Ненативний глюкагоновий пептид

Реферат: Розкриті модифіковані глюкагонові пептиди, які мають підвищену активність на глюкагоновому рецепторі в порівнянні з нативним глюкагоном. Додаткове модифікування глюкагонових пептидів шляхом утворення лактамних містків або заміни кінцевої карбоксильної кислоти амідною групою продукує пептиди, які виявляють активність співагоністів на глюкагоновому/GLP-1-рецепторі. Розчинність і стабільність цих високоактивних аналогів глюкагону може бути додатково поліпшена модифікуванням поліпептидів за допомогою пегілування, заміни карбоксикінцевих амінокислот або додання карбоксикінцевого пептиду, UA 104842 C2 (12) UA 104842 C2 вибраного з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 26 (GPSSGAPPPS), SEQ ID NO: 27 (KRNRNNIA) і SEQ ID NO: 28 (KRNR). UA 104842 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Перехресні посилання на споріднені заявки Ця заявка претендує на пріоритет за попередньою заявкою на патент США № 60/890,087, поданою 15 лютого 2007 року, і за попередньою заявкою на патент США № 60/938,565, поданою 17 травня 2007 року. Зміст згаданих попередніх заявок повністю включений в цю заявку шляхом посилання. Передумови створення винаходу Препроглюкагон являє собою поліпептид-попередник, що складається зі 158 амінокислот, який піддається процесингу в різних тканинах з утворенням ряду різних проглюкагонових пептидів, в тому числі глюкагону, глюкагоноподібного пептиду-1 (GLP-1), глюкагоноподібного пептиду-2 (GLP-2) і оксинтомодуліну (OXM), які беруть участь в різноманітних фізіологічних функціях, в тому числі в глюкозному гомеостазі, секреції інсуліну, випорожненні шлунка і в рості організму в результаті засвоєння їжі в кишечнику, а також в регулюванні споживання їжі. Глюкагон являє собою пептид, який складається з 29 амінокислот, які відповідають амінокислотам 33-61 препроглюкагону, в той час як GLP-1 продукується у вигляді пептиду довжиною в 37 амінокислот, які відповідають амінокислотам 72-108 препроглюкагону. Амід GLP1(7-36) або кислота GLP-1(7-37) є біологічно сильнодіючими формами GLP-1, які виявляють по суті еквівалентну активність на GLP-1-рецепторі. Гіпоглікемія спостерігається в тому випадку, коли рівень глюкози в крові падає надто низько для забезпечення достатньої кількості енергії для життєдіяльності організму. У дорослих і дітей старше ніж 10 років гіпоглікемія спостерігається рідко, крім тих випадків, коли вона є побічним ефектом лікування діабету, однак вона може бути наслідком застосування інших лікарських препаратів, захворювань, гормональної або ферментної недостатності або пухлин. Коли рівень глюкози в крові починає опускатися, глюкагон, гормон, продукований підшлунковою залозою, подає сигнал печінці для розщеплення глікогену і виділення глюкози, що призводить до підвищення рівня глюкози в крові до нормального рівня. Таким чином, загальна роль глюкагону в регулюванні рівня глюкози полягає в нейтралізації впливу інсуліну і підтримці рівня глюкози в крові. Однак у хворих діабетом подібна реакція глюкагону на гіпоглікемію може бути ослаблена, що утрудняє повернення рівня глюкози в межі нормального діапазону. Гіпоглікемія є станом, що становить загрозу для життя, який вимагає негайної медичної допомоги. Введення глюкагону є загальноприйнятим способом лікарської терапії при лікуванні гострої гіпоглікемії, за допомогою якого можна відновити нормальний рівень глюкози протягом декількох хвилин після введення. У разі застосування глюкагону при екстреному лікуванні гіпоглікемії, кристалічну форму глюкагону розчиняють у розбавленому кислому буфері, і розчин вводять внутрішньом'язовим шляхом. Незважаючи на ефективність згаданого лікування, методика його проведення обтяжлива і небезпечна для особи, що знаходиться в напівнепритомному стані. Отже, існує потреба в аналогові глюкагону, який зберігає або перевершує біологічні характеристики початкової молекули, однак є в достатній мірі розчинним і стабільним, у відповідних фізіологічних умовах, щоб його можна було заздалегідь виготовляти у вигляді розчину, готового для ін'єкцій. Крім того, хворим діабетом рекомендується підтримувати рівень глюкози в крові, близький до норми, для відстрочення або профілактики виникнення мікросудинних ускладнень. Досягнення цієї мети вимагає, як правило, проведення інтенсивної інсулінотерапії. У прагненні до досягнення цієї мети, лікарі зіткнулися зі значним підвищенням частоти і важкості гіпоглікемії у хворих діабетом. Отже, є потреба в поліпшених фармацевтичних препаратах і вдосконалених методиках лікування діабету, які мають меншу ймовірність індукування гіпоглікемії, в порівнянні з сучасними методами інсулінотерапії. GLP-1, в порівнянні з глюкагоном, має іншу біологічну активність. До числа його впливів належать стимулювання синтезу і секреції інсуліну, пригнічення секреції глюкагону і утримання від споживання їжі. Було показано, що GLP-1 знижує важкість гіперглікемії (підвищений рівень глюкози) у хворих діабетом. Ексендин-4, пептид з отрути ящірок, амінокислотний склад якого майже на 50 % співпадає з амінокислотним складом GLP-1, активізує GLP-1-рецептор і, так само, як було показано, знижує важкість гіперглікемії у хворих діабетом. Є також дані про те, що GLP-1 і ексендин-4 можуть знижувати споживання їжі і стимулювати зниження маси тіла, тобто надавати вплив, який є сприятливим не тільки для хворих діабетом, але і для хворих, які страждають на ожиріння. У хворих, які страждають на ожиріння, є великий ризик розвитку діабету, гіпертензії, гіперліпідемії, серцево-судинних захворювань і захворювань опорно-рухового апарату. Таким чином, зберігається потреба в альтернативних і відповідно до варіанта, якому віддається перевага, вдосконалених методах лікування діабету і ожиріння. Суть винаходу 1 UA 104842 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Відповідно до цього опису пропонуються високоефективні аналоги агоністів глюкагону, які виявляють також підвищену активність на глюкагоновому рецепторі і відповідно до описаних нижче варіантів здійснення виявляють підвищену біофізичну стабільність і/або розчинність у воді. Крім того, відповідно до іншого аспекту цього винаходу пропонуються аналоги агоністів глюкагону, які втратили вибірність нативного глюкагону відносно глюкагонових рецепторів, в порівнянні з GLP-1-рецепторами, і, тим самим, являють собою співагоністи двох згаданих рецепторів. Шляхом певних модифікацій амінокислот аналогів глюкагону можна контролювати відносну активність згаданого аналога на GLP-1-рецепторі, в порівнянні з відносною активністю на глюкагоновому рецепторі. Таким чином, відповідно до ще одного аспекту цього винаходу пропонуються аналоги співагоніста глюкагону, які мають підвищену активність на глюкагоновому рецепторі, в порівнянні з активністю на GLP-1-рецепторі, аналоги співагоніста глюкагону, які мають приблизно еквівалентну активність на обох рецепторах, і аналоги співагоніста глюкагону, які мають підвищену активність на GLP-1-рецепторі, в порівнянні з активністю на глюкагоновому рецепторі. Співагоніст останньої згаданої категорії може бути сконструйований методами генної інженерії для виявлення незначної активності або повної її відсутності на глюкагоновому рецепторі з одночасним збереженням здатності активізування GLP-1-рецептора з такою самою або кращою активністю, ніж нативний GLP-1. Будь-який із цих аналогів може також включати в себе модифікації, які наділяють їх підвищеною біофізичною стабільністю і/або розчинністю у воді. Аналоги глюкагону, які виявляють співагонізм на глюкагонових і GLP-1-рецепторах, корисні для декількох варіантів застосування. Передусім, застосування глюкагону для лікування гіпоглікемії може призвести до гіперкомпенсації низького рівня глюкози в крові, наслідком чого може бути надмірний рівень глюкози в крові. При введенні співагоніста глюкагонових/GLP-1рецепторів, додаткова стимуляція GLP-1-рецепторів може пом'якшувати вплив глюкагонового агоніста із запобіганням надмірному рівню глюкози в крові, який є наслідком лікування гіпоглікемії. Крім того, відповідно до наведеного у цьому документі опису аналоги співагоніста глюкагону, які відповідають цьому винаходу, можуть застосовуватися для регулювання вмісту глюкози в крові при гіперглікемії, стимулювання зниження маси тіла або запобігання приросту маси тіла при введенні окремо або в комбінації з іншими протидіабетичними препаратами або лікарськими засобами проти ожиріння. Іншою сполукою, яка стимулює зниження маси тіла, є оксинтомодулін, природний травний гормон, який виявляють в тонкій кишці (дивися Diabetes, 2005; 54:2390-2395). Оксинтомодулін являє собою пептид, що складається з 37 амінокислот, який включає в себе послідовність глюкагону з 29 амінокислот (тобто послідовність SEQ ID NO: 1), за якою йде карбоксикінцевий подовжувальний сегмент (послідовність SEQ ID NO: 27), який складається з 8 амінокислот (KRNRNNIA). Цим винаходом передбачається, що аналоги глюкагону, розкриті в цьому описі, можуть факультативно сполучатися зі згаданим карбоксикінцевим подовжувальним сегментом (послідовність SEQ ID NO: 27), який складається з 8 амінокислот, однак деякі варіанти здійснення цього винаходу також конкретно передбачають аналоги і застосування аналогів, позбавлених згаданих 8 прилеглих амінокислот карбоксильного кінця послідовності SEQ ID NO: 27. Модифікуванням амінокислот можуть бути отримані сполуки, спеціально призначені для регулювання активності згаданого пептиду по відношенню до GLP-1, і, отже, можуть бути отримані аналоги глюкагону, що відповідають цьому винаходу, які мають особливі властивості для лікування конкретного стану або захворювання. Зокрема, цим винаходом пропонуються аналоги глюкагону, де кожний аналог виявляє типовий відносний рівень активності на відповідних глюкагонових і GLP-1-рецепторах. Наприклад, модифікування може зазнавати кожний пептид з одержанням глюкагонового пептиду, який має активність на GLP-1-рецепторі в діапазоні від щонайменше приблизно 10 % (включаючи приблизно 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 75 %, 100 %, 125 %, 150 %, 175 %) до приблизно 200 % або більш високу в порівнянні з активністю нативного GLP-1, і активність на глюкагоновому рецепторі в діапазоні від щонайменше приблизно 10 % (включаючи приблизно 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 75 %, 100 %, 125 %, 150 %, 175 %, 200 %, 250 %, 300 %, 350 %, 400 %, 450 %) до приблизно 500 % або більш високу в порівнянні з активністю нативного глюкагону. Амінокислотна послідовність нативного глюкагону представлена послідовністю SEQ ID NO: 1, амінокислотна послідовність аміду GLP-1(7-36) представлена послідовністю SEQ ID NO: 52 і амінокислотна послідовність кислоти GLP-1(7-37) представлена послідовністю SEQ ID NO: 50. В ілюстративних варіантах здійснення глюкагоновий пептид може виявляти щонайменше 10 % активності нативного глюкагону на глюкагоновому рецепторі і щонайменше 50 % активності нативного GLP-1 на GLP1-рецепторі, або щонайменше 40 % активності нативного глюкагону на глюкагоновому 2 UA 104842 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 рецепторі і щонайменше 40 % активності нативного GLP-1 на GLP-1-рецепторі, або щонайменше 60 % активності нативного глюкагону на глюкагоновому рецепторі і щонайменше 60 % активності нативного GLP-1 на GLP-1-рецепторі. Вибірність глюкагонового пептиду відносно глюкагонового рецептора в порівнянні з GLP-1рецептором може описуватися як відносний показник активності глюкагону до активності GLP-1 (активність пептиду на глюкагоновому рецепторі відносно нативного глюкагону, ділена на активність пептиду на GLP-1-рецепторі відносно нативного GLP-1). Наприклад, глюкагоновий пептид, який виявляє 60 % активності нативного глюкагону на глюкагоновому рецепторі і 60 % активності нативного GLP-1 на GLP-1-рецепторі, має 1:1 відношення активності глюкагону до активності GLP-1. Приклади відношень активності глюкагону до активності GLP-1 включають приблизно 1:1, 1,5:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1 або 10:1 або приблизно 1:10, 1:9, 1:8, 1:7, 1:6, 1:5, 1:4, 1:3, 1:2 або 1:1,5. Як приклад, відношення активності глюкагону до активності GLP-1 10:1 вказує на 10-кратну вибірність відносно глюкагонового рецептора в порівнянні з GLP-1рецептором. Подібним чином, відношення активності GLP-1 до активності глюкагону 10:1 вказує на 10-кратну вибірність відносно GLP-1-рецептора в порівнянні з глюкагоновим рецептором. У одному з варіантів здійснення пропонуються аналоги глюкагону, які мають підвищену активність і оптимально поліпшену розчинність і стабільність. У одному з варіантів здійснення підвищена активність глюкагону забезпечується модифікуванням амінокислоти в положенні 16 нативного глюкагону (послідовність SEQ ID NO: 1). Як необмежувальний приклад, така підвищена активність може забезпечуватися заміною природного серину в положенні 16 глутаміновою кислотою або іншою негативно зарядженою амінокислотою, яка має бічний ланцюг довжиною в 4 атоми, або ж в альтернативному варіанті будь-якою амінокислотою з групи, яку складають глутамін, гомоглутамінова кислота і гомоцистеїнова кислота, або зарядженою амінокислотою, яка має бічний ланцюг, який містить щонайменше один гетероатом (наприклад, N, O, S, P), або бічний ланцюг довжиною приблизно 4 атоми (або 3-5 атомів). У одному з варіантів здійснення агоніст глюкагону підвищеної активності містить пептид, представлений послідовностями SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, або аналог агоніста глюкагону, представлений послідовністю SEQ ID NO: 5. У одному з варіантів здійснення пропонується білок-аналог глюкагону, який має підвищену активність на глюкагоновому рецепторі відносно глюкагону дикого типу, де пептид містить послідовності SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 або SEQ ID NO: 10, і де глюкагоновий білок зберігає свою вибірність відносно глюкагонового рецептора в порівнянні з GLP-1-рецепторами. Активність глюкагонового рецептора може бути знижена модифікуванням амінокислоти в положенні 3, наприклад, шляхом заміни природного глутаміну в положенні 3 будь-якою амінокислотою. Було показано, що заміна в цьому положенні кислою, основною або гідрофобною амінокислотою (глутаміновою кислотою, орнітином, норлейцином) значно знижує або ліквідує активність глюкагонового рецептора. Відповідно до деяких варіантів здійснення аналоги мають приблизно 10 % або менше активності нативного глюкагону на глюкагоновому рецепторі, наприклад, приблизно 1-10 %, або приблизно 0,1-10 %, або більше ніж приблизно 0,1 %, але менше ніж приблизно 10 %, одночасно із цим виявляючи щонайменше 20 % активності GLP-1 на GLP-1-рецепторі. Наприклад, ілюстративні аналоги, опис яких наведений у цьому документі, мають приблизно 0,5 %, приблизно 1 % або приблизно 7 % активності нативного глюкагону, в той самий час виявляючи щонайменше 20 % активності GLP-1 на GLP-1рецепторі. Відповідно до інших варіантів здійснення пропонуються аналоги глюкагону, які мають підвищену або збережену активність на глюкагоновому рецепторі в порівнянні з нативним глюкагоновим пептидом, але мають також значно підвищену активність на GLP-1-рецепторі. Глюкагон, як правило, має приблизно 1 % активності нативного GLP-1 на GLP-1-рецепторі, в той час як GLP-1, як правило, має менше ніж приблизно 0,01 % активності нативного глюкагону на глюкагоновому рецепторі. Підвищена активність на GLP-1-рецепторі забезпечується шляхом заміни карбоксильної групи C-кінцевої амінокислоти нейтральною за зарядом групою, такою як амід або складний ефір. У одному з варіантів здійснення ці аналоги глюкагону містять послідовність SEQ ID NO: 20, де карбоксикінцева амінокислота має амідну групу замість карбоксильної групи, яка знаходиться в нативній амінокислоті. Ці аналоги глюкагону мають сильну активність як на глюкагонових, так і на GLP-1-рецепторах і, таким чином, виступають на обох рецепторах як співагоністи. У одному з варіантів здійснення пропонується співагоніст глюкагонового і GLP-1-рецептора, де пептид містить послідовність SEQ ID NO: 20, в якій амінокислотою в положенні 28 є Asn або Lys і амінокислотою в положенні 29 є амід Thr. Підвищена активність на GLP-1-рецепторі забезпечується також завдяки стабілізації альфа 3 UA 104842 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 спіральної структури C-кінцевої частини глюкагону (приблизно амінокислоти 12-29) шляхом утворення внутрішньомолекулярного містка між бічними ланцюгами двох амінокислот, розділених трьома проміжними амінокислотами. Відповідно до інших варіантів здійснення місток або лінкер має приблизно 8 (або приблизно 7-9) атомів в довжину і утворюється між бічними ланцюгами амінокислот в положеннях 12 і 16, або в положеннях 16 і 20, або в положеннях 20 і 24, або в положеннях 24 і 28. Бічні ланцюги цих амінокислот можуть зв'язуватися між собою за допомогою водневих зв'язків або іонних взаємодій, таких як утворення сольових містків, або за допомогою ковалентних зв'язків. У одному з варіантів здійснення пропонується агоніст глюкагону, який містить глюкагоновий пептид з послідовністю SEQ ID NO: 20, де лактамний цикл утворюється між бічними ланцюгами залишку лізину, який знаходиться в положенні 12, 20 або 28, і залишком глутамінової кислоти, який знаходиться в положенні 16 або 24, де дві амінокислоти глюкагонового пептиду, бічні ланцюги яких беруть участь в утворенні лактамного циклу, відділені одна від іншої трьома проміжними амінокислотами. У одному з варіантів