Спосіб візуального виявлення похідних ряду 1,4-бензодіазепінів

Спосіб візуального виявлення похідних ряду 1,4-бензодіазепшів, який включає розчинення про би, що аналізується, у розчині соляної кислоти, проведення кольорової реакції з індикаторним реагентом і візуальній реєстрації змінення забарвлення розчину, який відрізняється тим, що для розчинення проби використовують розчин соляної кислоти концентрацією 0,8-1,2моль/л, а для проведення кольорової реакції - розчин барвника групи індиго-індигокарміну концентрацією (0,5-1,0) 10 2 моль/л у присутності окислювача - розчину перйодату калію концентрацією (1,5-2,0) 10 2 моль/л Винахід, що передбачається, має бути віднесений до розділу аналітичної хімії, а саме, до способів виявлення препаратів 1,4-бенздіазепшового ряду (далі - 1,4-БЗДЗ) в різноманітних лікарських засобах - таблетках, порошках чи розчинах Сторонні ефекти та етичні сторони неконтрольованого вживання психотропних речовин, утому числі і 1,4-БЗДЗ, викликають гостру необхідність у розробці нових швидких, нескладних і у той же час надійних та чутливих засобів їх виявлення у позалабораторних умовах Найбільш зручними засобами для такого виявлення вказаних речовин можуть бути візуальні експрес-тести, дія яких заснована на використанні чутливих індикаторних реакцій з речовиною, що досліджується У літературі описані методики візуального виявлення 1,4-БЗДЗ на папері або на пластинках при сприскуванні хроматограм розчинами соляної, азотної або сірчаної кислот, червоною і жовтою кров'яною сіллю, хлоридом ртуті, бромною водою, або реактивом Несслера [Duarte R , Paiva A, Rev port, farm , 1965, V IS, p 309] До недоліків цих методик треба віднести необхідність використання небезпечних агресивних мінеральних кислот та низьку селективність виявлення Хлордіазепоксид, діазепам, оксазепам та їх метаболіти можуть бути виявлені послідовною обробкою зразку 4-диметиламіно-бензальдепдом та так званим реактивом Браттона-Маршалла [Sawada Н , Shinohara К Arch Toxikol , 1970, 27,p 237] Реакція заснована на діазотуванні аро матичних амінів або амінобензофенонів, що утворюються при гідролізі більшості 1,4 -БЗДЗ, та їх подальшому сполучанні з N-1 нафтилетилендіаміном Таким чином визначають більшість 1,4 -БЗДЗ, що мають нітрогрупу, яку попередньо відновлюють [Rider J - ArzneimittelForsch , 1965, В 15, S 1134], або ацетамідную, яку пдролізують [Rider J там же, 1973, В 23, S 207] Тривалість такого пробопідготування робить неможливим застосування цих методик для експресних способів виявлення 1,4 -БЗДЗ Відносно непогані результати були отримані при ПОСЛІДОВНІЙ обробці хроматограм реактивами Браттона-Маршалла та реактивом Драгендорфа [Halot D, Prod, et prob pharmac , 1970.V 25, p 175] При цьому підвищується надійність результатів виявлення, але до недоліків цих методів, як і попередніх, треба віднести окрім їх тривалості ще і складність пробопідготування, що робить проблематичним їх використання для тестових методів виявлення 1,4 -БЗДЗ Реагент, що широко використовується для якісного виявлення 1,4 -БЗДЗ - йодоплатинат калію [Speaker J - J Chromatogr Sei, 1974, V 12, p 297J, низько специфічний і може виявляти широкий круг органічних речовин Окрім того, у своєму складі він вміщує сіль дорогоцінного металу - платини, що робить не економічним його широке використання Найбільш близьким до винаходу, що передбачається, є прийнятий нами за прототип ідентифі CO 00 го ю 53183 каційний спосіб визначення похідних ряду 1,4БЗДЗ за допомогою якісних реакцій [Фартушини А Ф , Мужановський Є Б , Седов А I Фармацевтичний журнал, 1988, №3, с 45-49] Згідно цьому способу на фарфорову пластинку або пластинку, що покрита тонким шаром силікагелю, наносять 0 2 мл розчину, що був отриманий після попереднього концентрування 5 - 50 мл зразку, що було взято на аналіз, додають 2мл розчину соляної кислоти