Рідкі і стабільні олеїнові фракції

Реферат: Даний винахід стосується стабільної і рідкої олеїнової фракції, де менше ніж 8,6 % TAG частинок вказаної олеїнової фракції має загальну формулу SMS, і щонайменше 26 % TAG частинок вказаної олеїнової фракції має загальну формулу SMM, де S означає насичену жирну кислоту, і М означає моноєнову жирну кислоту, де олеїнова фракція утворюється за допомогою фракціонування високонасиченої соняшникової олії з високим вмістом олеїну і збирання рідкої фракції. Також винахід стосується способу отримання стабільної і рідкої олеїнової фракції за допомогою низькотемпературного фракціонування високонасиченої соняшникової олії з високим вмістом олеїну. UA 99108 C2 (12) UA 99108 C2 UA 99108 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Галузь техніки, до якої належить винахід Даний винахід стосується олеїнових фракцій, які особливо придатні для застосування, де необхідно, щоб олія була рідкою і стійкою до окислення. Також винахід стосується застосування олеїнової фракції і олійних сумішей, що містять дані фракції. Рівень техніки винаходу Природні олії складаються з триацилгліцеридів (TAG), які становлять більше 98 % від загальної кількості олії. Отже, хімічні і фізичні властивості олій визначаються їх триацилгліцеридним складом і розподілом жирної кислоти в даних молекулах. Рослинні жири і олії, що застосовуються в харчовій і в інших нехарчових галузях, де потрібна висока стабільність до окислення, вимагають спеціального триацилгліцеридного складу, головним чином, якщо необхідно уникнути проведення хімічних реакцій, таких як гідрування. Частково гідровані олії містять трансізомери жирних кислот, які небажані з точки зору застосування в їжу. Деякі промислові олії частково відповідають даним вимогам, проте мають технологічні недоліки або недоліки, що стосуються харчування. Наприклад, пальмова олія і пальмовий олеїн мають високу стабільність, проте вони є твердими або напівтвердими при кімнатній температурі внаслідок динасиченого і тринасиченого TAG складу, і шкідливими для здоров'я при використанні в їжу, головним чином, внаслідок того, що пальмітинова кислота знаходиться в положенні sn-2 триацилгліцериду (Renaud та інш., J. Nutr. 125:229-237 (1995)). Рослинні олії з високим вмістом олеїну є рідкими при температурах нижче 0˚С, проте вони недостатньо стабільні. Отже, дані олії неможливо застосовувати там, де необхідна стабільна і рідка олія. Корисні для здоров'я олії з хорошою стабільністю до окислення мають низький вміст насичених жирних кислот, переважно, включаючи стеарат, оскільки він є нейтральним відносно рівнів сироваткового холестерину [Paerson, Am. J. Clin. Nutr., 60(S): 1071S-1072S, (1994); Kelly і інш., Eur. J. of Clinical Nutr., 55:88-96, (2001)], і не повинні мати насичені жирні кислоти в середньому положенні (sn-2) триацилгліцериду. Було зроблено припущення, що олії з насиченими жирними кислотами в середньому положенні триацилгліцериду є відповідальними за атерогенні ефекти даних олій (Renaud і інш., J. Nutr. 125:229-237 (1995)). WO0019832 повідомляє, як може бути отримана олія з високим вмістом стеарату і олеату з Brassica. Крім того, були отримані деякі фракції стеарину і олеїну. Більше того, WO99057990 повідомляє, як може бути отримана олія з високим вмістом стеарату і олеату з соєвих бобів, і, крім того, як були отримані деякі стеаринові і олеїнові фракції. Всі показані олії і фракції в даному патенті мали більше 0,5 % лінолеату. Отже, ніякі з даних попередніх олій або їх фракцій не є хорошими речовинами для отримання олеїнової фракції даного винаходу. Було запропоновано, що деякі тропічні олеїнові фракції, змішані зі стандартними промисловими оліями, будуть використовуватися як жири для смаження. Як повідомляється в WO2006/061100, олеїнова фракція з олії тропічного олійного дерева може бути змішана зі стандартними промисловими оліями, даючи жир для смаження. Проте, олія олійного дерева має недолік в зв'язку з тим, що вона є досить рідкою, оскільки отримується з тропічних дерев. Для виробництва олії в промисловому масштабі можуть бути труднощі з сировиною. ЕР-1290119 описує використання соняшникової олії з високим вмістом стеарину і олеїну (HSHOSF) для отримання стеарину, який змішується з рідкою рослиною олією для отримання жирової фази. Вміст твердої речовини стеаринової фракції більший 50 % по вазі, і вона містить щонайменше 30 % по вазі SUS жирних кислот. Стеаринова фракція призначена для структурування рослинної олії для отримання маргарину або харчового продукту пастоподібної консистенції. Таким чином, стеаринова фракція забезпечує твердість в даних продуктах і сама по собі не є рідкою. Олії, що головним чином складаються з насичених або мононенасичених жирних кислот, мають дуже хорошу стабільність, проте, беручи до уваги біосинтез ТAG в рослинах, олії з підвищеним вмістом насичених жирних кислот будуть володіти значною кількістю триацилгліцеридів з двома і трьома насиченими жирними кислотами. Дані триацилгліцериди будуть випадати в осад навіть при кімнатній температурі, роблячи дані олії такими, що легко тужавіють. Промисловий інтерес викликають рідкі при 0ºС і стабільні олії. Соняшникові олії з високим вмістом стеарату і олеату мають дуже хорошу стабільність до окислення, проте, легко тужавіють. Фракції даної олії без більшої частини динасичених триацилгліцеридів повинні мати хорошу стабільність і будуть рідкими при температурі близько 0ºС. Отже, метою даного винаходу є забезпечення новою олією, яка є рідкою при низьких температурах і стійкою до окислення. Суть винаходу 1 UA 99108 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Таким чином, винахід стосується олеїнової фракції, де: а. менше 8,6 % TAG частинок вказаної олеїнової фракції має загальну формулу SMS, і b. щонайменше 26 % TAG частинок вказаної олеїнової фракції має загальну формулу SMM, де S означає насичену жирну кислоту і М означає моноенову жирну кислоту, де