Консорціум штамів біфідобактерій bifidobaсterium bifidum, b.longum, b.breve, b.infantis, b.adolescentis для приготування кисломолочних продуктів лікувально-дієтичного харчування, неферментованих харчових продуктів та бактерійних препаратів

Винахід відноситься до медичної мікробіології і являє собою консорціум штамів біфідобактерій п'яти видів, який може бути використаний для приготування кисломолочних, неферментованих харчових продуктів і препаратів. Препарати і продукти, які містять в своєму складі біфідобактерії, призначені для нормалізації мікробіоценозу кишечника людей, що терплять від дисбактеріозу, який виник внаслідок несприятливих екологічних умов, стресових дій, перенесених кишкових захворювань, тривалої антибіотикотерапії, променевої та хіміотерапії. Відомі зарубіжні моно- і комплексні препарати - еубіотики і кисломолочні продукти, що містять в своєму складі біфідобактерії видів B.bifidum, B.longum, B.adolescentis, B.breve (патент 2336886, патент 2411008, Франція; патент 637297, Швейцарія; патент 2134179, патент 2421066, ФРН; патент 5227946, патент 430642; Японія, патент 4645667, США). Для приготування бактерійних препаратів і продуктів лікувально-дієтичного харчування застосовують штами біфідобактерій видів B.bifidum №1, 791, B.longum B 379M, B.adolescentis MC-42 (авторське свідоцтво №343588, патент 1347221, патент 849779, патент 863639, СРСР]. В кишечнику людини трапляються 5 видів біфідобактерій - B.bifidum, B.longum, B.adolescentis, B.breve, B.infantis. Частіше всього виявляються види B.bifidum, B.longum і B.adolescentis (39 - 75%), причому два останніх переважають у дорослих людей. У немовлят в 30% випадків трапляються і біфідобактерії видів B.breve і B.infantis. Задачею винаходу є одержати консорціум штамів біфідобактерій, які мають комплекс властивостей, притаманних окремим штамам, здатний більш швидко приживлятися в кишечнику, має більш високу специфічну активність і сприяє нормалізації мікрофлори кишечника в більш ранні строки. Консорціум одержаний шляхом сполучення штамів 5 видів біфідобактерій - B.bifidum 791, B.longum B379M, B.breve 79 - 119, B.infantis 73 - 15, B.adolescentis Г7513, які мають близькі культуральні і фізіолого-біохімічні властивості, а також мають активність сквашування. Штам B.bifidum 791 виділений з вмісту кишечника здорового немовляти, депонований в ВНДІ генетика в ЦМП М під №B-3300. Штам B.longum B379M виділений з вмісту кишечника здорової дорослої людини, депонований в ВНДІ генетика в ЦМП М під №B-2000. Штам B.breve 79 - 119 виділений з вмісту кишечника здорового немовляти, депонований під №153 в ДКНМ МНДІЕМ ім. Г.Н. Габричевського. Штам B.infantis 73 - 15 виділений з вмісту кишечника здорового немовляти, депонований під №155 в ДКНМ МНДІЕМ ім. Г.Н. Габричевського. Штам B.adolescentis Г 7513 виділений з вмісту кишечника здорової дорослої людини, депонований під №158 в ДКНМ МНДІЕМ ім. Г.Н. Габричевського. Культурально-морфологічні ознаки консорціуму. Клітини штамів біфідобактерій являють собою грам + поліморфні палички з біфуркацією чи стовщенням на 1 - 2 кінцях, схильні до утворення скупчень. В рідинних живильних середовищах ростуть по всій висоті ємкості, крім зони аеробіозу. Логарифмічна фаза росту закінчується до 24 годин. Фізіолого-біохімічні ознаки консорціуму. Нерухомі, безспорові анаероби. Оптимальна температура вирощування 37,5 - 38°C, pH живильних середовищ 7,2 - 7,4. Каталазу не утворюють, желатину не розріджують. Зброджують глюкозу з утворенням оцтової і L + молочної кислоти без утворення газу, закислюючи середовище вирощування до pH 4,1 - 3,9. Видова належність кожного з штамів визначена згідно з їх ферментативною активністю. Штами здатні сквашувати молоко до 24 годин культивування. Штами активно нарощують мікробну масу на середовищах різного складу і сквашують молоко до 24 годин культивування, накопичуючи визначену кількість кислот (табл.1). Консорціум штамів активно розмножується на середовищах різного складу, до 24 годин культивування досягаючи в 1мл Ig 8,9 - 9,3, сквашує молоко з високою концентрацією біфідобактерій, що є головним показником можливості використання штамів в те хнологічному процесі. Продукуючи кислоти, консорціум штамів 5 видів інгібує ріст патогенних та умовно-патогенних мікроорганізмів (табл.2). Здатність консорціуму штамів 5 видів біфідобактерій нарощувати мікробну масу в живильних середовищах, сквашувати молоко в короткі строки, виявляти специфічну активність робить можливим його використання для приготування кисломолочних, неферментованих харчови х продуктів і бактерійних препаратів. Приклад 1. Використання консорціуму штамів біфідобактерій в складі закваски для приготування кисломолочних продуктів. 