Спосіб ацилювання 7-аміногрупи цефалоспоранового кільця, n-фенілацетил-3-заміщений цефалоспорин

1. Способ ацилирования 7-аминогруппы цефалоспоранового кольца, предусматривающий получение аминотиазол ил защищенного аддукта 7-амино-З-ацетоксиметил-З-цефем-4-карбоновой кислоты ацилированием указанной аминогруппы с помощью необязательно замещенной аминотиазолилуксусной кислоты, содержащей защищенную аминогруппу, с последующим снятием защиты, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что аминозащитную группу выбирают из фенилацетильной и фе ноксиацетильной группы и что снятие защиты осуществляют гидролизом в водном растворе при температуре от О до 50°С и при рН от 5 до 9 в присутствии энзима, выбранного из группы, состоящей из пенициллин G амидазы и пенициллин V амидазы, соответственно. 2. Способ по п. 1, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что указанный гидролиз проводят при температуре от 15 до 35°С и при рН от 6 до 8. 3. N-Фенилацетил-З-замещенный цефалоспорин формулы: Изобретение относится к способу ацилирования 7-аминогруппы цефалоспора' нового кольца. 7-АСА (7-амино-З-ацетоксиметил-Зцефем-4-карбоновая кислота) формулы является хорошо известным соединением, которое предложено в качестве исходного сырья в различных синтезах, в частности в синтезах многих цефалоспоринов. Целый ряд наиболее важных цефалоспоринов получают через следующие стадии: а) осуществление ацилирования 7аминогруппы цефалоспоранового кольца аминотиазолилуксусной кислотой, возмож О R1 'R' где R' - оба Н или вместе образуют группу =N-CH 3 , FP - ОСОСН3, или о. Os О 26664 но замещенной, у которой защищена аминогруппа; б) снятие защиты аминогруппы; и в) необязательное замещение 3-ацетоксиметильной группы цефалоспоринового кольца нуклеофильным агентом. Последовательность вышеуказанных стадий может по желанию меняться. Например, последовательность стадий может быть а), б), в); или а), в), б); или также в), а), б), как описано в Journal of Antibiotics, дек. 1978 г.: 1262-1271 и в ВЕА-823861 Такедой (относительно антибиотика цефотиам). В каждом случае ацилирование 7-аминогруппы цефалоспоринового кольца осуществляется аминотиазолилуксусной кислотой, возможно замещенной, у которой аминогруппа защищена, с последующим снятием защиты. Известные защитные группы, применяемые в практике, требуют использования дорогостоящего исходного сырья (такого как тритил или ВОС), критических условий для введения реагентов и критических кислотных условий для удаления защиты. Создание аминотиазольного кольца непосредственно на аддукте имеет тот недостаток, что оно требует применения высокоопасных реагентов, таких как дикетены и ангидриды. И вот неожиданно было найдено, что некоторые чрезвычайно важные преимущества достигаются в том случае, если аминозащитной группой является фенилацетильная группа или феноксиацетильная группа: эти защитные группы дешевы, их легко ввести, и они совместимы с условиями активирования карбонила, необходимыми для реакции с 7-АСА. Применение фенил- или феноксиуксусных кислот для защиты аминогруппы аминотиазолилуксусной кислоты (чтобы активировать ее карбоксильную группу) крайне важно, потому что такая защита позволяет иметь весьма устойчивый аддукт, который крайне трудно удалить химически, так что указанный адцукт, благодаря такой защите, может быть подвергнут последующей химической обработке без вовлечения защитной группы. Далее, неожиданно оказалось, что вышеупомянутые защитные группы допускают их избирательное удаление в исключительно мягких условиях простым гидролизом в водном растворе, в основном при комнатной температуре, в присутствии пенициллин G амидазы или пенициллин V амидазы, которые катализируют гид 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 ролиз амидной связи N-фенилацетил- или N-феноксиацетиламинотиазольной части молекулы с