фракція утворюється за допомогою фракціонування олії з високим вмістом олеїну і високонасиченої (НОНS) соняшникової олії і збирання рідкої фракції, що називається олеїн. Рідка фракція є надосадовою рідиною фракціонування. Переважно, НОНS олія є соняшниковою олією з високим вмістом олеїнової кислоти і високим вмістом стеаринової кислоти (НОНЕ). Олеїнова фракція даного винаходу має чудову стабільність до окислення, є рідкою при температурах близько або нижче 0ºС і має триацилгліцеридний склад, який робить її корисною для здоров'я в порівнянні з іншими високонасиченими стабільними оліями, такими як пальмова олія або пальмовий олеїн. Способами фракціонування, які є придатними для використання, є висушування або сольвентне фракціонування. Винахід також забезпечує різні застосування олії. Поліпшені характеристики олеїнової фракції дозволяють використовувати її в деяких харчових і нехарчових продуктах в тих випадках, коли потрібні рідкі олії з поліпшеною стабільністю до окислення, стабільністю при смаженні і стабільністю в період зберігання, будучи в той же час продуктом, корисним для здоров'я. Стабільність олій до окислення визначається складом жирних кислот триацилгліцеридів. Триацилгліцериди, збагачені поліненасиченими жирними кислотами, є більш нестабільними, ніж триацилгліцериди з високим вмістом насичених і мононенасичених жирних кислот. Ненасиченими жирними кислотами, виявленими в промислових оліях, є олеїнова, лінолева і ліноленова кислоти, що мають один, два і три подвійних зв'язки, відповідно. Ліноленова кислота є найбільш нестабільною жирною кислотою і відповідальна за рибний запах і, отже, повинна міститися в мінімальній можливій кількості в стабільних оліях, переважно, в слідовій кількості (нижче 0,5 %). Олії з ліноленатом вище даного значення не є хорошою вихідною речовиною для фракціонування олеїну даного винаходу. Олеїнова фракція винаходу має менше 0,5 % ваги лінолеату. Олеїнова фракція є рідкою при кімнатній температурі і більш стабільною в порівнянні з іншими оліями, які є рідкими при кімнатній температурі, такими як стандартна олія CAS-6 (Salas і інш., JAOCS, 83:539-545 (2006)) і високо-олеїнова олія CAS-9 (Fernandez-Moya і інш., J. Argic. Food Chem. 53:5326-5330 (2005)). Олії з високим вмістом олеїну і стеарину HOHS (WO0074470) дуже стабільні, проте не є рідкими при кімнатній температурі. Олія з високим вмістом пальмітину і олеїну IG-1297М (WO09964546), приблизно, така ж стабільна, але не є рідкою при кімнатній температурі і має високий вміст пальмітинової кислоти, що є менш бажаним з точки зору застосування в їжу. Докладний опис винаходу Олійна фракція винаходу має точку замерзання нижче, ніж 5ºС, переважно, нижче, ніж 0ºС, більш переважно, нижче, ніж -6ºС. Стабільна і рідка олійна фракція винаходу утворюється за допомогою низькотемпературного фракціонування високонасиченої соняшникової олії з високим вмістом олеїну. У першому варіанті низькотемпературним фракціонуванням є сухе фракціонування, яке включає наступні стадії: - зменшення температури олії до 12ºС, більш переважно, до 9,5ºС, ще більш переважно, до 5ºС, можливо, при перемішуванні; - відділення олеїну від твердої фракції; і - можливо, фракціонування отриманого олеїну знову при 2,5ºС, більш переважно, при 0ºС, отримуючи менш насичену олеїнову фракцію. В іншому варіанті низькотемпературним фракціонуванням є сольвентне фракціонування, яке включає наступні стадії: - змішування олії з органічним розчинником, таким як ацетон, гексан або етиловий ефір; - зменшення температури розчину олії до 0ºС, переважно, до -5ºС; - відділення олеїну від твердої фракції; і - можливо, виділення олеїну за допомогою видалення розчинника з надосадової рідини. У конкретному прикладі розчинник видаляється з надосадової рідини за допомогою дистиляції у вакуумі. Винахід оснований на використанні певної олії як джерела олії для фракціонування. Джерело олії повинне мати певний склад триацилгліцериду. Олеїнова фракція винаходу має вміст SUS між 1,8 і 9,8 %, переважно, між 2,4 і 8,8 %, більш переважно, між 3,8 і 7,9 %, найбільш 2 UA 99108 C2 5 10 переважно, між 4,2 і 7,6 %, і SUU між 54 і 64 %, переважно, між 56 і 62 %, більш переважно, між 58 і 60 %. Для використання як вихідної речовини з метою отримання фракції олії за винаходом, високонасичена соняшникова олія з високим вмістом олеїну може бути отримана з насіння HOHS, описаного в WO0074470 (вихідним матеріалом якого є CAS-3 (АТСС75968) і високо тіоестеразний мутант (АТСС РТА-628)). Дане насіння також описане в Fernandez-Moya і інш. (J. Argic. Food Chem. 53:5326-5330 (2005)) як CAS-15. Іншими оліями є НОНР, описані в WO9964546. IG-1297M насіння, каталогізоване як АТСС n˚ 209591, є таким насінням, яке має такий же TAG склад, як і CAS-12 від Alvarez-Ortega і інш. (Lipids 32:833-837 (1997)) або олії і насіння, описані в WO0074469, останні також описані в Serrano-Vega і інш. (Lipids 40:369-374 (2005)) як CAS-25. У таблицях 1 і 2 наведені види триацилгліцеридних молекул і триацилгліцеридний склад олії з високим вмістом олеату і стеарату CAS-15 в порівнянні з олією з високим вмістом олеату (CAS-9). 