здійснення лактамвмісний аналог глюкагону містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17 і SEQ ID NO: 18. В одному з варіантів здійснення карбоксикінцева амінокислота лактамвмісного пептиду містить амідну групу або складноефірну групу замість кінцевої карбоксильної групи. У одному з варіантів здійснення глюкагоновий пептид з послідовностями SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17 і SEQ ID NO: 18 додатково містить додаткову амінокислоту, ковалентно приєднану до карбоксильного кінця послідовностей SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17 і SEQ ID NO: 18. Відповідно до ще одного варіанта здійснення пропонується глюкагоновий пептид, який містить послідовність, вибрану з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 і SEQ ID NO: 69, і також містить додаткову амінокислоту, ковалентно приєднану до карбоксильного кінця послідовностей SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 і SEQ ID NO: 69. У одному з варіантів здійснення амінокислотою в положенні 28 є аспарагін або лізин і амінокислотою в положенні 29 є треонін. Підвищена активність на GLP-1-рецепторі забезпечується також модифікуванням амінокислоти в положенні 20. У одному з варіантів здійснення глутамін в положенні 20 замінюють іншою гідрофільною амінокислотою, що має бічний ланцюг, яка заряджена або ж має здатність до утворення водневого зв'язку і має в довжину щонайменше приблизно 5 (або приблизно 4-6) атомів, наприклад, лізином, цитруліном, аргініном або орнітином. Будь-яка з описаних вище модифікацій, яка підвищує або знижує активність глюкагонового рецептора і яка підвищує активність GLP-1-рецептора, може здійснюватися окремо або в комбіновано. Комбінації модифікацій, які підвищують активність GLP-1-рецептора, як правило, забезпечують більш високу активність GLP-1, ніж будь-яка з таких модифікацій окремо. Наприклад, цей винахід пропонує аналоги глюкагону, які містять модифікації в положенні 16, в положенні 20 і на C-кінцевій карбоксильній групі, факультативно з ковалентним зв'язком між амінокислотами в положеннях 16 і 20; аналоги глюкагону, які містять модифікації в положенні 16 і на C-кінцевій карбоксильній групі; аналоги глюкагону, які містять модифікації в положеннях 16 і 20, факультативно з ковалентним зв'язком між амінокислотами в положеннях 16 і 20; і аналоги глюкагону, які містять модифікації в положенні 20 і на C-кінцевій карбоксильній групі; факультативно за умови, що амінокислотою в положенні 12 не є Arg; або ж факультативно за умови, що амінокислотою в положенні 9 не є Glu. Інші модифікації в положенні 1 або 2, як описано в даному документі, можуть підвищити стійкість пептиду до розщеплення дипептидилпептидазою IV (DPP IV). Наприклад, амінокислота в положенні 2 може бути замінена D-серином, аланіном, D-аланіном, валіном, гліцином, Nметилсерином, N-метилаланіном або ж аміноізомасляною кислотою. В альтернативному варіанті або ж на додаток до нього амінокислота в положенні 1 може бути замінена Dгістидином, дезаміногістидином, гідроксилгістидином, ацетилгістидином, гомогістидином, Nметилгістидином, альфа-метилгістидином, імідазолоцтовою кислотою або ж альфа, альфадиметилімідазолоцтовою кислотою (DMIA). Спостерігалося, що модифікації в положенні 2 (наприклад, аміноізомасляна кислота (AIB) в положенні 2) і, в деяких випадках, модифікації в положенні 1 можуть знижувати активність глюкагону, іноді значно; несподівано подібне зниження активності глюкагону може бути відновлене за допомогою ковалентного зв'язку між амінокислотами в положеннях 12 і 16, 16 і 20 або 20 і 24, наприклад, лактамного містка між глутаміновою кислотою в положенні 16 і лізином в положенні 20. Відповідно до інших варіантів здійснення будь-яка з попередніх сполук може бути додатково модифікована для підвищення стабільності модифікуванням амінокислоти в положенні 15 4 UA 104842 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 послідовності SEQ ID NO: 1 для зниження розкладання пептиду з плином часу, особливо в кислотних або лужних буферах. Відповідно до іншого варіанта здійснення розчинність глюкагонових пептидів, розкритих в цьому описі, підвищується за допомогою ковалентного приєднання гідрофільної складової до пептиду. У одному з варіантів здійснення гідрофільною складовою є поліетиленгліколевий (PEG) ланцюг, факультативно приєднаний до пептиду в одному або декількох положеннях 16, 17, 21, 24, 29 або на C-кінці. Відповідно до певних варіантів здійснення нативну амінокислоту в цьому положенні замінюють амінокислотою, яка має бічний ланцюг, придатний для утворення місточкових зв'язків з гідрофільними складовими, для полегшення приєднання гідрофільної складової до пептиду. Відповідно до інших варіантів здійснення до пептиду на C-кінці додають амінокислоту, модифіковану для включення гідрофільної групи. У одному з варіантів здійснення пептид-співагоніст містить послідовність, вибрану з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 і SEQ ID NO: 19, де бічний ланцюг амінокислотного залишку в одному з положень 16, 17, 21 або 24 згаданого глюкагонового пептиду додатково містить поліетиленгліколевий ланцюг, який має молекулярну масу, вибрану в діапазоні від приблизно 500 Да до приблизно 40000 Да. У одному з варіантів здійснення поліетиленгліколевий ланцюг має молекулярну масу, вибрану в діапазоні від приблизно 500 Да до приблизно 5000 Да. У іншому варіанті здійснення поліетиленгліколевий ланцюг має молекулярну масу від приблизно 10000 Да до приблизно 20000 Да. В інших варіантах здійснення поліетиленгліколевий ланцюг має молекулярну масу від приблизно 20000 Да до приблизно 40000 Да. Відповідно до іншого варіанта здійснення розчинність будь-якого з вищезазначених аналогів глюкагону може бути поліпшена шляхом амінокислотних замін і/або додавань, які вводять заряджену амінокислоту в C-кінцеву частину пептиду, відповідно до варіанта, якому віддається перевага, в C-кінцеве положення відносно положення 27 послідовності SEQ ID NO: 1. Факультативно в C-кінцеву частину можуть бути введені одна, дві або три заряджені амінокислоти, відповідно до варіанта, якому віддається перевага, в C-кінцевому напрямі відносно положення 27. У одному з варіантів здійснення нативну(-і) амінокислоту(-и) в положеннях 28 і/або 29 замінюють зарядженими амінокислотами і/або відповідно до іншого варіанта здійснення до C-кінця пептиду також додають від однієї до трьох заряджених амінокислот. У подальших варіантах здійснення одна, дві або всі заряджені амінокислоти мають негативний заряд. Глюкагоновий пептид може зазнавати додаткових модифікацій, наприклад, консервативних замін, що, проте, дозволяє йому зберігати активність глюкагону. В одному з варіантів здійснення пропонується пептид-аналог з послідовністю SEQ ID NO: 20, де згаданий аналог відрізняється від послідовності SEQ ID NO: 20 1-2 замінами амінокислот в положеннях 17-26, та в іншому варіанті здійснення згаданий аналог відрізняється від пептиду з послідовністю SEQ ID NO: 20 заміною амінокислоти в положенні 20. Відповідно до одного з варіантів здійснення глюкагонові пептиди, розкриті в цьому описі, модифікуються шляхом додання другого пептиду до карбоксильного кінця глюкагонового пептиду, наприклад, послідовності SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27 або SEQ ID NO: 28. У одному з варіантів здійснення глюкагоновий пептид, який має пептидну послідовність, вибрану з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 і SEQ ID NO: 69, ковалентно з'єднується за допомогою пептидного зв'язку з другим пептидом, де другий пептид містить послідовність, вибрану з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27 і SEQ ID NO: 28. В іншому варіанті здійснення у глюкагонових пептидів, які містять C-кінцевий подовжувальний сегмент, треонін в положенні 29 нативного глюкагонового пептиду замінюється гліцином. Аналог глюкагону, який має заміну треоніну гліцином в положенні 29 і містить карбоксильний кінцевий подовжувальний сегмент послідовності SEQ ID NO: 26, в чотири рази активніший на GLP-1-рецепторі, в порівнянні з нативним глюкагоном, модифікованим із включенням карбоксильного кінцевого подовжувального сегмента послідовності SEQ ID NO: 26. Активність на GLP-1-рецепторі може бути додатково підвищена шляхом заміни нативного аргініну в положенні 18 аланіном. Таким чином, як описано в цьому документі, пропонуються високоефективні аналоги глюкагону або аналоги співагоніста глюкагону, які також виявляють підвищену розчинність і/або стабільність. Один з ілюстративних прикладів високоефективного аналога глюкагону виявляє щонайменше приблизно 200 % активності нативного глюкагону на глюкагоновому рецепторі, факультативно розчинний з концентрацією щонайменше 1 мг/мл при рН в межах 6-8 (наприклад, рН 7) і факультативно зберігає щонайменше 95 % початкового пептиду (наприклад, 5 % або менше початкового пептиду розкладається або розщеплюється) через 24 год. при 5 UA 104842 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 температурі 25C. Інший ілюстративний приклад аналога співагоніста глюкагону виявляє більше ніж приблизно 40 % або більше ніж приблизно 60 % активності як на глюкагоновому рецепторі, так і на GLP-1-рецепторі (в співвідношенні в межах приблизно 1:3-3:1 або в межах приблизно 1:2-2:1), факультативно розчинний при концентрації щонайменше 1 мг/мл при рН в межах 6-8 (наприклад, рН 7) і факультативно зберігає щонайменше 95 % початкового пептиду через 24 год. при температурі 25C. Інший ілюстративний аналог співагоніста глюкагону виявляє приблизно 175 % або більш високу активність нативного глюкагону на глюкагоновому рецепторі і приблизно 20 % або більш низьку активність нативного GLP-1 на GLP-1-рецепторі, факультативно розчинний при концентрації щонайменше 1 мг/мл при рН в межах 6-8 (наприклад, рН 7) і факультативно зберігає щонайменше 95 % початкового пептиду через 24 год. при температурі 25C. Ще один ілюстративний аналог співагоніста глюкагону виявляє приблизно 10 % або менше активності нативного глюкагону на глюкагоновому рецепторі і щонайменше приблизно 20 % активності нативного GLP-1 на GLP-1-рецепторі, факультативно розчинний при концентрації щонайменше 1 мг/мл при рН в межах 6-8 (наприклад, рН 7) і факультативно зберігає щонайменше 95 % початкового пептиду через 24 год. при температурі 25C. Ще один ілюстративний аналог співагоніста глюкагону виявляє приблизно 10 % або більш низьку (але вище за 0,1 %, 0,5 % або 1 %) активність нативного глюкагону на глюкагоновому рецепторі і щонайменше приблизно 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 % або 100 % або більш високу активність нативного GLP-1 на GLP-1-рецепторі, факультативно розчинний при концентрації щонайменше 1 мг/мл при рН в межах 6-8 (наприклад, рН 7) і факультативно зберігає щонайменше 95 % початкового пептиду через 24 год. при температурі 25C. В деяких варіантах здійснення такі аналоги глюкагону зберігають щонайменше 22, 23, 24, 25, 26, 27 або 28 природних амінокислот у відповідних положеннях в нативному глюкагоні (наприклад, мають 1-7 модифікацій, 1-5 модифікацій або 1-3 модифікації в порівнянні з природним глюкагоном). Будь-який з наведених нижче пептидів виключається з числа сполук, які відповідають цьому винаходу, хоч їх додаткові модифікації, які виявляють необхідну активність співагоніста, фармацевтичні композиції, набори і методи лікування, в яких застосовуються такі сполуки, можуть бути включені в цей винахід: пептид послідовності SEQ ID NO: 1 з [Arg12] заміною і Cкінцевим амідом; пептид послідовності SEQ ID NO: 1 з [Arg12, Lys20] замінами і C-кінцевим амідом; пептид послідовності SEQ ID NO: 1 з [Arg12, Lys24] замінами і C-кінцевим амідом; пептид послідовності SEQ ID NO: 1 з [Arg12, Lys29] замінами і C-кінцевим амідом; пептид послідовності SEQ ID NO: 1 з [Glu9] заміною; пептид послідовності SEQ ID NO: 1 з відсутнім His1, з [Glu9, Glu16, Lys29] замінами і C-кінцевим амідом; пептид послідовності SEQ ID NO: 1 з [Glu9, Glu16, Lys29] замінами і C-кінцевим амідом; пептид послідовності SEQ ID NO: 1 з [Lys13, Glu17] замінами, приєднаними через лактамний місток, і C-кінцевим амідом; пептид послідовності SEQ ID NO: 1 c [Lys17, Glu21] замінами, приєднаними через лактамний місток, і Cкінцевим амідом; пептид послідовності SEQ ID NO: 1 з відсутнім His1, з [Glu20, Lys24] замінами, приєднаними через лактамний місток. Відповідно до одного з варіантів здійснення пропонується фармацевтична композиція, яка містить будь-який з нових глюкагонових пептидів, розкритих в цьому описі, який відповідно до варіанта, якому віддається перевага, є стерильним, і відповідно до варіанта, якому віддається перевага, має рівень чистоти щонайменше 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % або 99 %, і фармацевтично прийнятний розчинник, носій або наповнювач. Такі композиції можуть містити глюкагоновий пептид із концентрацією щонайменше 0,5 мг/мл, 1 мг/мл, 2 мг/мл, 3 мг/мл, 4 мг/мл, 5 мг/мл, 6 мг/мл, 7 мг/мл, 8 мг/мл, 9 мг/мл, 10 мг/мл, 11 мг/мл, 12 мг/мл, 13 мг/мл, 14 мг/мл, 15 мг/мл, 16 мг/мл, 17 мг/мл, 18 мг/мл, 19 мг/мл, 20 мг/мл, 21 мг/мл, 22 мг/мл, 23 мг/мл, 24 мг/мл, 25 мг/мл або вище. У одному з варіантів здійснення фармацевтичні композиції виконані у вигляді водних розчинів, які стерилізуються і факультативно зберігаються в різних місткостях. Сполуки, які відповідають цьому винаходу, можна застосовувати відповідно до одного з варіантів здійснення, щоб заздалегідь виготовити розчини, готові для ін'єкцій. У інших варіантах здійснення фармацевтичні композиції виконані у вигляді ліофілізованого порошку. Фармацевтичні композиції можуть додатково фасуватися як частина набору, який включає в себе одноразовий пристрій для введення композиції хворому. Місткості або набори можуть маркуватися для зберігання при кімнатній або при зниженій температурі. Відповідно до одного з варіантів здійснення пропонується спосіб прискореного підвищення рівня глюкози або лікування гіпоглікемії із застосуванням заздалегідь одержаної водної композиції глюкагонових пептидів, які відповідають цьому винаходу. Згаданий спосіб включає стадію введення ефективної кількості водного розчину, який містить новий модифікований глюкагоновий пептид, розкритий в цьому описі. У одному з варіантів здійснення глюкагоновий пептид пегілований в положенні 21 або 24 глюкагонового пептиду, і поліетиленгліколевий 6 UA 104842 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 ланцюг має молекулярну масу від приблизно 500 Да до приблизно 5000 Да. У одному з варіантів здійснення розчин модифікованого глюкагону розфасовується в пристрій, застосовуваний для введення композиції хворому, який страждає на гіпоглікемію. Відповідно до одного з варіантів здійснення пропонується поліпшений спосіб регулювання рівня глюкози в крові у інсулінзалежних хворих. Згаданий спосіб включає стадії введення інсуліну в кількості, терапевтично ефективній для регулювання вуглеводного обміну речовин при діабеті, і введення нового модифікованого глюкагонового пептиду, розкритого в цьому описі, в кількості, терапевтично ефективній для запобігання гіпоглікемії, де згадані стадії введення здійснюються роздільно протягом проміжку часу тривалістю 12 год. В одному з варіантів здійснення глюкагоновий пептид і інсулін вводять одночасно у вигляді єдиної композиції, причому глюкагоновий пептид пегільований поліетиленгліколевим ланцюгом, який має молекулярну масу, вибрану в межах від приблизно 5000 Да до приблизно 40000 Да. В іншому варіанті здійснення пропонується спосіб ініціювання тимчасового параліча кишечнику. Згаданий спосіб включає стадію введення хворому одного або декількох глюкагонових пептидів, розкритих в цьому описі. У ще одному варіанті здійснення пропонується спосіб лікування гіперглікемії або спосіб зниження приросту маси тіла або ініціювання зниження маси тіла, який включає введення ефективної кількості водного розчину, який містить глюкагоновий пептид, який відповідає цьому винаходу. В одному з варіантів здійснення будь-який спосіб включає введення ефективної кількості композиції, яка містить агоніст глюкагону, вибраний з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 і SEQ ID NO: 19. В іншому варіанті здійснення згаданий спосіб включає введення ефективної кількості композиції, яка містить агоніст глюкагону, де агоніст глюкагону містить глюкагоновий пептид, вибраний з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68 і SEQ ID NO: 69, де амінокислота 29 глюкагонового пептиду приєднана до другого пептиду через пептидний зв'язок, і згаданий другий пептид містить послідовності SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27 або SEQ ID NO: 28. У інших варіантах здійснення пропонуються способи лікування діабету, які включають одночасне ведення традиційної дози або зменшеної дози інсуліну і глюкагонового пептиду, який відповідає цьому винаходу. Пропонуються також способи лікування діабету за допомогою глюкагонового пептиду, який відповідає цьому винаходу, без одночасного ведення інсуліну. У ще одному аспекті цей винахід пропонує нові способи лікування гіперглікемії і нові способи зниження апетиту або стимулювання зниження маси тіла, які включають введення молекули співагоніста глюкагону/GLP-1 (включаючи їхні фармацевтично прийнятні солі), яка активізує як глюкагонові, так і GLP-1-рецептори. Агонізм, тобто активізація, як глюкагонових, так і GLP-1рецепторів, забезпечує при лікуванні гіперглікемії несподіване поліпшення в порівнянні тільки з агонізмом GLP-1. Таким чином, додання глюкагонового