гораздо более высокой скоростью чем та, с которой гидролизуется амидная связь, присутствующая в положении 7 конечного продукта реакции. Энзимы пенициллина G амидаза и пенициллин V амидаза сами по себе известны, и их применение описано, например, в GB-A 1480850 и GB-A 1473100: было известно, что используя такие энзимы можно получить ферментативно (вместо химического пути) 6-АРА, исходя из пенициллина G или пенициллина V, и 7-ADCA, исходя из цефалоспорина G или цефалоспорина V. Поэтому использование N-фенил- или N-феноксиуксусной защитной группы, избирательно снимаемой энзиматическим гидролизом в водном растворе, или без удаления ацетоэфирной группы, присутствующей в молекуле, или без значительного гидролиза амидной связи в положении 7, представляет собой очень важное экономическое и экологическое преимущество в сравнении со способами ацилирования 7-аминогруппы це фал осп о paHd во го кольца, в частности для введения защиты и снятия защиты аминогруппы в известных синтезах 7-аминотиазолилцефалоспоринов. Особую важность представляет также тот факт, что реакция происходит в водной среде с высоким выходом. Изобретение относится к способу ацилирования 7-аминогруппы цефалоспоранового кольца, предусматривающий получение 7-АСА аминотиазолилзащищенного аддукта ацилированием указанной аминогруппы аминотиазолилуксусной кислотой, возможно замещенной, у которой аминогруппа защищена,-с последующим снятием защиты аминогруппы, причем аминозащитная группа выбрана из группы, состоящей из феиилацетильной и соответственно из феноксиацетильной группы и что снятие защиты осуществляют гидролизом в водном растворе при температуре от 0 до 50°С и при рН от 5 до 9 в присутствии энзима, выбранного из группы, состоящей из пенициллин G амидазы и пенициллин V амидазы соответственно. В частности, было найдено, что гидролиз можно лэоводить при температуре от 15 до 35°С и при рН от 6 до 8 Изобретение также относится к новой аминотиазолилуксусной кислоте и ее осзамещенным производным, у которых_аминогруппа защищена фенилкарбонильной группой, выбранной из группы, состоящей 26664 из фенилацетильной или феноксиацетильной группы; и также к 7-АСА аминотиазолилзащищенному аддукту, в которое защита аминогруппы осуществляется фенилкарбонильной группой, выбранной из группы, состоящей из фегилацетильной и феноксиацетильной группы. Само собой разумеется, частью настоящего изобретения являются также новые, возможно замещенные ос-аминотиазолилуксусной кислотой и 3-замещенные, N-фени л ацетил- и N-феноксиацетилфалоспорины. Для пояснения признаков настоящего изобретения ниже подробно описываются некоторые неограничительные его варианты. П р и м е р 1. Получение 7-[2(аминотиазол-4-ил)]ацетамидоцефалоспорановой кислоты. А) Получение N-фенилацетиламинотиазолилуксусной кислоты (защищенный ацилирующий агент). К 18,6 г (0,1 моль) этилового эфира аминотиазолилуксусной кислоты в 100 мл органического не гидроксилированного растворителя (метиленхлорид, THF, диоксан, ацетонитрил и др.) в присутствии 1,2 мольных эквивалента органического основания, например, триэтиламина, прибавляют при перемешивании при температуре от 0 до 5°С 15,4 г (0,1 моль) хлорангидрида фенилуксусной кислоты в течение 15 мин. Реакция заканчивается через несколько часов при комнатной температуре (тонкослойная хроматография на хремнеземе в этилацетат/гексане 7:3 R, : около 0,7). Сосуд затем охлаждают подо льдом, а органическую фазу промывают последовательно разбавленной хлористоводородной кислотой, водным раствором бикарбоната и водой. Раствор сушат и затем выпаривают под вакуумом. Маслянистый остаток затвердевает самопроизвольно. Продукт может быть кристаллизован из гексан/этилацетата. Однако в этом нет необходимости, потому что сырой продукт можно использовать непосредственно на следующей стадии. Эта стадия состоит в обработке раствора эфира, полученного выше, водным раствором NaOH; последний получают, растворяя 1 г NaOH в каждых 4 г эфира, подлежащего гидролизу. При смешении растворов имеет место легкое разогревание. Реакционную смесь перемешивают от 5 до 6 ч, этого времени достаточно для окончания гидролиза, за развитием которого следят посредством тонкослойной хроматографии. 