15 Таблиця 1 Триацилгліцеридний склад соняшникової олії з високим вмістом олеату і високим вмістом стеарату (CAS-15) в порівнянні з контрольною соняшниковою олією з високим вмістом олеату (CAS-9) Триацилгліцерід РОР РОЕ РОО PLE POL PLL EOE EOO ELE OOO EOL OOL ELL OLL EOA OOA OLA EOB OOB OLB Вміст триацилгліцериду (моль %) CAS-9 CAS-15 0,5 0,4 4,5 6,4 6,2 0,6 1,4 0,5 10,4 11,7 37,7 70,9 14,3 7,7 6,6 4,0 1,2 0,8 1,5 0,9 2,8 0,5 1,4 2,5 3,7 0,7 Р = пальмітинова кислота = 16:0; Е = стеаринова кислота = 18:0; О = олеїнова кислота = 18:1; L = лінолева кислота = 18:2; А = арахідонова кислота = 20:0; В = бегенова кислота = 22:0 3 UA 99108 C2 Таблиця 2 Триацилгліцеридний склад соняшникової олії з високим вмістом олеату і з високим вмістом стеарату (CAS-15) в порівнянні з контрольною соняшниковою олією з високим вмістом олеату (CAS-9). S = насичена жирна кислота, М = моноенова жирна кислота і D = діенова жирна кислота, U = ненасичена жирна кислота SMS SDS SMM SDM SDD MMM MDM MDD SUS SUU UUU 5 10 15 20 25 30 CAS-9 0,9 21,5 70,9 6,6 0,9 21,5 77,5 CAS-15 18,3 0,6 50,4 10,3 1,2 14,3 4,0 0,8 18,9 61,9 19,1 У першому варіанті олією є соняшникова олія з високим вмістом олеїну і високим вмістом стеарину (НОНЕ), яка утворюється виділенням з насіння соняшника сорту CAS-15 (FernandezMoya і інш., J. Argic. Food Chem. 2005, 53, 5326-5330), що є лінією типу HOHS, як описано в WO0074470, або з іншого сорту НОНЕ, що отримується за допомогою схрещування CAS-3 (ATCC-75968) з тіоестеразним мутантом з високим вмістом олеїну (АТСС РТА-628). У другому конкретному варіанті високонасиченою соняшниковою олією з високим вмістом олеїну є соняшникова олія з високим вмістом олеїну і пальмітину (НОНР), яка утворюється за допомогою виділення з насіння соняшника сорту IG-1297М (відповідає CAS-12), чиє насіння було представлене для реєстрації 20 січня 1998 під номером асоціації АТСС АТСС-209591. В іншому варіанті соняшникова олія з високим вмістом олеїну утворюється за допомогою виділення з насіння CAS-25, отриманого за допомогою схрещування IG-1297M (ATCC-209591) з CAS-3 (ATCC-75968), отримуючи олію з високим вмістом олеїну і високим вмістом пальмітину з низьким вмістом пальмітолеїну і низьким вмістом асклепіну. Олеїнова фракція винаходу може бути отримана з олії, виділеної з даного насіння. Проте винахід не обмежується олеїном, фракціонованим з олії, виділеної з даного насіння. Для отримання олії за винаходом будь-яка HOHS олія є відповідною вихідною олією. Така HOHS олія може використовуватися чистою, тобто безпосередньо екстрагованою з насіння, або змішаною для отримання високого вмісту олеїнової кислоти і насичених жирних кислот. У даному описі такі олії називаються "HOHS". CAS-15, CAS-33 і інші HOHS олії всі мають схожий вміст олеїну і насичених кислот, проте можуть розрізнятися за іншими характеристиками. Сольвентне або сухе фракціонування будь-яких високонасичених олій з високим вмістом олеїну, зокрема, з високим вмістом стеарину, може давати олеїнову фракцію згідно з винаходом. Сольвентне фракціонування проводять з рівними кількостями ацетону, гексану або етилового ефіру, і охолоджуючи суміш до 0ºС. Після центрифугування при 10000g в препаративній центрифузі Sorvall при 0ºС може бути розділений осад, стеаринова фракція і надосадова рідина, олеїнова фракція. Рідка олеїнова фракція має вельми низький вміст динасичених триацилгліцеридів і підвищений вміст ненасичених триацилгліцеридів, в таблицях 3 і 4 наведені вмісти прикладу вихідної олії з лінії насіння HOHS і олеїнової фракції. Олеїнова фракція має зменшену кількість динасичених триацилгліцеридів РОР, POS, SOS, SOA і SOB. 4 UA 99108 C2 Таблиця 3 Триацилгліцеридний склад олеїнової фракції з високонасиченої соняшникової олії з високим вмістом олеату в порівнянні з вихідною олією (HOHS) Триацилгліцерид РОР РОЕ РОО POL EOE EOO OOO EOL OOL OLL EOA OOA OLA EOB OOB Триацилгліцеридний склад (%) НONS Олеїн 0,3 0,2 2,3 1,1 6,7 7,3 0,7 0,7 4,2 0,9 34,4 36,7 31,7 35,0 2,7 2,7 4,2 4,7 0,4 0,4 0,9 0,4 3,4 3,6 0,3 0,0 1,1 0,0 6,6 6,2 Р = пальмітинова кислота = 16:0; Е = стеаринова кислота = 18:0; О = олеїнова кислота = 18:1; L = лінолева кислота = 18:2; А = арахідонова кислота = 20:0; В = бегенова кислота = 22:0 Таблиця 4 Триацилгліцеридний класовий склад олеїнової фракції з високонасиченої соняшникової олії з високим вмістом олеату в порівнянні з вихідною олією HOHS…) S = насичена жирна кислота, М = моноенова жирна кислота і D = діенова жирна кислота Триацилгліцерид Клас SMS SDS SMM SDM SDD MMM MDM MDD DDD 5 10 15 НОHS 8,9 51,1 3,7 31,7 4,2 0,4 Склад триацилгліцериду (%) Олеїн 2,7 53,8 3,4 35,0 4,7 0,4 Несподівано було виявлено, що олії даного типу мають чудові властивості стабільності в експериментах по стабільності до прискореного окислення і є рідкими при температурах близько 0ºС і нижче. Стабільність олії за винаходом може бути виражена в кількості змінених триацигліцеридів (окислені триацилгліцеридні мономери і полімеризований триацилгліцерид) після аналізу по прискореному окисленню. Для даного винаходу аналіз проводився за допомогою введення 2 г олії в піч при 180ºС і відбору 50 мг через двогодинні інтервали для визначення змінених триацилгліцеридів. Олію, що залишилася, після 10 годин витягували і додатково аналізували на полярні сполуки і розподіл окислених мономерів триацилгліцериду і полімерів триацилгліцериду. З цього виходить, що олія за винаходом є рідкою при низьких температурах близько 0ºС і має значну стабільність. Як буде показано в прикладах, склад триацилгліцеридів олій за винаходом значно відрізняється від олій попереднього рівня техніки. 5 UA 99108 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Олія за винаходом є природною олією, яке може бути виділене з насіння соняшника і отримане за допомогою низькотемпературного сухого або сольвентного фракціонування. Дана олеїнова фракція є термостійкою без способів модифікації, таких як гідрування подвійних зв'язків жирних кислот, переетерифікація або будь-які інші хімічні модифікації. Олія за винаходом утворюється без застосування таких штучних процесів модифікації. Переважна олеїнова фракція соняшникової олії за винаходом містить SMS між 1,6 % і 8,6 %, більш переважно, між 2,1 % і 8,4 % і, найбільш переважно, між 3,4 % і 8 %, і SMM між 26 % і 62 %, переважно, 38 % і 60 %, більш переважно, 40 % і 58 %, найбільш переважно, 42 % і 56 %. Крім того, переважно, щоб олійні фракції за винаходом мали менше ніж 8 % насичених жирних кислот в положенні sn-2 триацилгліцеридів, які складають олію, переважно, менше ніж 5 %, більш переважно, менше ніж 3 %. Насиченими жирними кислотами звичайно є стеаринова кислота і пальмітинова кислота. Переважно, щоб олійна фракція за винаходом мала відносно високий вміст стеарату, оскільки