Лізобактинаміди, спосіб їх одержання (варіанти) та застосування їх як антибактеріального засобу

1. Сполука формули 2 3 де циклоалкіл, циклоалкілметил, феніл, бензил, гетероарил і гетероарилметил можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибрані із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, гідроксигрупу, аміногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу, С1-С4алкіламіногрупу, гідроксикарбоніл, С1-С4алкоксикарбоніл, амінокарбоніл, С1-С4алкіламінокарбоніл і 5- або 6-членний гетероцикліл, який приєднаний через атом азоту, 4 R означає С1-С6-алкіл, С3-С7-циклоалкіл, С3-С7циклоалкілметил, феніл, бензил, 5- або 6-членний гетероарил, 5- або 6-членний гетероарилметил, триметилсилілметил або 2-аміно-2-оксоетил, де алкіл може містити 1-3 замісники, незалежно один від одного вибрані із групи, яка включає галоген, гідроксигрупу, аміногрупу, меркаптогрупу, 1,4,5,6-тетрагідропіримідин-2-іламіногрупу й [аміно(іміно)метил]аміногрупу, та де циклоалкіл, циклоалкілметил, феніл, бензил, гетероарил і гетероарилметил можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибрані із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, гідроксигрупу, аміногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу, С1-С4алкіламіногрупу, гідроксикарбоніл, С1-С4алкоксикарбоніл, амінокарбоніл і С1-С4алкіламінокарбоніл, 5 R означає С1-С6-алкіл, С3-С7-циклоалкіл, С3-С7циклоалкілметил, феніл, бензил, 5- або 6-членний гетероарил, 5- або 6-членний гетероарилметил, триметилсилілметил або 2-аміно-2-оксоетил, де алкіл може містити 1-3 замісники, незалежно один від одного вибрані із групи, яка включає галоген, гідроксигрупу, аміногрупу, меркаптогрупу, 1,4,5,6-тетрагідропіримідин-2-іламіногрупу й [аміно(іміно)метил]аміногрупу, та де циклоалкіл, циклоалкілметил, феніл, бензил, гетероарил і гетероарилметил можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибрані із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, гідроксигрупу, аміногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу, С1-С4алкіламіногрупу, гідроксикарбоніл, С1-С4алкоксикарбоніл, амінокарбоніл і С1-С4алкіламінокарбоніл, 6 R означає С1-С6-алкіл, де алкіл містить замісник, вибраний із групи, яка включає аміногрупу, 1,4,5,6-тетрагідропіримідин-2іламіногрупу, [аміно-(іміно)метил]аміногрупу, 2піридил, 3-піридил і 4-піридил, 7 R означає С1-С6-алкіл, С3-С7-циклоалкіл, С3-С7циклоалкілметил, феніл, бензил, 5- або 6-членний гетероарил, 5- або 6-членний гетероарилметил або триметилсилілметил, де алкіл може містити 1-3 замісники, незалежно один від одного вибрані із групи, яка включає галоген, гідроксигрупу, аміногрупу, меркаптогрупу, 1,4,5,6-тетрагідропіримідин-2-іламіногрупу й [аміно(іміно)метил]аміногрупу, та де циклоалкіл, циклоалкілметил, феніл, бензил, гетероарил і гетероарилметил можуть містити 1-4 95630 4 замісники, незалежно один від одного вибрані із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, гідроксигрупу, аміногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу, С1-С4алкіламіногрупу, гідроксикарбоніл, С1-С4алкоксикарбоніл, амінокарбоніл і С1-С4алкіламінокарбоніл, 8 R означає С1-С6-алкіл, С3-С7-циклоалкіл, С3-С7циклоалкілметил, феніл, бензил, 5- або 6-членний гетероарил, 5- або 6-членний гетероарилметил, триметилсилілметил або 2-аміно-2-оксоетил, де алкіл може містити 1-3 замісники, незалежно один від одного вибрані із групи, яка включає галоген, гідроксигрупу, аміногрупу, меркаптогрупу, 1,4,5,6-тетрагідропіримідин-2-іламіногрупу й [аміно(іміно)метил]аміногрупу, та де циклоалкіл, циклоалкілметил, феніл, бензил, гетероарил і гетероарилметил можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибрані із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, гідроксигрупу, аміногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу, С1-С4алкіламіногрупу, гідроксикарбоніл, С1-С4алкоксикарбоніл, амінокарбоніл і С1-С4алкіламінокарбоніл, 9 R означає водень, С1-С6-алкіл, С3-С7-циклоалкіл, С3-С7-циклоалкілметил, феніл, бензил, 5- або 6членний гетероарил, 5- або 6-членний гетероарилметил, триметилсилілметил або 2-аміно-2оксоетил, де алкіл може містити 1-3 замісники, незалежно один від одного вибрані із групи, яка включає галоген, гідроксигрупу, аміногрупу, меркаптогрупу, 1,4,5,6-тетрагідропіримідин-2-іламіногрупу й [аміно(іміно)метил]аміногрупу, та де циклоалкіл, циклоалкілметил, феніл, бензил, гетероарил і гетероарилметил можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибрані із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, гідроксигрупу, аміногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу, С1-С4алкіламіногрупу, гідроксикарбоніл, С1-С4алкоксикарбоніл, амінокарбоніл і С1-С4алкіламінокарбоніл, 10 R означає водень, С1-С6-алкіл, С3-С7-циклоалкіл, С3-С7-циклоалкілметил, феніл, бензил, 5- або 6членний гетероарил, 5- або 6-членний гетероарилметил, триметилсилілметил, 2-аміно-2-оксоетил, 2-аміно-1-гідроксі-2-оксоетил, (аміносульфоніл)(гідрокси)метил, 2-(С1-С4-алкіламіно)-2оксоетил або 2-(С1-С4-алкіламіно)-1-гідроксі-2оксоетил, де алкіл може містити замісник, вибраний із групи, яка включає галоген, гідроксигрупу, аміногрупу, меркаптогрупу, 1,4,5,6-тетрагідропіримідин-2іламіногрупу й [аміно(іміно)метил]аміногрупу, та де циклоалкіл, циклоалкілметил, феніл, бензил, гетероарил і гетероарилметил можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибрані із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, гідроксигрупу, аміногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу, С1-С4 5 95630 алкіламіногрупу, гідроксикарбоніл, С1-С4алкоксикарбоніл, амінокарбоніл і С1-С4алкіламінокарбоніл, 11 R означає С1-С6-алкіл, С3-С7-циклоалкіл, С3-С7циклоалкілметил, феніл, бензил, 5- або 6-членний гетероарил, 5- або 6-членний гетероарилметил, триметилсилілметил, 2-аміно-2-оксоетил, 2-аміно1-гідроксі-2-оксоетил, (аміносульфоніл)(гідрокси)метил, 2-(С1-С4-алкіламіно)-2оксоетил або 2-(С1-С4-алкіламіно)-1-гідроксі-2оксоетил, де алкіл може містити замісник, вибраний із групи, яка включає галоген, гідроксигрупу, аміногрупу, меркаптогрупу, 1,4,5,6-тетрагідропіримідин-2іламіногрупу й [аміно(іміно)метил]аміногрупу, та де циклоалкіл, циклоалкілметил, феніл, бензил, гетероарил і гетероарилметил можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибрані із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, гідроксигрупу, аміногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу, С1-С4алкіламіногрупу, гідроксикарбоніл, С1-С4алкоксикарбоніл, амінокарбоніл і С1-С4алкіламінокарбоніл, або одна з її солей, її сольватів або сольватів її солей, за винятком сполуки формули O HO NH2 O NH O HO R1 O H2 N N H R2 H N O O O HN O HN OH CH3 CH3 HN O NH H3C H3C NH O OH HN H3C CH3 O O NH R12 N H HN NH NH2 , (Іа) у якій 1 R означає 2-метилпроп-1-іл, 2,2-диметилпроп-1іл, 2,2-диметилбут-1-ил, триметилсилілметил, бензил, 2-піридилметил, 3-піридилметил, 2тієнілметил, 3-тієнілметил або 1,3-тіазол-4ілметил, де бензил, 2-піридилметил, 3-піридилметил, 2тієнілметил, 3-тієнілметил і 1,3-тіазол-4-ілметил можуть містити 1 або 2 замісники, незалежно один від одного вибрані із групи, яка включає галоген, трифторметил, метил і метоксигрупу, 2 R означає 2-метилпроп-1-іл, 2,2-диметилпроп-1іл, 2,2-диметилбут-1-ил, триметилсилілметил, бензил, 2-піридилметил, 3-піридилметил, 2 6 тієнілметил, 3-тієнілметил або 1,3-тіазол-4ілметил, де бензил, 2-піридилметил, 3-піридилметил, 2тієнілметил, 3-тієнілметил і 1,3-тіазол-4-ілметил можуть містити 1 або 2 замісники, незалежно один від одного вибрані із групи, яка включає галоген, трифторметил, метил і метоксигрупу, та 12 R означає водень або метил, або однієї з її солей, її сольватів або сольватів її солей. 