5 10 15 20 25 ЗО 35 40 45 50 55 Когда реакция закончена, смесь выпаривают под вакуумом для удаления большей части растворителя, поддерживая температуру кипения на низком уровне, чтобы избежать гидролиза амидной связи. Реакционную смесь затем разбавляют водой, при перемешивании, и охлаждают и подкисляют НО. Остаток, состоящий из N-фенилацетиламинотиазолилуксусной кислоты (далее обозначаемой как соединение "X") собирают посредством фильтрации и затем промывают водой на фильтре и наконец сушат, получая 22 г (79%). Б) Получение 7-амидо-((2-М-фенилацетиламино-4-тиазолил)-2-ацетил)~3-ацетоксиметил-З-цефем-4-карбоновой кислоты. ..13,8 г {0,05 моль) кислоты "Xя, полученной согласно вышеприведенному разделу А, суспендированной в 30 мл метиленхлорида, обрабатывают 9,5 граммами оксалилхлорида (0,075 моль) и несколькими каплями DMC при комнатной температуре, при перемешивании. Когда выделение газа практически прекращается, прибавляют еще 3 г оксалилхлорида, нагревают, слегка орошая, в течение 30 мин. Реакционную смесь затем концентрируют под вакуумом. К остатку, имеющему интенсивно зеленый цвет, прибавляют 50 мл метиленхлорида, и полученную смесь прибавляют по каплям, при перемешивании и под атмосферой азота при-tO°C, к смеси 12,2 г (0,045 моль) 7-АСА и-40 мл триэтиламина в 100 мл метиленхлорида. Когда прибавление заканчивается, температуре дают подняться до комнатной температуры и затем реакционную смесь промывают холодной водой и разбавленной хлористоводородной кислотой. Высушенную органическую фазу выпаривают, получая маслянистый остаток красного цвета. Этот материал, хорошо высушенный под вакуумом, может самопроизвольно затвердевать. Однако, если к нему добавить небольшой объем этанола при температуре от 50 до 60°С, это позволит выделитькристаллическое твердое вещество (соединение "X"}, которое собирают на фильтре. 16,7 г (67%). Подобные выхода получают, когда обрабатывают суспензию 7-АСА в метиленхлориде 2 мольными эквивалентами BSA, до полного растворения, -с последующей добавкой триэтиламина и затем хлорангидрида кислоты. Вышеуказанное соединение может быть получено также следующим образом : 26664 К f 3,8 г (0,05 моль) кислоты, полученной в соответствии с разделом А (выше), в 300 мл THF в присутствии 6,2 г (0,06 моль) N-метиленморфолина по каплям прибавляют 5,4 г этилового эфира хлормуравьиной кислоты. Через 3 ч прибавляют 13,6 г (0,05 моль) 7-АСА в 50 мл метиленхлориде и 50 мл триэтиламина при комнатной температуре. Через 12 ч, всегда при комнатной температуре, реакционную смесь концентрируют под вакуумом, затем разбавляют метиленхлоридом и повторно промывают разбавленной НСІ и водой и наконец сушат. Красноватый остаток, полученный выпариванием растворителя, затем обрабатывают этанолом, получая таким образом твердый 7-АСА аминотиазолилзащищенный аддукт (соединение "Y"), которое отфильтровывают. Получают 14 г (59%). В) Энзиматический гидролиз. 5,3 г соединения "Y", полученного в соответствии с разделом Б (выше), суспендируют в 120 мл воды и суспензию обрабатывают NaOH при рН 8, при 36°С. Вся твердая фаза растворяется в течение 10-15 мин. Затем добавляют 500 единиц энзима PGA, и за развитием гидролиза следят посредством жидкостной хроматографии высокого давления, так как не наблюдается прямого соответствия между израсходованным основанием и развитием гидролиза. Когда исчезает исходный материал, иммобилизованный энзим отфильтровывают, реакционную смесь концентрируют под вакуумом, объемом 50 мл, затем охлаждают и подкисляют до рН 3,6. Осадок собирают и смывают с фильтра абсолютным этанолом..