агонізму забезпечує несподіваний адитивний або синергічний ефект або інший(-і) несподіваний(-і) сприятливий(-і) клінічний(-і) вплив(-и). Відповідно до згаданих способів передбачається введення зі звичайною дозою інсуліну, зменшеною дозою інсуліну або без інсуліну. Агонізм глюкагонового рецептора також має непередбачений сприятливий вплив в порівнянні тільки з агонізмом GLP-1 при стимулюванні зниження маси тіла або попередженні приросту маси тіла. До прикладів молекул співагоністів глюкагону/GLP-1 належать глюкагонові пептиди, які відповідають цьому винаходу, аналоги GLP-1, які активізують як GLP-1-рецептори, так і глюкагонові рецептори, гібриди глюкагону і GLP-1 або гібриди аналогів глюкагону і аналогів GLP-1 або їхні хімічно модифіковані похідні. В альтернативному варіанті сполука, яка активізує глюкагоновий рецептор, може вводитися одночасно зі сполукою, яка активізує GLP-1-рецептор (такою як аналог GLP-1, аналог ексендину-4 або їхні похідні). Винахід передбачає також одночасне ведення аналога агоніста глюкагону з аналогом агоніста GLP-1. Такі способи лікування гіперглікемії і/або зниження апетиту або стимулювання схуднення включають введення аналога глюкагону з модифікацією в положенні 12 (наприклад, Arg12), факультативно в поєднанні з модифікаціями в положенні 16 і/або 20. Способи, які відповідають цьому винаходу, включають також введення аналогів глюкагону, які мають внутрішньомолекулярний місток між бічними ланцюгами двох амінокислот в межах ділянки амінокислот 12 і 29, які розділяються трьома проміжними амінокислотами, наприклад, положення 12 і 16, положення 13 і 17 (наприклад, Lys13Glu17 або Glu13Lys17), положення 16 і 20, положення 17 і 21 (наприклад, Lys17Glu21 або Glu17Lys21), положення 20 і 24 або положення 24 і 28, за факультативної умову, що амінокислота в положенні 9 не є Glu, і які 7 UA 104842 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 факультативно містять C-кінцевий амід або складний ефір. Відповідно до одного з варіантів здійснення із числа таких молекул співагоністів глюкагону/GLP-1 виключаються будь-які аналоги глюкагону або аналоги GLP-1, які згідно з відомим рівнем техніка придатні для застосування в такому способі. У іншому варіанті здійснення пептиди, описані в патенті США № 6,864,069, які діють як агоніст GLP-1 і антагоніст глюкагону при лікуванні діабету, також виключаються із числа молекул співагоністів глюкагону/GLP-1. У іншому варіанті здійснення при лікуванні діабету виключається застосування антагоністів глюкагону, таких як антагоністи, описані в публікаціях Unson et al., J. Biol. Chem., 264:789-794 (1989), Ahn et al., J. Med. Chem., 44:3109-3116 (2001) і Sapse et al., Mol. Med., 8(5):251-262 (2002). У іншому варіанті здійснення оксинтомодулін або аналог глюкагону, який містить 8 C-кінцевих амінокислот оксинтомодуліну (послідовність SEQ ID NO: 27), також виключаються із числа молекул співагоністів глюкагону/GLP-1. Очікується, що такі способи лікування гіперглікемії будуть придатні для лікування гіперглікемії різних типів, в тому числі діабету, цукрового діабету типу I, цукрового діабету типу II, діабету вагітних, як інсулінозалежних, так і інсулінонезалежних, і скорочення кількості ускладнень, зумовлених діабетом, в тому числі нефропатії, ретинопатії і судинних захворювань. Передбачається, що такі способи зниження апетиту або стимулювання зниження маси тіла будуть придатні для зменшення маси тіла, запобігання приросту маси тіла, лікування ожиріння різної етіології, включаючи ожиріння, ініційоване лікарськими препаратами, і скорочення кількості ускладнень, пов'язаних із ожирінням, в тому числі судинних захворювань (коронарна хвороба серця, інсульт, захворювання периферичних судин, ішемічна реперфузія тощо), гіпертензії, початкової стадії діабету типу II, гіперліпідемії, хвороб кістково-м'язової системи. Всі терапевтичні способи, фармацевтичні композиції, набори й інші подібні варіанти здійснення, опис яких наведений у цьому документі, передбачають, що вживання терміну "аналоги глюкагону" охоплює всі його фармацевтично прийнятні солі або складні ефіри. Короткий опис фігур Фіг. 1 стовпчикова діаграма, яка відображає стабільність глюкагону Cys21малеімідоPEG5K, інкубованого при 37C протягом 24 год., 48 год., 72 год., 96 год., 144 год. і 166 год., відповідно. Фіг. 2 відображає дані, отримані за допомогою HPLC аналізу глюкагону Cys21малеімідоPEG5K при рН 5, інкубованого при 37C протягом 24 год., 72 год. або 144 год., відповідно. Фіг. 3 відображає дані, які показують рецептор-опосередковане індукування цАМФ аналогами глюкагону. Конкретніше, на Фіг. 3 порівнюється індукування глюкагонового рецептора аналогами глюкагону E16, K20 , E15, E16 , E16, K20 , E15, E16 , E16 і Gluc-NH2 . Фіг. 4A і Фіг. 4B відображають дані, які показують рецептор-опосередковане індукування цАМФ аналогами глюкагону. Конкретніше, на Фіг. 4A порівнюється індукування глюкагонового рецептора аналогами глюкагону Gluc-NH2 , E16 Gluc-NH2 , E3, E16 Gluc-NH2 , Orn3, E16 Gluc-NH2 і Nle3, E16 Gluc-NH2 , в порівнянні з нативним глюкагоном , в той час як на Фіг. 4B порівнюється індукування GLP-1-рецептора аналогами глюкагону Gluc-NH2 , E16 Gluc-NH2 , E3, E16 Gluc-NH2 , Orn3, E16 Gluc-NH2 і Nle3, E16 Gluc-NH2 , в порівнянні з нативним GLP-1 . Фіг. 5A і Фіг. 5B відображають дані, які показують рецептор-опосередковане індукування цАМФ аналогами глюкагону. Конкретніше, на Фіг. 5A порівнюється індукування глюкагонового рецептора аналогами глюкагону (Е16, К20 Gluc-NH2 (5 нМ, концентрований розчин), Е15, E16 Gluc-NH2 (5 нМ, концентрований розчин), E16, К20 Gluc-NH2 (10 нМ, концентрований розчин), Е15, Е16 Gluc-NH2 (10 нМ, концентрований розчин) і E16 Gluc-NH2 ), в порівнянні з глюкагоном-NH2 ( ), в той час як на Фіг. 5B порівнюється індукування GLP-1-рецептора аналогами глюкагону (Е16, К20 Gluc-NH2 , Е15, E16 Gluc-NH2 і E16 Gluc-NH2 ), в порівнянні з GLP-1 ( ) і NH2-глюкагоном ( ). Фіг. 6A і Фіг. 6B відображають дані, які показують рецептор-опосередковане індукування цАМФ аналогами глюкагону. Конкретніше, на Фіг. 6A порівнюється індукування глюкагонового рецептора аналогами глюкагону (Gluc-NH2 , К12Е16-NH2-лактам , E16К20-NH2-лактам , К20Е24-NH2-лактам і Е24К28-NH2-лактам ), в порівнянні з глюкагоном ( ), в той час як на Фіг. 6B порівнюється індукування GLP-1-рецептора аналогами глюкагону (Gluc-NH2 , К12Е16NH2-лактам , E16К20-NH2 лактам , К20Е24-NH2-лактам і Е24К28-NH2-лактам ), в порівнянні з GLP-1 ( ). Фіг. 7A і Фіг. 7B відображають дані, що показують рецептор-опосередковане індукування цАМФ аналогами глюкагону. Конкретніше, на Фіг. 7A порівнюється індукування глюкагонового 8 UA 104842 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 рецептора аналогами глюкагону (Gluc-NH2 , E16 Gluc-NH2 , K12, E16 Gluc-NH2-лактам , E16, К20 Gluc-NH2 і Е16, К20 Gluc-NH2-лактам ), в порівнянні з глюкагоном ( ), в той час як на Фіг. 7B порівнюється індукування GLP-1-рецептора аналогами глюкагону (Gluc-NH2 , Е16 Gluc-NH2 , K12, E16 Gluc-NH2-лактам , E16, К20 Gluc-NH2 і E16, К20 Gluc-NH2-лактам ), в порівнянні з GLP-1 ( ). Фіг. 8A-8F відображають дані, які показують рецептор-опосередковане індукування цАМФ аналогами глюкагону на глюкагоновому рецепторі (Фіг. 8A, Фіг. 8C і Фіг. 8E) або на GLP-1рецепторі (Фіг. 8B, Фіг. 8C і Фіг. 8F), де hE – гомоглутамінова кислота і hC – гомоцистеїнова кислота. Фіг. 9A і Фіг. 9B: відображають дані, які показують рецептор-опосередковане індукування цАМФ аналогами глюкагону GLP-1 (17-26), де амінокислоти в положеннях 17-26 нативного глюкагону (послідовність SEQ ID NO: 1) були замінені амінокислотами положень 17-26 нативного GLP-1 (послідовність SEQ ID NO: 50). Конкретніше, на Фіг. 9A порівнюється індукування глюкагонового рецептора сконструйованими аналогами глюкагону GLP-1 (17-26), а на Фіг. 9В порівнюється індукування GLP-1-рецептора сконструйованими аналогами глюкагону GLP-1 (17-26). На Фіг. 10A-E показані діаграми, які відображають in vivo дані, що виявляють здатність глюкагонових пептидів, які відповідають цьому винаходу, ініціювати зниження маси мишами, яким підшкірним шляхом були введені вказані кількості відповідних сполук. Ідентифікатори послідовностей для глюкагонового пептиду, перелічені на Фіг. 10A-10E, виглядають таким чином, для Фіг. 10A: химера 2 Aib2 C24 40K PEG (SEQ ID NO: 486), Aib2 C24 химера 2 40K лактам (SEQ ID NO: 504) і Aib2 E16 K20 Gluc-NH2 Lac 40K (SEQ ID NO: 528); Фіг. 10B: Aib2 C24 Chi 2 лактам 40K (SEQ ID NO: 504), DMIA1 C24 Chi 2 лактам 40K (SEQ ID NO: 505), химера 2 DMIA1 C24 40K (SEQ ID NO: 519) і химера 2 Aib2 C24 40K (SEQ ID NO: 486), де цифра в кінці послідовності означає використане дозування, 70 нмоль/кг або 350 нмоль/кг; Фіг. 10C: AIB2 без лактаму C24 40K (SEQ ID NO: 504), AIB2 E16 K20 без лактаму C24 40K (SEQ ID NO: 528), DMIA1 E16 K20 без лактаму C24 40K (SEQ ID NO: 510), DMIA1 E16 K20 без лактаму CEX 40K (SEQ ID NO: 513) і DMIA1 E16 K20 без лактаму CEX 40K (SEQ ID NO: 529); Фіг. 10D: AIB2 без лактаму C24 40K (SEQ ID NO: 504), AIB2 E16 K20 без лактаму C24 40K (SEQ ID NO: 528), DMIA1 E16 K20 без лактаму C24 40K (SEQ ID NO: 510) і DMIA1 E16 K20 без лактаму/Cex C24 40K (SEQ ID NO: 513), де цифра в кінці послідовності означає використане дозування, 14 нмоль/кг/тиждень або 70 нмоль/кг/тиждень; Фіг. 10E: AIB2 без лактаму C24 40K (SEQ ID NO: 486), Chi 2 AIB2 C24 CEX 40K (SEQ ID NO: 533), AIB2 E16 A18 K20 C24 40K (SEQ ID NO: 492), AIB2 без лактаму CEX G29 C40 40K (SEQ ID NO: 488), AIB2 без лактаму CEX C40 C41-2 (SEQ ID NO: 532), AIB2 без лактаму CEX C24 C40-2 (SEQ ID NO: 531) і AIB2 без лактаму C24 60K (SEQ ID NO: 498), де позначення 40К або 60К означає молекулярну масу поліетиленгліколевого ланцюга, приєднаного до глюкагонового пептиду. Докладний опис Визначення В описі і формулі винаходу буде вживатися така термінологія, яка відповідає визначенням, наведеним нижче. Термін "фармацевтично прийнятний носій", вживаний в цьому описі, охоплює будь-який зі звичайних фармацевтичних носіїв, таких як забуферений фосфатом сольовий розчин, вода, емульсії, такі як емульсія масла у воді або емульсія води в маслі, і зволожувальні засоби різних типів. Згаданий термін охоплює також будь-який з агентів, схвалених органом регулювання федерального уряду США або наведених в Фармакопеї США для застосування на тваринах, включаючи людей. Термін "фармацевтично прийнятна сіль", вживаний в цьому описі, означає солі сполук, які зберігають біологічну активність початкової сполуки і які не є небажаними ні в біологічному, ні в інших відношеннях. Багато які сполуки, розкриті в цьому описі, здатні утворювати кислі і/або основні солі завдяки присутності аміногруп і/або карбоксильних груп або груп, до них подібних. Фармацевтично прийнятні солі з основами можуть бути отримані з неорганічних і органічних основ. До числа солей, похідних неорганічних основ, належать (тільки як приклад) солі натрію, калію, літію, амонію, кальцію і магнію. До числа солей, похідних органічних основ, належать (але ними не обмежуються) солі первинних, вторинних і третинних амінів. Фармацевтично прийнятні солі з кислотами можуть бути одержані з неорганічних і органічних кислот. До числа солей, похідних неорганічних кислот, належать солі хлористоводневої кислоти, бромистоводневої кислоти, сірчаної кислоти, азотної кислоти, фосфорної кислоти тощо. До числа солей, похідних органічних кислот, належать солі оцтової кислоти, пропіонової кислоти, гліколевої кислоти, піровіноградної кислоти, щавлевої кислоти, 9 UA 104842 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 яблучної кислоти, малонової кислоти, бурштинової кислоти, малеїнової кислоти, фумарової кислоти, винної кислоти, лимонної кислоти, бензойної кислоти, коричної кислоти, мигдалевої кислоти, метансульфонової кислоти, етансульфонової кислоти, п-толуолсульфонової кислоти, саліцилової кислоти тощо. Термін "лікування", вживаний в цьому описі, охоплює профілактику певного розладу або стану або полегшення важкості симптомів, пов'язаних із певним розладом або станом і/або запобігання або ліквідацію згаданих симптомів. Наприклад, термін "лікування діабету", вживаний в цьому описі, буде загалом відноситися до зміни рівня глюкози в крові в напрямі нормального рівня і може включати підвищення або зниження рівня глюкози в крові, в залежності від конкретної ситуації. Визначення "ефективна" кількість або "терапевтично ефективна кількість" глюкагонового пептиду, вживане в цьому описі, означає нетоксичну, але достатню кількість пептиду для забезпечення досягнення бажаного ефекту. Наприклад, одним із бажаних ефектів було б запобігання або лікування гіпоглікемії, визначуваної, наприклад, за підвищенням рівня глюкози в крові. Альтернативним бажаним ефектом для аналогів співагоністів, розкритих в цьому описі, було б включення лікування гіперглікемії, визначуваної, наприклад, за незначним відхиленням рівня глюкози в крові від нормального, або ініціювання зниження маси тіла/попередження приросту маси тіла, визначуване, наприклад, за зменшенням маси тіла, або запобігання чи зниження приросту маси тіла, або нормалізація розподілення жирового компонента тіла. Кількість, яка є "ефективною", буде змінюватися від суб'єкта до суб'єкта в залежності від віку і загального стану індивіда, способу введення тощо. Таким чином, не завжди можливо визначити точну "ефективну кількість". Однак, відповідна "ефективна" кількість в будь-якому окремому випадку може бути визначена середнім фахівцем в цій галузі із використанням загальноприйнятої практики експериментування. Термін "парентерально" означає не через травний тракт, а яким-небудь іншим шляхом, наприклад, підшкірним, внутрішньом'язовим, інтраспінальним або внутрішньовенним. Термін "очищений" і подібні терміни, вживані в цьому описі, стосуються виділення молекули або сполуки в формі, яка є по суті вільною від домішок, які, як правило, зв'язуються з молекулою або сполукою в нативному або природному оточенні. Термін "очищений", вживаний в цьому описі, не вимагає абсолютної чистоти; цей термін, швидше, вживається як відносне визначення. Словосполучення "очищений поліпептид" вживається тут для опису поліпептиду, який був відділений від інших сполук, в тому числі (але без обмеження) від молекул нуклеїнових кислот, ліпідів і вуглеводів. Термін "виділений" означає видалення еталонного матеріалу з його природного оточення (наприклад, природного оточення, якщо він зустрічається в природних умовах). Наприклад, полінуклеотид, який природно зустрічається, присутній в живій тварині, не є виділеним, але той самий полінуклеотид, відділений від певної частини або всіх співіснуючих в природній системі матеріалів, є виділеним. Термін "пептид", вживаний в цьому описі, означає послідовність з 3 або більше амінокислот, як правило, менше ніж 50 амінокислот, де згадані амінокислоти є природними або штучними амінокислотами. Штучні амінокислоти означають амінокислоти, які не зустрічаються in vivo в природних умовах, але які, проте, можуть бути включені в пептидні структури, опис яких наведений у цьому документі. Терміни "поліпептид" і "білок", застосовувані в цьому описі, являють собою терміни, які вживаються взаємозамінно для позначення полімеру амінокислот, незалежно від довжини згаданого полімеру. Довжина поліпептидних і білкових полімерів, як правило, перевершує довжину "пептидів". Словосполучення "глюкагоновий пептид", вживане в цьому описі, означає будь-який пептид, який містить або амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 1 або будь-який аналог амінокислотної послідовності SEQ ID NO: 1, включаючи заміни амінокислот, додання, делеції або посттрансляційні модифікації (наприклад, метилування, ацилювання, убіквітування, внутрішньомолекулярне ковалентне сполучання, таке як утворення лактамних містків, пегілування тощо) пептиду, де згаданий аналог стимулює активність глюкагонового або GLP-1рецептора, що визначається, наприклад, за рівнем продукування цАМФ за допомогою аналізу, опис якого наведений в Прикладі 14. Словосполучення "агоніст глюкагону" означає комплексну сполуку, яка містить глюкагоновий пептид, який стимулює активність глюкагонового рецептора, що визначається, наприклад, за рівнем продукування цАМФ за допомогою аналізу, опис якого наведений в Прикладі 14. Словосполучення "аналог агоніста глюкагону", вживане в цьому описі, означає глюкагоновий пептид, який містить послідовність, вибрану з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 10 UA 104842 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14 і SEQ ID NO: 15, або аналог такої послідовності, яка була модифікована з включенням однієї або декількох консервативних амінокислотних замін в одному або декількох положеннях 2, 5, 7, 10, 11, 12, 13, 14, 17, 18, 19, 20, 21, 24, 27, 28 або 29. Термін "модифікація" амінокислоти, вживаний в цьому описі, означає заміну, додання або делецію амінокислоти і охоплює заміну будь-якої з 20 амінокислот або додання будь-якої з 20 амінокислот, які звичайно входять до складу людських білків, а також атипових або штучних амінокислот. Всі посилання в описі на конкретні номери положень амінокислоти (наприклад, положення 28) відносяться до амінокислоти в цьому положенні в нативному глюкагоні (послідовність SEQ ID NO: 1) або до положення відповідної амінокислоти в будь-якому з його аналогів. Наприклад, посилання в описі на "положення 28" буде означати відповідне положення 27 для аналога глюкагону, в якому перша амінокислота послідовності SEQ ID NO: 1 була видалена. Подібним