з концентрацією бмоль/л, кип'ятять 2хв, охолоджують 15хв у морозильній камері холодильника, додають 1мл 6% розчинів нітриту натрію та броміду натрію (1 1), ще раз охолоджують ЗОхв , після чого додають 5мл 10% розчину сечовини, а через 15хв - 30% розчин натрію гідроксиду до слаболужної реакції за лакмусом, проводять кольорову реакцію з реагентом-індикатором, додаючи 0 5мл 1% розчину 1-нафтолу та реєструють зміну забарвлення розчину З наведеного опису видно, що відомий спосіб включає 9 операцій з використанням 7 реагентів 1 -розчинення зразка у розчині соляної кислоти з концентрацією бмоль/л, 2 -кип'ячіння розчину на протязі 2 хв , 3 -охолоджування розчину у морозильній камері 15 хв , 4 -обробку проби розчинами нітриту та броміду натрія, 5 -охолоджування розчину на протязі ЗОхв , 6 -обробка розчину, що був охолоджений, розчином сечовини, 7 -доведення розчину до слаболужної реакції гідроксидом натрію, 8 -додання індикаторного розчину -1-нафтолу, 9 -візуальну реєстрацію зміни забарвлення розчину ПОХІДНІ ряду 1,4 - БЗДЗ - еленіум, тазепам та феназепам дають при цьому тестуванні рожеве або червоне забарвлення, нітразепам -синьофіолетове, Препарати шшіх груп також можуть давати забарвлення, наприклад, антелепсин - зелене, фенацетин та парацетамол - фіолетове До недоліків прототипу треба віднести - невисоку межу відкриття - 0 5 - 20мкг (для різних похідних 1,4-БЗДЗ вона різниться), яка є недостатньою при дослідженні сумішей або розчинів лікарских речовин, небезпечність способу - використання міцних розчинів агресивної соляної кислоти та розчину токсичного реагента -1-нафтолу, - багатостадійність процесу і пов'язаний з цим значний час виконання аналізу - майже 90хв , неможливість використання методу у польових умовах, оскільки для його виконання потрібне таке стаціонарне обладнання як піч та холодильник, окрім того, невисоку селективність методу Задача нинішнього винаходу - розробка візуального способу виявлення похідних 1,4- БЗДЗ у різних об'єктах, який би дозволив за рахунок використання нових реагентів підвищити чутливість та селективність способу, зменшити КІЛЬКІСТЬ операцій та реагентів, за рахунок чого скоротити строк виконання аналізу та підняти рівень його безпеки, уникнути використання стаціонарного обладнання для проведення експрес-аналізу Рішення поставленої задачі забезпечується тим, що у способі візуального виявлення похідних 1,4-БЗДЗ, який вміщує розчинення проби, що аналізується, у розчині соляної кислоти, проведення кольорової реакції з індикаторним реагентом і візуальній реєстрації зміни забарвлення розчину, згідно винаходу для розчинення проби використовують розчин соляної кислоти з концентрацією 0,8 - 1,2моль/л, а для проведення кольорової реакції розчин барвника групи індиго - індигокарміну з концентрацією (0 5 - 1,0) 102моль/л у присутності окислювача - розчину перйодату калію з концентрацією (1 5 - 2 0) 10 2моль/л Згідно запропонованому способу у розчинах, що вміщують ПОХІДНІ 1,4-БЗДЗ, затримується реакція окислення барвника індигокарміну перйодатом калію ВІДПОВІДНО, у розчинах, що не містять 1,4-БЗДЗ, реакція закінчується значно швидше і супроводжується зникненням синього кольору реагента - індигокарміну у часі З наведеного опису способу визначення, що запропоновано, можна бачити, що КІЛЬКІСТЬ реагентів зведено до 3 при чотирьох операціях, а саме 1 -розчинення зразка у соляній кислоті з концентрацією 0,8 -1,2моль/л, 2 -проведення індикаторної реакції з розчином індигокарміну, 3 -додання розчину перйодату калія, 4 -візуальна реєстрація зміни забарвлення розчину у часі За рахунок використання нових реагентів і реєстрації зміни забарвлення реакційного розчину у часі, вдалося підвищити чутливість запропонованого способу у порівнянні з прототипом, скоротити час виконання аналізу за рахунок зменшення КІЛЬКОСТІ операцій і реагентів з 