Продукт представляет собой 7-[2(аминотиазол-4-ил)]ацетамидоцефалоспорановую кислоту, которая может быть кристаллизована из водного раствора этанола. Выход 3,3 г (80%). 5 10 15 20 25 30 35 40 П р и м е р 2. Получение 7{[{2- 45 амино-4-тиазолил)ацетил]амино}-3-{[1-/2(диметил-амино) -этил/-1Н-тетразол-5-ил]тио} метил-8-оксо-5-тиа-1 -аза-бицикло[4.2.0] окт-2-ен-2-карбоновой кислоты. 2HCI (цефотиам). 50 5 г (12,1 ммоль) 7-[2(аминотиазол-4ил)]ацеамидоцефалоспорановой кислоты, полученной в примере 1-В (выше), растворяют в 40 мл Н2О с 2,3 г (13,2 ммоль) 1-(2-диметил-аминоэтил)-1Н-тетразол-5- 55 тиола (соединение "Z") и 2,18 г (26 ммоль) NaHCO3 при 70°С. Смесь оставляют реагировать при 70°С на 2 ч, следя за развитием реакции посредством тонкослойной хроматографии. 8 Смесь затем охлаждают до 20°С и раствор, при рН 7, элюируют на XAD 1180. Продукт элюируют смесью Н.О/метанол, выпаривая под вакуумом ооогащенную фракцию, и цефотиам кристаллизуют добавлением изопропанола и концентрированной НСІ. Затем проводят фильтрацию и сушку под вакуумом. Мольный выход: 67%. Альтернативный синтез: 20 ммоль 7-[2-(аминотиазол-4-ил)]ацетамидоцефалоспорановой кислоты из примера 1-В обрабатывают 20 ммоль вышеупомянутого соединения "Z" в 150 мл ди THF /Н2О 1/1 и 40 ммоль NaHCO3 при 60°С под азотом в течение 4 ч. В конце реакции раствор концентрируют под вакуумом, устанавливая рН на 7, и экстрагируют 3 раза с помощью 40 мл CH2Ct2. Остаток водной суспензии концентрируют дальше и подкисляют до рН 3,0 концентрированной НС!, затем охлаждают до 0°С и фильтруют. Твердую фазу очищают в изопропаноле при 50°С в течение 30 мин и затем охлаждают, отфильтровывают и сушат. Мольный выход: 58%. П р и м е р 3. Получение цефотиама. А) Получение 7-амино-цеф-3-ем-3-1; 4,60 (2Н, м, СН2 N диметил); 4,76 (1Н, д, 6СН); 4,94 (1Н, д, 7СН). В) Получение N-фенилацетилзащищен- 15 ного 3-замещенного це фалос порина, 10 ммоль защищенного ацилирующего агента "Xм в 10 мл безводного DMF и 20 мл СН2С12 обрабатывают 10 ммоль Nметилморфолина при -30°С. Затем при- 20 бавляют 10 ммоль этилового эфира хлормуравьиной кислоты, поддерживая температуру при -30°С в течение 30 мин. Смесь затем выливают в 10-ммольный раствор 25 соединения, полученного в соответствии с вышеприведенным разделом А), растворяли в ТО мл DMF, 20 мл СН2С/2 и ТО ммоль N-метилморфолина. Реакция конденсации заканчивается за один час; растворитель выпаривают под вакуумом, а ос- 30 таток извлекают небольшим количеством воды и доводят рН до 3,5 концентрированной HCI. Затем отфильтровывают кристаллическое твердое вещество и очищают 35 его в изопропаноле при 4°С. Мольный выход составляет 65%. Альтернативный синтез: 20 ммоль защищенного ацилирующего агента "X" подвергают реакции с 20 40 ммоль соединения, полученного в соответствии с вышеприведенным разделом А), в 200 мл CH3CN/H2O 1/1 и 50 ммоль NaHCO3 при 65°С в течение 3 ч в инертной атмосфере азота. В конце реакции осуществляют кон- 45 центрирование под вакуумом, устанавливая рН на 7, и затем дважды экстрагируют 45 мл СН2СН2, Затем водную суспензию концентрируют дальше и доводят 50 рН до 3,5 и фильтруют. •« 0 •>• количество!» не Твердое вещество может быть подвергнуто энзиматическому гидролизу в том виде, как оно есть, или его можно очис^ тить нагреванием в изопропиловом спирте, отфильтровать и высушить. 55 с и » | Выход: 55%. ЯМР (5 в DMSO - сіб): 2,62 (6Н, с, N диметил); 3,40 (2Н, т, этеро N метилен); 3,50 (2Н, к, АВ, 2СН2); переме 12 26664 11 —-r снова Р^ этилацетата и Й стороны СИМ дующей выпаривания МольныйDвыS льный выход. M ЯМР D M S ° nС"Оr H 6 V 3,55 (2Н, к АВ, С 5 (ЗН, С " * н . 