2. Сполука за п. 1, яка відрізняється тим, що 10 R означає С1-С6-алкіл, С3-С7-циклоалкіл, С3-С7циклоалкілметил, феніл, бензил, 5- або 6-членний гетероарил, 5- або 6-членний гетероарилметил, триметилсилілметил, 2-аміно-2-оксоетил, 2-аміно1-гідроксі-2-оксоетил, (аміносульфоніл)(гідрокси)метил, 2-(С1-С4-алкіламіно)-2оксоетил або 2-(С1-С4-алкіламіно)-1-гідроксі-2оксоетил, де алкіл може містити замісник, вибраний із групи, яка включає галоген, гідроксигрупу, аміногрупу, меркаптогрупу, 1,4,5,6-тетрагідропіримідин-2іламіногрупу й [аміно(іміно)метил]аміногрупу, та де циклоалкіл, циклоалкілметил, феніл, бензил, гетероарил і гетероарилметил можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибрані із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, гідроксигрупу, аміногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу, С1-С4алкіламіногрупу, гідроксикарбоніл, С1-С4алкоксикарбоніл, амінокарбоніл і С1-С4алкіламінокарбоніл, або одна з її солей, її сольватів або сольватів її солей. 3. Сполука за п. 1 або 2, яка відрізняється тим, що 1 R означає 2-метилпроп-1-іл, 2,2-диметилпроп-1іл, 2,2-диметилбут-1-ил, триметилсилілметил, бензил, 2-піридилметил або 3-піридилметил, де бензил, 2-піридилметил і 3-піридилметил можуть містити 1 або 2 замісники, незалежно один від одного вибрані із групи, яка включає галоген, трифторметил і метил, 2 R означає 2-метилпроп-1-іл, 2,2-диметилпроп-1іл, 2,2-диметилбут-1-ил, триметилсилілметил, бензил, 2-піридилметил або 3-піридилметил, де бензил, 2-піридилметил і 3-піридилметил можуть містити 1 або 2 замісники, незалежно один від одного вибрані із групи, яка включає галоген, трифторметил і метил, 3 R означає С1-С4-алкіл, феніл, бензил, 2-піридил, 3-піридил або 4-піридил, де феніл, бензил, 2піридил, 3-піридил і 4-піридил можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибрані із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4алкоксигрупу й С1-С4-алкіламіногрупу, 4 R означає С1-С6-алкіл, С3-С7-циклоалкілметил, бензил, 5- або 6-членний гетероарилметил або триметилсилілметил, де алкіл може бути заміщений гідроксигрупою, та де циклоалкілметил, бензил і гетероарилметил можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від 7 одного вибрані із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, гідроксигрупу, аміногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4алкоксигрупу, С1-С4-алкіламіногрупу, гідроксикарбоніл, С1-С4-алкоксикарбоніл, амінокарбоніл і С1С4-алкіламінокарбоніл, 5 R означає С1-С6-алкіл, С3-С7-циклоалкілметил, феніл, бензил, 5- або 6-членний гетероарилметил або триметилсилілметил, де алкіл може містити замісник, вибраний із групи, яка включає галоген, гідроксигрупу, аміногрупу, меркаптогрупу, 1,4,5,6-тетрагідропіримідин-2іламіногрупу й [аміно(іміно)метил]аміногрупу, та де циклоалкілметил, феніл, бензил і гетероарилметил можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибрані із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу й С1-С4алкіламіногрупу, 6 R означає С1-С6-алкіл, де алкіл містить замісник, вибраний із групи, яка включає аміногрупу, 1,4,5,6-тетрагідропіримідин-2іламіногрупу, [аміно(іміно)метил]аміногрупу, 2піридил, 3-піридил і 4-піридил, 7 R означає С1-С6-алкіл, С3-С7-циклоалкілметил, феніл, бензил, 5- або 6-членний гетероарилметил або триметилсилілметил, де алкіл може містити замісник, вибраний із групи, яка включає галоген, гідроксигрупу, аміногрупу, меркаптогрупу, 1,4,5,6-тетрагідропіримідин-2іламіногрупу й [аміно(іміно)метил]аміногрупу, та де циклоалкілметил, феніл, бензил і гетероарилметил можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибрані із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу й С1-С4алкіламіногрупу, 8 R означає С1-С6-алкіл, С3-С7-циклоалкілметил, бензил, 5- або 6-членний гетероарилметил або триметилсилілметил, де алкіл може бути заміщений гідроксигрупою, та де циклоалкілметил, бензил і гетероарилметил можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибрані із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, гідроксигрупу, аміногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4алкоксигрупу, С1-С4-алкіламіногрупу, гідроксикарбоніл, С1-С4-алкоксикарбоніл, амінокарбоніл і С1С4-алкіламінокарбоніл, 9 R означає водень, С1-С6-алкіл, С3-С7-циклоалкіл, феніл, триметилсилілметил або 2-аміно-2оксоетил, де метил може містити замісник, вибраний із групи, яка включає гідроксигрупу, аміно й меркаптогрупу, та де циклоалкіл і феніл можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибрані із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, гідроксигрупу, аміногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу й С1-С4алкіламіногрупу, 95630 8 10 R означає водень, С1-С6-алкіл, С3-С7-циклоалкіл, феніл, триметилсилілметил, 2-аміно-2-оксоетил, 2аміно-1-гідроксі-2-оксоетил, (аміносульфоніл)(гідрокси)метил, 2-(С1-С4-алкіламіно)-2оксоетил або 2-(С1-С4-алкіламіно)-1-гідроксі-2оксоетил, де алкіл може містити замісник, вибраний із групи, яка включає галоген, гідроксигрупу, аміногрупу, меркаптогрупу, 1,4,5,6-тетрагідропіримідин-2іламіногрупу й [аміно(іміно)метил]аміногрупу, та де циклоалкіл і феніл можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибрані із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, гідроксигрупу, аміногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу й С1-С4алкіламіногрупу, 11 R означає метил або етил, де метил і етил може містити замісник, вибраний із групи, яка включає гідроксигрупу, аміногрупу, меркаптогрупу, 1,4,5,6-тетрагідропіримідин-2іламіногрупу й [аміно(іміно)метил]аміногрупу, або одна з її солей, її сольватів або сольватів її солей, за винятком сполуки формули (Іа), у якій 1 R означає 2-метилпроп-1-іл, 2,2-диметилпроп-1іл, 2,2-диметилбут-1-ил, триметилсилілметил, бензил, 2-піридилметил або 3-піридилметил, де бензил, 2-піридилметил і 3-піридилметил можуть містити 1 або 2 замісники, незалежно один від одного вибрані із групи, яка включає галоген, трифторметил і метил, 2 R означає 2-метилпроп-1-іл, 2,2-диметилпроп-1іл, 2,2-диметилбут-1-ил, триметилсилілметил, бензил, 2-піридилметил або 3-піридилметил, де бензил, 2-піридилметил і 3-піридилметил можуть містити 1 або 2 замісники, незалежно один від одного вибрані із групи, яка включає галоген, трифторметил і метил, та 12 R означає водень або метил, або однієї з її солей, її сольватів або сольватів її солей. 4. Сполука за п. 3, яка відрізняється тим, що 1 R означає 2-метилпроп-1-іл, 2,2-диметилпроп-1іл, 2,2-диметилбут-1-ил, триметилсилілметил або бензил, де бензил може містити 1 або 2 замісники, незалежно один від одного вибрані із групи, яка включає галоген, трифторметил і метил, або одна з її солей, її сольватів або сольватів її солей. 5. Сполука за п. 3 або 4, яка відрізняється тим, що 3 R означає феніл, бензил, 2-піридил, 3-піридил або 4-піридил, де феніл, бензил, 2-піридил, 3-піридил і 4-піридил можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибрані із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу й С1-С4алкіламіногрупу, або одна з її солей, її сольватів або сольватів її солей. 9 6. Сполука за будь-яким з пп. 3-5, яка відрізняється тим, що 10 R означає С1-С6-алкіл, С3-С7-циклоалкіл, феніл, триметилсилілметил, 2-аміно-2-оксоетил, 2-аміно1-гідроксі-2-оксоетил, (аміносульфоніл)(гідрокси)метил, 2-(С1-С4-алкіламіно)-2-оксоетил або 2-(С1-С4-алкіламіно)-1-гідроксі-2-оксоетил, де алкіл може містити замісник, вибраний із групи, яка включає галоген, гідроксигрупу, аміногрупу, меркаптогрупу, 1,4,5,6-тетрагідропіримідин-2іламіногрупу й [аміно(іміно)метил]аміногрупу, та де циклоалкіл і феніл можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибрані із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, гідроксигрупу, аміногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу й С1-С4алкіламіногрупу, або одна з її солей, її сольватів або сольватів її солей. 