чином, посилання в описі на "положення 28" буде означати відповідне положення 29 для аналога глюкагону, у якого перед N-кінцем послідовності SEQ ID NO: 1 була додана одна амінокислота. До числа наявних на ринку джерел атипових амінокислот належать компанія Sigma-Aldrich (Milwaukee, штат Вісконсін), компанія ChemPep Inc. (Miami, штат Флоріда) і компанія Genzyme Pharmaceuticals (Cambridge, штат Массачусетс). Атипові амінокислоти можуть бути закуплені від комерційних постачальників, синтезовані de novo, хімічно модифіковані або одержані з інших амінокислот. Словосполучення "співагоніст глюкагону", вживане в цьому описі, означає глюкагоновий пептид, який виявляє активність на глюкагоновому рецепторі, рівень якої становить щонайменше від приблизно 10 % до приблизно 500 % або більше в порівнянні з нативним глюкагоном, і який також виявляє активність на GLP-1-рецепторі, рівень якої становить щонайменше від приблизно 10 % до приблизно 200 % або більше в порівнянні з нативним GLP1. Словосполучення "молекула співагоніста глюкагону/GLP-1", вживане в цьому описі, означає молекулу, яка виявляє активність на глюкагоновому рецепторі, рівень якої становить щонайменше приблизно 10 % в порівнянні з нативним глюкагоном, і яка також виявляє активність на GLP-1-рецепторі, рівень якої становить щонайменше приблизно 10 % в порівнянні з нативним GLP-1. Словосполучення "нативний глюкагон", вживане в цьому описі, означає пептид, який містить послідовність SEQ ID NO: 1; словосполучення "нативний GLP-1" являє собою узагальнюючий термін, який означає амід GLP-1(7-36) (який містить послідовність SEQ ID NO: 52), кислоту GLP1(1-37) (яка містить послідовність SEQ ID NO: 50) або суміш двох цих сполук. Загальне посилання в цьому описі на "глюкагон" або "GLP-1", при відсутності будь-яких додаткових визначень, означає нативний глюкагон або нативний GLP-1, відповідно. Термін "заміна" амінокислоти, вживаний в цьому описі, означає заміну одного залишку амінокислоти іншим залишком амінокислоти. Словосполучення "консервативна заміна амінокислот", вживане в цьому описі, визначається як заміна в межах однієї з п'яти наведених нижче груп: I. Невеликі аліфатичні, неполярні або злегка полярні залишки: Ala, Ser, Thr, Pro, Gly; II. Полярні, негативно заряджені залишки і їхні аміди і складні ефіри: Asp, Asn, Glu, Gln, цистеїнова кислота і гомоцистеїнова кислота; III. Полярні, позитивно заряджені залишки: His, Arg, Lys; орнітин (Orn); IV. Великі аліфатичні, неполярні залишки: Met, Leu, Ile, Val, Cys, норлейцин (Nle), гомоцистеїн; V. Великі ароматичні залишки: Phe, Tyr, Trp, ацетилфенілаланін. Узагальнююче словосполучення "поліетиленгліколевий ланцюг" або "PEG ланцюг", вживане в цьому описі, означає суміші конденсаційних полімерів етиленоксиду і води, у вигляді розгалуженого або нерозгалуженого ланцюга, представленого загальною формулою H(OCH2CH2)nOH, де n дорівнює щонайменше 9. При відсутності будь-яких додаткових визначень, згадане словосполучення означає полімери етиленгліколю з усередненим значенням молекулярної маси, вибраним в межах від 500 Да до 40000 Да. Словосполучення "поліетиленгліколевий ланцюг" або "PEG ланцюг" вживається в поєднанні з числовим індексом для позначення його приблизної середньої молекулярної маси. Наприклад, PEG-5000 означає поліетиленгліколевий ланцюг, який має усереднене значення молекулярної маси приблизно 5000 Да. 11 UA 104842 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Термін "пегільований" і подібні терміни, вживані в цьому описі, стосуються сполуки, яка була модифікована в порівнянні з її нативним станом шляхом приєднання до згаданої сполуки поліетиленгліколевого ланцюга. "Пегільований глюкагоновий пептид" являє собою глюкагоновий пептид, який має поліетиленгліколевий ланцюг, ковалентно приєднаний до згаданого глюкагонового пептиду. Загальне посилання на пептид, яке вживається в цьому описі, стосується пептидів, які мають модифіковані аміно- і карбоксильні кінці. Наприклад, амінокислотний ланцюг, який містить амідну групу замість кінцевої карбоксильної кислоти, визначається амінокислотною послідовністю, яка означає стандартні амінокислоти. Термін "лінкер", вживаний в цьому описі, означає зв'язок, молекулу або групу молекул, яка сполучає дві окремі складові одна з одною. Лінкери можуть визначати оптимальне просторове розміщення двох складових або ж можуть додатково забезпечувати лабільний зв'язок, який уможливлює взаємне розділення двох складових. До числа лабільних зв'язків належать фоторозщеплювані групи, нестійкі до впливу кислот групи, нестійкі до впливу основ групи і розщеплювані ферментами групи. Термін "димер", вживаний в цьому описі, означає комплексну сполуку, яка включає дві субодиниці, ковалентно приєднані одна до іншої за допомогою лінкера. Термін "димер", у разі його вживання без яких-небудь визначень, означає як гомодимери, так і гетеродимери. Гомодимер містить дві ідентичні субодиниці, в той час як гетеродимер містить дві субодиниці, які розрізнюються, незважаючи на те, що дві згадані субодиниці є по суті подібними одна до іншої. Словосполучення "заряджена амінокислота", вживане в цьому описі, означає амінокислоту, яка містить бічний ланцюг, негативно заряджений (тобто депротонований) або позитивно заряджений (тобто протонований), у водному розчині при фізіологічному рН. Наприклад, до числа негативно заряджених амінокислот належать аспарагінова кислота, глутамінова кислота, цистеїнова кислота, гомоцистеїнова кислота і гомоглутамінова кислота, в той час як до числа позитивно заряджених амінокислот належать аргінін, лізин і гістидин. До заряджених амінокислот належать заряджені амінокислоти з числа 20 амінокислот, які звичайно виявляються в людських білках, а також атипові або штучні амінокислоти. Словосполучення "кисла амінокислота", вживане в цьому описі, означає амінокислоту, яка містить другу кислу складову, включаючи, наприклад, карбоксильну або сульфокислотну групи. Приклади здійснення Цей винахід пропонує глюкагонові пептиди з підвищеною або зниженою активністю на глюкагоновому рецепторі, GLP-1-рецепторі або на обох рецепторах. Цей винахід пропонує також глюкагонові пептиди із зміненою вибірковістю відносно глюкагонового рецептора, в порівнянні з GLP-1-рецептором. Підвищена активність на глюкагоновому рецепторі забезпечується модифікуванням амінокислоти в положенні 16 нативного глюкагону (послідовність SEQ ID NO: 1), як описано в даному документі. Знижена активність на глюкагоновому рецепторі забезпечується, наприклад, модифікуванням амінокислоти в положенні 3, як описано в даному документі. Підвищена активність на GLP-1-рецепторі забезпечується шляхом заміни карбоксильної групи C-кінцевої амінокислоти нейтральною за зарядом групою, такою як амід або складний ефір. Підвищена активність на GLP-1-рецепторі забезпечується за допомогою модифікацій, які уможливлюють утворення внутрішньомолекулярного містка між бічними ланцюгами двох амінокислот, розділених трьома проміжними амінокислотами, наприклад, в положеннях 12 і 16, або 16 і 20, або 20 і 24, як описано в даному документі. Підвищена активність на GLP-1-рецепторі забезпечується модифікуванням амінокислоти в положенні 20, як описано в даному документі. Підвищена активність на GLP-1-рецепторі пропонується у аналогів глюкагону, які містять Cкінцевий подовжувальний сегмент (послідовність SEQ ID NO: 26). Активність на GLP-1рецепторі у таких аналогів, що містять послідовність SEQ ID NO: 26, може додатково підвищуватися шляхом модифікування амінокислоти в положенні 18, 28 або 29 або в положенні 18 і 29, як описано в даному документі. Відновлення активності на глюкагоновому рецепторі, яка була знижена модифікаціями амінокислот в положеннях 1и2, забезпечується за допомогою ковалентного зв'язку між бічними ланцюгами двох амінокислот, розділених трьома проміжними амінокислотами, наприклад, в положеннях 12 і 16, або 16 і 20, або 20 і 24, як описано в даному документі. Додаткове незначне підвищення активності на GLP-1-рецепторі забезпечується за 12 UA 104842 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 допомогою модифікування амінокислоти в положенні 10, якою є Trp. Будь-яка з описаних вище модифікацій, яка підвищує або знижує активність на глюкагоновому рецепторі і яка підвищує активність на GLP-1-рецепторі, може здійснюватися окремо або в комбінації. Будь-яка з описаних вище модифікацій може також поєднуватися з іншими модифікаціями, які забезпечують отримання інших необхідних властивостей, таких як підвищена розчинність, і/або стабільність, і/або тривалість дії. У альтернативному варіанті будьяка з описаних вище модифікацій може поєднуватися з іншими модифікаціями, які не надають істотного впливу на розчинність, стабільність або активність. До прикладів модифікацій належать (але ними не обмежуються) наведені нижче: (A) Поліпшення розчинності, наприклад, шляхом введення однієї, двох, трьох або більше заряджених амінокислот в C-кінцеву частину нативного глюкагону, відповідно до варіанта, якому віддається перевага, в C-кінцевому напрямі відносно положення 27. Така заряджена амінокислота може бути введена шляхом заміни нативної амінокислоти зарядженою амінокислотою, наприклад, в положеннях 28 або 29, або в альтернативному варіанті шляхом додання зарядженої амінокислоти, наприклад, після положення 27, 28 або 29. У ілюстративних варіантах здійснення одна, дві, три або всі заряджені амінокислоти мають негативний заряд. У інших варіантах здійснення одна, дві, три або всі заряджені амінокислоти є позитивно зарядженими. Такі модифікації підвищують розчинність, наприклад, забезпечують щонайменше 2-кратне, 5-кратне, 10-кратне, 15-кратне, 25-кратне, 30-кратне або більше збільшення розчинності в порівнянні з нативним глюкагоном, при заданому рН в межах від приблизно 5,5 до 8, наприклад, рН 7, при визначенні через 24 год. при температурі 25C. (B) Підвищення розчинності і збільшення тривалості дії або періоду напіввиведення з плазми за допомогою додання гідрофільної складової, такої як поліетиленгліколевий ланцюг, як описано в даному документі, наприклад, в положенні 16, 17, 20, 21, 24 або 29 або на C-кінці пептиду. (C) Підвищення стабільності модифікуванням аспарагінової кислоти в положенні 15, наприклад, шляхом делеції або заміни глутаміновою кислотою, гомоглутаміновою кислотою, цистеїновою кислотою або гомоцистеїновою кислотою. Такі модифікації можуть зменшити розкладання або розщеплення при рН в межах від 5,5 до 8, наприклад, із збереженням щонайменше 75 %, 80 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % або 99 % початкового пептиду через 24 год. при температурі 25C. (D) Підвищення стабільності модифікуванням амінокислоти в положенні 27, наприклад, шляхом заміни метіоніном, лейцином або норлейцином. Такі модифікації можуть зменшити окиснювальну деструкцію. (E) Підвищення стійкості до розщеплення дипептидилпептидазою IV (DPP IV) модифікуванням амінокислоти в положенні 1 або положенні 2, як описано в даному документі. (F) Консервативні заміни, додання або делеції, які не надають негативного впливу на активність, наприклад, консервативні заміни в одному або декількох положеннях 2, 5, 7, 10, 11, 12, 13, 14, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 24, 27, 28 або 29; або делеція амінокислоти 29, факультативно приєднаної до C-кінцевого аміду або складного ефіру замість C-кінцевої карбоксильної групи; (G) Додання C-кінцевого подовжувального сегмента, як описано в даному документі; (H) Гомодимеризація або гетеродимеризація, як описано в даному документі. У ілюстративних варіантах здійснення глюкагоновий пептид може містити сумарно 1, до 2, до 3, до 4, до 5, до 6, до 7, до 8, до 9 або до 10 модифікацій амінокислот, в порівнянні з послідовністю нативного глюкагону. У одному з варіантів здійснення, розкритих в цьому описі, запропонований агоніст глюкагону, модифікований в порівнянні з пептидом дикого типу (His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-SerAsp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr (послідовність SEQ ID NO: 1)) для підвищення активності пептиду на глюкагоновому рецепторі. Несподівано заявники виявили, що серин, який займає положення 16 нативного глюкагону (послідовність SEQ ID NO: 1), може бути замінений вибраною кислою амінокислотою для підвищення активності глюкагону, з точки зору його здатності стимулювати синтез цАМФ у випробуванні in vitro моделі (дивися Приклад 14). Конкретніше, ця заміна підвищує активність аналога на глюкагоновому рецепторі щонайменше в 2 рази, 4 рази, 5 разів і до 10 разів. Ця заміна також підвищує активність аналога на GLP-1-рецепторі щонайменше в 5 разів, 10 разів або 15 разів в порівнянні з нативним глюкагоном, однак вибірність зберігається відносно глюкагонового рецептора в порівнянні з GLP-1-рецептором. Відповідно до одного з варіантів здійснення залишок серину в положенні 16 нативного глюкагону замінюється амінокислотою, вибраною з групи, яку складають глутамінова кислота, глутамін, гомоглутамінова кислота, гомоцистеїнова кислота, треонін або гліцин. Відповідно до 13 UA 104842 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 іншого варіанта здійснення залишок серину в положенні 16 нативного глюкагону замінюється амінокислотою, вибраною з групи, яку складають глутамінова кислота, глутамін, гомоглутамінова кислота і гомоцистеїнова кислота, та в ще одному з варіантів здійснення залишок серину замінюється глутаміновою кислотою. В одному з варіантів здійснення глюкагоновий пептид, який має підвищену специфічність відносно глюкагонового рецептора, містить пептид послідовностей SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 або аналог агоніста глюкагону, де карбоксикінцева амінокислота зберігає свою нативну карбоксильну групу. Відповідно до одного з варіантів здійснення пропонується агоніст глюкагону, який містить послідовність NH2-His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Arg-Arg-AlaGln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr-COOH (послідовність SEQ ID NO: 10), де пептид виявляє приблизно в п'ять разів більш високу активність на глюкагоновому рецепторі в порівнянні з нативним глюкагоном, як визначається in vitro аналізом цАМФ Прикладу 14. Глюкагонові пептиди, які відповідають цьому винаходу, можуть бути додатково модифіковані для поліпшення розчинності і стабільності пептиду у водних розчинах при фізіологічному рН з одночасним збереженням високої біологічної активності в порівнянні з нативним глюкагоном. Відповідно до одного з варіантів здійснення передбачається, що введення гідрофільних груп в положеннях 17, 21 і 24 пептиду послідовності SEQ ID NO: 9 або послідовності SEQ ID NO: 10, поліпшить розчинність і стабільність високоефективного аналога глюкагону в розчинах, які мають фізіологічний рН. Введення таких груп також збільшує тривалість дії, наприклад, оскільки визначається більш тривалим періодом напіввиведення із системи кровообігу. До числа відповідних гідрофільних складових належать будь-які водорозчинні полімери, відомі в цій галузі, включаючи поліетиленгліколь, гомо- або співполімери поліетиленгліколю, монометилзаміщений полімер поліетиленгліколю (mPEG) або поліоксіетиленгліцерол (POG). Відповідно до одного з варіантів здійснення гідрофільна група містить поліетиленгліколевий (PEG) ланцюг. Конкретніше, в одному з варіантів здійснення глюкагоновий пептид містить послідовність SEQ ID NO: 6 або послідовність SEQ ID NO: 7, де поліетиленгліколевий ланцюг ковалентно приєднаний до бічних ланцюгів амінокислот, присутніх в положеннях 21 і 24 глюкагонового пептиду, і карбоксикінцева кислота пептиду має карбоксильну групу. Цим описом охоплюються також інші кон'югати, в яких глюкагонові пептиди, які відповідають цьому винаходу, приєднані, факультативно за допомогою ковалентного зв'язку і факультативно за допомогою лінкера, до кон'югату. Приєднання може здійснюватися за допомогою ковалентних хімічних зв'язків, фізичних сил, наприклад, електростатичних, водневих, іонних, ван-дер-ваальсових, гідрофобних або гідрофільних взаємодій. Можуть застосовуватися різні системи нековалентного сполучення, в тому числі біотин-авідин, ліганд/рецепторі, фермент/субстрат, нуклеїнова кислота/білок, який зв'язує нуклеїнову кислоту, ліпід/білок, який зв'язує ліпід, партнери молекули клітинної адгезії або ж будь-які сполучні партнери або їх фрагменти, які мають взаємну спорідненість. До прикладів кон'югатов належать (але ними не обмежуються) гетерологічний пептид або поліпептид (включаючи, наприклад, білок плазми), засіб спрямованої доставки, імуноглобулін або його частина (наприклад, варіабельна ділянка, гіперваріабельна ділянка або Fc-фрагмент), діагностична мітка, така як радіоізотоп, флуорофор або ензиматична мітка, полімер, в тому числі водорозчинні полімери, або інші терапевтичні або діагностичні агенти. У одному з варіантів здійснення пропонується кон'югат, який містить глюкагоновий пептид, що відповідає цьому винаходу, і білок плазми, де білок плазми вибраний з групи, яку складають альбумін, трансферин, фібриноген і глобуліни. В одному з варіантів здійснення білковою складовою плазми кон'югата є альбумін або трансферин. У деяких варіантах здійснення лінкер містить ланцюг атомів довжиною від 1 атома до приблизно 60 атомів, від 1 атома до 30 атомів або більше, від 2 атомів до 5 атомів, від 2 атомів до 10 атомів, від 5 атомів до 10 атомів або від 10 атомів до 20 атомів. У деяких варіантах здійснення всі атоми ланцюга є атомами вуглецю. У деяких варіантах здійснення