3,90 (ЗН, с. °" ОН, д. в сн , м, Ph); 7.4 (1Н. ^ £ 1йЬ 9 с о о н ) Н ф„оспор»-о. , д. - 40 для 45 Eoperg^t и за посредством н а за 40 амидазу. ПрИ of Упорядник Замовлення 523 Підписне о дер Ж авГпТтвитн Є Л І ДОМС^ а КР п а1н^ Львівська 254655, "' моле кулы, в УКРАЇНА (19) UA 26664 m m С1 (51)6 С 07 D 501/04, С 07 D 501/06, С 07 D 501/34, С 07 D 501/36; С 12 Р 35/00 ОПИС ДО ПАТЕНТУ ДЕРЖАВНЕПАТЕНТНЕ ВІДОМСТВО НА ВИНАХІД (54) СПОСІБ АЦИЛЮВАННЯ 7-АМІНОГРУПИ ЦЕФАЛОСПОРАНОВОГО КІЛЬЦЯ, N-ФЕНІЛАЦЕТИЛ-3-ЗАМІЩЕНИЙ ЦЕФАЛОСПОРИН 1 2 (21) Э30О3185 (22) 06.08.93 (24) 12.11.99 (31) 9216759.2 (32) 07.08.92 (33) GB (46) 12.11.99. Бюл. № 7 (56) 1. Патент FR № 2249889, кл. С 07 D 501/04, 1980. 2. Патент GB № 2161476, кл. С 07 D 501/06, 1986. (72) Зеноні Мауріцю (IT), Фіганті Клаудіо (ГГ) (73) ФІНПАЄЛ С.П.А. (IT) (57) 1. Способ ацилирования 7-аминогруппы цефалоспоранового кольца, предусматривающий получение аминотиазолилзащищенного аддукта 7-амино-З-ацетоксиметил-З-цефем-4-карбоновой кислоты ацилированием указанной аминофуппы с помощью необязательно замещенной аминотиазолилуксусной кислоты, содержащей защищенную аминогруппу, с последующим снятием защиты, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что аминозащитную группу выбирают из фенилацетильной и фе ноксиацетильнои группы и что снятие защиты осуществляют гидролизом в водном растворе при температуре от О до 50°С и при рН от 5 до 9 в присутствии энзима, выбранного из группы, состоящей из пенициллин G амидазы и пенициллин V амидазы, соответственно. 2. Способ п о п . 1 , о т л и ч а ю щ и й с я тем, что указанный гидролиз проводят при температуре от 15 до 35°С и при рН от 6 до 8. 3. N-Фенилацетил-З-замещенный цефалоспорин формулы: Изобретение относится к способу ацилирования 7-аминогруппы цефалоспоранового кольца. 7-АСА (7-амино-З-ацетоксиметил-Зцефем-4-карбоновая кислота) формулы является хорошо известным соединением, которое предложено в качестве исходного сырья в различных синтезах, в частности в синтезах многих цефалоспоринов. Целый ряд наиболее важных цефалоспоринов получают через следующие стадии: а) осуществление ацилирования 7аминогруппы цефалоспоранового кольца аминотиазолилуксусной кислотой, возмож о 11 :ооі і s^ о. R1 R' H где R' - оба Н или вместе образуют группу =N-CH,, R2 - ОСОСН,, или f / W о О 26664 но замещенной, у которой защищена аминогруппа; б) снятие защиты аминогруппы; и в) необязательное замещение 3-ацетоксиметильной группы цефалоспоринового кольца нуклеофильным агентом. Последовательность вышеуказанных стадий может по желанию меняться. Например, последовательность стадий может быть а), б), в); или а), в), б); или также в), а), б), как описано в Journal of Antibiotics, дек. 1978 г.: 1262-1271 и в ВЕА-823861 Такедой (относительно антибиотика цефотиам). В каждом случае ацилирование 7-аминогруппы цефалоспоринового кольца осуществляется аминотиазолилуксусной кислотой, возможно замещенной, у которой аминогруппа защищена, с последующим снятием защиты. Известные защитные группы, применяемые в практике, требуют использования дорогостоящего исходного сырья (такого как тритил или ВОС), критических условий для введения реагентов и критических кислотных условий для удаления защиты. Создание аминотиазольного кольца непосредственно на аддукте имеет тот недостаток, что оно требует применения высокоопасных реагентов, таких как дикетены ,и ангидриды. . И вот неожиданно было найдено, что некоторые чрезвычайно важные преимущества достигаются в том случае, если аминозащитной группой является фенилацетильная группа или феноксиацетильная группа: эти защитные группы дешевы, их легко ввести, и они совместимы с условиями активирования карбонила, необходимыми для реакции с 7-АСА. Применение фенил- или феноксиуксусных кислот для защиты аминогруппы аминотиазолилуксусной кислоты (чтобы активировать ее карбоксильную группу) крайне важно, потому что такая защита позволяет иметь весьма устойчивый аддукт, который крайне трудно удалить