тоді олія буде корисним для здоров'я. Для забезпечення максимальної термостабільності, переважно, щоб все повне SMM олеїнової фракції було не меншим 30 %, більш переважно, не меншим 35 %, найбільш переважно, 45 % і більше. Крім того, переважно, щоб олія мала високий вміст олеїну і, відповідно, низький вміст лінолевої кислоти, оскільки олеїнова кислота є більш стабільною, ніж лінолева кислота, і має вельми хороші харчові властивості. Додатково, переважно, щоб олія мала менше 15 % лінолевої кислоти, більш переважно, менше ніж 10 %, найбільш переважно, 5 % або менше, з розрахунку на загальну вагу жирних кислот. Також, переважно, щоб вміст ліноленату був нижчим 0,5 %, оскільки ліноленова кислота є найбільш нестабільною жирною кислотою промислових олій і є відповідальною за рибні запахи. У першому переважному варіанті винахід стосується олеїнової фракції, в якій від 1,6 % до 8,6 %, зокрема, 3,4 % TAG частинок мають загальну формулу SMS, від 26 % до 62 %, зокрема, 48 % TAG частинок мають загальну формулу SMM, і олеїнова фракція має - точку помутніння від 4ºС до -6ºС, зокрема, -1,2ºС, і - таку термічну стабільність, що після нагрівання при 180ºС протягом 10 годин максимально змінюється від 20,1 % до 26,5 %, зокрема, 22,3 % триацилгліцеридів. Така олія утворюється за допомогою вологого фракціонування олії з насіння CAS-15. У другому переважному варіанті винахід стосується олеїнової фракції, в якій від 2,6 % до 7,4 %, зокрема, 4,2 % TAG частинок мають загальну формулу SMS, від 39 % до 59 %, зокрема, 49 % TAG частинок мають загальну формулу SMM, і олеїнова фракція має - точку помутніння від 3ºС до -4ºС, зокрема, -0,2ºС, і - таку термічну стабільність, що після нагрівання при 180ºС протягом 10 годин максимально змінюється від 19,8 % до 24,2 %, зокрема, 20,2 % триацилгліцеридів. Така олія утворюється за допомогою сухого фракціонування олії з насіння CAS-15. Олеїнова фракція винаходу є термостійкою в тому значенні, що вона більш стійка до окислення і полімеризації триацилгліцеридів, які складають олію, в порівнянні з оліями з високим вмістом олеату. Як наслідок цього, олеїнова фракція винаходу є особливо придатною для тривалого зберігання і для смаження і готування при температурах не менше 100ºС, переважно, від 160ºС до 180ºС. Передбачається, що смаження включає смаження продуктів харчування, таких як м'ясо, птиця, риба, фрукти, овочі і т.п., а також глибоке просмаження кондитерських виробів, картоплі фрі, кукурудзяних пластівців. Більше того, олія винаходу також є придатною для випікання, обсмаження, варіння і отримання майонезу, легкого майонезу, знежиреного майонезу, гірчиці, кетчупу, соусу тартар, пасти для сандвічів, салатного соусу, приправи до салату, напівфабрикатів, готових супів, соусів, кремів і т.п. У більш широкому значенні винахід стосується застосування олеїнової фракції, що має менше ніж 15 % насичених жирних кислот і менше ніж 10 %, переважно, менше ніж 5 % лінолевої кислоти після того, як олію піддають високотемпературним умовам, які включають витримання олії в печі при 180ºС протягом 10 годин. Фактично, такі високотемпературні умови є прикладом, що зустрічається при смаженні і випіканні. Винахід не обмежується такою олією, як це. Винахід стосується застосування олії в суміші з іншими оліями, причому в даних сумішах загальні властивості можуть відрізнятися від олії за винаходом, і також можуть бути використані в промисловому процесі, такому як ферментативна або хімічна переетерифікація з метою подальшого фракціонування олії. Олеїнова фракція за винаходом може бути використана з деякими антиоксидантами або іншими домішками для поліпшення її властивостей, головним чином для періодичного смаження, як описано в Marquez-Ruiz і інш., (Eur. J. Lipid Sci. Technol. 106:752-758 (2004)). В даній публікації показано, що деякі кремнієві сполуки і, зокрема, диметилполісилоксани (DMPS), 6 UA 99108 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 додані до олій і жирів в дуже низьких концентраціях, поліпшують їх властивості, головним чином для періодичного смаження. Дані домішки широко використовувалися в промисловому смаженні олій як інгібітори термічних реакцій окислення при глибокому просмажуванні. Також винахід стосується способу отримання стабільної і рідкої олійної фракції за допомогою низькотемпературного фракціонування високонасиченої соняшникової олії з високим вмістом олеїну. Способом є низькотемпературне фракціонування, і переважним є як сухе фракціонування, так і сольвентне фракціонування. Терміни, що використовуються тут, "олійна фракція", "олеїнова фракція" і "олія за винаходом" використовуються як взаємозамінні. Хоча продукт винаходу є фракцією олії, він сам залишається олією і, таким чином, називається "олія". TAG частинки загальної формули SUS, де S є насиченою жирною кислотою, і U є ненасиченою жирною кислотою, є SMS і SDS. М є моноеновою жирною кислотою з одним ненасиченим зв'язком. D є діеновою жирною кислотою з двома ненасиченими зв'язками. SMS частинки є EOE, POP, POE, EOB, EOA. SDS частинки є PLP, ELE, PLE. TAG частинки загальної формули SUU є SMM, SMD і SDD. SMM частинки є POO, EOO, OOA і OOB. SMD частинки є POL, EOL, OLA і OLB. SDD частинки є PLL і ELL. TAG частинки загальної формули UUU є MMM, MMD, MDD і DDD. MMM частинки є ООО. MMD частинки є OOL. MDD частинки є OLL, і DDD частинки є LLL. Далі даний винахід буде пояснений в прикладах, які описані далі і які в жодному разі не збираються обмежити винахід. У прикладах посилання зроблені на наступній фігурі: Фіг. Напрямки полімеризації різних олій при 180ºС. Були вивчені звичайна соняшникова олія (CAS-6), соняшникова олія з високим вмістом олеїну (CAS-9), соняшникова олія з високим вмістом олеїну і високим вмістом пальмітину (CAS-12), олії з високим вмістом олеїну і високим вмістом стеарину (HOHS-17 %E і HOHS-20 %E) і надосадові рідини олій з високим вмістом олеїну і високим вмістом стеарину після фракціонування