Спосіб визначення ступеня імунологічної недостатності

Спосіб визначення ступеня імунологічної недостатності, що включає навантаження туберкуліном та реєстрацію внутрішньошкірної реакції, який відрізняється тим, що туберкуліном навантажують пробу периферичної крові людини, потім вимірюють інтенсивність хемілюмінесценції проби, а ступінь імунологічної недостатності визначають за величиною ємності функціональних резервів імунокомпетентних клітин, яку розраховують за формулою: 2 3 (туберкулінових) та інших, що дозволяють реєструвати розлади в клітинному імунітеті хворих. Так, при негативній пробі Манту діагностували анергію, що підтвердили показниками клітинного імунітету, оскільки спостерігали супресію клітинної ланки імунітету, тобто підвищення рівня Т-супресорів у периферичній крові хворих (Батян А.Н. Иммунологические нарушения у больных туберкулезом легких и пути повышения эффективности лечения: Автореф. дис. докт. мед. наук. - М., 1995. - 35с). Даний спосіб є найбільш близьким до того, що заявляється, за технічною суттю та результатом, який може бути досягнутим, тому його обрано в якості прототипу. Основним недоліком способу-прототипу є його інвазивність. У зв'язку з вищевикладеним, в основу корисної моделі покладена задача зменшення інвазивності та підвищення інформативності способу. Задачу, яку покладено в основу корисної моделі, вирішують тим, що у відомому способі визначення ступеня імунологічної недостатності, який включає внутрішньошкірні проби з навантаженням туберкуліном, згідно з корисною моделлю, туберкуліном навантажують пробу периферичної крові і вимірюють інтенсивність хемілюмінесценції (ХЛ), а ступінь імунологічної недостатності визначають за величиною ємності функціональних резервів імунокомпетентних клітин, яку розраховують за формулою: ХЛту б t ХЛс пон . ЄФР , ХЛс пон ТС . де: ЄФР - ємність функціональних резервів імунокомпетентних клітин, ТС - рівень фонового світіння, ХЛспон - хемілюмінесценція без навантаження алергеном, ХЛтуб+t - хемілюмінесценція після навантаження туберкуліном і термостатування протягом 25±1хв. при t=37±0,1°С і при значеннях цього показника 20 та більше у.о. реєструють відсутність імунологічної недостатності; у межах 16-19у.о. - 1-й ступінь імунологічної недостатності, 10-15,9у.о. - 2-й ступінь імунологічної недостатності, 9,9у.о. та менше - 3-й ступінь імунологічної недостатності. Спосіб здійснюють таким чином. З венозної гепаринізованої крові хворого, узятої натще, виділяють у градієнті щільності фікол-верографіну (d=1,077) популяцію мононуклеарів (лімфоцити, моноцити), двічі відмивають від слідів верографіну й фіколу розчином Рінгера. Розводять суспензію клітин до 1-1,5млн./мл і поміщають по 50мкл у 2 пробірки. Потім у пробірки додають по 1 мл фізрозчину (0,9% NaCl), 10мкл люмінолу (1мг/мл) і перед виміром - 20мкл 3%-ного перекису водню. Після цього проводять реєстрацію люмінолзалежної хемілюмінесценції (ЛЗХЛ), вимірюючи інтенсивність надслабкого світіння (імп/с) у діапазоні від 200 до 600нм у режимі рахунку фотонів. Спочатку вимірюють рівень фонового світіння, а потім до другого зразка додають 0,2 ТО туберкуліну і інкубують суміш 25±1 хвилин у термостаті при темпе 46661 4 ратурі 37±0,1°С, та вимірюють інтенсивність ХЛ, а ступінь імунологічної недостатності визначають за величиною ємності функціональних резервів імунокомпетентних клітин, яку розраховують за формулою: ХЛту б t ХЛс пон . ЄФР ХЛс пон ТС . де: ЄФР - ємність функціональних резервів імунокомпетентних клітин, ТС - рівень фонового світіння, ХЛспон - хемілюмінесценція без навантаження алергеном, ХЛтуб+t - хемілюмінесценція після навантаження туберкуліном і термостатування протягом 25±1хв. при t=37±0,1°С і при значеннях цього показника 20 та більше у.о. реєструють відсутність імунологічної недостатності; у межах 16-19у.о. - 1-й ступінь імунологічної недостатності; 10-15,9у.