7. Сполука за будь-яким з пп. 1-6, яка відрізняється тим, що 1 R означає 2,2-диметилпроп-1-іл, 2,2-диметилбут1-ил, триметилсилілметил або 3-піридилметил, 2 R означає 2,2-диметилпроп-1-іл, 2,2-диметилбут1-ил, триметилсилілметил або 3-піридилметил, 3 R означає С1-С4-алкіл, 3-піридил або феніл, де 3-піридил або феніл може містити замісник, вибраний із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, метил, метоксигрупу, диметиламіно та діетиламіногрупу, 4 R означає -СН(ОН)-С1-С5-алкіл або СН(ОН)феніл, де -СН(ОН)феніл може містити 1-3 замісники, незалежно один від одного вибрані із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу й С1-С4-діалкіламіногрупу, 5 R означає С1-С6-алкіл, С3-С7-циклоалкілметил, бензил або триметилсилілметил, 6 R означає лінійний С2-С4-алкіл, де алкіл містить замісник, вибраний із групи, яка включає аміногрупу, 1,4,5,6-тетрагідропіримідин-2іламіно й [аміно(іміно)метил]аміногрупу, 7 R означає С1-С6-алкіл, С3-С7-циклоалкілметил, бензил або триметилсилілметил, 8 R означає С1-С4-алкіл, -СН2-ОН, -СН(ОН)-С1-С5алкіл або -СН(ОН)-феніл, де -СН(ОН)феніл може містити 1-3 замісники, незалежно один від одного вибрані із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу й С1-С4-діалкіламіногрупу, і 9 R означає водень, С1-С6-алкіл, гідроксиметил або 2-аміно-2-оксоетил, 10 R означає водень, С1-С4-алкіл, 2-аміно-2оксоетил або 2-аміно-1-гідроксі-2-оксоетил, де С1-С4-алкіл може містити замісник, вибраний із групи, яка включає аміно й гідроксигрупу, за тим 10 виключенням, що R не означає 4-амінобут-1-ил, 11 R означає метил, де метил містить замісник, вибраний із групи, яка включає гідроксигрупу й аміногрупу, або одна з її солей, її сольватів або сольватів її солей, 95630 10 за винятком сполуки формули (Іа), у якій 1 R означає 2,2-диметилпроп-1-іл, 2,2-диметилбут1-ил, триметилсилілметил або 3-піридилметил, 2 R означає 2,2-диметилпроп-1-іл, 2,2-диметилбут1-ил, триметилсилілметил або 3-піридилметил, та 12 R означає водень або метил, або однієї з її солей, її сольватів або сольватів її солей. 8. Сполука за п. 7, яка відрізняється тим, що 1 R означає 2,2-диметилпроп-1-іл, 2,2-диметилбут1-ил або триметилсилілметил, або одна з її солей, її сольватів або сольватів її солей. 9. Сполука за п. 7 або 8, яка відрізняється тим, 2 що R означає 2,2-диметилпроп-1-іл або 3піридилметил, або одна з її солей, її сольватів або сольватів її солей. 10. Сполука за будь-яким з пп. 7-9, яка відрізня3 ється тим, що R означає феніл, де феніл може містити замісник, вибраний із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, метил, метоксигрупу, диметиламіно й діетиламіногрупу, або одна з її солей, її сольватів або сольватів її солей. 11. Сполука за будь-яким з пп. 7-10, яка відрізня8 ється тим, що R означає -СН(ОН)-С1-С5-алкіл або -СН(ОН)феніл, де -СН(ОН)феніл може містити 1-3 замісники, незалежно один від одного вибрані із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу й С1-С4-діалкіламіногрупу, або одна з її солей, її сольватів або сольватів її солей. 12. Сполука за будь-яким з пп. 7-11, яка відрізняється тим, що 10 R означає метил, етил, 2-аміно-2-оксоетил або 2аміно-1-гідроксі-2-оксоетил, де метил і етил можуть бути заміщені гідроксигрупою, або одна з її солей, її сольватів або сольватів її солей. 13. Спосіб одержання сполуки формули (І) за п. 1, який відрізняється тим, що сполуку формули R10 O NH R11 NH O HN O H2N O R9 R7 O NH O HN R8 HN R3 R4 O HN O O NH N H R6 R5 , (ІІ) у якій 3 4 5 6 7 8 9 10 11 R , R , R , R , R , R , R , R і R мають значення за п. 1, спочатку вводять у реакцію зі сполукою формули 11 Y1 12 R10 R1 O HN 95630 O X1 N H R11 O R2 , (III) у якій 1 2 R і R мають значення за п. 1, 1 Y означає трет-бутоксикарбоніл або бензилоксикарбоніл, і 1 X означає галоген, переважно бром, хлор або фтор, або гідроксигрупу, і потім з кислотою і/або піддають гідрогенолізу. 14. Спосіб за п. 13, який відрізняється тим, що сполуку формули (II) одержують за реакцією сполуки формули R10 O NH O HO O O R4 O HN N H NH R6 R1 O N H R3 H N O O NH2 O Si H3C R6 3 H N O O N H HN O NH , (VI) у якій 4 5 6 7 8 9 10 11 R , R , R , R , R , R , R і R мають значення за п. 1, спочатку зі сполукою формули R3 CH O O R7 O NH O R2 R5 O R8 HN R4 HN R7 O O O O HN O O H3C Y1 R8 HN O CH3 HO , (IV) у якій 4 5 6 7 8 9 10 11 R , R , R , R , R , R , R і R мають значення за п. 1, спочатку вводять у реакцію зі сполукою формули R9 HN NH2 R9 NH O R5 NH R11 H3C NH N H O CH CH3 3 O R13 , (VII) у якій 3 R має значення за п. 1, і 13 R означає ціанометил, п-нітрофеніл, онітрофеніл, 2,4-динітрофеніл, 2,4,5-трихлорфеніл, пентахлорфеніл, пентафторфеніл (Pfp), Nгідроксифталімідил, N-гідроксисукцинімідил (OSu), 1-гідроксипіперидиніл або 5-хлор-8гідроксихінолініл, і потім проводять 3-стадійний синтез a) з кислотою, b) з дегідратуючим реагентом, якщо це доцільно, то в присутності основи, та c) проводять гідрогеноліз. 15. Спосіб одержання сполуки формули (І) за п. 1, який відрізняється тим, що сполуку формули CH3 CH3 , (V) у якій 1 2 3 R , R і R мають значення за п. 1, і 1 Y означає трет-бутоксикарбоніл або бензилоксикарбоніл, і потім проводять 4-стадійний синтез a) із фторидним реагентом, таким як тетрабутиламонійфторид, b) з кислотою, c) з дегідратуючим реагентом, якщо це доцільно, то в присутності основи, та d) проводять гідрогеноліз. 16. Сполука за будь-яким з пп. 1-12, призначена для лікування і/або профілактики захворювань. 17. Застосування сполуки за будь-яким з пп. 1-12 для приготування лікарського засобу, призначеного для лікування і/або профілактики захворювань. 18. Застосування сполуки за будь-яким з пп. 1-12 для приготування лікарського засобу, призначеного для боротьби з бактеріальними інфекціями і/або їх профілактики 19. Лікарський засіб, який містить сполуку за будьяким з пп. 1-12 у комбінації з інертним, нетоксичним, фармацевтично прийнятним наповнювачем. 20. Лікарський засіб за п. 19, призначений для боротьби з бактеріальними інфекціями і/або їх профілактики. 21. Спосіб боротьби з бактеріальними інфекціями в людей і тварин шляхом, при якому здійснюють введення антибактеріально ефективної кількості принаймні однієї сполуки за будь-яким з пп. 1-12. 13 Даний винахід стосується лізобактинамідів і способів їх одержання, а також їх застосування для приготування лікарських засобів, призначених для лікування і/або профілактики захворювань, переважно - бактеріальних інфекційних захворювань. Стінки клітин бактерій синтезуються за допомогою ряду ферментів (біосинтез стінки клітини) і вони важливі для забезпечення життєздатності та розмноження мікроорганізмів. Структура цієї макромолекули, а також білки, які приймають участь у її синтезі, зберігаються в бактерії незмінними. Внаслідок його важливості та однорідності біосинтез стінок клітин є ідеальним об'єктом впливу нових антибіотиків (D.W. Green, The bacterial cell wall as a source of antibacterial targets, Expert Opin. Ther. Targets, 2002, 6, 1-19). Ванкоміцин і пеніциліни є інгібіторами біосинтезу стінок клітин бактерій і являють собою чудові приклади антибіотичної активності для такого впливу. Їх протягом декількох десятиліть використовували в клінічних умовах для боротьби з бактеріальними інфекціями, особливо із грампозитивними патогенами. Внаслідок все зростаючого поширення резистентних мікробів, наприклад, резистентних до метициліну стафілококів, резистентних до пеніциліну пневмококів і резистентних до ванкоміцину ентерококів (F. Baquero, Gram-positive resistance: challenge for the development of new antibiotics, J. Antimicrob. Chemother., 1997, 39, Suppl A:1-6; A.P. Johnson, D.M. Livermore, G.S. Tillotson, Antimicrobial susceptibility of Gram-positive bacteria: what's current, what's anticipated?, J. Hosp. Infect., 2001, (49), Suppl A: 3-11), а також недавно вперше виявлених резистентних до ванкоміцину стафілококів (В. Goldrick, First reported case of VRSA in the United States, Am. J. Nurs., 2002, 102, 17) ці речовини все більшою мірою втрачають свою терапевтичну ефективність. Даний винахід стосується нового класу інгібіторів біосинтезу стінок клітин бактерій, які не мають перехресну резистентність з відомими класами антибіотиків. Природний продукт лізобактин і деякі його похідні описані, як такі, що мають антибактеріальну 95630 14 активність, в US 4754018. Виділення та антибактеріальна активність лізобактину також описані в ЕРА-196042 і JP 01132600. В WO04/099239 описані похідні лізобактину, які мають антибактеріальну активність. Антибактеріальний вплив лізобактину та катанозину А також описаний в публікаціях O'Sullivan, J. et al., J. Antihiot. 1988, 41, 1740-1744, Bonner, D. P. et al., J. Antibiot. 1988, 41, 1745-1751, Shoji, J. et al., J. Antibiot. 