90хв до 2 - 5хв , завдяки виключенню з процесу стадій кип'ятіння та охолоджування, позбавитись використання стаціонарного обладнання, підвищити селективність способу Окрім того, зміна концентрації соляної кислоти - розчинника зразка з 6 моль/л на концентрацію 0 8 - 1 0моль/л поряд з заміною токсичного реагента 1- нафтола на нетоксичний індигокармін дало змогу підвищити рівень його безпеки Приклад Візуальне виявлення похідних 1,4БЗДЗ На фторопластову, скляну або фарфорову пластинку вміщують 1 краплю (~0,03мл) розчину або 1-Змг порошку, що аналізується, додають 1 краплю розчину соляної кислоти з концентрацією 0 8-1 2моль/л, 1 краплю розчину індигокарміну з концентрацією ( 0 5 - 1 0 ) 102моль/л та 1 краплю розчину перйодату калію з концентрацією (1 5 2 0) 102моль/л В присутності похідних 1,4 - БЗДЗ забарвлення розчину не змінюється на протязі до 5 хвилин У контрольній пробі при відсутності похідних 1,4 - БЗДЗ синій колір розчину зникає на протязі 0 5 - 1 0 хвилини Вивчено вплив концентрації кожного з реагентів на хід якісної реакції для виявлення похідних 1 4 - БЗДЗ (Табл 1) Найкращі результати одержано при застосуванні розчину соляної кислоти з концентрацією від 0 8 - 1 2моль/л, індигокарміну з концентрацією (0 5 - 1 0),10 2моль/л та розчину перйодату калію з концентрацією (15 - 2 0)10 2 моль/л Зменшення концентрацій веде до зниження чутливості способу через нестачу реагентів 53183 При більш високих концентраціях знижується різниця у часі між контрольним розчином і розчином зразка, що містить ПОХІДНІ ряду 1,4 - БЗДЗ, а також при цьому знижується селективність реакції Спосіб, що запропоновано, є специфічним для більшості похідних ряду 1,4 - БЗДЗ, а саме для діазепаму, тазепаму, нітразепаму, хлордіазепоксіду та пдазепаму Межа відкриття 1,4 -БЗДЗ за пдазепамом дорівнює 0,2мкг Перевірка селективності запропонованого способу показала, що ІНШІ поширені психотропні речовини, а саме барбітурати та фенотіазіни, як і багато ІНШІХ лікарских препаратів, наприклад, сульфаміди, саліцілати, ПОХІДНІ антипірину, дають негативний показник при цьому тестуванні Порівняльні характеристики прототипу та запропонованого способу наведено у таблиці 2, із чого видно, Ідо запропонований спосіб візуального виявлення похідних ряду 1,4 - БЗДЗ відрізняється вищею чутливістю при значно меньшому об'ємі проби, підвищеним рівнем безпеки, завдяки застосуванню як розчинника зразка розведеного розчину соляної кислоти та заміною токсичного індикаторного реагенту, експресністю та простотою виконання, що дає змогу застосовувати цей спосіб у позалабораторних умовах Він дозволяє швидко та надійно виявляти присутність похідних ряду 1,4 - БЗДЗ в різноманітних лікарських формах, наприклад, при проведенні судово-хімічної експертизи Таблиця 1 Вивчення впливу концентрацій реагентів на якісну реакцію окислювання індигокарміну перйодатом калію у присутності діазепаму СОЛЯНІ КИСЛОТИ 06 0,8 1,2 1,4 1,0 -"-"-"1,0 -"-"-" Концентрація реагентів, моль/л індигокарміну перйодата калію 0,5x10' 2,0x10' -"-"-" -"-"-" 0,3x10' 0,5x10' 1,0x10' 1,2x10' 0,5x10' 2,0x104 Забарвлення розчину проби на 2-ій хвилині досліджуваної контрольної блакитн синьо-фюл блакитний -"-"-" СИНІЙ -"-" 1,0x10' 1,5x10' 2,0x10' 2,5x10' -"-"-" блакитний безбарвний -"синьо-фюл безбарвний -"-"блакитний СИНІЙ -" СИНІЙ -"-" СИНІЙ безбарвний -"-" -" Таблиця 2 Порівняльні характеристики прототипу та запропонованого способу № Показник Прототип 1 Об'єм проби, мл або маса проби, мг 2, Чутливість (межа відкриття) мкг 3 Концентрація кислотного реагенту- НСІ, моль/л 4 Час аналізу, хв 5 Токсичність реагенту - індикатору 6 Використання обладнання 7 КІЛЬКІСТЬ операцій 5,0-50,0 0,5-20,0 6,0 90 токсичний ПІЧ, ХОЛОДИЛЬНИК 9 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24 Запропонований спосіб 0,03 1,0-3,0 0,2 0,8-1,2 2-5 нетоксичний не потрібне 4