1 - й пасаж. Ліофілізовані штами B.bifidum 791, B.longum B379M, B.infantis 73 - 15, B.breve 79 - 119, B.adolescentis Г 7513 у кількості 0,1г сухої біомаси (1 доза) кожний окремо вносять до середовища вирощування (печінкову, тіогліколеву, кукур удзяно-лактозну) і титрують методом десятикратних розведень до 10. Вирощують 48 - 72 години при температурі 37,5 - 38°C. 2 - й пасаж. Культур у кожного з штамів, яка виросла, в об'ємі 5 - 10% вносять до середовища накопичення і культивують 16 - 24 години при температурі 37,5 - 38°C. 3 - й пасаж. Одержану біомасу (консорціум) в об'ємі 5% вносять до стерильного молока і культивують 12 16 годин при температурі 37,5 - 38°C. 4 - й пасаж. Лабораторну закваску в об'ємі 5% вносять до великого об'єму стерильного молока і культивують 12 - 16 годин при температурі 37,5 - 38°C. Одержання продукту. Одержану виробничу закваску в об'ємі 5% вносять до пастеризованого молока і культивують 4 - 5 годин, після чого продукт охолоджують і зливають. В результаті одержують готовий продукт з ніжним кисломолочним смаком густої однорідної консистенції із вмістом в 1мл 10 живих біфідобактерій. Приклад 2. Використання консорціуму штамів біфідобактерій в складі закваски для приготування неферментованих харчових продуктів. 1 - й пасаж. Ліофілізовані штами B.bifidum 791, B.longum B379, B.infantis 73 - 15, B.breve 79 - 119, B.adolescentis Г 7513 у кількості 0,1 сухої біомаси (1 доза) вносять кожний окремо до середовища вирощування (печінкову, тіогліколеву, кукур удзяно-лактозну) і титрують методом десятикратних розведень до 10. Вирощують 48 - 72 години при температурі 37,5 - 38°C. 2 - й пасаж. Культуру кожного із штамів, яка виросла, в об'ємі 5 - 10% вносять до середовища вирощування і культивують 16 - 24 години при температурі 37,5 - 38°C. 3 - й пасаж. Одержану біомасу (консорціум) у кількості 5% вносять до середовища накопичення більшого об'єму і культивують 16 - 24 години при температурі 37,5 - 38°C. Одержання продукту. Закваску, яка виросла, вносять до харчової сировини (молоко, соки, пиво та ін.), перемішують і розливають в ємкості. В результаті одержують продукт з загальною концентрацією синантропної біфідофлори не менше 1млн/мл. Приклад 3. Використання консорціуму штамів біфідобактерій для одержання бактерійного препарату. Штами B.bifidum 791, B.longum B379M, B.infantis 73 - 15, B.breve 79 - 119, B.adolescentis Г7513 1 - 2 - 3 його пасажів культивують при 37,5 - 38°C та pH 7,2 - 7,4 протягом 16 - 24 годин. До біомаси консорціуму, яку виростили, додають захисні середовища висушування (сахароза 80% і желатина 8% в об'ємі 10 - 12%, знежирене молоко до 20%). Одержану суспензію розливають до 2мл в ампули чи у пеніцилінові флакони, заморожують при температурі -40 - -45°C та ліофілізують із замороженого становища в вакуум-сушильних апаратах. Одержаний препарат містить 10 живих клітин біфідобактерій. Згідно з НТД на сухий біфідумбактерин (ФС 42 - 1,32 BC 94) дозволяється вміст в 1 дозі препарату не менше 10 живих клітин біфідобактерій. Таким чином, запропонований консорціум штамів 5 видів біфідобактерій активно розмножується в живильних середовищах з накопиченням виробничої біомаси в короткі строки культивування, сквашує молоко з утворенням згустка з добрими смаковими і органолептичними властивостями, має специфічну активність. Консорціум штамів можна рекомендувати в складі заквасок для приготування кисломолочних лікувальнодієтичних продуктів, неферментованих харчови х продуктів та бактерійних препаратів.