1988, 41, 713-718 і Tymiak, A. A. et al., J. Org. Chem. 1989, 54, 1149-1157. Стабільність активного інгредієнта є важливим параметром, який визначає його застосовність як лікарський засіб. Стабільність, зокрема, важлива для зберігання та введення лікарських засобів. Багато натуральних продуктів мають стабільність, недостатню для їх використання як лікарські засоби. Депсипептид лізобактин, який має антибактеріальну активність, гідролізується у водному середовищі з реакцією від нейтральної до лужної (рН>7) за декілька днів. Утворюється "розкритийлізобактин", у якому розкрите лактонне кільце і який не має антибактеріальну активність. Тому необхідні активні аналоги лізобактину, кільце яких більш стабільне. В основу даного винаходу була покладена задача одержання альтернативних лізобактину сполук, які мають порівнянний або посилений антибактеріальний вплив, кращу переносимість, наприклад, меншу нефротоксичність, і поліпшену стабільність у водному середовищі з реакцією від нейтральної до лужної, призначені для лікування бактеріальних захворювань у людей і тварин. У контексті даного винаходу несподівано було встановлено, що лізобактинаміди (циклічні аміди нонапептидів) мають аналогічний лізобактину антибактеріальний вплив і стійкі щодо гідролізу у водному середовищі з реакцією від нейтральної до лужної. Лізобактинаміди являють собою раніше не описані аза-аналоги лізобактину, у яких центральна лактонна група замінена на лактамну групу. Даний винахід стосується сполук формули 15 у якій 1 R означає 2-метилпроп-1-іл, 2,2диметилпроп-1-іл, 2,2-диметилбут-1-ил, триметилсилілметил, бензил, 2-піридилметил, 3піридилметил, 2-тієнілметил, 3-тієнілметил або 1,3-тіазол-4-ілметил, де бензил, 2-піридилметил, 3-піридилметил, 2тієнілметил, 3-тієнілметил і 1,3-тіазол-4-ілметил можуть містити 1 або 2 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає галоген, трифторметил, метил і метоксигрупу, 2 R означає 2-метилпроп-1-іл, 2,2диметилпроп-1-іл, 2,2-диметилбут-1-ил, триметилсилілметил, бензил, 2-піридилметил, 3піридилметил, 2-тієнілметил, 3-тієнілметил або 1,3-тіазол-4-ілметил, де бензил, 2-піридилметил, 3-піридилметил, 2тієнілметил, 3-тієнілметил і 1,3-тіазол-4-ілметил можуть містити 1 або 2 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає галоген, трифторметил, метил і метоксигрупу, 3 R означає водень, С1-С4-алкіл, С3-С7циклоалкіл, С3-С7-циклоалкілметил, феніл, бензил, 5- або 6-членний гетероарил або 5- або 6-членний гетероарилметил, де циклоалкіл, циклоалкілметил, феніл, бензил, гетероарил і гетероарилметил можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, гідроксигрупу, аміногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу, С1С4-алкіламіногрупу, гідроксикарбоніл, С1-С4алкоксикарбоніл, амінокарбоніл, С1-С4алкіламінокарбоніл і 5- або 6-членний гетероцикліл, який приєднаний через атом азоту, 4 R означає С1-С6-алкіл, С3-С7-циклоалкіл, С3С7-циклоалкілметил, феніл, бензил, 5- або 6членний гетероарил, 5- або 6-членний гетероарилметил, триметилсилілметил або 2-аміно-2оксоетил, де алкіл може містити 1-3 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає галоген, гідроксигрупу, аміногрупу, меркаптогрупу, 95630 16 1,4,5,6-тетрагідропіримідин-2-іламіногрупу та [аміно(іміно)метил]аміногрупу, та де циклоалкіл, циклоалкілметил, феніл, бензил, гетероарил і гетероарилметил можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, гідроксигрупу, аміногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу, С1С4-алкіламіногрупу, гідроксикарбоніл, С1-С4алкоксикарбоніл, амінокарбоніл і С1-С4алкіламінокарбоніл, 5 R означає С1-С6-алкіл, С3-С7-циклоалкіл, С3С7-циклоалкілметил, феніл, бензил, 5- або 6членний гетероарил, 5- або 6-членний гетероарилметил, триметилсилілметил або 2-аміно-2оксоетил, де алкіл може містити 1-3 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає галоген, гідроксигрупу, аміногрупу, меркаптогрупу, 1,4,5,6-тетрагідропіримідин-2-іламіногрупу та [аміно(іміно)метил]аміногрупу, та де циклоалкіл, циклоалкілметил, феніл, бензил, гетероарил і гетероарилметил можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, гідроксигрупу, аміногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу, С1С4-алкіламіногрупу, гідроксикарбоніл, С1-С4алкоксикарбоніл, амінокарбоніл і С1-С4алкіламінокарбоніл, 6 R означає С1-С6-алкіл, де алкіл містить замісник, вибраний із групи, яка включає аміногрупу, 1,4,5,6тетрагідропіримідин-2-іламіногрупу, [аміно(іміно)метил]аміногрупу, 2-піридил, 3-піридил і 4піридил, 7 R означає С1-С6-алкіл, С3-С7-циклоалкіл, С3С7-циклоалкілметил, феніл, бензил, 5- або 6членний гетероарил, 5- або 6-членний гетероарилметил або триметилсилілметил, де алкіл може містити 1-3 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає 17 галоген, гідроксигрупу, аміногрупу, меркаптогрупу, 1,4,5,6-тетрагідропіримідин-2-іламіногрупу та [аміно(іміно)метил]аміногрупу, та де циклоалкіл, циклоалкілметил, феніл, бензил, гетероарил і гетероарилметил можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, гідроксигрупу, аміногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу, С1С4-алкіламіногрупу, гідроксикарбоніл, С1-С4алкоксикарбоніл, амінокарбоніл і С1-С4алкіламінокарбоніл, 8 R означає С1-С6-алкіл, С3-С7-циклоалкіл, С3С7-циклоалкілметил, феніл, бензил, 5- або 6членний гетероарил, 5- або 6-членний гетероарилметил, триметилсилілметил або 2-аміно-2оксоетил, де алкіл може містити 1-3 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає галоген, гідроксигрупу, аміногрупу, меркаптогрупу, 1,4,5,6-тетрагідропіримідин-2-іламіногрупу та [аміно(іміно)метил]аміногрупу, та де циклоалкіл, циклоалкілметил, феніл, бензил, гетероарил і гетероарилметил можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, гідроксигрупу, аміногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу, С1С4-алкіламіногрупу, гідроксикарбоніл, С1-С4алкоксикарбоніл, амінокарбоніл і С1-С4алкіламінокарбоніл, 9 R означає водень, С1-С6-алкіл, С3-С7циклоалкіл, С3-С7-циклоалкілметил, феніл, бензил, 5- або 6-членний гетероарил, 5- або 6-членний гетероарилметил, триметилсилілметил або 2аміно-2-оксоетил, де алкіл може містити 1-3 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає галоген, гідроксигрупу, аміногрупу, меркаптогрупу, 1,4,5,6-тетрагідропіримідин-2-іламіногрупу та [аміно(іміно)метил]аміногрупу, та де циклоалкіл, циклоалкілметил, феніл, бензил, гетероарил і гетероарилметил можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, гідроксигрупу, аміногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу, С1 95630 18 С4-алкіламіногрупу, гідроксикарбоніл, С1-С4алкоксикарбоніл, амінокарбоніл і С1-С4алкіламінокарбоніл, 10 R означає водень, С1-С6-алкіл, С3 С7циклоалкіл, С3-С7-циклоалкілметил, феніл, бензил, 5- або 6-членний гетероарил, 5- або 6членний гетероарилметил, триметилсилілметил, 2-аміно-2-оксоетил, 2-аміно-1-гідроксі-2-оксоетил, (аміносульфоніл)(гідрокси)метил, 2-(С1-С4алкіламіно)-2-оксоетил або 2-(С1-С4-алкіламіно)-1гідроксі-2-оксоетил, де алкіл може містити замісник, вибраний із групи, яка включає галоген, гідроксигрупу, аміногрупу, меркаптогрупу, 1,4,5,6-тетрагідропіримідин2-іламіногрупу та [аміно(іміно)метил]аміногрупу, та де циклоалкіл, циклоалкілметил, феніл, бензил, гетероарил і гетероарилметил можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, гідроксигрупу, аміногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу, С1С4-алкіламіногрупу, гідроксикарбоніл, С1-С4алкоксикарбоніл, амінокарбоніл і С1-С4алкіламінокарбоніл, 11 R означає С1-С6-алкіл, С3-С7-циклоалкіл, С3С7-циклоалкілметил, феніл, бензил, 5- або 6членний гетероарил, 5- або 6-членний гетероарилметил, триметилсилілметил, 2-аміно-2-оксоетил, 2-аміно-1-гідроксі-2-оксоетил, (аміносульфоніл)(гідрокси)метил, 2-(С1-С4-алкіламіно)-2оксоетил або 2-(С1-С4-алкіламіно)-1-гідроксі-2оксоетил, де алкіл може містити замісник, вибраний із групи, яка включає галоген, гідроксигрупу, аміногрупу, меркаптогрупу, 1,4,5,6-тетрагідропіримідин2-іламіногрупу та [аміно(іміно)метил]аміногрупу, та де циклоалкіл, циклоалкілметил, феніл, бензил, гетероарил і гетероарилметил можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, гідроксигрупу, аміногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу, С1С4-алкіламіногрупу, гідроксикарбоніл, С1-С4алкоксикарбоніл, амінокарбоніл і