Консорціум штамів агробактерій для виготовлення бактеріального добрива під шовковицю

Консорціум штамів агробактерій Agrobactenum radiobacter 51 і Agrobactenum radiobacter C-7 для виготовлення бактеріального добрива під шовковицю розміри клітин 1,0 - 1,5 х 2,0 - 3,0 з латерально прикріпленими жгутиками Спор не утворює Бактерії Agrobactenum radiobacter 51 грамвід'ємні Фізюлого-бюхімічні ознаки штаму Agrobactenum radiobacter 51 Аероб, але здатен рости в мікроаерофільних умовах Оптимум температур 25 - 30°С, оптимум рН5,7-8,0 Відношення до джерел вуглецю добре засвоює глюкозу, сахарозу, фруктозу, галактозу, лактозу, мальтозу, маніт, сорбіт, дульцит, погано -крохмаль Сброжує прості вуглеводи з утворенням КИСЛОТИ І СО2 Відношення до джерел азоту використовує органічні і мінеральні форми азоту Росте на безазотному середовищі Виноградського Фіксує атмосферний азот Нітроганзна активність на напіврядкому середовищі Єшбі з сахарозою 0,14мкг азоту на 1мл середовища за 24 год Казеїн не пдролізує, желатину не розріджує, молоко не згортає Штам зберігається при 3 - 4°С на агаризованому гороховому середовищі Періодичність пересівів 3 МІСЯЦІ Ознаки штаму СТІЙКІ Культурально-морфолопчні ознаки штаму Agrobactenum radiobacter C-7 На твердих середовищах МЛА і гороховому агарі утворює велику КІЛЬКІСТЬ слизу полісахаридної природи Колонії прозорі, в'язкі, мають гладку поверхню, не пігментованію Форма клітин округла паличка з розмірами 0,8 - 1,0 х 2,0 2,5мкм Клітини ругливі, спор не утворює Бактерії Agrobactenum radiobacter 51 грамвід'ємні Фізюлого-бюхімічні ознаки штаму (О со 00 00 48836 Agrobactenum radiobacter C-7 ному гороховому середовищі Періодичність пе Аероб, але здатен рости в мікроаерофільних умовах Оптимум температур 22 - 32°С, оптимум рН5,5-9,0 Відношення до джерел вуглецю добре засвоює глюкозу, сахарозу, фруктозу, галактозу, лактозу, мальтозу, маніт, сорбіт, дульцит, погано -крохмаль Сброжує прості вуглеводи з утворенням КИСЛОТИ І СО2 Відношення до джерел азоту використовує органічні і мінеральні форми азоту На безазотному середовищі росте дуже повільно Нітрогеназна активнсть на напіврідкому середовищі Єшбі, з сахарозою 0,082мкг азоту на 1 мл середовища за 24 год Казеїн не пдролізує, желатину не розріджує, молоко не згортає Штам зберігається при 3 - 4°С на агаризованому гороховому середовищі Періодичність пе ресівів - 3 МІСЯЦІ ресівів - 3 МІСЯЦІ Ознаки штаму СТІЙКІ Консорціум бактерій Agrobactenum radiobacter зберігається при 3 - 4°С на агаризова Приклади конкретного застосування консорціума штамів агробактеріи Приклад 1 Для вивчення розвитку консорціуму штамів Agrobactenum radiobacter 51 і Agrobactenum radiobacter C-7 в порівнянні з монокультурами бактерій, які входять до його складу, кожний штам і консорціум Ш-1 культивували на рідкому гороховому середовищі в колбах Ерленмейера на 0,5л на качалках протягом двох діб при t° 28°С Результати досліджень по вивченню титра бактерій при розвитку їх в монокультурі і консорціумі наведені в табл 1 Дані наведені в табл 1 свідчать про те, що в умовах спільного вирощування двох штамів агробактеріи вихід клітин агробактеріи збільшується на порядок Дані наведені в табл 1 свідчать про те, що в умовах спільного вирощування двох штамів агробактеріи вихід клітин агробактеріи збільшується на порядок Таблиця 1 Титр клітин різних штамів агробактеріи при вирощуванні окремо і в консорціумі Варіанти досліду Agrobactenum radiobacter 51 Agrobactenum radiobacter C-7 Консорціум агробактеріи Ш-1 КІЛЬКІСТЬ КЛІТИН В 1МЛ середовища, млн 7,5-10 і и 2,3- 10 і и 50- 10 і и Приклад 2 Для вивчення здатності фіксувати атмосферний азот консорціумом штамів агробактеріи і окремими штамами кожний штам і консорціум штамів культивували на