химически, так что указанный аддукт, благодаря такой защите, может быть подвергнут последующей химической обработке без вовлечения защитной группы. Далее, неожиданно оказалось, что вышеупомянутые защитные группы допускают их избирательное удаление в исключительно мягких условиях простым гидролизом в водном растворе, в основном при комнатной температуре, в присутствии пенициллин G амидазы или пенициллин V амидазы, которые катализируют гид 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 ролиз амидной связи N-фенилацетил- или N-феноксиацетиламинотиазольной части молекулы с гораздо более высокой скоростью чем та, с которой гидролизуется амидная связь, присутствующая в положении 7 конечного продукта реакции. Энзимы пенициллина G амидаза и пенициллин V амидаза сами по себе известны, и их применение описано, например, в GB-A 1480850 и GB-A 1473100: было известно, что используя такие энзимы можно получить ферментативно (вместо химического пути) 6-АРА, исходя из пенициллина G или пенициллина V, и 7-ADCA, исходя из цефалоспорина G или цефалоспорина V. Поэтому использование N-фенил- или N-феноксиуксусной защитной группы, избирательно снимаемой энзиматическим гидролизом в водном растворе, или без удаления ацетоэфирной группы, присутствующей в молекуле, или без значительного гидролиза амидной связи в положении 7, представляет собой очень важное экономическое и экологическое преимущество в сравнении со способами ацилирования 7-аминогруппы цефалослорандвого кольца, в частности для введения защиты и снятия защиты аминогруппы в известных синтезах 7-аминотиазолилцефалоспоринов. Особую важность представляет также тот факт, что реакция происходит в водной среде с высоким выходом. Изобретение относится к способу ацилирования 7-аминогруппы цефалоспоранового кольца, предусматривающий получение 7-АСА аминотиазолилзащищенного аддукта ацилированием указанной аминогруппы аминотиазолилуксусной кислотой, возможно замещенной, у которой аминогруппа защищена,-с последующим снятием защиты аминогруппы, причем аминозащитная группа выбрана из группы, состоящей из фен ил ацетильной и соответственно из феноксиацетильной группы и что снятие защиты осуществляют гидролизом в водном растворе при температуре от 0 до 50°С и при рН от 5 до 9 в присутствии энзима, выбранного из группы, состоящей из пенициллин G амидазы и пенициллин V амидазы соответственно. В частности, было найдено, что гидролиз можно проводить при температуре от 15 до 35°С и при рН от 6 до 8. Изобретение также относится к новой аминотиазолилуксусной кислоте и ее азамещенным производным, у которых_аминогруппа защищена фенилкарбонильной группой, выбранной из группы, состоящей 26664 из фенилацетильной или феноксиаиетильной группы; и также к 7-АСА аминотиазолилзащищенному аддукту, в которое защита аминогруппы осуществляется фенилкарбонильной группой, выбранной из группы, состоящей из фегилацетильной и феноксиацетильной группы. Само собой разумеется, частью настоящего изобретения являются также новые, возможно замещенные а-аминотиазолилуксусной кислотой и 3-замещенные, N-фенил ацетил- и N-феноксиацетилфалоспорины. Для пояснения признаков настоящего изобретения ниже подробно описываются некоторые неограничительные его варианты. П р и м е р 1. Получение 7-[2{аминотиазол-4-ил)]ацетамидоцефалоспорановой кислоты. А) Получение N-фенилацетиламинотиазол ил уксусной кислоты (защищенный ацилирующий агент). К 18,6 г (0,1 моль) этилового эфира аминотиазолилуксусной кислоты в 100 мл органического не гидроксилированного растворителя (метиленхлорид, THF, диоксан, ацетонитрил и др.) в присутствии 1,2 мольных эквивалента органического основания, например, триэтиламина, прибавляют при перемешивании при температуре от 0 до 5°С 15,4 г (0,1 моль) хлорангидрида фенилуксусной кислоты в течение 15 мин. Реакция заканчивается через несколько