о. - 2-й ступінь імунологічної недостатності; 9,9у.о. та менше - 3-й ступінь імунологічної недостатності. Ефективність способу ілюструють наступні приклади. Приклад 1 Хворий М., історія хвороби №709, вік 55 років, в минулому робітник ливарного цеху, чистильник, стаж у шкідливих умовах праці в пиловій професії 27 років. Основний діагноз - хронічне обструктивне захворювання легень (ХОЗЛ) пиловій етіології II стадії у фазі ремісії, невеликий пневмофіброз, емфізема легень II стадії, легенева недостатність II стадії. За результатами виміру ЛЗХЛ клітин крові й підрахунку за формулою показник ЄФР складає 75,9у.о. Висновок: показник ємності функціональних резервів вище 20у.о., слід діагностувати відсутність імунологічної недостатності. Це збігається з даними імунного статусу, де кількість Т-хелперів (CD4) складає 31%, а число Т-супресорів (CD8) 14%. Імунорегуляторний індекс (ІРІ), що означає співвідношення CD4/CD8, складає число 2,21 (норма 1,4-1,8), що навіть перевищує норму і дозволяє робити висновок про відсутність імунологічної недостатності. Приклад 2 Хворий А., історія хвороби №726, вік 57 років, в минулому робітник ливарного цеху, стриженщік, стаж у шкідливих умовах праці, в пиловій професії 33 роки. Основний діагноз - хронічне обструктивне захворювання легень, токсико-пиловій етіології II стадії, у фазі ремісії, невеликий пневмофіброз. Супутні захворювання - гіпертонічна хвороба II стадії. За результатами виміру ЛЗХЛ клітин крові й підрахунку за формулою, показник ЄФР складає 17,7у.о. Висновок: показник ємності функціональних резервів трошки менше межі норми (20у.о.), слід діагностувати перший, тобто невеликий ступінь імунологічної недостатності. Це узгоджується з даними імунного статусу, де ще не реєструється дисбаланс в співвідношенні між хелперами та супресорами, однак величини їх знижені. Кількість Т 5 46661 хелперів (CD4) складає 15%, число Т-супресорів (CD8) - теж 15%. ІРІ - співвідношення CD4/CD8, складає число 1,0, що також нижче норми (1,41,8). Таким чином, усі показники свідчать про певну ступінь імунологічної недостатності. Приклад 3 Хвора М, історія хвороби №761, вік 49 років, робітниця ливарного виробництва, формувальниця, стаж у шкідливих умовах праці 12 років. Діагноз - хронічне обструктивне захворювання легень пиловій етіології, ІІ-ІІІ стадії, вторинна персистируюча бронхіальна астма ІІ-ІІІ стадії, емфізема II стадії, невеликий пневмофіброз. Супутні захворювання - холецистит, гіпертонічна хвороба II стадії. За результатами виміру ЛЗХЛ клітин крові й підрахунку за формулою показник ЄФР складає 13,4у.о. Висновок: показник ємності функціональних резервів знаходиться у межах 16-19у.о., що дозволяє діагностувати 2-й ступінь імунологічної недостатності. Це узгоджується з даними імунного статусу. У даному випадку перевищує число Тсупресорів (CD8), яке складає 33% і нижче - кількість Т-хелперів (CD4) - 27%, що відповідає супре Комп’ютерна верстка О. Рябко 6 сії клітинної ланки імунітету. ІРІ (CD4/CD8) у цій хворої значно знижений, складає 0,82 і свідчить про наявність імунодефіциту. Приклад 4 Хворий С, історія хвороби №745, вік 48 років, в минулому електрозварник, стаж у шкідливих умовах праці 17 років. Основний діагноз - хронічне обструктивне захворювання легень токсикопиловій етіології II стадії, ускладнення - початковий пневмофіброз. За результатами виміру ЛЗХЛ клітин крові й підрахунку за формулою, показник ЄФР складає 7,4у.о. Висновок: показник ємності функціональних резервів менше 9,9у.о., що дозволяє діагностувати 3-й ступінь імунологічної недостатності. Це узгоджується з даними імунного статусу. Число Тсупресорів (CD8) складає 29% і перевищує кількість Т-хелперів (CD4) - 17%, що відповідаєте супресії клітинної ланки імунітету. ІРІ в цьому випадку низький, складає 0,58. Таким чином, усі показники вказують на наявність імунодефіциту. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601