Спосіб визначення токсигенності корінебактерій дифтерії

Спосіб визначення токсигенності корінебактерій дифтерії шляхом постановки реакції імунопре 30669 Технічний результат, що при цьому досягається, проявляється в швидкому утворенні ліній преципітації (на 4-6 годин) і економії живильного середовища. Поставлене завдання вирішується тим, що при використанні відомого методу визначення токсигенності коренебактерій дифтерії, що включає розміщення в чашках Петрі на середовищі для визначення токсигенності коренебактерій дисків діаметром 0,6 см, змочених антитоксином, та посівом навкруги кожного з них дослідної та контрольної культур у вигляді "плямок" з діаметром 0,6-0,7 см на відстані 0,6-0,7 см від краю дисків, інкубації їх при 37°С, і облік наслідків за утворенням білуватих ліній преципітації між дисками і "плямками", згідно з винаходом, перед накладанням дисків і посівом культур в середовище 5 разів послідовно занурюють профламбований і охолоджений трафарет, у вигляді рівнобічного п'ятикутника, з довжиною сторін 2,1 см, видаляють надлишки середовища за межами трафарету і на утворені п'ятикутники накладають диски з антитоксином, навкруги якого висівають дослідну та контрольні культури у вигляді "плямок" при 37°С, роблять облік за утворенням лінії преципітації. Ознакою, яка відрізняє винахід, що пропонується, є зменшення площі живильного середовища, що обмежує радіальну дифузію екзотоксину, чим підвищується його концентрація в зоні реакції, що сприяє прискоренню утворення ліній преципітації. Крім того, за рахунок розміщення на кожному з утворених п'ятикутників з середовищем в чашці Петрі, дисків з антитоксином і посівом навкруги кожного з них трьох дослідних і двох контрольних культур, економиться живильне середовище. Спосіб здійснюється таким чином. В середовище (12 мл) для визначення токсигенності коринебактерій дифтерії, яке міститься в чашці Петрі (діаметр 10 см), до дна занурюють профламбований і охолоджений трафарет у вигляді п'ятикутника (довжина кожної грані 2,1 см) 5 разів, надлишки середовища видаляють за допомогою стерильного ланцета. В центрі кожного агарового п'ятикутника, що утворився, розміщують диск з антитоксином діаметром 0,6 см, а в кутах висівають культури у вигляді "плямок", діаметром 0,6-0,7 см на відстані 0,6-0,7 см від краю диску, 2 з яких є відомими токсигенними штамами і три - з дослідної культури (дві - з окремих колоній і третя із суміші 3-6 колоній). Чашку з посівами інкубують в термостаті при 37°С. Облік наслідків здійснюють, при позитивних наслідках, через 13-16 годин за появою ліній преципітації між дисками і "плямками". Приклад конкретного виконання способу Хворий Д. занедужав на лакунарну ангіну 23.03.1997. В матеріалі із зіву, який одержали в лабораторії 26.02.1997, виділили культуру коренебактерій дифтерії, біовару гравіс. 27.02.1997 культура була надіслана до баклабораторії Київської облсанепідстанції і з 1700 цього ж дня була поставлена реакція преципітації в гелі 2-ма способами відомим і тим, що пропонується. Наслідки реакції виявили 28.02.1997 при дослідженні способом, що пропонується о 800, а при постановці реакції загальноприйнятим способом о 1200 того ж дня. В період з 20.02. до 31.05.1997 виявлення токсигенності коренебактерій дифтерії здійснено в реакції імунопреципітації в гелі з 10 токсигенними музейними і виділеними від хворих культурами, способом-прототипом та способом, який пропонується, в 100 паралельних дослідах. Результати досліджень наведені у таблиці. Як видно з даних наведених в таблиці, час проявлення реакції при використанні способу, що пропонується, скорочується на 25,8% (5,4 год). Джерела інформації: 1. Приказ Министерства здравоохранения СССР № 450 от 02.04.1986 "О мерах по предупреждению заболеваемостью дифтерией". 2. Методические рекомендации по применению модифицированной среды Пизу и индикаторных бумажных дисков для идентификации, биохимического типирования и определения токсигенности дифтерийных микробов, № 28-6/31. - М., 1988. – 81 с.. Таблиця Використаний спосіб Спосіб-прототип Спосіб, який пропонується 12-14 3 19 Час утворення ліній преципітації в годинах 15-17 18-20 21-23 18 26 35 48 25 6 __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2002 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 35 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 2 24 і більше 18 2