атоми ланцюга в каркасі лінкера вибрані з групи, яка складається з C, O, N та S. Атоми ланцюга і лінкери можуть бути вибрані відповідно до їх очікуваної розчинності (гідрофільності), з метою отримання більш розчинного кон'югата. У деяких варіантах здійснення лінкер містить функціональну групу, яка зазнає розщеплення ферментом, іншим каталізатором або гідролітичними умовами, які виявляються в тканині-мішені, органі або клітині. У деяких варіантах здійснення довжина лінкера є достатньою для зниження потенціалу стеричної перешкоди. Якщо лінкер являє собою ковалентний зв'язок або пептидильний зв'язок, а кон'югат є поліпептидом, згаданий кон'югат загалом може бути гібридним білком. Такі пептидильні лінкери можуть мати будь-яку довжину. Варіанти лінкерів мають в довжину від приблизно 1 амінокислоти до 50 амінокислот, від 5 амінокислот до 50 амінокислот, від 3 14 UA 104842 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 амінокислот до 5 амінокислот, від 5 амінокислот до 10 амінокислот, від 5 амінокислот до 15 амінокислот або від 10 амінокислот до 30 амінокислот. У альтернативному варіанті такі гібридні білки можуть бути одержані методами рекомбінантних ДНК, відомих середньому фахівцю в цій галузі. У наведеному описі розкриті також глюкагонові гібридні пептиди або білки, де другий пептид або поліпептид був сполучений з кінцем, наприклад, карбоксильним кінцем, глюкагонового пептиду. Конкретніше, гібридний глюкагоновий пептид може містити агоніст глюкагону послідовностей SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 9 або SEQ ID NO: 10, який додатково містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 26 (GPSSGAPPPS), послідовність SEQ ID NO: 27 (KRNRNNIA) або послідовність SEQ ID NO: 28 (KRNR), приєднану до амінокислоти 29 глюкагонового пептиду. В одному з варіантів здійснення амінокислотна послідовність SEQ ID NO: 26 (GPSSGAPPPS), послідовність SEQ ID NO: 27 (KRNRNNIA) або послідовність SEQ ID NO: 28 (KRNR) приєднується до амінокислоти 29 глюкагонового пептиду за допомогою пептидного зв'язку. Заявники встановили, що заміна у глюкагонових гібридних пептидів, які містять C-кінцевий подовжувальний пептид ексендину-4 (наприклад, послідовність SEQ ID NO: 26 або послідовність SEQ ID NO: 29), нативного залишку треоніну в положенні 29 гліцином, різко посилює активність на GLP-1-рецепторі. Ця амінокислотна заміна може застосовуватися в поєднанні з іншими модифікаціями, розкритими в цьому описі, для підвищення спорідненості аналогів глюкагону до GLP-1-рецептора. Наприклад, заміна T29G може комбінуватися з амінокислотними замінами S16E і N20K, факультативно з лактамним містком між амінокислотами 16 і 20, і факультативно з доданням поліетиленгліколевого ланцюга, як описано в даному документі. У одному з варіантів здійснення пропонується співагоніст глюкагонового/GLP-1-рецептора, який містить послідовність SEQ ID NO: 64. В одному з варіантів здійснення глюкагонова пептидна частина глюкагонового гібридного пептиду вибрана з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 і SEQ ID NO: 5, де поліетиленгліколевий ланцюг, у разі її присутності в положеннях 17, 21, 24, або в C-кінцевій амінокислоті, або в обох положеннях 21 і 24, вибирають в діапазоні від 500 Да до 40000 Да. Конкретніше, в одному з варіантів здійснення глюкагоновий пептидний сегмент вибраний з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8 і SEQ ID NO: 63, де поліетиленгліколевий ланцюг вибраний в діапазоні від 500 Да до 5000 Да. У одному з варіантів здійснення глюкагоновий пептид являє собою гібридний пептид, який містить послідовності SEQ ID NO: 55 і SEQ ID NO: 65, де пептид послідовності SEQ ID NO: 65 приєднаний до карбоксильного кінця послідовності SEQ ID NO: 55. Відповідно до одного з варіантів здійснення додаткова хімічна модифікація глюкагонового пептиду послідовності SEQ ID NO: 10 забезпечує підвищену активність на GLP-1-рецепторі до такої міри, коли відносні активності на глюкагоновому рецепторі і GLP-1-рецепторі виявляються фактично еквівалентними. Відповідно, в одному з варіантів здійснення пропонується співагоніст глюкагонового/GLP-1-рецептора, де кінцева амінокислота глюкагонових пептидів, які відповідають цьому винаходу, має амідну групу, замість карбоксильної групи, присутньої у нативної амінокислоти. Відносна активність аналога глюкагону на відповідних глюкагонових і GLP-1-рецепторах може регулюватися за допомогою додаткових модифікацій глюкагонового пептиду з одержанням аналогів, які виявляють від приблизно 40 % до приблизно 500 % або більше активності нативного глюкагону на глюкагоновому рецепторі і від приблизно 20 % до приблизно 200 % або більше активності нативного GLP-1 на GLP-1-рецепторі, наприклад, 50кратне, 100-кратне або більше збільшення в порівнянні з нормальною активністю глюкагону на GLP-1-рецепторі. У іншому варіанті здійснення пропонуються аналоги глюкагону, які виявляють активність співагоніста глюкагонового/GLP-1-рецептора, де внутрішньомолекулярний місток утворений між двома бічними ланцюгами амінокислот для стабілізації об'ємної структури карбоксильного кінця пептиду. Конкретніше, бічні ланцюги амінокислотних пар 12 і 16, 16 і 20, 20 і 24 або 24 і 28 приєднуються один до одного і, тим самим, стабілізують альфа-спіраль глюкагону. Два бічні ланцюги можуть бути сполучені один з іншим за допомогою водневих зв'язків, іонних взаємодій, таких як утворення сольових містків, або ж за допомогою ковалентних зв'язків. У деяких варіантах здійснення величина циклу або лінкера становить приблизно 8 атомів або приблизно 7-9 атомів. До числа прикладів складання пар амінокислот, здатних до ковалентного сполучення з утворенням линкерного містка із семи атомів, належать Orn-Glu (лактамний цикл); Lys-Asp (лактам) або гомосерин-гомоглутамін (лактон). До числа прикладів складання пар амінокислот, які можуть утворювати лінкер з восьми атомів, належать Lys-Glu (лактам); гомолізин-Asp (лактам); Orn-гомоглутамін (лактам); 4-аміно-Phe-Asp (лактам); або Tyr-Asp (лактон). До числа 15 UA 104842 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 прикладів складання пар амінокислот, які можуть утворювати лінкер з дев'яти атомів, належать гомолізин-Glu (лактам); Lys-гомоглутамін (лактам); 4-аміно-Phe-Glu (лактам); або Tyr-Glu (лактон). Будь-який з бічних ланцюгів цих амінокислот може додатково замінюватися додатковими хімічними групами доти, доки не руйнується об'ємна структура альфа-спіралі. Середній фахівець в цій галузі може передбачити альтернативне складання пар або альтернативні аналоги амінокислот, в тому числі хімічно модифіковані похідні, які могли б утворити стабілізуючу структуру подібного ж розміру і необхідної дії. Наприклад, дисульфідний місток гомоцистеїн-гомоцистеїн має в довжину 6 атомів і може зазнавати додаткового модифікування для отримання бажаного ефекту. Навіть без ковалентного приєднання, описане вище складання пар амінокислот або ж подібне складання пар, яке може передбачатися середнім фахівцем в цій галузі, може також забезпечити додаткову стабільність альфа-спіралі через нековалентні зв'язки, наприклад, шляхом утворення сольових містків або взаємодій водневих зв'язків. Додаткові варіанти здійснення включають наведене нижче складання пар, факультативно з лактамним містком: Glu в положенні 12 з Lys в положенні 16; нативний Lys в положенні 12 з Glu в положенні 16; Glu в положенні 16 з Lys в положенні 20; Lys в положенні 16 з Glu в положенні 20; Glu в положенні 20 з Lys в положенні 24; Lys в положенні 20 з Glu в положенні 24; Glu в положенні 24 з Lys в положенні 28; Lys в положенні 24 з Glu в положенні 28. Відповідно до одного з варіантів здійснення пропонується аналог глюкагону, який виявляє активність співагоніста глюкагонового/GLP-1-рецептора, де згаданий аналог містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48 і SEQ ID NO: 49. У одному з варіантів здійснення бічні ланцюги ковалентно сполучені між собою, а в іншому варіанті здійснення дві амінокислоти сполучені між собою з утворенням лактамного циклу. Величина лактамного циклу може змінюватися в залежності від довжини бічних ланцюгів амінокислот, і в одному з варіантів здійснення лактам утворюється шляхом приєднання бічних ланцюгів амінокислоти лізину до бічного ланцюга глутамінової кислоти. Порядок амідного зв'язку в лактамному циклі може змінюватися на зворотний (наприклад, лактамний цикл може бути утворений між бічними ланцюгами Lys 12 і Glu16 або в альтернативному варіанті між Glu12 і Lys16). Відповідно до одного з варіантів здійснення пропонується аналог глюкагону послідовності SEQ ID NO: 45, де щонайменше один лактамний цикл утворений між бічними ланцюгами амінокислотної пари, вибраної з групи, яку складають амінокислотні пари 12 і 16, 16 і 20, 20 і 24 або 24 і 28. У одному з варіантів здійснення пропонується співагоніст глюкагонового/GLP-1-рецептора, де згаданий співагоніст містить аналог глюкагонового пептиду послідовності SEQ ID NO: 20, де згаданий пептид містить внутрішньомолекулярний лактамний місток, утворений між положеннями 12 і 16 амінокислот або ж між положеннями 16 і 20 амінокислот. У одному з варіантів здійснення пропонується співагоніст глюкагонового/GLP-1-рецептора, який містить послідовність SEQ ID NO: 20, де внутрішньомолекулярний лактамний місток утворений між положеннями 12 і 16 амінокислот, між положеннями 16 і 20 амінокислот або ж між положеннями 20 і 24 амінокислот, і амінокислотою в положенні 29 є гліцин, де послідовність SEQ ID NO: 29 приєднана до Cкінцевої амінокислоти послідовності SEQ ID NO: 20. У іншому варіанті здійснення амінокислотою в положенні 28 є аспарагінова кислота. Розчинність глюкагонового пептиду послідовності SEQ ID NO: 20 може бути додатково поліпшена, наприклад, введенням однієї, двох, трьох або більше заряджених амінокислот в Cкінцеву частину глюкагонового пептиду послідовності SEQ ID NO: 20, відповідно до варіанта, якому віддається перевага, в C-кінцевому напрямі відносно положення 27. Така заряджена амінокислота може бути введена шляхом заміни нативної амінокислоти зарядженою амінокислотою, наприклад, в положеннях 28 або 29, або в альтернативному варіанті за допомогою додання зарядженої амінокислоти, наприклад, після положення 27, 28 або 29. У подальших варіантах здійснення одна, дві, три або всі заряджені амінокислоти є негативно зарядженими. У альтернативному варіанті розчинність може також бути підвищена за допомогою ковалентного приєднання гідрофільних складових, наприклад, поліетиленгліколю, до пептиду. Відповідно до одного з варіантів здійснення пропонується аналог глюкагону, який містить послідовність SEQ ID NO: 55, де згаданий аналог відрізняється від послідовності SEQ ID NO: 55 1-3 амінокислотами, вибраними з положень 1, 2, 3, 5, 7, 10, 11, 13, 14, 17, 18, 19, 21, 24, 27, 28 і 29, причому згаданий глюкагоновий пептид виявляє щонайменше 20 % активності нативного GLP-1 на GLP-1-рецепторі. Відповідно до одного з варіантів здійснення пропонується співагоніст глюкагонового/GLP-1 16 UA 104842 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 рецептора, який містить послідовність NH2-His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-TyrLeu-Xaa-Xaa-Arg-Arg-Ala-Xaa-Asp-Phe-Val-Xaa-Trp-Leu-Met-Xaa-Xaa-R (послідовність SEQ ID NO: 33), в якій Xaa в положенні 15 вибрана з групи амінокислот, яку складають Asp, Glu, цистеїнова кислота, гомоглутамінова кислота і гомоцистеїнова кислота, Xaa в положенні 16 вибрана з групи амінокислот, яку складають Ser, Glu, Gln, гомоглутамінова кислота і гомоцистеїнова кислота, Xaa в положенні 20 являє собою Gln або Lys, Xaa в положенні 24 являє собою Gln або Glu, Xaa в положенні 28 являє собою Asn, Lys або кислу амінокислоту, Xaa в положенні 29 являє собою Thr, Gly або кислу амінокислоту, R являє собою COOH або CONH2, за умови, що у випадку, якщо в положенні 16 знаходиться серин, то в положенні 20 знаходиться Lys, або в альтернативному варіанті у випадку, якщо в положенні 16 знаходиться серин, то в положенні 24 знаходиться Glu, а в положенні 20 або в положенні 28 знаходиться Lys. У одному з варіантів здійснення співагоніст глюкагонового/GLP-1-рецептора містить послідовність SEQ ID NO: 33, де амінокислотою в положенні 28 є аспарагінова кислота і амінокислотою в положенні 29 є глутамінова кислота. У іншому варіанті здійснення амінокислотою в положенні 28 є нативний аспарагін, амінокислотою в положенні 29 є гліцин і амінокислотна послідовність SEQ ID NO: 29 або послідовність SEQ ID NO: 65 ковалентно приєднана до карбоксильного кінця послідовності SEQ ID NO: 33. У одному з варіантів здійснення пропонується співагоніст, який містить послідовність SEQ ID NO: 33, де до карбоксильного кінця пептиду додана додаткова кисла амінокислота. У ще одному варіанті здійснення карбоксикінцева амінокислота аналога глюкагону має амід замість карбоксильної групи природної амінокислоти. У одному з варіантів здійснення аналог глюкагону містить послідовність, вибрану з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43 і SEQ ID NO: 44. Відповідно до одного з варіантів здійснення пропонується аналог глюкагонового пептиду послідовності SEQ ID NO: 33, де згаданий аналог відрізняється від послідовності SEQ ID NO: 33 1-3 амінокислотами, вибраними з положень 1, 2, 3, 5, 7, 10, 11, 13, 14, 17, 18, 19, 21 і 27, за умови, що у випадку, якщо амінокислотою в положенні 16 є серин, то в положенні 20 знаходиться лізин, або між амінокислотою в положенні 24 і будь-якою амінокислотою в положенні 20 або в положенні 28 утворений лактамний місток. Відповідно до одного з варіантів здійснення згаданий аналог відрізняється від послідовності SEQ ID NO: 33 1-3 амінокислотами, вибраними з положень 1, 2, 3, 21 і 27. У одному з варіантів здійснення аналог глюкагонового пептиду послідовності SEQ ID NO: 33 відрізняється від цієї послідовності 1-2 амінокислотами, або в одному з варіантів здійснення однією амінокислотою, вибраною з положень 1, 2, 3, 5, 7, 10, 11, 13, 14, 17, 18, 19, 21 і 27, за умови, що у випадку, якщо амінокислотою в положенні 16 є серин, то в положенні 20 знаходиться лізин, або між амінокислотою в положенні 24 і будь-якою амінокислотою в положенні 20 або в положенні 28 утворений лактамний місток. Відповідно до іншого варіанта здійснення пропонується відносно вибірковий агоніст GLP-1рецептора, який містить послідовність NH2-His-Ser-Xaa-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-TyrLeu-Xaa-Xaa-Arg-Arg-Ala-Xaa-Asp-Phe-Val-Xaa-Trp-Leu-Met-Xaa-Xaa-R (послідовність SEQ ID NO: 53), де Xaa в положенні 3 вибрана з групи амінокислот, яку складають Glu, Orn і Nle, Xaa в положенні 15 вибрана з групи амінокислот, яку складають Asp, Glu, цистеїнова кислота, гомоглутамінова кислота і гомоцистеїнова кислота, Xaa в положенні 16 вибрана з групи амінокислот, яку складають Ser, Glu, Gln, гомоглутамінова кислота і гомоцистеїнова кислота, Xaa в положенні 20 являє собою Glnабо Lys, Xaa в положенні 24 являє собою Gln або Glu, Xaa в положенні 28 являє собою Asn, Lys або кислу амінокислоту, Xaa в положенні 29 являє собою Thr, Gly або кислу амінокислоту, R являє собою COOH, CONH2, послідовність SEQ ID NO: 26 або послідовність SEQ ID NO: 29, за умови, що у випадку, якщо в положенні 16 знаходиться серин, то в положенні 20 знаходиться Lys, або в альтернативному варіанті у випадку, якщо в положенні 16 знаходиться серин, то в положенні 24 знаходиться Glu, а в положенні 20 або в положенні 28 знаходиться Lys. У одному з варіантів здійснення амінокислотою в положенні 3 є глутамінова кислота. У одному з варіантів здійснення кислою амінокислотою, заміненою в положенні 28 і/або 29, є аспарагінова кислота або глутамінова кислота. В одному з варіантів здійснення глюкагоновий пептид, в тому числі пептид-співагоніст, містить послідовність SEQ ID NO: 33, яка додатково містить додаткову кислу амінокислоту, додану до карбоксильного кінця пептиду. У іншому варіанті здійснення карбоксикінцева амінокислота аналога глюкагону має амід замість карбоксильної групи природної амінокислоти. Відповідно до одного з варіантів здійснення пропонується співагоніст глюкагонового/GLP-1рецептора, який містить модифікований глюкагоновий пептид, вибраний з групи, яку складають: NH2-His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Xaa-Xaa-Arg-Arg-Ala-Xaa-Asp-PheVal-Xaa-Trp-Leu-Met-Xaa-Xaa-R (послідовність SEQ ID NO: 34), де Xaa в положенні 15 вибрана з 17 UA 104842 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 групи амінокислот, яку складають Asp, Glu, цистеїнова кислота, гомоглутамінова кислота і гомоцистеїнова кислота, Xaa в положенні 16 вибрана з групи амінокислот, яку складають Ser, Glu, Gln, гомоглутамінова кислота і гомоцистеїнова кислота, Xaa в положенні 20 являє собою Gln або Lys, Xaa в положенні 24 являє собою Gln або Glu, Xaa в положенні 28 являє собою Asn, Asp або Lys, R являє собою COOH або CONH2, Xaa в положенні 29 являє собою Thr або Gly, R являє собою COOH, CONH2, послідовності SEQ ID NO: 26 або SEQ ID NO: 29, за умови, що у випадку, якщо в положенні 16 знаходиться серин, то в положенні 20 знаходиться Lys, або в альтернативному варіанті у випадку, якщо в положенні 16 знаходиться серин, то в положенні 24 знаходиться Glu, а в положенні 20 або в положенні 28 знаходиться Lys. У одному з варіантів здійснення R являє собою CONH2, Xaa в положенні 15 являє собою Asp, Xaa в положенні 16 вибрана з групи амінокислот, яку складають Glu, Gln, гомоглутамінова кислота і гомоцистеїнова кислота, кожна з Xaa в положеннях 20 і 24 