напіврідкому середовищі Ешбі з сахарозою в склянках на ЗО мл при t°28°C протягом двох діб Потім СКЛЯНКИ герметично закривали і в них вводили ацетилен в КІЛЬКОСТІ 10% від об'єму склянки Визначення КІЛЬКОСТІ етилену, який утворився протягом доби, проводили на газовому хроматографії "Chrom-4" з полум'яноіонізаційним детектором, використовуючі колонку з Р-Р-діоксшропюнітрилом Витрати газів водню ЗОмл за хвилину, азоту -100, повітря - 500 Дані досліду по фіксації атмосферного азоту консорціумом штамів і окремими штамами представлені в таблиці 2 Таблиця 2 Нітрогеназна активність різних штамів агробактеріи при вирощуванні окремо і в консорціумі Варіанти досліду Agrobactenum radiobacter 51 Agrobactenum radiobacter C-7 Консорціум агробактеріи Ш-1 Нітрогеназна активність.мкг азоту на 1мл середовища за добу 140-10' 82- 1 0 ' 672-10' Дані, представлені в табл 2 свідчать про підвищення активності фіксації атмосферного азоту консорціумом двох штамів агробактеріи в порівнянні зі штамами Agrobactenum radiobacter 51 і Agrobactenum radiobacter C-7 26, рекомендовано для виробництва бактеріальних препаратів під небобові культури, пояснюється тим, що з бульбочок шовковиці поряд з консорціумом агробактеріи було виділено 3 штами, ідентифіковані як Azospinllum brasilense В ДОСЛІДІ використовували сорт шовковиці Харківська 11 Рослини шовковиці в останній декаді квітня поливали суспензією клітин консорціума штамів агробактеріи із розрахунку 90 109 клітин на одну рослину в порівнянні зі штамом Azospinllum brasilense, який використовувався аналогічно консорціуму агробактеріи Результати досліду наведені в таблиці З Таблиця З 48836 Вплив консорціуму штамів агробактерій на листову масу рослин шовковиці Варіанти досліду Маса листя на кущі, кг Контроль (без обробки) Обробка консорціумом штамів агробактерій Ш-1 Обробка суспензією стандартного штаму Azospinllum brasilense 26 HCPos 2,132 Прибавка маси листя кг % 2,686 0,554 25,9 2,346 0,214 10,0 0,112 Аналізуючі одержані дані доходим до висновку, що консорціум штамів агробактерій сприяє підвищенню листової маси на 25,9%, в той час як стандартний штам Azospinllum brasilense збільшує листову масу шовковиці на 10% Приклад 4 В польових дослідах було вивчено вплив консорціуму агробактерій на листову масу рослин шовковиці сортів Українська 510 і Українська 1 Умови проведення досліду аналогічні прикла дуз Результати досліду представлені в таблиці 4 Дані представлені в табл 4 свідчать, що консорціум штамів агробактерій сприяє підвищенню листової маси шовковиці на 14,6 - 67,9% в залежності від сорту Отже, нова консорція штамів агробактерій активно фіксує атмосферний азот і підвищує масу листя на рослинах шовковиці на 14,6 - 67,9% в залежності від сорту Таблиця 4 Вплив консорціуму штамів агробактерій на листову масу рослин шовковиці різних сортів Варіанти досліду Маса листя на кущі, кг сорт Українська 510 Контроль (без обробки) 1,460 Обробка рослин консорціумом штамів 2,451 агробактерій Ш-1 0,881 HCPos сорт Українська 1 Контроль (без обробки) 1,350 Обробка рослин консорціумом штамів 1,546 агробактерій Ш-1 0,093 HCPos Література 1 Пилипенко Б Ф , Езерська Н В Феномен інтенсивного росту шовковиці, зумовлений мікробною інвазією // Шовківництво -Київ Урожай, 1994-С 7-9 2 Определитель бактерий Берджи (Под ред ДжХоулта, Н Крига, П Снита, ДжСтейнли, Прибавка маси листя кг % 0,991 67,9 0,196 14,6 С Уильямса Пер с англ под ред акад РАН Г А Заварзина М Мир, 1997 - 800 с З А с № 1538469 С 05 F п/08, С 12 N 'л"Штамм бактерий Azospinllum brasi-lense для производства бактериального удобрения под гречиху Опубл 02 11 87 ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна ( 0 4 4 ) 4 5 6 - 2 0 - 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71