часов при комнатной температуре (тонкослойная хроматография на кремнеземе в этилацетат/гексане 7.3 Rf : около 0,7). Сосуд затем охлаждают подо льдом, а органическую фазу промывают последовательно разбавленной хлористоводородной кислотой, водным раствором бикарбоната и водой. Раствор сушат и затем выпаривают под вакуумом. Маслянистый остаток затвердевает самопроизвольно. Продукт может быть кристаллизован из гексан/эти л ацетата. Однако в этом нет необходимости, потому что сырой продукт можно использовать непосредственно на следующей стадии. Эта стадия состоит в обработке раствора эфира, полученного выше, водным раствором NaOH; последний получают, растворяя 1 г NaOH в каждых 4 г эфира, подлежащего гидролизу. При смешении растворов имеет место легкое разогревание. Реакционную смесь перемешивают от 5 до 6 ч, этого времени достаточно для окончания гидролиза, за развитием которого следят посредством тонкослойной хроматографии. Когда реакция закончена, смесь выпаривают под вакуумом для удаления большей части растворителя, поддерживая температуру кипения на низком уров5 не, чтобы избежать гидролиза амидной связи. Реакционную смесь затем разбавляют водой, при перемешивании, и охлаждают и подкисляют HCI. Остаток, состоящий из N-фенилацетиламинотиазолилуксусной кислоты (далее обозначаемой 10 как соединение "X") собирают посредством фильтрации и затем промывают водой на фильтре и наконец сушат, получая 22 г (79%). 15 20 25 ЗО 35 40 45 50 55 Б) Получение 7-амидо-((2-Ы-фенилацетиламино-4-тиазолил)-2-ацетил)-3-ацетоксиметил-З-цефем-4-карбоновой кислоты. ..13,8 г (0,05 моль) кислоты "Xя, полученной согласно вышеприведенному разделу А, суспендированной в 30 мл метиленхлорида, обрабатывают 9,5 граммами оксалилхлорида (0,075 моль) и несколькими каплями DMC при комнатной температуре, при перемешивании. Когда выделение газа практически прекращается, прибавляют еще 3 г оксалилхлорида, нагревают, слегка орошая, в течение 30 мин. Реакционную смесь затем концентрируют под вакуумом. К остатку, имеющему интенсивно зеленый цвет, прибавляют 50 мл метиленхлорида, и полученную смесь прибавляют по каплям, при перемешивании и под атмосферой азота при -10°С, к смеси 12,2 г (0,045 моль) 7-АСА и- 40 мл триэтиламина в 100 мл метиленхлорида Когда прибавление заканчивается, температуре дают подняться до комнатной температуры и затем реакционную смесь промывают холодной водой и разбавленной хлористоводородной кислотой. Высушенную органическую фазу выпаривают, получая маслянистый остаток красного цвета. Этот материал, хорошо высушенный под вакуумом, может самопроизвольно затвердевать. Однако, если к нему добавить небольшой объем этанола при температуре от 50 до 60°С, это позволит выделить кристаллическое твердое вещество (соединение "X"), которое собирают на фильтре. 16,7 г (67%). Подобные выхода получают, когда обрабатывают суспензию 7-АСА в метиленхлориде 2 мольными эквивалентами BSA, до полного растворения, с последующей добавкой триэтиламина и затем хлорангидрида кислоты. Вышеуказанное соединение может быть получено также следующим образом : 26664 К + 3,8 г (0,05 моль) кислоты, полученной в соответствии с разделом А (выше), в 300 мл THF в присутствии 6,2 г (0,06 моль) N-метиленморфолина по каплям прибавляют 5,4 г этилового эфира хлормураеьиной кислоты. Через 3 ч прибавляют 13,6 г (0,05 моль) 7-АСА в 50 мл метиленхлорида и 50 мл триэтиламина при комнатной температуре. Через 12 ч, всегда при комнатной температуре, реакционную смесь концентрируют под вакуумом, затем разбавляют метиленхлоридом и повторно промывают разбавленной НСІ и водой и наконец сушат. Красноватый остаток, полученный выпариванием растворителя, затем обрабатывают этанолом, получая таким образом твердый 7-АСА аминотиазолилзащищенный аддукт (соединение "Y"), которое отфильтровывают. Получают 14 г (59%). В) Энзиматический гидролиз. 