являє собою Gln, Xaa в положенні 28 являє собою Asn або Asp і Xaa в положенні 29 являє собою Thr. У одному з варіантів здійснення кожна з Xaa в положеннях 15 і 16 являє собою Glu, кожна з Xaa в положеннях 20 і 24 являє собою Gln, Xaa в положенні 28 являє собою Asn або Asp, Xaa в положенні 29 являє собою Thr і R являє собою CONH2. Повідомлялося, що певні положення нативного глюкагонового пептиду можуть бути модифіковані зі збереженням принаймні певної частини активності початкового пептиду. Відповідно, заявники вважають, що одна або декілька амінокислот, що знаходяться в положеннях 2, 5, 7, 10, 11, 12, 13, 14, 17, 18, 19, 20, 21, 24, 27, 28 або 29 пептиду послідовності SEQ ID NO: 11 можуть бути замінені амінокислотою, яка відрізняється від кислоти, присутньої в нативному глюкагоновому пептиді, зі збереженням активності на глюкагоновому рецепторі. У одному з варіантів здійснення залишок метіоніну, присутній в положенні 27 нативного пептиду, замінений лейцином або норлейцином для запобігання окиснювальній деструкції згаданого пептиду. У іншому варіанті здійснення амінокислота в положенні 20 замінена Lys, Arg, Orn або цитруліном, і/або амінокислота в положенні 21 замінена Glu, гомоглутаміновою кислотою або гомоцистеїновою кислотою. У одному з варіантів здійснення пропонується аналог глюкагону послідовності SEQ ID NO: 20, де від 1 до 6 амінокислот, вибраних із положень 1, 2, 5, 7, 10, 11, 13, 14, 17, 18, 19, 21, 27, 28 або 29 аналога, відрізняються від відповідної амінокислоти послідовності SEQ ID NO: 1, за умови, що у випадку, якщо амінокислотою в положенні 16 є серин, то в положенні 20 знаходиться Lys, або в альтернативному варіанті у випадку, якщо в положенні 16 знаходиться серин, то в положенні 24 знаходиться Glu, а в положенні 20 або в положенні 28 знаходиться Lys. Відповідно до іншого варіанта здійснення пропонується аналог глюкагону послідовності SEQ ID NO: 20, де від 1 до 3 амінокислот, вибраних з положень 1, 2, 5, 7, 10, 11, 13, 14, 17, 18, 19, 20, 21, 27, 28 або 29 аналога, відрізняються від відповідної амінокислоти послідовності SEQ ID NO: 1. У іншому варіанті здійснення пропонується аналог глюкагону послідовностей SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 або SEQ ID NO: 11, де від 1 амінокислоти до 2 амінокислот, вибраних з положень 1, 2, 5, 7, 10, 11, 13, 14, 17, 18, 19, 20 або 21 аналога, відрізняються від відповідної амінокислоти послідовності SEQ ID NO: 1, та в ще одному варіанті здійснення від однієї до двох амінокислот, які відрізняються, являють собою консервативні амінокислотні заміни в порівнянні з амінокислотами, присутніми в послідовності нативного глюкагону (послідовність SEQ ID NO: 1). У одному з варіантів здійснення пропонується глюкагоновий пептид послідовностей SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14 або SEQ ID NO: 15, причому згаданий глюкагоновий пептид додатково містить одну, дві або три амінокислотні заміни в положеннях, вибраних із положень 2, 5, 7, 10, 11, 13, 14, 17, 18, 19, 20, 21, 27 або 29. У одному з варіантів здійснення заміни в положеннях 2, 5, 7, 10, 11, 13, 14, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 27 або 29 являють собою консервативні амінокислотні заміни. Відповідно до одного з варіантів здійснення пропонується співагоніст глюкагонового/GLP-1рецептора, який містить варіант послідовності SEQ ID NO: 33, де від 1 до 10 амінокислот варіанта, вибрані з положень 16, 17, 18, 20, 21, 23, 24, 27, 28 і 29, відповідно, відрізняються від відповідної амінокислоти послідовності SEQ ID NO: 1. Відповідно до одного з варіантів здійснення пропонується варіант послідовності SEQ ID NO: 33, причому згаданий варіант відрізняється від послідовності SEQ ID NO: 33 одною або декількома амінокислотними замінами, вибраними з групи, яку складають Gln17, Ala18, Glu21, Ile23, Ala24, Val27 і Gly29. Відповідно до одного з варіантів здійснення пропонується співагоніст глюкагонового/GLP-1рецептора, який містить варіанти послідовності SEQ ID NO: 33, де від 1 до 2 амінокислот варіанта, вибрані з положень 17-26, відрізняються від відповідної амінокислоти послідовності SEQ ID NO: 1. Відповідно до одного з варіантів здійснення пропонується варіант послідовності SEQ ID NO: 33, де згаданий варіант відрізняється від послідовності SEQ ID NO: 33 18 UA 104842 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 амінокислотною заміною, вибраною з групи, яку складають Gln17, Ala18, Glu21, Ile23 і Ala24. Відповідно до одного з варіантів здійснення пропонується варіант послідовності SEQ ID NO: 33, де згаданий варіант відрізняється від послідовності SEQ ID NO: 33 амінокислотною заміною в положенні 18, де замінена амінокислота вибрана з групи, яку складають Ala, Ser, Thr, Pro і Gly. Відповідно до одного з варіантів здійснення пропонується варіант послідовності SEQ ID NO: 33, причому згаданий варіант відрізняється від послідовності SEQ ID NO: 33 заміною амінокислоти Ala в положенні 18. Такі варіанти передбачаються послідовністю SEQ ID NO: 55. У іншому варіанті здійснення пропонується співагоніст глюкагонового/GLP-1-рецептора, який містить варіанти послідовності SEQ ID NO: 33, де від 1 амінокислоти до 2 амінокислот варіанта, вибрані з положень 17-22, відрізняються від відповідної амінокислоти послідовності SEQ ID NO: 1, та у відповідності із ще одним варіантом здійснення пропонується варіант послідовності SEQ ID NO: 33, причому згаданий варіант відрізняється від послідовності SEQ ID NO: 33 1 або 2 амінокислотними замінами в положеннях 20 і 21. Відповідно до одного з варіантів здійснення пропонується співагоніст глюкагонового/GLP-1-рецептора, який містить послідовність: NH2-HisSer-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Xaa-Xaa-Arg-Arg-Ala-Xaa-Xaa-Phe-Val-XaaTrp-Leu-Met-Xaa-Xaa-R (послідовність SEQ ID NO: 51), причому Xaa в положенні 15 являє собою Asp, Glu, цистеїнову кислоту, гомоглутамінову кислоту або гомоцистеїнову кислоту, Xaa в положенні 16 являє собою Ser, Glu, Gln, гомоглутамінову кислоту або гомоцистеїнову кислоту, Xaa в положенні 20 являє собою Gln, Lys, Arg, Orn або цитрулін, Xaa в положенні 21 являє собою Asp, Glu, гомоглутамінову кислоту або гомоцистеїнову кислоту, Xaa в положенні 24 являє собою Gln або Glu, Xaa в положенні 28 являє собою Asn, Lys або кислу амінокислоту, Xaa в положенні 29 являє собою Thr або кислу амінокислоту та R являє собою COOH або CONH2. У одному з варіантів здійснення R являє собою CONH2. Відповідно до одного з варіантів здійснення пропонується співагоніст глюкагонового/GLP-1-рецептора, який містить варіант послідовностей SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48 або SEQ ID NO: 49, де згаданий варіант відрізняється від згаданої послідовності амінокислотною заміною в положенні 20. У одному з варіантів здійснення амінокислотна заміна для положення 20 вибрана з групи, яку складають Lys, Arg, Orn і цитрулін. У одному з варіантів здійснення пропонується агоніст глюкагону, який містить пептид-аналог послідовності SEQ ID NO: 34, причому згаданий аналог відрізняється від послідовності SEQ ID NO: 34 наявністю в положенні 2 амінокислоти, яка відрізняється від серину. У одному з варіантів здійснення залишок серину замінений аміноізомасляною кислотою або аланіном, та в одному з варіантів здійснення залишок серину замінений аміноізомасляною кислотою. Такі модифікації пригнічують розщеплення дипептидилпептидазою IV з одночасним збереженням специфічної активності початкової сполуки (наприклад, щонайменше 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % або більше активності початкової сполуки). У одному з варіантів здійснення розчинність аналога підвищується, наприклад, введенням однієї, двох, трьох або більше заряджених амінокислот на C-кінцеву ділянку нативного глюкагону, відповідно до варіанта, якому віддається перевага, в Cкінцевому напрямі відносно положення 27. У подальших варіантах здійснення одна, дві, три або всі заряджені амінокислоти є негативно зарядженими. У іншому варіанті здійснення згаданий аналог додатково містить заміну нативної амінокислоти кислою амінокислотою в положенні 28 або 29 або кислу амінокислоту, додану до карбоксильного кінця пептиду послідовності SEQ ID NO: 34. У одному з варіантів здійснення аналоги глюкагону, розкриті в цьому описі, додатково модифіковані в положенні 1 або 2 для зниження сприйнятливості до розщеплення дипептидилпептидазою IV. У одному з варіантів здійснення пропонується аналог глюкагону послідовностей SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14 або SEQ ID NO: 15, причому згаданий аналог відрізняється від початкової молекули заміною в положенні 2 і виявляє знижену сприйнятливість (тобто стійкість) до розщеплення дипептидилпептидазою IV. Конкретніше, в одному з варіантів здійснення положення 2 пептидуаналога замінене амінокислотою, вибраною з групи, яку складають d-серин, аланін, валін, аміно-н-масляна кислота, гліцин, N-метилсерин і аміноізомасляна кислота. У одному з варіантів здійснення положення 2 пептиду-аналога замінене амінокислотою, вибраною з групи, яку складають d-серин, аланін, гліцин, N-метилсерин і аміноізомасляна кислота. У іншому варіанті здійснення положення 2 пептиду-аналога замінене амінокислотою, вибраною з групи, яку складають d-серин, гліцин, N-метилсерин і аміноізомасляна кислота. У одному з варіантів здійснення глюкагоновий пептид містить послідовність SEQ ID NO: 21 або послідовність SEQ ID NO: 22. У одному з варіантів здійснення пропонується аналог глюкагону послідовностей SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14 або SEQ ID NO: 15, причому 19 UA 104842 C2 5 10 15 20 25 30 згаданий аналог відрізняється від початкової молекули заміною в положенні 1 і виявляє знижену сприйнятливість (тобто стійкість) до розщеплення дипептидилпептидазою IV. Конкретніше, положення 1 пептиду-аналога замінене амінокислотою, вибраною з групи, яку складають dгістидин, альфа, альфа-диметилімідазолоцтова кислота (DMIA), N-метилгістидин, альфаметилгістидин, імідазолоцтова кислота, дезаміногістидин, гідроксигістидин, ацетилгістидин і гомогістидин. У іншому варіанті здійснення пропонується агоніст глюкагону, який містить пептид-аналог послідовності SEQ ID NO: 34, де згаданий аналог відрізняється від послідовності SEQ ID NO: 34 наявністю в положенні 1 амінокислоти, яка відрізняється від гістидину. У одному з варіантів здійснення розчинність аналога підвищена, наприклад, шляхом введення однієї, двох, трьох або більше заряджених амінокислот на C-кінцевій ділянці нативного глюкагону, відповідно до варіанта, якому віддається перевага, в C-кінцевому напрямі відносно положення 27. У ілюстративних варіантах здійснення одна, дві, три або всі заряджені амінокислоти є негативно зарядженими. У іншому варіанті здійснення аналог додатково містить заміну нативної амінокислоти кислою амінокислотою в положенні 28 або 29 або кислу амінокислоту, додану до карбоксильного кінця пептиду послідовності SEQ ID NO: 34. У одному з варіантів здійснення кислою амінокислотою є аспарагінова кислота або глутамінова кислота. У одному з варіантів здійснення співагоніст глюкагонового/GLP-1-рецептора містить послідовність SEQ ID NO: 20, яка додатково містить додатковий карбоксикінцевий подовжувальний сегмент з однієї амінокислоти або пептиду, вибраний з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27 і SEQ ID NO: 28. У одному з варіантів здійснення у випадку, коли до карбоксильного кінця послідовності SEQ ID NO: 20 додана одна амінокислота, згадана амінокислота, як правило, вибрана з числа 20 традиційних амінокислот, та в одному з варіантів здійснення додаткова карбоксикінцева амінокислота має амідну групу замість карбоксильної групи нативної амінокислоти. У одному з варіантів здійснення додаткова амінокислота вибрана з групи, яку складають глутамінова кислота, аспарагінова кислота і гліцин. У альтернативному варіанті здійснення пропонується співагоніст глюкагонового/GLP-1рецептора, де пептид містить щонайменше один лактамний цикл, утворений між бічним ланцюгом залишку глутамінової кислоти і залишком лізину, де залишок глутамінової кислоти і залишок лізину розділені трьома амінокислотами. У одному з варіантів здійснення карбоксикінцева амінокислота лактама, яка містить глюкагоновий пептид, має амідну групу замість карбоксильної групи нативної амінокислоти. Конкретніше, в одному з варіантів здійснення пропонується співагоніст глюкагону і GLP-1, який містить модифікований глюкагоновий пептид, вибраний з групи, яку складають: 35 , 20 UA 104842 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 де Xaa в положенні 28=Asp або Asn, Xaa в положенні 29 являє собою Thr або Gly, R вибраний з групи, яку складають COOH, CONH2, глутамінова кислота, аспарагінова кислота, гліцин, послідовності SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27 і SEQ ID NO: 28, а лактамний місток утворений між Lys в положенні 12 і Glu в положенні 16 для послідовності SEQ ID NO: 66, між Glu в положенні 16 і Lys в положенні 20 для послідовності SEQ ID NO: 67, між Lys в положенні 20 і Glu в положенні 24 для послідовності SEQ ID NO: 68, між Glu в положенні 24 і Lys в положенні 28 для послідовності SEQ ID NO: 69, між Lys в положенні 12 і Glu в положенні 16 та між Lys в положенні 20 і Glu в положенні 24 для послідовності SEQ ID NO: 16, між Lys в положенні 12 і Glu в положенні 16 та між Glu в положенні 24 і Lys в положенні 28 для послідовності SEQ ID NO: 17, між Glu в положенні 16 і Lys в положенні 20 та між Glu в положенні 24 і Lys в положенні 28 для послідовності SEQ ID NO: 18. У одному з варіантів здійснення R вибраний з групи, яку складають COOH, CONH2, глутамінова кислота, аспарагінова кислота і гліцин, амінокислотою в положенні 28 є Asn і амінокислотою в положенні 29 є треонін. У одному з варіантів здійснення R – CONH2, амінокислотою в положенні 28 є Asn і амінокислотою в положенні 29 є треонін. У іншому варіанті здійснення R вибраний з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 29 і SEQ ID NO: 65, та амінокислотою в положенні 29 є гліцин. У ще одному варіанті здійснення співагоніст глюкагонового/GLP-1-рецептора вибраний з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17 і SEQ ID NO: 18, де згаданий пептид додатково містить додатковий карбоксикінцевий подовжувальний сегмент з однієї амінокислоти або пептиду, вибраний з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27 і SEQ ID NO: 28. У одному з варіантів здійснення кінцевий подовжувальний сегмент містить послідовності SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 29 і SEQ ID NO: 65, та глюкагоновий пептид містить послідовність SEQ ID NO: 55. У одному з варіантів здійснення співагоніст глюкагонового/GLP-1рецептора містить послідовність SEQ ID NO: 33, в якій амінокислотою в положенні 16 є глутамінова кислота, амінокислотою в положенні 20 є лізин, амінокислотою в положенні 28 є аспарагін та амінокислотна послідовність SEQ ID NO: 26 або SEQ ID NO: 29 приєднана до карбоксильного кінця послідовності SEQ ID NO: 33. У згаданому варіанті здійснення, в якому одна амінокислота додана до карбоксильного кінця послідовності SEQ ID NO: 20, згадана амінокислота, як правило, вибрана з числа 20 традиційних амінокислот, та в одному з варіантів здійснення згадана амінокислота має амідну групу замість карбоксильної групи нативної амінокислоти. У одному з варіантів здійснення додаткова амінокислота вибрана з групи, яку складають глутамінова кислота, аспарагінова кислота і гліцин. У згаданих варіантах здійснення, в яких аналог агоніста глюкагону додатково містить карбоксикінцевий подовжувальний сегмент, карбоксикінцева амінокислота подовжувального сегмента в одному з варіантів здійснення закінчується не карбоксильною групою, а амідною групою або складноефірною групою. У іншому варіанті здійснення співагоніст глюкагонового/GLP-1-рецептора містить послідовність: NH2-His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Arg-Arg-AlaGln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr-Xaa-CONH2 (послідовність SEQ ID NO: 19), в якій Xaa в положенні 30 являє собою будь-яку амінокислоту. У одному з варіантів здійснення Xaa вибрана з числа 20 традиційних амінокислот, та в одному з варіантів здійснення згаданою амінокислотою є глутамінова кислота, аспарагінова кислота або гліцин. Розчинність цього пептиду може бути додатково поліпшена за допомогою ковалентного приєднання поліетиленгліколевого ланцюга до бічного ланцюга амінокислоти в положенні 17, 21, 24 або 30 послідовності SEQ ID NO: 19. У ще одному варіанті здійснення пептид містить додатковий карбоксикінцевий подовжувальний сегмент пептиду, вибраний з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27 і SEQ ID NO: 28. Відповідно до одного з варіантів здійснення співагоніст глюкагонового/GLP-1-рецептора містить послідовності SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31 і SEQ ID NO: 32. Додаткові сайт-специфічні модифікації в межах послідовностей SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19 і SEQ ID NO: 64 глюкагону можуть здійснюватися для отримання набору агоністів глюкагону, які мають різну міру GLP-1 агонізма. Таким чином, були одержані і охарактеризовані пептиди, які мають фактично ідентичну in vitro активністю на кожному рецепторі. Подібним чином були ідентифіковані і охарактеризовані пептиди з десятиразово вибірно підвищеною активністю на кожному з двох рецепторів. Як зазначалося вище, заміна залишку серину в положенні 16 глутаміновою кислотою підвищує активність нативного