Інактивуючий розчин “мік ір” для обробки патологічного матеріалу при туберкульозі для проведення полімеразної ланцюгової реакції

Інактивуючий розчин для обробки патологічного матеріалу при туберкульозі для проведення 3 25806 Недоліком прототипу є те, що глутаровий альдегід має здатність випарюватися, тому потребує використання персоналом, працюючим з ним, засобів захисту органів дихання, а також оснащення приміщення витяжним пристроєм та потребує виготовлення препарату безпосередньо перед застосуванням. В основу корисної моделі, поставлено задачу розробити інактивуючий розчин для обробки патологічного матеріалу при туберкульозі для проведення полімеразної ланцюгової реакції, що містить глутаровий альдегід та воду, шля хом додавання катіонних поверхнево активних речовин (ПАР) та хлористого натрію при слідуючому співвідношенні компонентів, мас.%: катіонні ПАР 0,15-0,75 глутаровий альдегід 0,05-0,25 хлористий натрій 0,2-1,0 вода решта, щоб забезпечити ефективність інактивуючого засобу. Розроблений інактивуючий розчин має переваги перед кисневмісними сполуками, хлорактивними, фенольними сполуками та прототипом. Цей розчин є ефективним та не руйнує стр уктур у ДНК, що не зашкоджує подальшому проведенню дослідження за допомогою ПЛР. Дослідження з вивчення впливу розробленого інактивуючого розчину та прототипу проводили на гомогенній суспензії патологічного матеріалу шляхом сорбентного виділення ДНК та подальшої ампліфікації за допомогою комерційного набору фірми OOO "Ізоген" на M.tub+bov (Росія), що відповідає критерію «новизна». Інактивуючий розчин готують перед застосування шляхом розчинення концентрату у воді у різних співвідношеннях компонентів композиції: Приклад 1. катіонні ПАР 0,75% глутаровий альдегід 0,25% хлористий натрій 1% вода решта За умов обробки суспензій патологічного матеріалу (n=20) розчином виготовленим за прикладом 1 за експозиції 24 години розчин проявляє руйнівну дію по відношенню до ДНК, в наслідок чого жодна проба не є позитивною. При експозиції 5 годин 3 проби з 20 виявились позитивними. Приклад 2. Тіж компоненти, що в першому прикладі, тільки при слідуючому співвідношенні: 4 катіонні ПАР 0,375% глутаровий альдегід 0,125% хлористий натрій 10,5% вода решта При обробці 20 проб патологічного матеріалу композицією з прикладу 2 з експозицією 5 годин виявилось, що 12 з 20 має характерне світіння (позитивні), а з експозицією 24 години жодна проба не є позитивною. Приклад 3. Теж саме, що і в прикладі №2 при співвідношенні компонентів: катіонні ПАР 0,15% глутаровий альдегід 0,05% хлористий натрій 0,2% вода решта Обробка інактивуючим розчином "Мік IP" ти х же проб виявилась найефективнішою, оскільки 15 проб суспензій з 20 мали характерне світіння при експозиції 5 годин (позитивні), а за експозиції 24 години тільки 4 проби виявились позитивними. Це свідчить, що розчин "Мік IP" має менш руйнівний характер по відношенню до ДНК. Отже можливе його використання для первинної обробки патологічного матеріалу контамінованих мікобактеріями для проведення молекулярно-генетичних досліджень на основі полімеразної ланцюгової реакції. Приклад 4. Обробку проводили розчином, який містить 2,5% глутарового альдегіду з рН 7,0-8,5 та вода - решта. При використанні розчину з прикладу 4 (прототип) з експозицією 5 та 24 години жодна з 20 проб не виявилася позитивною за показниками візуалізації полімеразної ланцюгової реакції. Отже прототип, який використовується для первинної обробки суспензії патологічного матеріалу для дослідження в подальшому за допомогою ПЛР не придатний, оскільки викликає значні руйнування будови ДНК. Результати досліджень ДНК за допомогою ПЛР мікобактерій приведені в таблиці 1 та 2. Розроблений інактивуючий розчин "Мік IP" для обробки патологічного матеріалу використовується у вигляді водних розчинів, пригнічуючи діє на мікобактерії та має незначний вплив на ДНК що не заважає подальшому проведенню дослідження. Запропонований інактивуючий розчин "Мік IP" буде застосовуватися при первинній обробці патологічного матеріалу, контамінованого мікобактеріями для подальшого проведення молекулярногенетичних досліджень на основі полімеразної ланцюгової реакції. Taблиця 1 Інактивуючий розчин "Мік IP" для обробки патологічного матеріалу при туберкульозі для проведення полімеразної ланцюгової реакції № проб 1 2 3 4 5 Приклад №1 5г 24г + Приклад №2 5г 24г + + + + Приклад №3 5г 24г + + + + + Приклад №4 5г 24г 5 25806 6 Продовження таблиці 1 Інактивуючий розчин "Мік IP" для обробки патологічного матеріалу при туберкульозі для проведення полімеразної ланцюгової реакції 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + Таблиця 2 експозиція часу 5 годин 24 години приклад 1% співвід. "+” "-" 15 85 Комп’ютерна в ерстка Л. Купенко приклад 2% співвід. "+” "-" 60 40 приклад 3% співвід. "+” "-" 75 25 20 80 Підписне приклад 4% співвід. "+” "-" Тираж 26 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601