Спосіб визначення якості та безпеки водорозчинних речовин за допомогою клітинної тест-системи

Спосіб визначення якості та безпеки водорозчинних речовин за допомогою клітинної тест 3 45458 культур почки вівці (РО), коронарних судин (KST) та легень ембріонів (LEK), які висівають на мікопланшети та порівняння з контролем без додавання дослідного агенту, відповідає критерію "новизна". Спосіб виконують таким чином: Спочатку готують клітинну тест-систему. Перещеплювані культури нирки вівці (РО), коронарних судин (KST) та легень ембріонів (LEK) висівають на мікропланшети з концентрацією клітин 200250тис/см3 в поживному середовищі, яке містить 10% ембріональної сироватки ВРХ та рівні об'єми середовищ Ігла та 199. Після чого клітинну систему культивують в СО2-інкубаторі не менше доби з послідуючим внесенням кількох розведень дослідної речовини. Оцінку цитотоксичної дії дослідних речовин проводять за допомогою мікроскопії протягом 2448-72 годин після внесення цільного препарату та його розведень. Зокрема, оцінюють такі морфофункціональні характеристики, як морфологію клітин і динаміку формування монослою в лунках планшету з дослідною речовиною та в контролі в лунках без додавання дослідного агенту. Приклад 1 Оцінку цитотоксичної дії дослідних речовин проводили за допомогою мікроскопії протягом 2448-72 годин після внесення цільного препарату та його розведень. Морфологія у нормі для клітин нирки вівці (РО) та легень ембріонів (LEK) була представлена клітинами, які варіюють у розмірах з округленими ядрами, що мають від одного до кількох ядерець Комп’ютерна верстка А. Крулевський 4 різної форми. Максимальний пік мітотичної активності у нормі для нирки вівці (РО) відбувався на другу добу після посіву (клітини формували моношар). Для клітин легень ембріонів (LEK) максимальний пік мітотичної активності відбувався на третю добу. В досліді з цільним препаратом спостерігали округлення та зернистість клітин, іноді каріопікноз ядер, формування моношару не відбувалось. Приклад 2 Оцінку цитотоксичної дії дослідних речовин проводили за допомогою мікроскопії протягом 2448-72 годин після внесення цільного препарату та його розведень. Морфологія у нормі для клітин коронарних судин (KST) складалася із середніх по розміру клітин також з закругленими ядрами та ядерцями різної форми. Максимальний пік мітотичної активності у нормі для клітин коронарних судин (KST) відбувався на другу добу після посіву, також формувався щільний моношар клітин. У випадку цитоксичних властивостей препарату моношар не формувався. За допомогою цього способу були визначені цитотоксичні властивості дослідних речовин, які проявились нездатністю клітин формувати моношар, набуванням закругленості, зернистості з послідуючою дегенерацією. Одержані за допомогою тест-системи дані допоможуть визначати цим способом допустимі концентрації дослідних речовин у продуктах харчування, лікарських препаратах, косметологічних засобах. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601