глюкагону як на глюкагоновому, так і на GLP-1-рецепторі, однак підтримує приблизно десятиразову вибірність відносно глюкагонового рецептора. Крім того, шляхом заміни нативного 21 UA 104842 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 глутаміну в положенні 3 глутаміновою кислотою (послідовність SEQ ID NO: 22) одержують аналог глюкагону, який виявляє приблизно десятиразову вибірність відносно GLP-1-рецептора. Розчинність пептидів-співагоністів глюкагону/GLP-1 може бути додатково підвищена у водних розчинах при фізіологічному рН з одночасним збереженням високої біологічної активності, в зіставленні з нативним глюкагоном, шляхом введення гідрофільних груп в положеннях 16, 17, 21 і 24 пептиду або за допомогою додання однієї модифікованої амінокислоти (тобто амінокислоти, модифікованої для включення гідрофільної групи) на карбоксильному кінці пептиду-співагоніста глюкагону/GLP-1. Відповідно до одного з варіантів здійснення гідрофільна група містить поліетиленгліколевий (PEG) ланцюг. Конкретніше, в одному з варіантів здійснення глюкагоновий пептид містить послідовності SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17 або SEQ ID NO: 18, де поліетиленгліколевий ланцюг ковалентно приєднаний до бічного ланцюга амінокислот в положенні 16, 17, 21, 24, 29 або до C-кінцевої амінокислоти глюкагонового пептиду, за умови, що у випадку, коли пептид містить послідовності SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12 або SEQ ID NO: 13, поліетиленгліколевий ланцюг ковалентно приєднаний до залишку амінокислоти в положенні 17, 21 або 24, коли пептид містить послідовність SEQ ID NO: 14 або SEQ ID NO: 15, поліетиленгліколевий ланцюг ковалентно приєднаний до залишку амінокислоти в положенні 16, 17 або 21, та коли пептид містить послідовності SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17 або SEQ ID NO: 18, поліетиленгліколевий ланцюг ковалентно приєднаний до залишку амінокислоти в положенні 17 або 21. У одному з варіантів здійснення глюкагоновий пептид містить послідовності SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12 або SEQ ID NO: 13, причому поліетиленгліколевий ланцюг ковалентно приєднаний до бічного ланцюга амінокислот в положенні 17, 21, 24 або до C-кінцевої амінокислоти глюкагонового пептиду, і карбоксикінцева амінокислота пептиду має амідну групу замість карбоксильної групи нативної амінокислоти. У одному з варіантів здійснення пептидспівагоніст глюкагонового/GLP-1-рецептора містить послідовність, вибрану з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 і SEQ ID NO: 19, причому поліетиленгліколевий ланцюг ковалентно приєднаний до бічного ланцюга амінокислоти в положенні 17, 21 або 24 послідовностей SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13 і SEQ ID NO: 19, або в положенні 16, 17 або 21 послідовностей SEQ ID NO: 14 і SEQ ID NO: 15, або в положенні 17 або 21 послідовностей SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17 і SEQ ID NO: 18 глюкагонового пептиду. У іншому варіанті здійснення пептид-співагоніст глюкагонового/GLP-1-рецептора містить послідовність SEQ ID NO: 11 або SEQ ID NO: 19, причому поліетиленгліколевий ланцюг ковалентно приєднаний до бічного ланцюга амінокислоти в положенні 17, 21 або 24 або до C-кінцевої амінокислоти глюкагонового пептиду. Відповідно до одного з варіантів здійснення і відповідно до обумовлених обмежень, опис яких наведений в попередніх параграфах, пептид-співагоніст глюкагону модифікований з включенням однієї або декількох замін амінокислот в положеннях 16, 17, 21, 24 або 29 або Cкінцевої амінокислоти, де нативна амінокислота замінена амінокислотою, яка має бічний ланцюг, придатний для утворення місточкових зв'язків з гідрофільними складовими, в тому числі, наприклад, з поліетиленгліколем. Нативний пептид може бути замінений природною амінокислотою або синтетичною (штучною) амінокислотою. Визначення "синтетичні" або "штучні" амінокислоти стосуються амінокислот, які не зустрічаються в природних умовах in vivo, але які, проте, можуть бути частиною пептидних структур, які відповідають наведеному у цьому документі опису. У альтернативному варіанті амінокислота, яка має бічний ланцюг, придатний для утворення місточкових зв'язків з гідрофільними фрагментами, в тому числі, наприклад, з поліетиленгліколем, може бути додана до карбоксильного кінця будь-якого з аналогів глюкагону, розкритих в цьому описі. Відповідно до одного з варіантів здійснення амінокислотна заміна виконується в пептиді-співагоністі глюкагонового/GLP-1-рецептора в положенні, вибраному з групи, яку складають положення 16, 17, 21, 24 або 29, із заміною нативної амінокислоти амінокислотою, вибраною з групи, яку складають лізин, цистеїн, орнітин, гомоцистеїн і ацетилфенілаланін, причому замінювальна амінокислота додатково містить поліетиленгліколевий ланцюг, ковалентно приєднаний до бічного ланцюга амінокислоти. У одному з варіантів здійснення глюкагоновий пептид, вибраний з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 і SEQ ID NO: 19, додатково модифікований з включенням поліетиленгліколевого ланцюга, ковалентно приєднаного до бічного ланцюга амінокислоти в положенні 17 або 21 глюкагонового пептиду. У одному з варіантів здійснення пегільований співагоніст глюкагонового/GLP-1-рецепора додатково містить послідовності SEQ ID NO: 26, SEQ 22 UA 104842 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 ID NO: 27 і SEQ ID NO: 29. У іншому варіанті здійснення глюкагоновий пептид, який містить послідовність SEQ ID NO: 55 або SEQ ID NO: 56, додатково містить C-кінцевий подовжувальний сегмент послідовностей SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 29 або SEQ ID NO: 65, приєднаний до C-кінцевої амінокислоти послідовності SEQ ID NO: 55 або SEQ ID NO: 56, і факультативно додатково містить поліетиленгліколевий ланцюг, ковалентно приєднаний до бічного ланцюга амінокислот в положеннях 17, 18, 21, 24 або 29 або до C-кінцевої амінокислоти пептиду. У іншому варіанті здійснення глюкагоновий пептид містить послідовність SEQ ID NO: 55 або SEQ ID NO: 56, де поліетиленгліколевий ланцюг ковалентно приєднаний до бічного ланцюга амінокислот в положеннях 21 або 24 глюкагонового пептиду, та пептид додатково містить C-кінцевий подовжувальний сегмент послідовностей SEQ ID NO: 26 або SEQ ID NO: 29. У іншому варіанті здійснення глюкагоновий пептид містить послідовність SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 33 або SEQ ID NO: 34, де додаткова амінокислота додана до карбоксильного кінця послідовності SEQ ID NO: 33 або SEQ ID NO: 34, і поліетиленгліколевий ланцюг ковалентно приєднаний до бічного ланцюга доданої амінокислоти. У ще одному варіанті здійснення пегільований аналог глюкагону додатково містить C-кінцевий подовжувальний сегмент послідовностей SEQ ID NO: 26 або SEQ ID NO: 29, приєднаний до C-кінцевої амінокислоти послідовності SEQ ID NO: 33 або SEQ ID NO: 34. У іншому варіанті здійснення глюкагоновий пептид містить послідовність SEQ ID NO: 19, де поліетиленгліколевий ланцюг ковалентно приєднаний до бічного ланцюга амінокислоти в положенні 30 глюкагонового пептиду, і пептид додатково містить C-кінцевий подовжувальний сегмент послідовностей SEQ ID NO: 26 або SEQ ID NO: 29, приєднаний до C-кінцевої амінокислоти послідовності SEQ ID NO: 19. Поліетиленгліколевий ланцюг може мати форму прямого ланцюга або він може бути розгалуженим. Відповідно до одного з варіантів здійснення поліетиленгліколевий ланцюг має середню молекулярну масу, вибрану в межах від приблизно 500 Да до приблизно 10000 Да. У одному з варіантів здійснення поліетиленгліколевий ланцюг має середню молекулярну масу, вибрану в межах від приблизно 1000 Да до приблизно 5000 Да. У альтернативному варіанті здійснення поліетиленгліколевий ланцюг має середню молекулярну масу, вибрану в межах від приблизно 10000 Да до приблизно 20000 Да. Відповідно до одного з варіантів здійснення пегільований глюкагоновий пептид містить два або більше поліетиленгліколевих ланцюгів, ковалентно приєднаних до глюкагонового пептиду, де загальна молекулярна маса глюкагонових ланцюгів становить від приблизно 1000 Да до приблизно 5000 Да. У одному з варіантів здійснення пегільований агоніст глюкагону містить пептид (послідовність SEQ ID NO: 5) або аналог агоніста глюкагону (послідовність SEQ ID NO: 5), де поліетиленгліколевий ланцюг ковалентно приєднаний до залишку амінокислоти в положенні 21 і в положенні 24, і де об'єднана молекулярна маса двох поліетиленгліколевих ланцюгів становить від приблизно 1000 Да до приблизно 5000 Да. Як детально описано в Прикладах, агоністи глюкагону, які відповідають цьому винаходу, мають підвищену біофізичну стабільність і водорастворимость, виявляючи, поряд із цим, підвищену біоактивність в порівнянні з нативним пептидом. Відповідно, вважають, що агоністи глюкагону, які відповідають цьому винаходу, придатні для будь-якого застосування, описаного вище для нативного глюкагонового пептиду. Таким чином, модифіковані глюкагонові пептиди, опис яких наведений у цьому документі, можуть застосовуватися для лікування гіпоглікемії або для підвищення рівня глюкози в крові, для ініціювання тимчасового параліча кишечнику для рентгенологічних досліджень або для лікування інших хвороб обміну речовин, які є наслідком низького рівня глюкагону в крові. Очікується також, що глюкагонові пептиди, опис яких наведений у цьому документі, можуть бути застосовані для зменшення або підтримування маси тіла, або для лікування гіперглікемії, або для зниження рівня глюкози в крові, або для нормалізації рівня глюкози в крові. Глюкагонові пептиди, які відповідають цьому винаходу, можуть вводитися окремо або в поєднанні з іншими антидіабетичними препаратами або засобами проти ожиріння. До числа антидіабетичних препаратів, які відомі у цій галузі або знаходяться в процесі дослідження, належать інсулін, сульфонілсечовини, такі як толбутамид (Orinase), ацетогексамід (Dymelor), толазамід (Tolinase), хлорпропамід (Diabinese), гліпізид (Glucotrol), глібурид (Diabeta, Micronase, Glynase), глімепірид (Amaryl) або гліклазид (Diamicron); меглітиніди, такі як репаглінід (Prandin) або натеглінід (Starlix); бігуаніди, такі як метформін (Glucophage) або фенформін; тіазолідиндіони, такі як росигліазон (Avandia), піоглітазон (Actos), троглітазон (Rezulin) або інші інгібітори PPARγ (активатор пероксисомальної проліферації); інгібітори альфа-глюкозидази, які пригнічують перетравлення вуглеводів, таких як міглітол (Glyset), акарбос (Precose/Glucobay); ексенатид (Byetta) або прамлінтид; інгібітори дипептидилпептидази-4 (DPP-4), такі як 23 UA 104842 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 вілдагліптин або ситагліптин; інгібітори SGLT (натрійзалежний переносник глюкози); або інгібітори фруктоза-1,6-бісфосфатази. До числа засобів проти ожиріння, які відомі у цій галузі або знаходяться в процесі дослідження, належать засоби, що приглушують апетит, в тому числі стимулятори типу фенетиламіну, фентермін (факультативно з фенфлураміном або дексфенфлураміном), ® ® ® ® діетилпропіон (Tenuate , фендиметразин (Prelu-2 Bontril ), бензфетамін (Didrex ), сибутрамін ® ® (Meridia , Reductil ); римонабант (Acomplia, інші антагоністи канабіноїдного рецептора; оксинтомодулін; флуоксетину гідрохлорид (Prozac); препарат Qnexa (топірамат і фентермін), препарат Excalia (бупропіон і зонісамід) або препарат Contrave (бупропіон і налтрексон); або інгібітори ліпаз, подібні ксенікалу (Orlistat) або препарату Cetilistat (відомому також як ATL-962) або препарат GT 389-255. Один з аспектів цього опису стосується заздалегідь виготовленого водного розчину розкритого в цьому описі глюкагонового агоніста для застосування при лікуванні гіпоглікемії. Поліпшена стабільність і розчинність композицій агоніста, який відповідає наведеному у цьому документі опису, надає можливість заздалегідь виготовляти водні розчини для швидкого введення і лікування гіпоглікемії. У одному з варіантів здійснення пропонується розчин, який містить пегільований агоніст глюкагону, для введення пацієнту, який страждає на гіпоглікемію, де загальна молекулярна маса поліетиленгліколевих ланцюгів, приєднаних до пегільованого агоніста глюкагону, становить від приблизно 500 Да до приблизно 5000 Да. У одному з варіантів здійснення пегільований агоніст глюкагону містить пептид, вибраний з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24 і SEQ ID NO: 25 і аналоги агоніста глюкагону послідовностей SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, або пегільоване лактамне похідне глюкагону, яке містить послідовність SEQ ID NO: 20, де бічний ланцюг амінокислотного залишку згаданого глюкагонового пептиду ковалентно приєднаний до поліетиленгліколевого ланцюга. Спосіб лікування гіпоглікемії, який відповідає цьому винаходу, включає стадії введення пацієнту розкритих в цьому описі агоністів глюкагону будь-яким звичайним шляхом введення, в тому числі парентерально, наприклад, внутрішньовенно, внутрішньоочеревинно, підшкірно або внутрішньом'язово, внутрішньооболонково, черезшкірно, ректально, перорально, назально або шляхом інгаляції. У одному з варіантів здійснення згадана композиція вводиться підшкірно або внутрішньом'язово. У одному з варіантів здійснення згадана композиція вводиться парентерально, та композиція, яка містить глюкагон, розфасовується в шприци. Несподівано заявники виявили, що можуть бути одержані пегільовані глюкагонові пептиди, які зберігають біологічну активність і специфічність початкового пептиду. Однак збільшення довжини поліетиленгліколевого ланцюга або приєднання численних поліетиленгліколевих ланцюгів до пептиду, так що загальна молекулярна маса приєднаного поліетиленгліколю перевищує 5000 Да, починає сповільнювати час дії модифікованого глюкагону. Відповідно до одного з варіантів здійснення пропонується глюкагоновий пептид послідовностей SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24 і SEQ ID NO: 25, або аналог агоніста глюкагону, або пегільоване лактамне похідне глюкагону, яке містить послідовність SEQ ID NO: 20, де пептид містить один або декілька поліетиленгліколевих ланцюгів, де загальна молекулярна маса приєднаного поліетиленгліколю перевищує 5000 Да, та в одному з варіантів здійснення становить більше ніж 10000 Да, але менше ніж 40000 Да. Такі модифіковані глюкагонові пептиди мають пролонгований час дії, але без зниження біологічної активності. Отже, такі сполуки можуть бути введені для пролонгування ефекту введеного глюкагонового пептиду. Глюкагонові пептиди, модифіковані для ковалентного приєднання до поліетиленгліколевого ланцюга, який має молекулярну масу більше за 10000 Да, можуть бути введені в поєднанні з інсуліном для пом'якшення дії інсуліну і підтримання стабільного рівня глюкози в крові у хворих на діабет. Модифіковані глюкагонові пептиди, які відповідають цьому опису, можуть бути введені спільно з інсуліном у вигляді однієї композиції, введені одночасно у вигляді окремих розчинів, або в альтернативному варіанті інсулін і модифікований глюкагоновий пептид можуть бути введені в різний час. У одному з варіантів здійснення композиція, яка містить інсулін, і композиція, яка містить модифікований глюкагоновий пептид, вводиться з розривом в 12 год. Точне співвідношення між модифікованим глюкагоновим пептидом і введеним інсуліном буде залежати, частково, від визначення рівня глюкагону хворого і може визначатися із застосуванням загальноприйнятої практики експериментування. Відповідно до одного з варіантів здійснення пропонується композиція, яка містить інсулін і модифікований глюкагоновий пептид, вибраний з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 і аналоги агоніста глюкагону, де модифікований глюкагоновий пептид додатково містить поліетиленгліколевий ланцюг, 24 UA 104842 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 ковалентно приєднаний до бічного ланцюга амінокислоти в положенні 17, 21, 24 або 21 і 24. У одному з варіантів здійснення композиція являє собою водний розчин, який містить інсулін і аналог глюкагону. У варіантах здійснення, в яких глюкагоновий пептид містить послідовність SEQ ID NO: 24 або SEQ ID NO: 25, поліетиленгліколевий ланцюг ковалентно приєднаний до глюкагонового пептиду в положенні 21 або 24. У одному з варіантів здійснення поліетиленгліколевий ланцюг має молекулярну масу від приблизно 10000 Да до приблизно 40000 Да. Відповідно до одного з варіантів здійснення модифіковані глюкагонові пептиди, розкриті в цьому описі, застосовують для ініціювання тимчасового параліча кишечнику. Цей спосіб придатний для рентгенологічних досліджень і включає стадію введення ефективної кількості фармацевтичної композиції, яка містить пегільований глюкагоновий пептид, глюкагоновий пептид, який містить C-кінцевий подовжувальний сегмент, або димер таких пептидів. У одному з варіантів здійснення глюкагоновий пептид містить послідовність, вибрану з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14 і SEQ ID NO: 15. У одному з варіантів здійснення глюкагоновий пептид додатково містить поліетиленгліколевий ланцюг масою від приблизно 1000 Да до 40000 Да, ковалентно приєднаний до амінокислотного залишку в положенні 21 або 24. У одному з варіантів здійснення глюкагоновий пептид вибраний з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14 і SEQ ID NO: 15. У одному з варіантів здійснення поліетиленгліколевий ланцюг має молекулярну масу від приблизно 500 Да до приблизно 5000 Да. У ще одному варіанті здійснення композиція, застосовувана