при 0ºС (надосадова рідина 1) і -5ºС (надосадова рідина 2). ПРИКЛАДИ ПРИКЛАД 1 Отримання олій для отримання олеїнової фракції за винаходом 1. Рослинний матеріал Олеїнову фракцію за винаходом отримують з насіння штаму, зареєстрованого як IG-1297M, або з насіння, яке отримане будь-яким іншим способом. Один з інших способів отримання такого насіння наведений далі. Використовують зріле насіння соняшника з високим вмістом олеату і високим вмістом стеарату з HOHS, як описано в WO0074470 і/або насіння CAS-15, як описано в Fernandez-Moya і інш. (J. Argic. Food Chem. 53:5326 5330 (2005)), які всі мають високий вміст стеарату в середовищі з високим вмістом олеату. Всі олії з високим вмістом олеату і високим вмістом стеарату (HOHS) є схожими і не залежать від насіння, використаного для виділення олій, які використовують в даних прикладах, причому олії можуть бути виділені з будь-якого іншого насіння і використовуватися в чистому вигляді або у вигляді суміші для отримання конкретного триацилгліцеридного складу. Використовують CAS-12 (зареєстрований як IG-1297M (ATCC 209591)) або CAS-25 (отриманий схрещуванням IG-1297M і CAS-3, як описано в Serrano-Vega і інш., Lipids 2005, 40, 369-374) разом або без пальмітолеату. Всі олії з високим вмістом олеату і високим вмістом пальмітину є схожими і не залежать від насіння, використаного для виділення олій, які використовують в даних прикладах, причому олії можуть бути виділені з будь-якого іншого насіння і використовуватися в чистому вигляді або у вигляді суміші для отримання конкретного триацилгліцеридного складу. Як контрольну речовину використовують зріле насіння звичайної лінії соняшника (стандарт, CAS-16) і лінії з високим вмістом олеїну (CAS-9). Деякі приклади жирнокислотних складів олій, що використовуються в даних прикладах, можна знайти в таблиці 5. 7 UA 99108 C2 Таблиця 5 Жирнокислотні склади деяких олій, що використовуються в даному патенті Соняшникова олія Стандарт (CAS 6) Високий вміст олеїну (CAS 9) HOHS 17 %E HOHS 20 %E HOHS 24E HOHS 253 5 10 15 20 25 30 35 40 45 16:0 4,96 3,71 4,45 4,55 5,12 5,71 Жирнокислотний склад (мольний %) 18:0 18:1 18:2 20:0 7,8 28,39 57,24 0,43 7,28 85,48 1,18 0,7 17,75 70,37 3,34 1,52 20,2 67,49 2,87 1,74 24,0 61,63 4,14 2,18 19,6 57,91 12,83 1,46 22:0 1,17 1,64 2,56 3,16 2,93 2,36 Олії HOHS 17 %, HOHS 24E і HOHS 253 виділяють з насіння CAS-33 і CAS-15 і використовують в чистому вигляді. HOHS 20 % є змішаною олією. 2. Виділення олії У лабораторному масштабі олії, що використовуються для отримання олеїнової фракції за даним винаходом, екстрагують з насіння з використанням процесу, що включає подрібнення насіння до дрібного порошку, який змішують з 1/5 частиною по вазі безводного сульфату натрію. Потім отриманий порошок упаковують в картріджи фільтрувального паперу, що містять приблизно 25 г суміші, і екстрагують в апараті Сокслета протягом 16 годин з використанням гексану як розчинника. Збагачену олією суміш, повернену в ємність для розчинника, відганяють у вакуумі при 80ºС, і сліди розчинника видаляють, подаючи потік азоту. Альтернативний спосіб включає подрібнення насіння до дрібного порошку і періодичну екстракцію олії за допомогою змішування подрібненого насіння 2-кратною кількістю по вазі гептану. Суспензію переносять в колбу, що загвинчується, і витримують при 80ºС протягом 2 годин. Потім додають один об'єм 10 г/л NaCl в метанолі і дають фазам розділитися. Збагачений гептаном верхній шар виділяють і упарюють у вакуумі при 80ºС. У кінці, олію висушують за допомогою потоку азоту з метою видалення слідів розчинника. Для більш масштабного виділення насіння екстрагують, використовуючи олійний прес безперервної дії з пропускною здатність 8 кг/год. Партії по 5 кг екстрагують і рафінують. Оскільки дані олії проявляють низький вміст фосфату, то їх не обезсмолюють. Видалення надлишку вільних жирних кислот проводять нейтралізацією з 12 Боме (2,18 М) лугу при 15ºС протягом 40 хвилин. Мильну основу видаляють центрифугуванням, і потім олію промивають водою. Наступною стадією є знебарвлення олії обробкою активованою знебарвлюючою глиною (1 % по вазі) при 70ºС протягом 10 хвилин. Нарешті, олію дезодорують, застосовуючи 3 % потік при 200ºС протягом 3 годин під вакуумом. ПРИКЛАД 2 Властивості триацилгліцеридів 1. Ідентифікація триацилгліцеридів Очищений триацилгліцерид з соняшникових олій, що використовуються для отримання олеїнової фракції винаходу, отримують пропусканням 3 г олії, розчиненої в 3 мл петролейного ефіру, над оксидом алюмінію, який активують при 200ºС протягом 3 годин безпосередньо перед використанням. Оксид алюмінію (1,5 г, двічі) вміщують в дві невеликі колонки, з'єднані силіконовою трубкою, і ліпідний розчин наносять наверх, і фільтрують через оксид алюмінію. Далі колонки промивають 6 мл петролейного ефіру. Розчин упарюють, і очищений триацилгліцерид продувають азотом і зберігають при -20ºС. Триацилгліцерид не містить токофероли, що визначено за допомогою ВЕРХ, слідуючи IUPAC Standard Method 2432 (IUPAC Standard Methods for the Analysis of Oils, Fats and Derivatives, Blackwell, Oxford, 7. supp. th. ed. (1987)). Склад молекул триацилгліцериду визначають за допомогою газової хроматографії очищеного триацилгліцериду з використанням DB-17-HT (Agilent Technologies, USA) капілярної колонки 15 м х 0,25 мм (внутрішній діаметр), товщина плівки 0,1 мікрон, як носій водень і детектор спаду вільної індукції, за J. Arg. Food Chem. 2000, 48, 764 769. ПРИКЛАД 3 Отримання олеїнової фракції за винаходом 1. - Фракціонування олій з використанням розчинників Олії, виділені з насіння, як указано в прикладі 1, розчиняють в 3 об'ємах органічного розчинника, такого як гексан, ацетон або етиловий ефір. Інші співвідношення олії і розчинника 8 UA 99108 C2 5 дають аналогічні результати, див. "Edible Fats and Oils Processing: Basic Principles and Modern Practices", 1990, World Conference Proceedings, American Oil Chemists Society. Потім