С1-С4алкіламінокарбоніл, і їх солей, їх сольватів і сольватів їх солей, за винятком сполук формули 19 у якій 1 R означає 2-метилпроп-1-іл, 2,2диметилпроп-1-іл, 2,2-диметилбут-1-ил, триметилсилілметил, бензил, 2-піридилметил, 3піридилметил, 2-тієнілметил, 3-тієнілметил або 1,3-тіазол-4-ілметил, де бензил, 2-піридилметил, 3-піридилметил, 2тієнілметил, 3-тієнілметил і 1,3-тіазол-4-ілметил можуть містити 1 або 2 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає галоген, трифторметил, метил і метоксигрупу, 2 R означає 2-метилпроп-1-іл, 2,2диметилпроп-1-іл, 2,2-диметилбут-1-ил, триметилсилілметил, бензил, 2-піридилметил, 3піридилметил, 2-тієнілметил, 3-тієнілметил або 1,3-тіазол-4-ілметил, де бензил, 2-піридилметил, 3-піридилметил, 2тієнілметил, 3-тієнілметил і 1,3-тіазол-4-ілметил можуть містити 1 або 2 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає галоген, трифторметил, метил і метоксигрупу, та 12 R означає водень або метил, і їх солей, їх сольватів і сольватів їх солей. Сполуки, пропоновані в даному винаході, являють собою сполуки формули (І) і їх солі, сольвати, сольвати солей і проліки, сполуки, які описуються формулою (І) і які описуються формулами, зазначеними нижче, і їх солі, сольвати, сольвати солей і проліки, а також сполуки, які описуються формулою (І) і зазначені нижче, як типові варіанти здійснення, і їх солі, сольвати, сольвати солей і проліки, якщо тільки сполуки, які описуються формулою (І) і зазначені нижче, вже не є солями, сольватами, сольватами солей і проліками. Сполуки, пропоновані в даному винаході, залежно від своєї структури можуть існувати в стерео ізомерних формах (енантіомери, діастереоі 95630 20 зомери). Тому даний винахід стосується енантіомерів або діастереоізомерів і відповідних їх сумішей. Стереоізомерно однорідні компоненти можна виділити з таких сумішей енантіомерів і/або діастереоізомерів за відомими методиками. Якщо сполуки, пропоновані в даному винаході, можуть існувати в таутомерних формах, то даний винахід стосується всіх таутомерних форм. Солями, кращими для задач даного винаходу, є фізіологічно прийнятні солі сполук, пропонованих у даному винаході. Однак в обсяг даного винаходу включені солі, які самі по собі непридатні для використання у фармацевтиці, але які можна використовувати, наприклад, для виділення або очищення сполук, пропонованих у даному винаході, або змішаних солей. Змішані солі в контексті даного винаходу означають солі приєднання, які містять дві або більшу кількість різних кислот або основ, такі як, наприклад, трифторацетат-мезилат. Фізіологічно прийнятні солі сполук, пропонованих у даному винаході, включають солі приєднання з неорганічними кислотами, карбоновими кислотами й сульфоновими кислотами, наприклад, солі хлористоводневої кислоти, бромистоводневої кислоти, сірчаної кислоти, фосфорної кислоти, метансульфонової кислоти, етансульфонової кислоти, толуолсульфонової кислоти, бензолсульфонової кислоти, нафталінсульфонової кислоти, оцтової кислоти, трифтороцтової кислоти, пропіонової кислоти, молочної кислоти, винної кислоти, яблучної кислоти, лимонної кислоти, фумарової кислоти, малеїнової кислоти та бензойної кислоти. Фізіологічно прийнятні солі сполук, пропонованих у даному винаході, також включають солі звичайних основ, такі як, наприклад і переважно, солі лужних металів (наприклад, солі натрію та калію), солі лужноземельних металів (наприклад, солі 21 кальцію та магнію) і солі амонію, одержані із аміаку або органічних амінів, які містять від 1 до 16 атомів С, таких як, наприклад і переважно, етиламін, діетиламін, триетиламін, етилдіізопропіламін, моноетаноламін, діетаноламін, триетаноламін, дихлоргексиламін, диметиламіноетанол, прокаїн, дибензиламін, N-метилморфолін, аргінін, лізин, етилендіамін і N-метилпіперидин. Сольвати для задач даного винаходу означають такі форми сполук, пропонованих у даному винаході, які в рідкому або твердому стані утворюють комплекс шляхом координації з молекулами розчинника. Гідрати є особливою формою сольватів, у яких координація відбувається з водою. Для задач даного винаходу замісники, якщо не зазначено інше, мають наступні значення: Алкіл сам по собі та "алкіл" в алкоксигрупі, алкіламіногрупі, алкоксикарбонілі та алкіламінокарбонілі означає лінійний або розгалужений алкільний радикал, який звичайно містить від 1 до 6, краще - від 1 до 4, особливо краще - від 1 до 3 атомів вуглецю, наприклад і переважно метил, етил, н-пропіл, ізопропіл, трет-бутил, 2,2диметилпроп-1-іл, 2,2-диметилбут-1-ил, н-пентил або н-гексил. Алкоксигрупа наприклад і переважно означає метоксигрупу, етоксигрупу, н-пропоксигрупу, ізопропоксигрупу, трет-бутоксигрупу, н-пентоксигрупу або н-гексоксигрупу. Алкоксикарбоніл наприклад і переважно означає метоксикарбоніл, етоксикарбоніл, нпропоксикарбоніл, ізопропоксикарбоніл, третбутоксикарбоніл, н-пентоксикарбоніл або нгексоксикарбоніл. Алкіламіногрупа означає алкіламіновий радикал, який містить 1 або 2 алкільних замісники (вибраних незалежно один від одного), наприклад і переважно метиламіногрупу, етиламіногрупу, нпропіламіногрупу, ізопропіламіногрупу, третбутиламіногрупу, н-пентиламіногрупу, нгексиламіногрупу, N,N-диметиламіногрупу, Ν,Νдіетиламіногрупу, N-етил-N-метиламіногрупу, Nметил-N-н-пропіламіногрупу, Ν-ізопропіл-N-нпропіламіногрупу, N-трет-бутил-Nметиламіногрупу, N-етил-N-н-пентиламіногрупу або N-н-гексил-N-метиламіногрупу. С1-С3Алкіламіногрупа означає, наприклад, моноалкіламіновий радикал, який містить від 1 до 3 атомів вуглецю, або діалкіламіновий радикал, який містить від 1 до 3 атомів вуглецю в кожному алкільному заміснику. Алкіламінокарбоніл означає алкіламінокарбонільний радикал, який містить 1 або 2 алкільних замісники (вибраних незалежно один від одного), наприклад і переважно метиламінокарбоніл, етиламінокарбоніл, н-пропіламінокарбоніл, ізопропіламінокарбоніл, трет-бутиламінокарбоніл, нпентиламінокарбоніл, н-гексиламінокарбоніл, Ν,Νдиметиламінокарбоніл, N,N-діетиламінокарбоніл, N-етил-N-метиламінокарбоніл, N-метил-N-нпропіламінокарбоніл, N-iзопропіл-N-нпропіламінокарбоніл, N-трет-бутил-Nметиламінокарбоніл, N-етил-.N-нпентиламінокарбоніл або N-н-гексил-Nметиламінокарбоніл. С1-С3-Алкіламінокарбоніл 95630 22 означає, наприклад, моноалкіламінокарбонільний радикал, який містить від 1 до 3 атомів вуглецю або діалкіламінокарбонільний радикал, який містить від 1 до 3 атомів вуглецю в кожному алкільному заміснику. Циклоалкіл означає циклоалкільну групу, яка звичайно містить від 3 до 7 атомів вуглецю, наприклад і переважно циклопропіл, циклобутил, циклопентил, циклогексил або циклогептил. Гетероцикліл означає моноциклічний гетероциклічний радикал, який містить 5 або 6 кільцевих атомів і до 3 гетероатомів і/або гетероатомних груп, вибраних із групи, яка включає N, О, S, SO, SO2, де атом азоту також може утворювати Nоксид. Гетероциклільні радикали можуть бути насиченими або частково ненасиченими й наприклад і переважно означають піролідин-2-іл, піролідин-3іл, піролініл, тетрагідрофураніл, тетрагідротієніл, піраніл, піперидин-1-іл, піперидин-2-іл, піперидин3-іл, піперидин-4-іл, тіопіраніл, морфолін-1-іл, морфолін-2-іл, морфолін-3-іл. Гетероарил означає ароматичний моноциклічний радикал, який містить 5 або 6 кільцевих атомів і до 4 гетероатомів, вибраних із групи, яка включає S, О і N, наприклад і переважно тієніл, фурил, піроліл, тіазоліл, оксазоліл, імідазоліл, піридил, піримідил або піридазиніл. Галоген означає фтор, хлор, бром або йод, переважно - фтор або хлор. Перевагу надають сполукам формули (І), у якій 1 R означає 2-метилпроп-1-іл, 2,2диметилпроп-1-іл, 2,2-диметилбут-1-ил, триметилсилілметил, бензил, 2-піридилметил або 3піридилметил, де бензил, 2-піридилметил і 3-піридилметил можуть містити 1 або 2 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає галоген, трифторметил і метил, 2 R означає 2-метилпроп-1-іл, 2,2диметилпроп-1-іл, 2,2-диметилбут-1-ил, триметилсилілметил, бензил, 2-піридилметил або 3піридилметил, де бензил, 2-піридилметил і 3-піридилметил можуть містити 1 або 2 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає галоген, трифторметил і метил, 3 R означає С1-С4-алкіл, феніл, бензил, 2піридил, 