Ферментний препарат

Ферментний препарат, що містить лізоцим і панкреатин, який відрізняється тим, що вказані ферменти препарат містить при наступному співвідношенні, мас. %: лізоцим 30-70, панкреатин 70-30. (19) (21) u201103677 (22) 28.03.2011 (24) 10.11.2011 (46) 10.11.2011, Бюл.№ 21, 2011 р. (72) ЧЕРНО НАТАЛІЯ КИРИЛІВНА, ОЗОЛІНА СОФІЯ ОЛЕКСАНДРІВНА, ТІРОН-ВОРОБЙОВА НАТАЛІЯ БОРИСІВНА 3 лізоциму, а також часткове заміщення лізоциму трипсином дозволяє створити бінарні ферментні композиції, які за лізоцимною активністю перевищують власно лізоцим. Також показано, що можливе підвищення лізоцимної активності у випадку часткового заміщення лізоциму сумішшю трипсину і панкреатичної ліпази. В той же час кожен з розглянутих ферментів - трипсин і ліпаза не виявляють окремо антибактеріальної дії, тобто у випадку використання таких композицій імовірно спостерігається синергічний ефект. Це явище можна пояснити, виходячи з будови клітинної стінки бактерій, яка побудована переважно з мукополісахариду, до складу якого входять залишки Nацетилглюкозаміну і N-ацетилмурамової кислоти, які перехресно зв'язані короткими пептидами. Бактерицидний ефект лізоциму зумовлений його здатністю гідролізувати -D-(14), а також, можливо, -D-(12) глікозидні зв'язки мукополісахариду. Сумісна дія лізоциму, що розщеплює глікозидні зв'язки мукополісахариду, а також трипсину, що додатково розщеплює пептидні зв'язки, ліпази, що гідролізує відповідно складноефірні зв'язки ліпідів, які присутні у складі клітинної стінки деяких бактерій, приводить до підвищення сумарної активності ферментних композицій. Враховуючи, що у складі панкреатину присутні як трипсин, так і ліпаза, а додаткове їх вилучення і очистка супроводжується підвищенням ціни на відповідні ферменти, було досліджено можливість створення двокомпонентних ферментних композицій, що містять лізоцим і панкреатин. Суміщення лізоциму з панкреатином підвищує активність двокомпонентної суміші, хоча самостійно панкреатин не виявляє лізоцимної активності (табл. 2). Ферментний препарат отримували наступним чином. 3 Ферменти: лізоцим (5 мг у 50 см дистильова3 ної води) і панкреатин (5 мг у 50 см дистильованої води) швидко змішували у різному співвідношенні при кімнатній температурі 20±2 °С. Одразу після перемішування додавали у реакційну суміш 64406 4 останні компоненти (K-Na-фосфатний буферний розчин, трилон Б, субстрат (10 мг/см)) і вимірювали лізоцимну активність (у даному випадку, змінення оптичної густини системи) окремо панкреатину, лізоциму і у суміші лізоцим-панкреатин, використовуючи як субстрат Micrococcus luteus загально прийнятим методом згідно з патентом Російської Федерації № 2294373. Приклад 1. Отримували ферментний препарат, як наведено вище. Компоненти брали у наступному співвідношенні, мас. % : лізоцим - 30, панкреатин - 70. Приклад 2. Отримували ферментний препарат, як наведено вище компоненти брали у наступному співвідношенні, мас. % : лізоцим - 50, панкреатин 50. Приклад 3. Отримували ферментний препарат, як наведено вище компоненти брали у наступному співвідношенні, мас. % : лізоцим 70, панкреатин - 30. Лізоцимна активність отриманих ферментних сумішей за прикладами 1-3 наведена в табл. 1. Дані, наведені в табл. 1, вказують на те, що найбільш суттєве збільшення лізоцимної активності відносно контролю спостерігається при співвідношенні лізоциму і панкреатину у мас. %: 5050, 7030, відповідно. Бактерицидний ефект сумішей лізоцимпанкреатин наведено у табл. 3. Дані, наведені в табл. 3, вказують на те, що при співвідношенні лізоциму і панкреатину у мас. %: 7030, розширився спектр дії суміші на Гр бактерії (Pseudomonas aemginosa, Planococcus citreus). Отриманий ферментний препарат застосовували для одержання антибактеріального засобу у формі таблеток, до складу яких увійшли наступні компоненти, мас. %: - лізоцим білка курячих яєць - 30-70 %; - панкреатин - 70-30 %. - фармацевтично допустимий носій - лактози моногідрат. Таблиця 1 Зміна оптичної густини лізоцим-трипсин-ліпаза 5 сумішей за Micrococcus luteus № зразка 1 2 3 4 5 6 7 Зміна оптичної густини сумі- Збільшення лізоцимної активності відносші за Micrococcus luteus но контролю, % Лізоцим (л) (контроль) 0,455 Трипсин (т) 0 неактивний Ліпаза (лп) 0 неактивна 70 % л + 30 % лп 0,516 13,4 100%л + 40%т 0,541 18,9 60 % л + 40 % т + 40 % 0,583 28,1 лп 40 % л + 30 % т + 30 % 0,522 14,8 лп Ферменти 5 64406 6 Таблиця 2 Зміна оптичної густини лізоцим-панкреатин сумішей за Micrococcus luteus № зразка 1 2 3 4 5 Зміна оптичної густини сумі- Збільшення лізоцимної активності відносші за Micrococcus luteus но контролю, % Лізоцим (л) (контроль) 0,455 Панкреатин (п) (конт0 неактивний роль) 50 % л + 50 % п 0,680 49,6 70%л + 30% п 0,635 39,7 70 %п 4-30% л 0,674 48,3 Ферменти Таблиця 3 Бактерицидний ефект сумішей лізоцим-панкреатин № п/п Мікроорганізми 1 Micrococcus luteus 3 Escherichia coli 4 Klebsiella pneumoniae 5 6 Pseudomonas aeruginosa Planococcus cilreus Комп’ютерна верстка Л. Купенко Зони лізису, мм Лізоцим білка курячих яєць Панкреатин + лізоцим(70 %+30 %) 35 35 бактеріостатична дія 25 25 бактеріостатична дія 25 25 20 30 35 42 Підписне Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601