їх витримують при низькій температурі протягом 24 годин. Надосадові рідини відділяють від осаду центрифугуванням при 5000g, і розчинник видаляють з олеїнової фракції продуванням азоту. Олеїнові фракції зберігають при -20ºС в атмосфері азоту. Два фракціонування проводять при 0ºС і -5ºС, отримуючи олеїни різного складу і властивостей. Таблиця 6 Триацилгліцеридний склад олій з високим вмістом стеарину і високим вмістом олеїну і різноманітні фракції, одержані фракціонуванням з ацетоном при 0С (надосадова рідина 1) і -5С (надосадова рідина 2) Триацилгліцерид РОР PLP POE POO PLE POL PLL EOE EOO ELE OOO EOL OOL ELL OLL LLL EOA OOA OLA EOB OOB OLB HOHS 253 0,82 0,23 4,03 8,54 1,52 1,83 1,18 5,28 27,67 2,01 21,24 6,34 4,57 4,7 1,57 1,06 1,14 1,91 0,24 0,61 2,98 0,54 Склад триацилгліцериду (мольний %) Надосадова Надосадова Надосадова Надосадова HOHS 24Е рідина 1_253 рідина 1_24Е рідина 2_253 рідина 2_24Е 0,83 0,62 0,57 0,69 0,72 0,2 0,22 5,72 1,95 1,54 1,67 1,3 8,13 9,53 13,75 11,63 15,77 0,23 1,41 0,37 1,14 0,38 1,06 2,13 1,86 2,31 2,24 1,16 0,21 1,18 10,07 1,12 1,04 0,68 0,59 39,24 30,3 32,74 27,38 30,22 0,6 1,1 0,23 15,45 23,74 26,06 27,02 28,58 4,92 6,91 6,23 6,09 6,16 2,95 5,05 5,37 5,23 5,63 5,17 5,23 0,35 2,14 0,8 2,34 0,35 1,23 0,92 1,56 0,14 0,42 3,22 2,16 4,65 2,05 4,27 0,23 0,3 0,55 0,65 0,49 1,37 0,19 3,76 3,22 3,44 2,51 2,69 0,3 0,53 0,49 0,65 0,38 Р = пальмітинова кислота = 16:0; Е = стеаринова кислота = 18:0; О = олеїнова кислота = 18:1; L = лінолева кислота = 18:2; А = арахідонова кислота = 20:0; В = бегенова кислота = 22:0 10 15 20 Олії HOHS 24E і HOHS 253 були виділені з насіння CAS-33 і CAS-15. 2. Сольвентне фракціонування олій з високим вмістом олеїну і високим вмістом стеарину Приклади сольвентного фракціонування можна знайти в таблиці 6. Дві олії з високим вмістом олеїну і високим вмістом стеарину HOHS 253 і HOHS 24Е, виділені з насіння лінії CAS15 (описано в Fernandez-Moya і інш., J. Argic. Food Chem. 53:5326-5330 (2005)) або з насіння HOHS, як описано в WO0074470, виділяють з ацетоном при 0ºС, і їх відповідні фракції збирають (надосадова рідина 1_253 і надосадова рідина 1_24Е). Дві інші фракції отримують при -5ºС (надосадова рідина 2_253 і надосадова рідина 2_24Е). Фракції, отримані при 0ºС і -5ºС, мають знижений вміст динасиченого триацилгліцериду, такого як POS, SOS, SOA, SOB і т.п. Триацилгліцеридний склад може бути представлений як клас триацилгліцериду, згідно з насиченим (S), мононасиченим (М) і динасиченим (D) складом триацилгліцериду. У таблиці 7 наведені дані, згруповані, як указано вище. 9 UA 99108 C2 Таблиця 7 Триацилгліцеридний класовий склад олій з високим вмістом олеату і з високим вмістом стеарату і різноманітні фракції, отримані фракціонуванням з ацетоном при 0С (надосадова рідина 1) і -5С (надосадова рідина 2). S = насичена жирна кислота, М = моноенова жирна кислота і D = діенова жирна кислота, U = ненасичена жирна кислота Склад триацилгліцериду (мольний %) Триацилгліцерид Надосадова Надосадова Надосадова Надосадова Клас HOHS 253 HOHS 24Е рідина 1_253 рідина 1_24Е рідина 2_253 рідина 2_24Е SMS 11,88 19,55 3,69 3,48 3,46 2,61 SDS 3,76 0,83 2,71 0,37 1,36 0,61 SMM 41,1 54,35 45,21 54,58 43,57 52,95 SMD 8,95 6,51 9,87 9,13 9,7 9,27 SDD 5,88 6,33 0,21 6,41 MMM 21,24 15,45 23,74 26,06 27,02 28,58 MMD 4,57 2,95 5,05 5,37 5,23 5,63 MDD 1,57 0,35 2,14 0,8 2,34 0,35 DDD 1,06 1,23 0,92 SUS 15,64 20,38 6,4 3,85 4,82 3,22 SUU 55,93 60,86 61,41 63,92 59,68 62,22 UUU 28,44 18,75 32,16 32,23 35,51 34,56 5 10 15 З вищевикладеного випливає, що олеїнові фракції за винаходом мають значно менше SMS значення в порівнянні з вихідними оліями. 3. Сольвентне фракціонування олій з високим вмістом олеату і високим вмістом пальмітину Також фракціонують інші насичені олії з соняшника, наприклад, олію з високим вмістом олеату і високим вмістом пальмітину з CAS-12, і отримують олеїнову фракцію. Дана олеїнова фракція має зменшену кількість динасиченого триацилгліцериду. У таблиці 8 представлений склад триацилгліцериду вихідної соняшникової олії з високим вмістом олеату і високим вмістом пальмітину (НОНР з CAS-12) і фракцій, отриманих з використанням ацетону при 0ºС і -5ºС через 24 години, які називаються надосадова рідина 1 і надосадова рідина 2, відповідно. Триацилгліцеридний склад може бути представлений як клас триацилгліцериду. У таблиці 9 наведені класи триацилгліцеридів вихідної НОНР олії і фракцій надосадової рідини 1 і надосадової рідини 2. Олеїнові фракції мають знижену кількість динасиченого триацилгліцериду, наприклад SMS, і збільшену кількість мононасиченого триацилгліцериду і триненасиченого триацилгліцериду, таких як SMM і MMM. Таблиця 8 Триацилгліцеридний склад олії з високим вмістом пальмітину і високим вмістом олеїну (CAS-12) і різноманітні фракції, отримані фракціонуванням з ацетоном при 0С (надосадова рідина 1) і -5С (надосадова рідина 2) Триацилгліцерид PPoP PPoPo POP PAsP PPoО PPoL POE POO POAs HOHP 0,62 0,28 17,5 0,66 9,87 1,3 1,85 30,9 5,41 Склад триацилгліцериду (мольний %) Hадосадова рідина 1 Надосадова рідина 2 0,71 0,35 0,44 0,64 7,02 2,26 0,29 16,46 13,44 2,49 2,64 0,64 0,48 36,31 29,73 7,07 7,01 10 UA 99108 C2 Продовження таблиці 8 Триацилгліцеридний склад олії з високим вмістом пальмітину і високим вмістом олеїну (CAS-12) і різноманітні фракції, отримані фракціонуванням з ацетоном при 0С (надосадова рідина 1) і -5С (надосадова рідина 2) Триацилгліцерид POL PoOO PoOL EOE EOO OOO OOAs OOL POB OOA OOB HOHP 8,22 1,41 0,54 0,25 2,22 10,99 3,74 1,43 0,96 0,25 1,02 Склад триацилгліцериду (мольний %) Hадосадова рідина 1 Надосадова рідина 2 12,3 12,54 2,68 0,56 0,82 1,99 3,67 8,08 13,38 3,35 5,57 0,92 1,49 0,15 0,4 0,22 0,4 0,59 1,2 Р = пальмітинова кислота = 16:0; Po = пальмітолеїнова кислота = 16:1; Е = стеаринова кислота = 18:0; О = олеїнова кислота = 18:19; As = асклепова кислота = 18:111; L = лінолева кислота 18:2; А = арахідонова кислота = 20:0; В = бегенова