3-піридил або 4-піридил, де феніл, бензил, 2-піридил, 3-піридил і 4піридил можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу та С1-С4алкіламіногрупу, 4 R означає С1-С6-алкіл, С3-С7циклоалкілметил, бензил, 5- або 6-членний гетероарилметил або триметилсилілметил, де алкіл може бути заміщений гідроксигрупою, та де циклоалкілметил, бензил і гетероарилметил можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, гідроксигрупу, аміногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4 23 алкоксигрупу, С1-С4-алкіламіногрупу, гідроксикарбоніл, С1-С4-алкоксикарбоніл, амінокарбоніл і С1С4-алкіламінокарбоніл, 5 R означає С1-С6-алкіл, С3-С7циклоалкілметил, феніл, бензил, 5- або 6-членний гетероарилметил або триметилсилілметил, де алкіл може містити замісник, вибраний із групи, яка включає галоген, гідроксигрупу, аміногрупу, меркаптогрупу, 1,4,5,6-тетрагідропіримідин2-іламіногрупу та [аміно(іміно)метил]аміногрупу, та де циклоалкілметил, феніл, бензил і гетероарилметил можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу та С1-С4алкіламіногрупу, 6 R означає С1-С6-алкіл, де алкіл містить замісник, вибраний із групи, яка включає аміногрупу, 1,4,5,6тетрагідропіримідин-2-іламіногрупу, [аміно(іміно)метил]аміногрупу, 2-піридил, 3-піридил і 4піридил, 7 R означає С1-С6-алкіл, С3-С7циклоалкілметил, феніл, бензил, 5- або 6-членний гетероарилметил або триметилсилілметил, де алкіл може містити замісник, вибраний із групи, яка включає галоген, гідроксигрупу, аміногрупу, меркаптогрупу, 1,4,5,6-тетрагідропіримідин2-іламіногрупу та [аміно(іміно)метил]аміногрупу, та де циклоалкілметил, феніл, бензил і гетероарилметил можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу та С1-С4алкіламіногрупу, 8 R означає С1-С6-алкіл, С3-С7циклоалкілметил, бензил, 5- або 6-членний гетероарилметил або триметилсилілметил, де алкіл може бути заміщений гідроксигрупою, та де циклоалкілметил, бензил і гетероарилметил можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, гідроксигрупу, аміногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4алкоксигрупу, С1-С4-алкіламіногрупу, гідроксикарбоніл, С1-С4-алкоксикарбоніл, амінокарбоніл і С1С4-алкіламінокарбоніл, 9 R означає водень, С1-С6-алкіл, С3-С7циклоалкіл, феніл, триметилсилілметил або 2аміно-2-оксоетил, де метил може містити замісник, вибраний із групи, яка включає гідроксигрупу, аміногрупу та меркаптогрупу, та де циклоалкіл і феніл можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, гідроксигрупу, аміногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу та С1-С4алкіламіногрупу, 10 R означає водень, С1-С6-алкіл, С3-С7циклоалкіл, феніл, триметилсилілметил, 2-аміно-2 95630 24 оксоетил, 2-аміно-1-гідроксі-2-оксоетил, (аміносульфоніл)(гідрокси)метил, 2-(С1-С4-алкіламіно)-2оксоетил або 2-(С1-С4-алкіламіно)-1-гідроксі-2оксоетил, де алкіл може містити замісник, вибраний із групи, яка включає галоген, гідроксигрупу, аміногрупу, меркаптогрупу, 1,4,5,6-тетрагідропіримідин2-іламіногрупу та [аміно(іміно)метил]аміногрупу, та де циклоалкіл і феніл можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, гідроксигрупу, аміногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу та С1-С4алкіламіногрупу, 11 R означає метил або етил, де метил і етил може містити замісник, вибраний із групи, яка включає гідроксигрупу, аміногрупу, меркаптогрупу, 1,4,5,6-тетрагідропіримідин-2іламіногрупу та [аміно(іміно)метил]аміногрупу, і їх солям, їх сольватам і сольватам їх солей, за винятком сполук формули (Іа), у якій 1 R означає 2-метилпроп-1-іл, 2,2диметилпроп-1-іл, 2,2-диметилбут-1-ил, триметилсилілметил, бензил, 2-піридилметил або 3піридилметил, де бензил, 2-піридилметил і 3-піридилметил можуть містити 1 або 2 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає галоген, трифторметил і метил, 2 R означає 2-метилпроп-1-іл, 2,2диметилпроп-1-іл, 2,2-диметилбут-1-ил, триметилсилілметил, бензил, 2-піридилметил або 3піридилметил, де бензил, 2-піридилметил і 3-піридилметил можуть містити 1 або 2 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає галоген, трифторметил і метил, та 12 R означає водень або метил, і їх солей, їх сольватів і сольватів їх солей. Перевагу також надають сполукам формули (І), у якій 1 R означає 2,2-диметилпроп-1-іл, 2,2диметилбут-1-ил, триметилсилілметил або 3піридилметил, 2 R означає 2,2-диметилпроп-1-іл, 2,2диметилбут-1-ил, триметилсилілметил або 3піридилметил, 3 R означає С1-С4-алкіл, 3-піридил або феніл, де 3-піридил або феніл може містити замісник, вибраний із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, метил, метоксигрупу, диметиламіногрупу та діетиламіногрупу, 4 R означає -СН(ОН)-С1-С5-алкіл або СН(ОН)феніл, де -СН(ОН)феніл може містити 1-3 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу та С1-С4-діалкіламіногрупу, 5 R означає С1-С6-алкіл, С3-С7циклоалкілметил, бензил або триметилсилілметил, 6 R означає лінійний С2-С4-алкіл, 25 де алкіл містить замісник, вибраний із групи, яка включає аміногрупу, 1,4,5,6тетрагідропіримідин-2-іламіногрупу та [аміно(іміно)метил]аміногрупу, 7 R означає С1-С6-алкіл, С3-С7циклоалкілметил, бензил або триметилсилілметил, 8 R означає С1-С4-алкіл, -СН2-ОН, -СН(ОН)-С1С5-алкіл або -СН(ОН)феніл, де -СН(ОН)феніл може містити 1-3 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу та С1-С4-діалкіламіногрупу, 9 R означає водень, С1-С6-алкіл, гідроксиметил або 2-аміно-2-оксоетил, 10 R означає водень, С1-С4-алкіл, 2-аміно-2оксоетил або 2-аміно-1-гідроксі-2-оксоетил, де С1-С4-алкіл може містити замісник, вибраний із групи, яка включає аміногрупу та гідроксиг10 рупу, за тим виключенням, що R не означає 4амінобут-1-ил, 11 R означає метил, де метил містить замісник, вибраний із групи, яка включає гідроксигрупу та аміногрупу, і їх солям, їх сольватам і сольватам їх солей, за винятком сполук формули (Іа), у якій 1 R означає 2,2-диметилпроп-1-іл, 2,2диметилбут-1-ил, триметилсилілметил або 3піридилметил, 2 R означає 2,2-диметилпроп-1-іл, 2,2диметилбут-1-ил, триметилсилілметил або 3піридилметил, та 12 R означає водень або метил, і їх солей, їх сольватів і сольватів їх солей. Перевагу також надають сполукам формули (І), у якій 1 R означає 2-метилпроп-1-іл, 2,2диметилпроп-1-іл, 2,2-диметилбут-1-ил, триметилсилілметил або бензил, де бензил може містити 1 або 2 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає галоген, трифторметил і метил, або одній з їх солей, їх сольватів або сольватів їх солей. Перевагу також надають сполукам формули (І), у якій 1 R означає 2,2-диметилпроп-1-іл, 2,2диметилбут-1-ил або триметилсилілметил, або одній з їх солей, їх сольватів або сольватів їх солей. Перевагу також надають сполукам формули (І), у якій 2 R означає 2,2-диметилпроп-1-іл або 3піридилметил, або одній з їх солей, їх сольватів або сольватів їх солей. Перевагу також надають сполукам формули (І), у якій 3 R означає феніл, бензил, 2-піридил, 3-піридил або 4-піридил, де феніл, бензил, 2-піридил, 3-піридил і 4піридил можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає 95630 26 галоген, ціаногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу та С1-С4алкіламіногрупу, або одній з їх солей, їх сольватів або сольватів їх солей. Перевагу також надають сполукам формули (І), у якій 3 R означає феніл, де феніл може містити замісник, вибраний із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, метил, метоксигрупу, диметиламіногрупу та діетиламіногрупу, або одній з їх солей, їх сольватів або сольватів їх солей. Перевагу також надають сполукам формули 8 (І), у якій R означає -СH(OH)-С1-С5-алкіл або СН(ОН)феніл, де -СН(ОН)феніл може містити 1-3 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу та С1-С4-діалкіламіногрупу, і або одній з їх солей, їх сольватів або сольватів їх солей. Перевагу також надають сполукам формули (І), у якій 10 R означає С1-С6-алкіл, С3-С7-циклоалкіл, С3С7-циклоалкілметил, феніл, бензил, 5- або 6членний гетероарил, 5- або 6-членний гетероарилметил, триметилсилілметил, 2-аміно-2-оксоетил, 2-аміно-1-гідроксі-2-оксоетил, (аміносульфоніл)(гідрокси)метил, 2-(С1-С4-алкіламіно)-2оксоетил або 2-(С1-С4-алкіламіно)-1-гідроксі-2оксоетил, де алкіл може містити