для ініціювання тимчасового параліча кишечнику, містить перший модифікований глюкагоновий пептид і другий модифікований глюкагоновий пептид. Перший модифікований пептид містить послідовність, вибрану з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24 і SEQ ID NO: 25, факультативно приєднану до поліетиленгліколевого ланцюга масою від приблизно 500 Да до приблизно 5000 Да, і другий пептид містить послідовність, вибрану з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24 і SEQ ID NO: 25, факультативно приєднану до поліетиленгліколевого ланцюга масою від приблизно 10000 Да до приблизно 40000 Да. Відповідно до цього варіанта здійснення поліетиленгліколевий ланцюг кожного пептиду ковалентно приєднаний до амінокислотного залишку відповідного пептиду в будь-якому з положень 17, 21 або 24 незалежно один від одного. Повідомлялося, що оксинтомодулін, природний травний гормон, який виявляють в тонкій кишці, спричиняє зниження маси тіла при введенні пацюкам або людям (дивися Diabetes 2005; 54:2390-2395). Оксинтомодулін являє собою пептид з 37 амінокислот, який містить послідовність глюкагону з 29 амінокислот (тобто послідовність SEQ ID NO: 1), за якою йде карбоксикінцевий подовжувальний сегмент з 8 амінокислот послідовності SEQ ID NO: 27 (KRNRNNIA). Таким чином, заявники вважають, що біологічна активність оксинтомодуліну може бути збережена (тобто приглушення апетиту і ініційоване зниження маси/збереження маси) з одночасним поліпшенням розчинності і стабільності сполуки і поліпшенням фармакокінетики шляхом заміни частини оксинтомодуліну, яка відповідає глюкагоновому пептиду, модифікованими глюкагоновими пептидами, розкритими в цьому описі. Крім того, заявники вважають також, що усічена молекула оксинтомодуліну, яка містить глюкагоновий пептид, який відповідає цьому винаходу, при видаленні чотирьох кінцевих амінокислот оксинтомодуліну, також буде ефективна відносно приглушення апетиту і ініціювання зниження маси/збереження маси. Таким чином, цим винаходом передбачаються також модифіковані глюкагонові пептиди, які відповідають цьому винаходу та мають карбоксикінцевий подовжувальний сегмент послідовностей SEQ ID NO: 27 (KRNRNNIA) або SEQ ID NO: 28. Ці сполуки можуть бути введені пацієнтам для ініціювання зниження маси тіла або запобігання приросту маси тіла. У одному з варіантів здійснення аналог агоніста глюкагону послідовностей SEQ ID NO: 33 або SEQ ID NO: 20, який додатково містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 27 (KRNRNNIA) або SEQ ID NO: 28, приєднану до амінокислоти 29 глюкагонового пептиду, вводять пацієнтам для ініціювання зниження маси або запобігання приросту маси тіла. Конкретніше, глюкагоновий пептид містить послідовність, вибрану з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14 і SEQ ID NO: 15, яка додатково містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 27 (KRNRNNIA) або SEQ ID NO: 28, приєднану до амінокислоти 29 глюкагонового пептиду. Ексендин-4 являє собою пептид, який складається з 39 амінокислот. Це сильнодіючий 25 UA 104842 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 стимулятор рецептора, відомий як GLP-1. Повідомлялося також, що цей пептид приглушує апетит і ініціює зниження маси тіла. Заявники виявили, що кінцева послідовність ексендину-4, у разі її додання до карбоксильного кінця глюкагону, поліпшує розчинність і стабільність глюкагону без погіршення біологічної активності останнього. У одному з варіантів здійснення десять кінцевих амінокислот ексендину-4 (тобто послідовність SEQ ID NO: 26 (GPSSGAPPS)) приєднані до карбоксильного кінця глюкагонового пептиду, який відповідає цьому опису. Передбачається, що ці гібридні білки мають фармакологічну активність для приглушення апетиту і ініціювання зниження маси/підтримки маси тіла. Відповідно до одного з варіантів здійснення аналог агоніста глюкагону послідовностей SEQ ID NO: 33 або SEQ ID NO: 20, який додатково містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 26 (GPSSGAPPS) або SEQ ID NO: 29, приєднану до амінокислоти 29 глюкагонового пептиду, вводять пацієнтам для ініціювання зниження маси або попередження приросту маси тіла. Конкретніше, глюкагоновий пептид містить послідовність, вибрану з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 55 і SEQ ID NO: 56, яка додатково містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 26 (GPSSGAPPS) або SEQ ID NO: 29, приєднану до амінокислоти 29 глюкагонового пептиду. У одному з варіантів здійснення введений аналог глюкагонового пептиду містить послідовність SEQ ID NO: 64. Цей опис охоплює також мультимери модифікованих глюкагонових пептидів, розкритих в цьому описі. Два або більше модифікованих глюкагонових пептидів можуть бути сполучені один з іншим за допомогою звичайних сполучних агентів і способів, відомих фахівцям в цій галузі. Наприклад, між двома модифікованими глюкагоновими пептидами можуть утворюватися димери шляхом застосування біфункціональних тіолових агентів зшиття і біфункціональних амінових агентів зшиття, особливо для глюкагонових пептидів, у яких були зроблені заміни залишками цистеїну, лізину, орнітину, гомоцистеїну або ацетилфенілаланіну (наприклад, послідовності SEQ ID NO: 3 і SEQ ID NO: 4). Димер може бути гомодимером або в альтернативному варіанті гетеродимером. Згідно з одним із прикладів здійснення димер містить гомодимер глюкагонового гібридного пептиду, де частина глюкагонового пептиду містить послідовність SEQ ID NO: 11 або SEQ ID NO: 20 і амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 26 (GPSSGAPPPS), послідовність SEQ ID NO: 27 (KRNRNNIA) або SEQ ID NO: 28 (KRNR), приєднану до амінокислоти 29 глюкагонового пептиду. У іншому варіанті здійснення димер містить гомодимер аналога глюкагонового агоніста (послідовність SEQ ID NO: 11), де глюкагоновий пептид додатково містить поліетиленгліколевий ланцюг, ковалентно приєднаний до положення 21 або 24 глюкагонового пептиду. Відповідно до одного з варіантів здійснення пропонується димер, який містить перший глюкагоновий пептид, приєднаний до другого глюкагонового пептиду за допомогою лінкера, де перший глюкагоновий пептид містить пептид, вибраний з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 і SEQ ID NO: 11, і другий глюкагоновий пептид містить послідовність SEQ ID NO: 20. Відповідно до іншого варіанта здійснення пропонується димер, який містить перший глюкагоновий пептид, приєднаний до другого глюкагонового пептиду за допомогою лінкера, де згаданий перший глюкагоновий пептид містить послідовність, вибрану з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, і другий глюкагоновий пептид містить послідовність SEQ ID NO: 11, та фармацевтично прийнятні солі згаданих глюкагонових поліпептидів. Відповідно до іншого варіанта здійснення пропонується димер, який містить перший глюкагоновий пептид, приєднаний до другого глюкагонового пептиду за допомогою лінкера, де перший глюкагоновий пептид вибраний з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18 і другий глюкагоновий пептид незалежно вибраний з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17 і SEQ ID NO: 18, і фармацевтично прийнятні солі згаданих глюкагонових поліпептидів. У одному з варіантів здійснення перший глюкагоновий пептид вибраний з групи, яку складає послідовність SEQ ID NO: 20, і другий глюкагоновий пептид незалежно вибраний з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9 і SEQ ID NO: 11. У одному з варіантів здійснення димер утворений між двома пептидами, де кожний пептид містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 11. Модифіковані глюкагонові пептиди, які відповідають цьому винаходу, можуть пропонуватися відповідно до одного з варіантів здійснення як частина набору. У одному з варіантів здійснення пропонується набір для введення антагоніста глюкагону пацієнту, який його потребує, де набір включає в себе модифікований глюкагоновий пептид, вибраний з групи, яку складають 1) 26 UA 104842 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 глюкагоновий пептид, який містить послідовності SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 або SEQ ID NO: 11; 2) глюкагоновий гібридний пептид, який містить аналог агоніста глюкагону послідовностей SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 20 або SEQ ID NO: 55 і амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 26 (GPSSGAPPPS), SEQ ID NO: 27 (KRNRNNIA) або SEQ ID NO: 28 (KRNR), приєднану до амінокислоти 29 глюкагонового пептиду; і 3) пегільований глюкагоновий пептид послідовності SEQ ID NO: 11 або SEQ ID NO: 51, який додатково містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 26 (GPSSGAPPPS), SEQ ID NO: 27 (KRNRNNIA) або SEQ ID NO: 28 (KRNR), приєднану до амінокислоти 29 глюкагонового пептиду, де поліетиленгліколевий ланцюг, ковалентно приєднаний в положенні 17, 21 або 24, має молекулярну масу від приблизно 500 Да до приблизно 40000 Да. У одному з варіантів здійснення набір включає в себе співагоніст глюкагону/GLP-1, де пептид містить послідовність, вибрану з групи, яку складають послідовності SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17 і SEQ ID NO: 18. У одному з варіантів здійснення пропонується набір з пристроєм для введення глюкагонової композиції пацієнту, наприклад, голкою для шприца, шприцом-ін'єктором, безголковим шприцом або іншим безголковим ін'єктором. Набір в альтернативному варіанті або на додаток може включати один або більше контейнерів, наприклад, флаконів, пробірок, пляшечок, одно- або багатокамерних заздалегідь заповнених шприцов, капсул, інфузійних насосів (зовнішніх або імплантовних), безголкових шприцов, заздалегідь заповнених шприцов-ін'єкторів тощо, які факультативно вміщують глюкагоновий пептид в ліофілізованому вигляді або в формі водного розчину. Відповідно до варіанта, якому віддається перевага, набори будуть також включати в себе інструкції щодо застосування. Відповідно до одного з варіантів здійснення пристрій з набору являє собою пристрій для дозованого розподілення аерозолю, де композиція заздалегідь розфасована в згаданий пристрій для дозованого розподілення аерозолю. У іншому варіанті здійснення набір включає в себе шприц і голку, та в одному варіанті здійснення стерильна глюкагонова композиція розфасована в шприц. Сполуки, які відповідають цьому винаходу, можуть бути одержані стандартними методами синтезу, методами рекомбінантних ДНК або будь-якими іншими методами одержання пептидів і гібридних білків. Незважаючи на те, що деякі штучні амінокислоти не можуть експресуватися звичайними методами рекомбинантних ДНК, в цій галузі відомі способи їх одержання. Сполуки, які відповідають цьому винаходу та містять пептидні частини, можуть бути синтезовані шляхом стандартних реакцій органічної хімії, на додаток до звичайних реакцій хімії пептидів, у разі їх застосовності. Приклади Загальна методика синтезу: Аналоги глюкагону синтезували шляхом одностадійної реакції сполучення HBTUактивізованої смоли (HBTU – o-бензотриазол, N, N,N-тетраметилуронію гексафторфосфат) "Fast Boc", починаючи з 0,2 ммоль смоли Boc Thr(Obzl)Pam, на модифікованому синтезаторі пептидів Applied Biosystem 430A. Boc амінокислоти і HBTU були одержані від компанії Midwest Biotech (Fishers, штат Індіана). Застосовувалися наведені нижче захисні групи бічних ланцюгів: Arg(Tos), Asn(Xan), Asp(OcHex), Cys(pMeBzl), His(Boc), Lys(2Cl-Z), Ser(OBzl), Thr(OBzl), Tyr(2BrZ) і Trp(CHO). Як захисну групу бічного ланцюга N-кінцевого His застосовували Boc (третбутилоксикарбоніл). Кожну з одержаних пептидильних смол обробляли 20 % розчином піперидину в диметилформаміді для видалення формільної групи з триптофану. Розщеплення рідким фтороводнем здійснювали в присутності п-крезолу і диметилсульфіду. Розщеплення здійснювали протягом 1 год. на льодяній бані за допомогою фтороводневої установки (компанія Penninsula Labs). Після випарювання фтороводня залишок суспендували в діетиловому ефірі, і тверді матеріали відфільтровувати. Кожний пептид екстрагували в 30-70 мл водного розчину оцтової кислоти, і розбавлену аліквоту аналізували засобами HPLC (високоефективна рідинна хроматографія) [Beckman System Gold, колонка Zorbax C8 0,465 см, 1 мл/хв, 45C, 214 нм, буфер A – 0,1 % розчин TFA (трифтороцтова кислота), B – 0,1 % розчин TFA/90 % розчин ацетонітрилу, градієнт від 10 % до 80 % B протягом 10 хв]. Очищення здійснювали засобами FPLC (швидка хроматографія білків (поліпептидів і полінуклеотидів) високого розділення) на колонці Kromasil C18 2,225 см з УФ-моніторингом при 214 нм зі збиранням 5 хв фракцій. Однорідні фракції об'єднували і ліофілізували з одержанням продукту (чистота >95 %). Відкоректовану молекулярну масу і ступінь чистоти підтверджували за допомогою MALDI (мас-спектрометрія з іонізацією методом лазерної десорбції в матричному розчині)-мас-спектрального аналізу. 27 UA 104842 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Загальна методика пегілування: (Cys-малеімід) Cys-аналог глюкагону, як правило, розчиняють в забуференому фосфатом сольовому розчині (5-10 мг/мл), і додають 0,01 М розчин етилендіамінтетраоцтової кислоти (10-15 % від загального обсягу). Додають надлишок (2-кратний) малеімідметоксиполіетиленгліколевого реактиву (компанія Nektar), і реакційну суміш перемішують при кімнатній температурі з моніторингом розвитку реакції засобами HPLC. Через 8-24 год. реакційну суміш підкисляють і завантажують в колонку для препаративної хроматографії зі зворотною фазою для очищення за допомогою градієнтного 0,1 % розчину TFA/ацетонітрил. Відповідні фракції об'єднували і ліофілізували з одержанням необхідних пегільованих аналогів. Приклад 1 17 Синтез глюкагону Cys (1-29) і подібних моноCys аналогів 0,2 ммоль смоли Boc Thr(Obzl) Pam (компанія SynChem Inc) в 60 мл реакторі і наведену нижче послідовність вміщували в модифікований синтезатор пептидів Applied Biosystems 430A з подальшим застосуванням FastBoc HBTU-активізованих одностадійних реакцій сполучення. (послідовність SEQ ID NO: 35) Застосовувалися наведені нижче захисні групи бічних ланцюгів: Arg(Tos), Asp(OcHex), Asn(Xan), Cys(pMeBzl), Glu(OcHex), His(Boc), Lys(2Cl-Z), Ser(Bzl), Thr(Bzl), Trp(CHO) і Tyr(Br-Z). Одержану пептидильну смолу обробляли 20 % розчином піперидину в диметилформаміді для видалення формільної групи з триптофану, потім переносили у фтороводневий реактор і сушили у вакуумі. Додавали 1,0 мл п-крезолу і 0,5 мл диметилсульфіду з перемішуванням за допомогою магнітної мішалки. Реактор приєднували до фтороводневої установки (компанія Penninsula Labs), охолоджували на бані із сумішшю сухого льоду з метанолом, відкачували газ, і конденсували приблизно 10 мл рідкого фтороводню. Реакційну суміш перемішували на льодяній бані протягом 1 год., після чого фтороводень видаляли у вакуумі. Залишок суспендували в етиловому ефірі; тверді речовини відфільтровували, промивали ефіром, і пептид екстрагували в 50 мл водного розчину оцтової кислоти. Невелику пробу розщепленого екстракту піддавали аналітичному HPLC [колонка Zorbax C8 0,465 см, 1 мл/хв, 45C, 214 нм, буфер A – 0,1 % розчин TFA, буфер B – 0,1 % розчин TFA/90 % розчин ACN (ацетонітрил), градієнт від 10 % B до 80 % В протягом 10 хв]. Залишок екстракту завантажували в колонку для препаративної хроматографії зі зворотною фазою Kromasil C18 2,225 см, і градієнт ацетонітрилу проганяли за допомогою системи FPLC компанії Pharmacia. 5 хв фракції збирали з УФ-моніторингом при 214 нм (2,0 A). A – 0,1 % розчин TFA, B – 0,1 % розчин TFA/50 % розчин ацетонітрилу. Градієнт від 30 % B до 100 % B протягом 450 хв. Фракції, які містять найчистіший продукт (48-52), об'єднували, заморожували і ліофілізували з одержанням 30,1 мг. Аналіз продукту засобами HPLC показав ступінь чистоти >90 %, а MALDIмасс-спектральний аналіз показав необхідну масу 3429,7. Подібним чином одержали глюкагон 21 24 29 Cys , глюкагон Cys і глюкагон Cys . Приклад 2 Синтез глюкагона-Сех і інших аналогів з C-кінцевим подовжувальним сегментом 285 мг (0,2 ммоль) метоксибензгідриламіну (компанія Midwest Biotech) в реакторі місткістю 60 мл і наведену нижче послідовність вміщували в модифікований синтезатор пептидів Applied Biosystems 430A з подальшим здійсненням FastBoc HBTU-активізованих одностадійних реакцій сполучення. (послідовність SEQ ID NO: 36) Застосовувалися наведені нижче захисні групи бічних ланцюгів: Arg(Tos), Asp(OcHex), Asn(Xan), Cys(pMeBzl), Glu(OcHex), His(Boc), Lys(2Cl-Z), Ser(Bzl), Thr(Bzl), Trp(CHO) і Tyr(Br-Z). Одержану пептидильну смолу обробляли 20 % розчином піперидину в диметилформаміді для видалення захисної формільної групи з триптофану, потім переносили у фтороводневий реактор і сушили у вакуумі. Додавали 1,0 мл п-крезолу і 0,5 мл диметилсульфіду з перемішуванням за допомогою магнітної мішалки. Реактор приєднували до фтороводневої установки (компанія Penninsula Lab), охолоджували на бані із сумішшю сухого льоду з метанолом, відкачували газ, і конденсували приблизно 10 мл рідкого фтороводню. Реакційну суміш перемішували на льодяній бані протягом 1 год., після чого фтороводень видаляли у вакуумі. Залишок суспендували в етиловому ефірі; тверді речовини відфільтровували, промивали ефіром, і пептид екстрагували в 50 мл водного розчину оцтової кислоти. Аліквоту розщепленого екстракту піддавали аналітичному HPLC [колонка Zorbax C8 0,465 см, 1 мл/хв, 45C, 214 нм, буфер A – 0,1 % розчин TFA, буфер B – 0,1 % розчин TFA/90 % розчин ACN, градієнт від 10 % B до 80 % В протягом 10 хв]. Екстракт завантажували в колонку для 28