виготовлення 3-метил-АОГ) У відповідності з наступним способом, 3-метил-АОГ одержували із АОГ. В 5 мл ДМСО (безводного диметилсульфоксиду), розчиняли 153 мг АОГ при температурі 50 °C, до зазначеного додавали 0,075 мл йодометану, та одержану суміш піддавали реакції протягом 4 годин. Фракцію, одержану з використанням препаративної тонкошарової хроматографії (ТШХ, рухлива фаза CH2Cl2: метанол = 9:1), додатково піддавали ВЕРХ (колонка 9 UA 109939 C2 5 10 15 20 25 30 Develosil C30-UG-5 (розмір 20 × 250 мм, швидкість потоку: 5 мл/хвилину, рухлива фаза: 10 % метанолу в 0,0 5 % трифтороцтової кислоти, детектування: УФ 310 нм) з одержанням 10,2 мг (вихід 6,11 %) 3-метил-АОГ. 1 13 За допомогою результатів мас-спектрометрії, за допомогою H-ЯМР і C-ЯМР, було підтверджено, що одержана речовина являє собою 3-метил-АОГ, і деталі були наступними. Коли зразок досліджували з використанням мас-спектрометра (мас-спектрометр JMS+ T100LC) у режимі визначення позитивно заряджених іонів, то були визначені m/z168[M+H] і + m/z190[M+Na] . 1 13 Додатково, за допомогою H-ЯМР та C-ЯМР, зразок показав наступні значення. 1 H-ЯМР (500 МГц) δ 3.88 13 C-ЯМР (125 МГц) δ 37.9, 112.8, 142.1, 148.0, 152.7 [0046] (Приклад 12. Вплив АОГ і 3-метил-АОГ на рис) Стерилізованому насінню рису (Nipponbare) (Oryza sativa L. cv. Nipponbare) давали проростати при температурі 28 °C протягом трьох днів. Пророщене насіння (чотири насінини на пробірку) вирощували в пробірці, у яку додавали контрольне рідке живильне середовище, живильне середовище, до якого додавали 0,2 мМ АОГ, або живильне середовище, до якого додавали 0,2 мМ 3-метил-АОГ, і залишали при температурі 28 °C протягом тижня. Контрольне рідке живильне середовище містило 0,5 мМ NH4NO3, 0,3 мМ Na2HPO4, 0,15 мМ 20 K2SO4, 0,2 мМ MgCl2, 0,1 мМ CaCl2, 23 мкМ Fe-етилендіамінтетраоцтової кислоти (Fe-ЕДТК), 25 мкМ H3BO3, 4,5 мкМ MnSO4, 0,15 мкМ CuSO4, 0,35 мкМ ZnSO4, а також 0,05 мкМ Na2MoO4. Рідке живильне середовище заміняли новим рідким живильним середовищем через день. Після вирощування, вимірювали довжину пагонів і коріння. Заміряне збільшення коріння показано на Фігурі 8. Було підтверджено, що 3-метил-АОГ, аналогічно АОГ, мав підвищену активність для коріння. (На Фігурі 8, «*» вказує значення P < 0,05, і «**» вказує значення P < 0,01. n=16.). На відміну від цього, 3-метил-АОГ не виявляє впливу на збільшення пагонів. Промислова придатність [0047] Оскільки АОГ і 3-метил-АОГ відповідно до цього винаходу мають дію регулювання росту, то їх можна ефективно застосовувати в якості регуляторів росту рослин. Такі регулятори росту рослин можуть широко застосовуватись в сільському господарстві та садівництві. ФОРМУЛА ВИНАХОДУ 35 40 45 50 55 60 1. Сполука, вибрана із групи, яка складається з наступних сполук (А) і (Б): (А) 3Н-імідазо[4,5-d][1,2,3]триазин-4,6(5Н, 7Н)-діон; та (Б) 3-метил-3Н-імідазо[4,5-d][1,2,3]триазин-4,6(5Н, 7Н)-діон. 2. Сполука за п. 1, де сполука являє собою (А) 3Н-імідазо[4,5-d][1,2,3]триазин-4,6(5Н, 7Н)-діон. 3. Регулятор росту рослини, що містить сполуку за п. 1. 4. Спосіб регулювання росту рослини, що включає дію сполуки, вибраної із групи, яка складається з наступних сполук (А) і (Б): (А) 3Н-імідазо[4,5-d][1,2,3]триазин-4,6(5Н, 7Н)-діон; та (Б) 3-метил-3Н-імідазо[4,5-d][1,2,3]триазин-4,6(5Н, 7Н)-діон, на рослину. 5. Спосіб за п. 4, де рослина являє собою рослину сімейства Роасеае. 6. Спосіб за п. 4, де рослина являє собою рослину роду Oryza або роду Zoysia. 7. Спосіб одержання 3Н-імідазо[4,5-d][1,2,3]триазин-4,6(5Н, 7Н)-діону, що включає стадію: надання можливості ксантиноксидазі діяти на 7Н-імідазо[4,5-d][1,2,3]триазин-4(3Н)-он до одержання 3Н-імідазо[4,5-d][1,2,3]триазин-4,6(5Н, 7Н)-діону, або що включає стадії: екстрагування організму рослини для того, щоб приготувати екстракт; і виділення 3Н-імідазо[4,5-d][1,2,3]триазин-4,6(5Н, 7Н)-діону із екстракту. 8. Спосіб за п. 7, де спосіб включає стадію: надання можливості ксантиноксидазі діяти на 7Н-імідазо[4,5-d][1,2,3]триазин-4(3Н)-он до одержання 3Н-імідазо[4,5-d][1,2,3]триазин-4,6(5Н, 7Н)-діону. 9. Спосіб за п. 7, де спосіб включає стадії: екстрагування організму рослини для того, щоб приготувати екстракт; і виділення 3Н-імідазо[4,5-d][1,2,3]триазин-4,6(5Н, 7Н)-діону із екстракту. 10. Застосування сполуки, вибраної із групи, яка складається з наступних сполук (А) і (Б): (А) 3Н-імідазо[4,5-d][1,2,3]триазин-4,6(5Н, 7Н)-діону; та (Б) 3-метил-3Н-імідазо[4,5-d][1,2,3]триазин-4,6(5Н, 7Н)-діону, 10 UA 109939 C2 для регулювання росту рослини. 11. Застосування за п. 10, де рослина являє собою рослину сімейства Роасеае. 12. Застосування за п. 10, де рослина являє собою рослину роду Oryza або роду Zoysia. 11 UA 109939 C2 12 UA 109939 C2 Комп’ютерна верстка Л. Бурлак Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 13
ДивитисяДодаткова інформація
Назва патенту англійськоюImidazole derivatives
Автори англійськоюKawagishi, Hirokazu, Choi, Jae-Hoon
Назва патенту російськоюПроизводные имидазола
Автори російськоюКавагиши Хироказу, Чой Дже-Хун
МПК / Мітки
МПК: C07D 487/04, C12P 17/12, A01N 43/90, A01P 21/00
Код посилання
<a href="https://ua.patents.su/15-109939-pokhidni-imidazolu.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Похідні імідазолу</a>
Попередній патент: Механічна фіксуюча система для будівельних панелей
Наступний патент: Спосіб сканування труби, призначеної для обробки на верстаті лазерного різання
Випадковий патент: Установка для індукційного нагріву деталей