замісник, вибраний із групи, яка включає галоген, гідроксигрупу, аміногрупу, меркаптогрупу, 1,4,5,6-тетрагідропіримідин2-іламіногрупу та [аміно(іміно)метил]аміногрупу, та де циклоалкіл, циклоалкілметил, феніл, бензил, гетероарил і гетероарилметил можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибраних із групи, яка включає галоген, ціаногрупу, гідроксигрупу, аміногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу, С1С4-алкіламіногрупу, гідроксикарбоніл, С1-С4алкоксикарбоніл, амінокарбоніл і С1-С4алкіламінокарбоніл, або одній з їх солей, їх сольватів або сольватів їх солей. Перевагу також надають сполукам формули (І), у якій 10 R означає С1-С6-алкіл, С3-С7-циклоалкіл, феніл, триметилсилілметил, 2-аміно-2-оксоетил, 2аміно-1-гідроксі-2-оксоетил, (аміносульфоніл)(гідрокси)-метил, 2-(С1-С4-алкіламіно)-2оксоетил або 2-(С1-С4-алкіламіно)-1-гідроксі-2оксоетил, де алкіл може містити замісник, вибраний із групи, яка включає галоген, гідроксигрупу, аміногрупу, меркаптогрупу, 1,4,5,6-тетрагідропіримідин2-іламіногрупу та [аміно(іміно)метил]аміногрупу, та де циклоалкіл і феніл можуть містити 1-4 замісники, незалежно один від одного вибраних із гру 27 95630 28 пи, яка включає галоген, ціаногрупу, гідроксигрупу, аміногрупу, трифторметил, трифторметоксигрупу, С1-С4-алкіл, С1-С4-алкоксигрупу та С1-С4алкіламіногрупу, або одній з їх солей, їх сольватів або сольватів їх солей. Перевагу також надають сполукам формули (І), у якій 1 R означає метил, етил, 2-аміно-2-оксоетил або 2-аміно-1-гідроксі-2-оксоетил, де метил і етил можуть бути заміщені гідроксигрупою, або одній з їх солей, їх сольватів або сольватів їх солей. Даний винахід також стосується способу одержання сполук формул (І), у якому [А] сполуки формули у якій 4 5 6 7 8 9 10 11 R , R , R , R , R , R , R і R мають зазначені вище значення, спочатку вводять у реакцію зі сполуками формули у якій 3 4 5 6 7 8 9 10 11 R , R , R , R , R , R , R , R і R мають зазначені вище значення, спочатку вводять у реакцію зі сполуками формули у якій 1 2 R і R мають зазначені вище значення, 1 Y означає трет-бутоксикарбоніл або бензилоксикарбоніл, і 1 X означає галоген, переважно - бром, хлор або фтор, або гідроксигрупу, і потім з кислотою і/або піддають гідрогенолізу, або [В] сполуки формули у якій 1 2 3 R , R і R мають зазначені вище значення, і 1 Y означає трет-бутоксикарбоніл або бензилоксикарбоніл, і потім проводять 4-стадійний синтез a) із фторидним реагентом, таким як тетрабутиламонійфторид, b) з кислотою, c) з дегідратуючим реагентом, якщо це доцільно, то в присутності основи, та d) проводять гідрогеноліз. Методика [А]: 1 Якщо X означає галоген, то реакцію на першій стадії звичайно проводять в інертних розчинниках, якщо це доцільно, то в присутності основи, переважно - при температурі в діапазоні від -30 до 50°С при атмосферному тиску. Прикладами інертних розчинників є тетрагідрофуран, метиленхлорид, піридин, діоксан, диметилацетамід, N-метилпіролідон і диметилформамід, і кращими є піридин і диметилформамід. Прикладами основ є триетиламін, діізопропілетиламін і N-метилморфолін, і кращим є діізопропілетиламін. 1 Якщо X означає гідроксигрупу, то реакцію на першій стадії звичайно проводять в інертних розчинниках, у присутності дегідратуючого реагенту, якщо це доцільно, то в присутності основи, пере 29 важно - при температурі в діапазоні від -30 до 50°С при атмосферному тиску. Прикладами інертних розчинників є галогеновані вуглеводні, такі як дихлорметан і трихлорметан, вуглеводні, такі як бензол, нітрометан, діоксан, диметилформамід і ацетонітрил. Також можна використовувати суміші цих розчинників. Дихлорметан і диметилформамід є особливо кращими. Прикладами придатних дегідратуючих реагентів є карбодііміди, такі як, наприклад, N,N'-діетил-, N,N'-дипропіл-, N,N'-діізопропіл-, N,N'дициклогексилкарбодіімід, N-(3диметиламіноізопропіл)-N'етилкарбодіімідгідрохлорид (ЕДХ), Nциклогексилкарбодіімід-N'пропілоксиметилполістирол (ПС-карбодіімід), і карбонільні сполуки, такі як карбонілдіімідазол, і 1,2-оксазолієві сполуки, такі як 2-етил-5-феніл-1,2оксазолій-3-сульфат або 2-трет-бутил-5метилізоксазолійперхлорат, або ациламінові сполуки, такі як 2-етоксі-1-етоксикарбоніл-1,2дигідрохінолін, і пропанфосфоновий ангідрид, або ізобутилхлорформіат, або біс(2-оксо-3оксазолідиніл)фосфорилхлорид або бензотриазолілокситри(диметиламіно)фосфонійгексафторфосфат, або O-(бензотриазол-1-іл-N,N,N',N'тетраметилуронійгексафторфосфат (HBTU), 2-(2оксо-1-(2Н)-піридил)-1,1,3,3тетраметилуронійтетрафторборат (TPTU), О-{1Н6-хлорбензотриазол-1-іл)-1,1,3,3тетраметилуронійтетрафторборат (TCTU) або O(7-азабензотриазол-1-іл)-N,N,N',N'тетраметилуронійгексафторфосфат (HATU), або 1-гідроксибензотриазол (HOBt), або бензотриазол1ілокситрис(диметиламіно)фосфонійгексафторфосфат (ВОР), або бензотриазол-1ілокситрис(піролідино)фосфонійгексафторфосфат (РуВОР), або N-гідроксисукцинімід, або їх суміші з основами. Прикладами основ є карбонати лужних металів, такі як, наприклад, карбонат і бікарбонат натрію або калію, або органічні основи, такі як триалкіламіни, наприклад, триетиламін, Nметилморфолін, N-метилпіперидин, 4диметиламінопіридин або діізопропілетиламін. Конденсацію переважно проводять із використанням HATU або ЕДХ у присутності HOBt. Реакцію з кислотою на другій стадії способу переважно проводять при температурі в діапазоні від 0 до 40°С при атмосферному тиску. Придатними кислотами є хлорид водню в діоксані, бромід водню в оцтовій кислоті або трифтороцтова кислота в метиленхлориді. Гідрогеноліз на другій стадії способу звичайно проводять у розчиннику в присутності водню та паладію на активованому вугіллі, переважно - при температурі в діапазоні від 0 до 40°С при атмосферному тиску. Прикладами розчинників є спирти, такі як метанол, етанол, н-пропанол і ізопропанол, у суміші з водою та оцтовою кислотою або водним розчином хлористоводневої кислоти, і кращими є суміш ета 95630 30 нолу, води та оцтової кислоти або суміш ізопропанолу й водного розчину хлористоводневої кислоти. Методика [В]: Реакцію сполук формули (IV) зі сполуками формули (V) звичайно проводять в інертних розчинниках у присутності дегідратуючого реагенту, якщо це доцільно, то в присутності основи, переважно при температурі в діапазоні від -30 до 50°С при атмосферному тиску. Прикладами інертних розчинників є галогеновані вуглеводні, такі як дихлорметан і трихлорметан, вуглеводні, такі як бензол, нітрометан, діоксан, диметилформамід і ацетонітрил. Також можна використовувати суміші цих розчинників. Дихлорметан і диметилформамід є особливо кращими. Прикладами придатних дегідратуючих реагентів є карбодііміди, такі як, наприклад, N,N'-діетил-, N,N'-дипропіл-, N,N'-діізопропіл-, N,N'дициклогексилкарбодіімід, N-(3диметиламіноізопропіл)-N'етилкарбодіімідгідрохлорид (ЕДХ), Nциклогексилкарбодіімід-N'пропілоксиметилполістирол (ПС-карбодіімід), і карбонільні сполуки, такі як карбонілдіімідазол, і 1,2-оксазолієві сполуки, такі як 2-етил-5-феніл-1,2оксазолій-3-сульфат або 2-трет-бутил-5метилізоксазолійперхлорат, або ациламінові сполуки, такі як 2-етоксі-1-етоксикарбоніл-1,2дигідрохінолін, і пропанфосфоновий ангідрид, або ізобутилхлорформіат, або біс(2-оксо-3оксазолідиніл)фосфорилхлорид або бензотриазолілокситри(диметиламіно)фосфонійгексафторфосфат, або O-(бензотриазол-1-іл)-N,N,N',N'тетраметилуронійгексафторфосфат (HBTU), 2-(2оксо-1-(2Н)-піридил)-1,1,3,3тетраметилуронійтетрафторборат (TPTU), O-(1Н6-хлорбензотриазол-1-іл)-1,1,3,3тетраметилуронійтетрафторборат (TCTU) або O(7-азабензотриазол-1-іл)-N,N,N',N'тетраметилуронійгексафторфосфат (HATU), або 1-гідроксибензотриазол (HOBt), або бензотриазол1-ілокситрис(диметиламіно)фосфоній гексафторфосфат (ВОР), або бензотриазол-1ілокситрис(піролідино)фосфонійгексафторфосфат (РуВОР), або N-гідроксисукцинімід, або їх суміші з основами. Прикладами основ є карбонати лужних металів, такі як, наприклад, карбонат і бікарбонат натрію або калію, або органічні основи, такі як триалкіламіни, наприклад, триетиламін, Nметилморфолін, N-метилпіперидин, 4диметиламінопіридин або діізопропілетиламін. Конденсацію переважно проводять із використанням HATU або ЕДХ у присутності HOBt. Реакцію з тетрабутиламонійфторидом на першій стадії (а) іншого способу звичайно проводять в інертних розчинниках, переважно - при температурі в діапазоні від 0 до 40°С при атмосферному тиску. Прикладами інертних розчинників є галогеновані вуглеводні, такі як дихлорметан і трихлорметан, або прості ефіри, такі як тетрагідрофуран і діоксан. Тетрагідрофуран є особливо кращим. 