Штам lастовасіllus sресіеs “во” для профілактики дифтерії

Винахід відноситься до медицини, зокрема до мікробіології і може бути використаним для промислового випуску препарату для профілактики дифтерії. Рівень техніки: запропонований штам мікроорганізму новий і в науково-технічній, патентній літературі не описаний. Штам зарєгістрований в Депозитарії Інституту мікробіології і вірусології Н АН України за №IBM B-7010 від 14.03.97. Аналог застосування: відомий спосіб співіснування мікроорганізмів, як антагоністичний, коли одні мікроорганізми подавляють ріст і розвиток інших [1]. В якості прототипу використана дія непатогенних мікроорганізмів з патогенними, а також колонізації слизової оболонки, наприклад кишківника препаратами біфікол, біфідумбактерін [2 ]. Недоліком способу являється неможливість застосування його для профілактики дифтерії. Суттєві відмінності, в яких закладений технічний результат полягають у тому, що у дітей до 14 років, які мали контакт з хворими на дифтерію і не захворіли, а також у без-симптомних бактеріоносіїв з напруженістю Імунітету до дифтерії 0, 1:20, 1:40 в обох групах виділена непатогенна, грам позитивна коккобацила роду Lactobacillus виду Lactobacillus spec, вегетативні форми якої в концентрації 1×109 на живильному середовищі МП А і в кисломолочних продуктах подавляють ріст Corynebacterium diphtheriae на 100%, зберігаються в ізотонічному розчині натрію хлориду і в кисломолочних продуктах при температурі +4°С, причому титр антитіл в людини-хазяїна до аутоштаму рівняється 0. Штам може бути використаний для промислового виробництва препарату в кисломолочних продуктах для профілактики дифтерії. Шлях отримання штаму: у здорової дитини яка мала контакт з хворими на дифтерію і не захворіла і в бактеріоносіїв до 14 років брався посів з ротоглотки ватним тампоном (протоколи №3612 від 19.09.96,3816 від 12.10.96) мікроорганізми наносили на живильне середовище КТА і проводилася Інкубація на протязі 24 год., при температурі 37°С. При мікроскопічному обстеженні культура через 24 год.-грам позитивні коккобацили (окраска по Граму), ширина 1-1,5, довжина 1,5-2 мкм. Рухливість від'ємна, анаеробна ферментація глюкозипозитивна, глюкоза окислюється з затримкою до кислоти без газу, окислення лактази +++, не утворюють Індол, не утворюють сірководень каталаза - від'ємна, оксидаза - від'ємна, не розщеплюють манніт, ферментація молока - до кисломолочних продуктів. Непатогенна. Серологічні властивості - титр антитіл в людини-хазяїна до ауто штаму рівняється 0. Антибіотикограма: гентаміцин - 18 мм, левоміцетін - 18 мм, поліміцин - 0 мм, канаміцин - 20 мм, ампіцилін - 8 мм, оксацилін - 6 мм, ерітроміцин - 16 мм, цефалотін - 0 мм. Експериментальні дослідження: Дослід 1. В 5 пробірок одночасно вносилися: в 1-2-3 пробірки 2,0 суспензії штаму "ВО" і 2,0 мл суспензії c.d. в одинаковій концентрації 1×109 мікробних тіл, в 4 пробірку вносилися 2,0 мл суспензії c.d. в концентрації 1×109 мікробних тіл, до якої добавляли 2,0 мл ізотонічного розчину натрію хлориду, в 5 пробірку вносили 2,0 мл суспензії штаму "ВО" в концентрації 1×109, до якого добавляли 2,0 мл Ізотонічного розчину натрію хлориду. Вказані пробірки з досліджуваними штамами витримували в термостаті 7 діб, при температурі 37°С. Починаючи з першої доби кожний день з досліджуваних 3 пробірок і 2-х контрольних робився посів по Голду на середовище КТА бактеріологічною петлею в діаметрі 6 мм. Висіяна культура Інкубувалася в термостаті 24 год, при температурі 37°С. Проводилася якісна І кількісна оцінка еталонного штаму с.d., який був в контакті зі штамом "ВО" І контрольних штамів. Визначалася токсигенність в реакції преципітації в агарі. Результати дослідів наведені в таблиці. Дослід 2. На чашку ПетрІ з середовищем КТА наносили суспензію штаму "ВО", петлею в діаметрі 6 мм, концентрацією 1×109 мікробних тіл. Перпендикулярно до вказаного посіву наносили суспензію еталонного штаму c.d. тією ж самою петлею, після стерилізації (діаметр 6 мм) в концентрації 1×109 мікробних тіл. Культури розміщували в термостаті на 24 год., при температурі 37°С. Дослід 3. На чашку Петрі з середовищем КТА наносили суспензію штаму "ВО" в кисломолочному продукті петлею 6 мм в діаметрі, концентрацією 1×10 мікробних тіл, 0,01 мл, перпендикулярно до вказаного посіву наносили суспензію еталонного штаму cd. 0,1 мл тією ж самою петлею після стерилізації в концентрації 1-10 мікробних тіл. Таким чином, штам "ВО" у своїх веге тативних формах подавляє ріст c.d. на 100% на живильному середовищі і в кисломолочних продуктах. Може бути використана в промислових умовах для випуску препарату для профілактики дифтерії.