Спосіб визначення вмісту 8-гідроксигуаніну в сечі як маркера оксидативного пошкодження нуклеїнових кислот

Спосіб визначення вмісту 8-гідроксигуаніну в сечі як маркера оксидативного пошкодження нуклеїнових кислот, який включає осадження білків, хроматографічне розділення із безбілкового екстракту на твердому носії в рідкій суміші з проявленням в УФ-випромінюванні та проведенням оптичного аналізу вмісту 8-гідроксигуаніну, який відрізняється тим, що хроматографію проводять одноразово на пластинках силуфол в суміші нбутанол : ацетон : оцтова кислота 5% : NH4OH : вода з проявленням 8-гідроксигуаніну в УФвипромінюванні та кількісним елююванням амінокислоти в 0,1 н НС1 з подальшою спектрофотометрією. (19) (21) u200603501 (22) 31.03.2006 (24) 15.09.2006 (46) 15.09.2006, Бюл. № 9, 2006 р. (72) Колесник Юрій Михайлович, Бєленічев Ігор Федорович, Абрамов Андрій Володимирович, Ганчева Ольга Вікторівна, Бухтіярова Ніна Вікторівна, Павлов Сергій Васильович (73) ЗАПОРІЗЬКИЙ ДЕРЖАВНИЙ МЕДИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ, Колесник Юрій Михайлович, Бєленічев Ігор Федорович, Абрамов Андрій Володимирович, Ганчева Ольга Вікторівна, Бухтіярова Ніна Вікторівна, Павлов Сергій Васильович 3 17279 4 Genetic toxicology of environmental chemicals. - New Спосіб потребує менш часу, більш простий у York: Liss, 1985. - 265р.]. Прототип та спосіб, що виконанні, тому що хроматограму проводять одпропонується, мають такі спільні суттєві ознаки: норазово. осадження білків; Спосіб здійснюють таким чином: розподіл на твердому носії в рідкій суміші; Безбілковий екстракт біологічного матеріалу проведення хроматографії; хроматографують на твердому шарі силуфолу в виявлення вмісту 8-гідроксигуаніну в УФсуміші н-бутанол: ацетон:оцтова кислота випромінюванні. 5%:NH4OH:вода (3,5:2,5:1,5:1,5:1). 8-гідроксигуанін Але спосіб-прототип є недостатньо ефективвиявляють в УФ-випромінюванні. Виявлену пляму ним, тому що при очищенні від домішок в безвод8-гідроксигуаніну відповідно кількісно елююють в ному метанолі втрачається до 10% визначаємих розчині 0,1н НСl з подальшою спектрофотометрінуклеотидів, для розподілу речовин хроматограєю при довжині хвилі 260нм. фують зразки в високотоксичних солях літію, для Приклад. визначення досліджуваних речовин їх необхідно З сечі, зібраної за добу, відбирають середню обробляти газоподібним НС1, який є також висопорцію 100мл та впарюють до 5мл на водяній бані котоксичним. Процес визначення 8-гідроксигуаніну (100°С). Після цього до сечі додають 2мл 96% є довготривалим. етилового спирту, підкисленого 0,1н НСl та ретеВ основу корисної моделі поставлено задачу льно змішують протягом 20 хвилин. Центрифугуудосконалення способу визначення вмісту 8ють 30 хвилин при 2000об/хв. З надосадної рідини гідроксигуаніну шляхом хроматографії на силуфоберуть 0,1мл об'єму і наносять на лінію старту лових пластинках з подальшою спектрофотометхроматографічної платівки "Силуфол", висушують рією, що забезпечить підвищення чутливості, якопри 37С°. сті визначення вмісту 8-гідроксигуаніну та Хроматографують в суміші нспрощення методики. бутанол:ацетон:оцтова кислота 5%:NH4OH:вода Поставлена задача вирішується тим, що у (3,5:2,5:1,5:1,5:1) в хроматографічній камері. Після способі, який включає осадження білків, хроматогпроходження розчинником 10см платівку висушурафічне розділення із безбілкового екстракту на ють при 37°С та виявляють в УФ-випромінюванні твердому носії в рідкій суміші, з проявленням в при =263нм. Виявлені в ультрафіолеті ділянки УФ-випромінюванні та проведенням оптичного сорбенту з плямами відповідають 8аналізу вмісту 8-гідроксигуаніну, новим є те, що гідроксигуаніну. Ці плями відмічають, вирізають та розділення речовин проводять на силуфолових елююють при кімнатній температурі протягом 16 пластинках, в якості рідкої фази застосовують сугодин в 0,1 н НСl, періодично перемішуючи. Після міш н-бутанол:ацетон:оцтова кислота фільтрації проводять спектрофотометричне ви5%:NH40H:вода (3,5:2,5:1,5:1,5:1), з подальшим значення 8-гідроксигуаніну при =260нм. Для хопроявленням в УФ-випромінюванні та елююванлостого досліджування застосовують елюат із рівням 8-гідроксигуаніну 0,1н НСl. нозначних по площі ділянок сорбенту. В якості Причинно-наслідковий зв'язок між сукупністю хроматографічного стандарту необхідно застосоознак, що заявляються, та технічним результатом вувати 8-гідроксигуанін (Merck). полягає у такому: Вміст 8-гідроксигуаніну (8GG) визначають за В якості твердого носія застосовують платівки допомогою формули: з силуфолу, які є хімічно стійкими, міцно зв'язують A V Co n , 8GG амінокислоти та їх продукти модифікації, що сприAo L 100 яє зниженню похибки; де А - оптична щільність експериментального Для розділення речовин застосовують суміш зразка; н-бутанол:ацетон:оцтова кислота 5%:NH4OH:вода Ao - оптична щільність стандартного розчину; (3,5:2,5:1,5:1,5:1), що дозволяє проводити роздіV - об’єм розчину, який аналізують; лення одноетапно. Крім того, ця суміш менш токCo - молярний вміст стандарту; сична у порівнянні з солями літію; n - коефіцієнт розведення; Для виявлення 8-гідроксигуаніну застосовують L - товщина шару кювети (1см) розчин 0,1н НСl, а не газоподібну НСl, що також 100 - коефіцієнт перерахування менш токсично для працівника; Результат в нмоль/л. Виконання методу спрощено, не потребує складного обладнання, Комп’ютерна верстка Л. Ціхановська Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601