Спосіб визначення кількості плодових структур грибів (оогоніїв та ооспор) при створенні інфекційного фону

Спосіб визначення кількості плодових структур грибів (оогоніїв та ооспор) при створенні інфекційного фону, що включає підрахунок плодових структур досліджуваного гриба, який відрізняється тим, що ооспори підраховують безпосередньо в товщі агару на дні чашки Петрі, в заздалегідь відмічених, нарізаних та промаркованих ділянках, з наступним їх відбором. Корисна модель відноситься до області сільського господарства і може бути використаний у фітопатології, мікробіології, мікології, селекції. Серед збудників інфекційних хвороб рослин гриби найбільш чисельна група. Вони відрізняються між собою за систематичним положенням, особливостями розвитку, ступенем паразитизму, спеціалізацією, тощо. Основна частина грибів, за виключенням облігатних паразитів, може вирощуватися в лабораторних умовах з метою вивчення біологічних, морфологічних особливостей, моделювання процесу зараження, дослідження патологічного процесу. При проведенні подібних мікологічних досліджень важливим є визначення величини інфекційного навантаження. нок зооспор, які утворюються лише при наявності краплинної вологи, а при статевому розмноженні внаслідок запліднення антеридіїв і оогоній утворюються ооспори. Саме вони є більш постійними плодовими структурами цього класу Ця методика не дає змоги підрахувати плодові структури, зокрема ооспори грибів роду Pythium, що утворюються в товщі субстрату, а отже не змиваються та не рівномірно змішуються з водою. Виходячи з недоліків даної методики підрахунку титру спор, корисною моделлю ставиться завдання створити альтернативну методику для обрахунку кількості ооспор. Це було здійснено шляхом проглядання чашки Петрі із культурою гриба під мікроскопом, при збільшенні 100* Поставлене корисною моделлю завдання досягається тим, що у способі визначення кількості плодових структур грибів (оогоніїв та ооспор) при створенні інфекційного фону, що включає підрахунок плодових структур, згідно винаходу ооспори підраховують безпосередньо в товщі агару на дні чашки Петрі, в заздалегідь відмічених, нарізаних та промаркованих ділянках, з наступним їх відбором. Приклад. Розливають стерильне поживне середовище по 7-10мл в стерильні чашки Петрі Вирощування культури від 3 діб (при необхідності отримати незначну кількість плодових структур) до 8 діб (при необхідності отримати максимальну кількість плодових структур в поживному середовищі) при +25СС. Нарізають агар стерильним пробойчиком із діаметром не більше 0,5см. Маркують кожну ділянку із зворотного боку чашки Петрі (див схему маркування, Фіг. 1) тонким олівцем для скла За прототип було взято наведену в літературі методику підрахунку титру спор з використанням камери Горяєва [Методы экспериментальной микологии / ред. В.И.Билай, К.: Наукова думка, 1982.552с ] Краплину суспензії спор наносять на предметне скло камери Горяєва накривають покривним склом, обережно придавлюють, щоб вийшли повітряні пухирці і надлишок води. Підраховують кількість спор всередині та на лівій і верхній межі квадратиків, Ідо нанесені на поверхню предметного скла Обліковують 40 квадратів, визначають середню величину, перемножують на 250000 і отримують титр (кількість спор на 1см ). Основний із недоліків даної методики - вона розроблена лише для спорових грибів, конідії яких вільно змиваються водою з поверхні повітряного міцелію і утворюють суспензію Однак в циклі розвитку Ооміцетів відсутнє конідіальне спороношення, нестатеве розмноження відбувається за раху СО (О 9763 (перманентним маркером). Безпосередньо мікроскопують кожну відмічену ділянку із підрахунком плодових структур, що знаходяться в межах лінії нарізання. Відбирають ділянки Із потрібною кількістю ооспор. Дана методика дозволяє точно підраховувати чисельність плодових структур грибів, що не утво 4 рюють спор (конідій). Це сприяє підвищенню точності та достовірності експериментів та включає клас Ооміцети в коло використання певних родів грибів для створення інфекційних фонів, моделювання процесу зараження, вивчення паталогічного процесу та проведення Інших біологічних дослідів. Промарковані ділянки Фіг. 1 Схема маркування чашки Петрі набір символів та позначок для маркування нарізаних ділянок X 00 Л Q АЛ • * 0, тощо Комп'ютерна верстка М. Мацело Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул. Глазунова, 1, м. Київ-42, 01601