кислота = 22:0 Таблиця 9 Триацилгліцеридний класовий склад олії з високим вмістом олеату і з високим вмістом пальмітину і різноманітні фракції, отримані фракціонуванням з ацетоном при 0 С (надосадова рідина 1) і -5 С (надосадова рідина 2). S = насичена жирна кислота, М = моноенова жирна кислота і D = діенова жирна кислота, U = ненасичена жирна кислота Триацилгліцерид Клас SMS SDS SMM SMD SDD MMM MMD MDD DDD SUS SUU UUU 5 10 НОНР 21,84 49,95 9,52 16,14 1,97 21,84 59,47 18,11 Склад триацилгліцериду (мольний %) Надосадова рідина 1 Надосадова рідина 2 8,52 3,78 63,08 56,09 14,79 15,18 11,43 21,63 1,48 2,31 8,52 3,78 77,87 71,27 12,91 23,94 4. Сухе фракціонування олій Олії фракціонують без розчинників за допомогою охолоджування олій протягом 24-48 годин без будь-якого розчинника. Отриманий осад осаджують центрифугуванням при 5000g протягом 30 хвилин при температурі фракціонування. Олеїни збирають у вигляді надосадових рідин. Температури фракціонування коливаються від 12 до 0ºС. Сухе фракціонування описане в "Edible Fats and Oils Processing: Basic Principles and Modern Practices", 1990, World Conference Proceedings, American Oil Chemists' Society, стор. 136-141 і 239-245. Кристали, що утворюються, під час низькотемпературного зберігання насиченого триацилгліцериду відділяють від рідкої олії за допомогою центрифугування, холодного пресування і т.д. Деякі приклади сухого фракціонування наведені в таблицях 10 і 11. Вихідну олію з високим вмістом олеїну і високим вмістом стеарину витримують при 9,5ºС, і олеїн, що 11 UA 99108 C2 5 називається надосадовою рідиною 1, виділяють у вигляді надосадової рідини. Потім надосадову рідину 1 фракціонують при 5ºС протягом 24 годин, отримуючи олеїн, що називається надосадовою рідиною 2, у вигляді надосадової рідини. Потім знов фракціонують при 2,5ºС протягом 24 годин і отримують надосадову рідину 3 в таблицях 10 і 11. Як і у випадку сольвентного фракціонування, кількість динасиченого триацилгліцериду знижується, в той час як кількість ненасичених частинок триацилгліцериду збільшується. У таблиці 11 можна побачити аналогічні результати, наведені у вигляді класів триацилгліцериду. Таблиця 10 Триацилгліцеридний склад олії з високим вмістом стеарину і високим вмістом олеїну (олія отримана з насіння HOHS) і різноманітні фракції, отримані сухим фракціонуванням при 9,5С (надосадова рідина 1), 5С (надосадова рідина 2) і 2,5С (надосадова рідина 3) Триацилгліцерид РОР POE POO PLE POL EOE EOO ELE OOO EOL OOL OLL EOA OOA OLA EOB OOB OLB HOHS 0,56 3,38 7,18 0,98 6,7 36,65 0,47 25,42 4,98 4,76 0,32 0,98 2,87 0,27 0,82 3,47 0,2 Склад триацилгліцериду (мольний %) надосадова рідина 1 надосадова рідина 2 надосадова рідина 3 0,46 0,51 0,45 2,36 2,19 2,34 7,9 8 8,21 0,19 1,18 1,14 1,07 3,15 2,82 2,81 39,46 37,38 38,23 0,33 0,3 27,78 28,52 28,59 5,22 5,33 5,13 4,96 5,13 5,01 0,37 0,22 0,39 0,4 0,31 3,06 2,98 3,01 0,26 0,27 0,28 0,24 4,1 3,81 3,41 0,31 0,38 Р = пальмітинова кислота = 16:0; Е = стеаринова кислота = 18:0; О = олеїнова кислота = 18:1; L = лінолева кислота = 18:2; А = арахідонова кислота = 20:0; В = бегенова кислота = 22:0 Таблиця 11 Триацилгліцеридний класовий склад олії з високим вмістом олеїну і високим вмістом стеарину (олія отримана з насіння HOHS) і різноманітні фракції, отримані сухим фракціонуванням при 9,5 С (надосадова рідина 1), 5 С (надосадова рідина 2) і 2,5 С (надосадова рідина 3). S = насичена жирна кислота, М = моноенова жирна кислота і D = діенова жирна кислота Тригліцерид Клас SMS SDS SMM SMD SDD MMM MMD MDD DDD НОНS 12,44 0,47 50,17 6,43 25,42 4,76 0,32 Склад триацилгліцериду (мольний %) Надосадова рідина 1 Надосадова рідина 2 Надосадова рідина 3 6,36 6,2 6,15 0 0,52 0,3 54,52 52,17 52,86 6,4 7,04 6,85 27,78 28,52 28,59 4,96 5,13 5,01 0 0,37 0,22 10 12 UA 99108 C2 Продовження таблиці 11 Триацилгліцеридний класовий склад олії з високим вмістом олеїну і високим вмістом стеарину (олія отримана з насіння HOHS) і різноманітні фракції, отримані сухим фракціонуванням при 9,5 С (надосадова рідина 1), 5 С (надосадова рідина 2) і 2,5 С (надосадова рідина 3). S = насичена жирна кислота, М = моноенова жирна кислота і D = діенова жирна кислота Тригліцерид Клас SUS SUU UUU 5 10 НОНS 12,91 56,6 30,5 Склад триацилгліцериду (мольний %) Надосадова рідина 1 Надосадова рідина 2 Надосадова рідина 3 6,36 6,72 6,45 60,92 59,21 59,71 32,74 34,02 33,82 Сухе фракціонування даної олії сильно залежить від температур, що використовуються для кристалізації триацилгліцеридів. Отже, склад отриманих олеїнових фракцій відрізняється. Дані таблиць 12 і 13, наведених далі, представлені для сухого фракціонування олії з високим вмістом олеїну і високим вмістом стеарину, послідовно при 12, 2,5 і 0ºС протягом 24 годин. Фракціонування олії при більш низьких температурах дає більш рідку олію з низьким вмістом триацилгліцеридів типу SMS і з високим вмістом більш насичених класів, таких як MMM або MMD. Наявність триацилгліцеридів в формі SMM досягає максимуму в надосадової рідині 1 і потім трохи зменшується в надосадовій рідині 2 і надосадовій рідині 3, при цьому збільшується вміст ненасичених частинок, таких як MMM і MMD. Таблиця 12 Триацилгліцеридний склад олії з високим вмістом стеарину і високим вмістом олеїну і різноманітні фракції, отримані сухим фракціонуванням при 12С (надосадова рідина 1), 2,5С (надосадова рідина 2) і 0С (надосадова рідина 3) Триацилгліцерид РОР POE POO POL EOE EOO OOO EOL OOL OLL EOA OOA EOB OOB Склад триацилгліцериду (мольний %) HOHS 310 надосадова рідина 1 надосадова рідина 2 надосадова рідина 3 0,56 0,47 0,47 0,32 3,78 2,58 2,42 1,61 7,55 7,35 7,68 8,17 0,92 1 1,04 0,99 7,45 3,88 3,18 1,74 38,49 41,63 40,75 37,3 24,77 26,02 27,38 32,1 4,44 5,19 5,11 4,93 4,14 4,62 4,86 6,09 0,29 1 0,52 0,3 2,58 2,75 2,83 3,06 1,34 0,9 0,76 2,99 3,1 3,23 3,41 Р = пальмітинова кислота = 16:0; Е = стеаринова кислота = 18:0; О = олеїнова кислота = 18:1; L = лінолева кислота 18:2; А = арахідонова кислота = 20:0; В = бегенова кислота = 22:0 13 UA 99108 C2 Таблиця 13 Триацилгліцеридний класовий склад олії з високим вмістом олеїну і високим вмістом стеарину і різноманітні фракції, отримані сухим фракціонуванням при 12С (надосадова рідина 1), 2,5С (надосадова рідина 2) і 0С (надосадова рідина 3). S = насичена жирна кислота, М = моноенова жирна кислота і D = діенова жирна кислота, U = ненасичена жирна кислота Тригліцерид Клас SMS SDS SMM SMD SDD MMM MMD MDD DDD SUS SUU UUU 5 10 15 20 НОНS 310 14,13 Склад триацилгліцериду (мольний %) Надосадова рідина 1 Надосадова рідина 2 Надосадова рідина 3 8,35 7,13 3,67 51,61 5,36 54,83 6,19 54,49 6,15 51,94 5,92 24,77 4,14 26,02 4,62 27,38 4,86 32,1 6,09 0,29 14,13 56,97 28,91 8,35 61,02 30,64 7,13 60,64 32,24 3,67 58,15 38,48 ПРИКЛАД 4 Визначення точки помутніння Для багатьох харчових процесів переважною є рідка олія, наприклад, для глибокого заморожування більшість компаній віддають перевагу рідким оліям, для того щоб уникнути термічного виділення і нагрівання з метою уникнення тужавіння жирів. Точка помутніння є температурою, при якій олія стає непрозорою в результаті тужавіння триацилгліцеридів в заданих умовах. Її вимірюють в момент, коли олія через низьку температуру починає ставати твердою речовиною і з'являються деякі кристали твердого жиру. Олії з більш низькою точкою помутніння є рідинами при менших температурах. Також, якщо продукти необхідно зберігати в рефрижераторі, переважною є олія з точкою помутніння близько або менше 0ºС. З метою вимірювання точки помутніння олеїнових фракцій з різними SUS складами і контрольних олій переносять по 10 г кожного з них в скляні трубки з пробкою, що загвинчується, і нагрівають до 80ºС для видалення всіх слідів твердих речовин. Потім їх переносять в термостатовану баню, забезпечену лампою і віконцем, що дозволяє дослідити помутніння олій. Початкова температура бані є 30ºС, потім температуру знижують з швидкістю 2ºС кожні 20 хвилин, досягаючи кінцевої температури -10˚С. Точки помутніння встановлюють візуально, як температуру, при якій дана олія стає каламутною. Визначають точки помутніння деяких олеїнових фракцій олій з високим вмістом олеїну і високим вмістом стеарину. Триацилгліцеридний склад даних олеїнових фракцій наведений в таблиці 14. Таблиця 14 Триацилгліцеридний класовий склад олеїнових фракцій, що використовуються для визначення точки помутніння S = насичена жирна кислота, М = моноенова жирна кислота і D = діенова жирна кислота, U = ненасичена жирна кислота Олеїн А В С D SMS 3,1 0,7 3,7 7,1 SDS SMM 54,2 43,0 51,9 54,5 SMD 3,5 5,1 5,9 6,2 SDD 14 MMM 34,4 44,8 32,1 27,4 MMD 4,4 6,1 6,1 4,9 MDD 0,4 0,3 DDD UA 99108 C2 5 У таблиці 15 показано, що точки помутніння стандартної олії і олії з високим вмістом олеїну є однаковими і дорівнюють -8˚С. Отже, вони починають тужавіти при температурах нижче 0ºС, проте високонасичені олії мають точку помутніння вище 20ºС, і вони є твердими в рефрижераторі. Олеїнові фракції, отримані за допомогою сольвентного або сухого фракціонування олії з високим вмістом олеїну і високим вмістом стеарину, мають точки помутніння близько 0ºС і нижче, і вони близькі до значення стандартної олії і олії з високим вмістом олеїну. Таблиця 15 Точки помутніння різноманітних олій і НОНЕ олеїнових фракцій Соняшникова олія Стандартна (CAS-6) З високим вмістом олеїну (CAS-9) З високим вмістом олеїну і високим вмістом стеарину (CAS-15) Олеїн А Олеїн В Олеїн C Олеїн D 10 15 20 25 30 35 40 45 Вміст SUS (%) 2 1 Точка помутніння (С) -8 -8 19 24 3 1 4 7 -4 -6 -1 4 ПРИКЛАД 5 Термостійкість 1. Очищення триацилгліцеридів Триацилгліцериди з різних олій і олеїнових фракцій (надосадова рідина 1_253 і надосадова рідина 2_253 прикладу 3; Таблиця 6) очищують і звільняють від токоферолів, а потім проводять дослідження на термостабільність з використанням методики, описаної в прикладі 3. При нагріванні якість олії може погіршуватися, оскільки триацилгліцериди, які складають олію, окислюються і/або полімеризуються. Для дослідження термостабільності проводять теплову обробку протягом 10 годин при 180ºС, як указано далі. 2. Термоокислювальна обробка Термоокислювальну обробку зразків проводять в умовах, що суворо контролюються, згідно Barrera-Arellano і інш. (Grasas Aceites 48, 231-235 (1997). Коротко, 2,00±0,01 г очищеного триацилгліцериду відважують в стандартні скляні трубки 13 см  1 см (внутрішній діаметр) і потім вводять в піч при 180,0±0,1ºС. Через кожні 2 години відбирають зразки по 50 мг для визначення полімеризованого триацилгліцерину. Після нагрівання протягом повного 10 годинного періоду відбирають останні зразки і додатково аналізують на полярні сполуки і розподіл окислених триацилгліцеридних мономерів і триацилгліцеридних полімерів. Для TM очищення посудин і температурної корекції були ретельно вивчені інструкції Rancimat . Під час нагрівання не використовували барботоване повітря, і посудини були відкриті. 3. Визначення величини триацилгліцеридів Полімеризовані триацилгліцериди в різних оліях вимірюють за допомогою високоефективної ексклюзіонної хроматографії (HPSEC), слідуючи модифікації IUPAC Standard Method 2508 (вище), застосуванням детектора світлорозсіювання замість детектора показника заломлення в ВЕРХ. Всі полярні сполуки і їх розподіл в окислених триацилгліцеридних мономерах і триацилгліцеридних полімерах визначають комбінацією адсорбційної хроматографії і HPSEC (Dobarganes і інш., Far Sci. Techno. 90, 308-311 (1998)). Умови, що застосовуються для HPSEC, є наступними: розділення проводять в Waters 2695 Module (Milford, MA) сполученому з Waters 2420 ELS детектором даних, які обробляють з використанням програмного забезпечення Empower. Колонки Ultrastyragel (Waters Associates, Milford, Mass., USA) сполучені в ряд і працюючі при 35ºС (25 см  0,77 см (внутрішній діаметр)), завантажують пористим співполімером стиролу і дивінілбензолу з високою частотою поперечних зв'язків (