5,3 г соединения "Y", полученного в соответствии с разделом Б (выше), суспендируют в 120 мл воды и суспензию обрабатывают NaOH при рН 8, при 36°С. Вся твердая фаза растворяется в течение 10-15 мин. Затем добавляют 500 единиц энзима PGA, и за развитием гидролиза следят посредством жидкостной хроматографии высокого давления, так как не наблюдается прямого соответствия между израсходованным основанием и развитием гидролиза. Когда исчезает исходный материал, иммобилизованный энзим отфильтровывают, реакционную смесь концентрируют под вакуумом, объемом 50 мл, затем охлаждают и подкисляют до рН 3,6. Осадок собирают и смывают с фильтра абсолютным этанолом..Продукт представляет собой 7-[2(аммнотиазол-4-ил)]ацетамидоцефалоспорановую кислоту, которая может быть кристаллизована из водного раствора этанола. Выход 3,3 г (80%). П р и м е р 2. Получение 7{[(2амино-4-тиазолил)ацетил]амино}-3-{[1-/2(диметил-амино) -этил/-1Н-тетразол-5-ил]тио}метил-8-оксо-5-тиа-1-аза-бицикло[4.2.0] окт-2-ен-2-карбоновой кислоты. 2НС1 (цефотиам). 5 г (12,1 ммоль) 7-[2(аминотиазол-4ил)]ацеамидоцефалоспорановой кислоты, полученной в примере 1-В (выше), растворяют в 40 мл Н2О с 2,3 г (13,2 ммоль) 1-{2-диметил-аминоэтил)-1Н-тетразол-5тиола (соединение "Z") и 2,18 г (26 ммоль) NaHCO3 при 70°С. Смесь оставляют реагировать при 70°С на 2 ч, следя за развитием реакции посредством тонкослойной хроматографии. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 8 Смесь затем охлаждают до 20°С и раствор, при рН 7, элюируют на XAD 1180. Продукт элюируют смесью Н О/мета иол, выпаривая под вакуумом обогащенную фракцию, и цефотиам кристаллизуют добавлением изопропанола и концентрированной HCt. Затем проводят фильтрацию и сушку под вакуумом. Мольный выход: 67%. Альтернативный синтез: 20 ммоль 7-[2-(аминотиазол-4-ил)]ацетамидоцефалоспорановой кислоты из примера 1-В обрабатывают 20 ммоль вышеупомянутого соединения "Z" в 150 мл ди THF /Н2О 1/1 и 40 ммоль NaHCO3 при 60°С под азотом в течение 4 ч. В конце реакции раствор концентрируют под вакуумом, устанавливая рН на 7, и экстрагируют 3 раза с помощью 40 мл CH2Ct2. Остаток водной суспензии концентрируют дальше и подкисляют до рН 3,0 концентрированной HCI, затем охлаждают до 0°С и фильтруют. Твердую фазу очищают в изопропаноле при 50DC в течение 30 мин и затем охлаждают, отфильтровывают и сушат. Мольный выход: 58%. П р и м е р 3. Получение цефотиама. А) Получение 7-амино-цеф-3-ем-3-1(2-диметил-аминоэтил)-1Н-тетразол-5тиол-4 -карбоновой кислоты. 15,3 г (88,3 ммоль) 1-(2-диметиламиноэтил)-1Н-тетразол-5-тиола (соединение "Z") прибавляют к 100 мл трифторуксусной кислоты, охлажденной до -5°С. Затем загружают 24 г 7-АСА (88,1 ммоль) малыми количествами, в течение 30 мин при температуре от 0° до -5°С. За исчезновением 7-АСА следят посредством тонкослойной хроматографии. В конце реакции трифторуксусную кислоту выпаривают под вакуумом при 45°С. К концентрату добавляют 50 мл THF. Полученный осадок затем отфильтроаывают под вакуумом. Твердое вещество регенерируют водой при рН 7 и бикарбонатом натрия, извлекая основу титульного соединения в виде белого твердого вещества, которое фильтруют под вакуумом и сушат. Мольный выход: 76%. Альтернативный синтез: 15,3 г (88,3 ммоль) вышеупомянутого соединения "Z" прибавляют к 100 мл метансульфоновой кислоты, охлажденной до +5°С. Затем загружают 24 г 7-АСА (88,1 ммоль) малыми количествами при температуре от 0° до +5°С. В конце реакции добавляют 100 мл изопропиловой кислоты для кристаллиза 26664 ции диметансульфонатной соли титульного соединения. Затем проводят фильтрацию, и твердое вещество помещают в 80 мл воды, устанавливая рН 7 с помощью NaHCO3. 5 Прибавляют 30 мл изопропанола и осуществляют кристаллизацию титульного соединения при 15°С. ^ • Выход: 78%. 10 ЯМР {5 в DMCO -d e ): 2,58 (6Н, с, N диметил); 3,22