31 Реакцію з кислотою на другій стадії (b) способу переважно проводять при температурі в діапазоні від 0 до 40°С при атмосферному тиску. Придатними кислотами є хлорид водню в діоксані, бромід водню в оцтовій кислоті або трифтороцтова кислота в метиленхлориді. Реакцію на третій стадії (с) способу проводять за аналогією з реакцією сполук формули (IV) зі сполуками формули (V). Гідрогеноліз на четвертій стадії (d) способу звичайно проводять у розчиннику в присутності водню та паладію на активованому вугіллі, переважно - при температурі в діапазоні від 0 до 40°С при атмосферному тиску. Прикладами розчинників є спирти, такі як метанол, етанол, н-пропанол і ізопропанол, у суміші з водою та оцтовою кислотою або водним розчином хлористоводневої кислоти, і кращими є суміш етанолу, води та оцтової кислоти або суміш ізопропанолу та водного розчину хлористоводневої кислоти. Сполуки формули (II) є відомими або їх можна одержати за реакцією сполук формули у якій 4 5 6 7 8 9 10 11 R , R , R , R , R , R , R і R мають зазначені вище значення, спочатку зі сполуками формули у якій 95630 32 3 R має зазначені вище значення, і 13 R означає ціанометил, п-нітрофеніл, онітрофеніл, 2,4-динітрофеніл, 2,4,5-трихлорфеніл, пентахлорфеніл, пентафторфеніл (Pfp), Nгідроксифталімідил, N-гідроксисукцинімідил (OSu), 1-гідроксипіперидиніл або 5-хлор-8гідроксихінолініл, і потім проводять 3-стадійний синтез a) з кислотою, b) з дегідратуючим реагентом, якщо це доцільно, то в присутності основи, та c) проводять гідрогеноліз. Реакцію сполук формули (VI) зі сполуками формули (VII) звичайно проводять в інертних розчинниках, якщо це доцільно, то в присутності основи, переважно - при температурі в діапазоні від -30 до 50°С при атмосферному тиску. Прикладами інертних розчинників є тетрагідрофуран, метиленхлорид, піридин, діоксан, диметилацетамід, N-метилпіролідон і диметилформамід, і кращими є піридин і диметилформамід. Реакцію з кислотою на першій стадії (а) способу переважно проводять при температурі в діапазоні від 0 до 40°С при атмосферному тиску. Придатними кислотами є хлорид водню в діоксані, бромід водню в оцтовій кислоті або трифтороцтова кислота в метиленхлориді. Реакцію на другій стадії (b) способу проводять за аналогією з реакцією сполук формули (IV) зі сполуками формули (V). Гідрогеноліз на третій стадії (с) способу звичайно проводять у розчиннику в присутності водню та паладію на активованому вугіллі, переважно при температурі в діапазоні від 0 до 40°С при атмосферному тиску. Прикладами розчинників є спирти, такі як метанол, етанол, н-пропанол і ізопропанол, у суміші з водою та оцтовою кислотою або водним розчином хлористоводневої кислоти, і кращими є суміш етанолу, води та оцтової кислоти або суміш ізопропанолу та водного розчину хлористоводневої кислоти. Сполуки формул (III), (V) і (VII) є відомими або їх можна синтезувати за відомими методиками або за методиками, описаними нижче, з відповідних вихідних речовин. Сполуки формул (IV) і (VI) є відомими або їх можна синтезувати в розчині з використанням придатних захисних груп або у твердій фазі за відомими методиками синтезу пептидів або за методиками, описаними нижче, з відповідних вихідних речовин. Одержання сполук, пропонованих у даному винаході, можна проілюструвати за допомогою наведених нижче схем синтезу. 33 95630 34 35 95630 36 37 Сполуки, пропоновані в даному винаході, мають цінний діапазон фармакологічних впливів, які неможливо було передбачити. Вони мають антибактеріальний вплив. Тому вони придатні для застосування як лікарські засоби, призначені для лікування і/або профілактики захворювань у людей і тварин. Сполуки, пропоновані в даному винаході, відрізняються більш низькою гепатотоксичністю, ніж лізобактин. Сполуки, пропоновані в даному винаході, відрізняються поліпшеною стабільністю у водному середовищі з реакцією від нейтральної до лужної. Ця характеристика поліпшує зберігання сполук, пропонованих у даному винаході, і введення як лікарських засобів. Описані нонадепсипептиди діють, як інгібітори біосинтезу стінок клітин бактерій. 95630 38 Препарати, пропоновані в даному винаході, є особливо ефективними щодо бактерій і бактеріоїдних мікроорганізмів. Тому вони є особливо придатними для профілактики та хіміотерапії викликаних цими патогенами місцевих і системних інфекційних захворювань у медицині та ветеринарії. Препарати, пропоновані в даному винаході, в принципі, можна застосовувати проти всіх бактерій і бактериоїдних мікроорганізмів, клітина яких має стінку (murein sacculus) і відповідних ферментних систем, наприклад, проти наступних патогенів або сумішей наступних патогенів: грамнегативні коки (Neisseria gonorrhoeae), а також грамнегативні палички, такі як ентеробактерії, наприклад, Escherichia coli, Haemophilus influenzae, Pseudomonas, Klebsiella, Citrobacter (С. freundii, С. divernis), Salmonella і Shigella; крім того Enterobacter (Ε. aerogenes, Ε. agglomerans), Hafnia, 39 Serratia (S. marcescens), Providencia, Yersinia, a також родин Acinetobacter, Branhamella і Chlamydia. Діапазон антибактеріального впливу додатково включає строго анаеробні бактерії, такі як, наприклад, Bacteroides fragilis, представники родин Peptococcus, Peptostreptococcus, а також роду Clostridium; крім того, мікробактерії, наприклад, М. tuberculosis. Сполуки, пропоновані в даному винаході, здійснюють особливо виражений вплив на грампозитивні коки, наприклад, стафілококи (S. aureus, S. epidermidis, S. haemolyticus, S. carnosus), ентерококи (Ε. faecalis, Ε. faecium) і стрептококи (S. агалактія, S. pneumoniae, S. pyogenes). Представлений вище перелік патогенів наведений в основному для прикладу і його ніяким чином не слід вважати обмежуючим. Прикладами захворювань, які можна відзначити і які можуть бути викликані зазначеними патогенами або змішаними інфекціями, перебіг яких поліпшується або які лікуються препаратами, пропонованими в даному винаході, є: Інфекційні захворювання людей, такі як, наприклад, неускладнені та ускладнені інфекції сечових шляхів, неускладнені шкірні та нашкірні інфекції, ускладнені шкірні інфекції та інфекції м'яких тканин, лікарняна та нелікарняна пневмонія, нозокоміальні пневмонії, гострі приступи та вторинні бактеріальні інфекції при хронічному бронхіті, гострий отит середнього вуха, гострий синусит, стрептококовий фарингіт, бактеріальний менінгіт, неускладнений гонококовий і негонококовий утерит/цервіцит, гострий простатит, ендокардит, неускладнені та ускладнені внутрішньочеревні інфекції, гінекологічні інфекції, запальне захворювання таза, бактеріальний вагіноз, гострий і хронічний остеомієліт, гострий бактеріальний артрит, лихоманкова нейтропенія (емпіричне лікування), крім того, бактеріемія, інфекції MRSA, гостра інфекційна діарея, інфекції Helicobacter pylori, післяопераційні інфекції, одонтогенні інфекції, офтальмологічні інфекції, післяопераційні інфекції (включаючи перипроктальний абсцес, раневі інфекції, інфекції жовчних шляхів, мастит і гострий апендицит), муковісцидоз і бронхоектаз. Крім лікування людей, можна боротися з бактеріальними інфекціями в інших видів. Прикладами, які можна відзначити, є: Свині: діарея, ентеротоксемія, сепсис, дизентерія, сальмонельоз, синдром метрит-маститагалактія, мастит; Жуйні тварини (велика рогата худоба, вівці, кози): діарея, сепсис, бронхопневмонія, сальмонельоз, пастерелез, генітальні інфекції; Коні: бронхопневмонія, гнійне запалення суглобів, родові та післяродові інфекції, сальмонельоз; Собаки та кішки: бронхопневмонія, діарея, дерматит, отит, інфекції сечових шляхів, простатит; Домашня птиця (кури, індички, перепели, голуби, декоративні птахи та ін.): інфекції Е. coli, хронічні порушення дихальних шляхів, сальмонельоз, пастерелез, пситакоз. Також можна лікувати бактеріальні захворювання при розведенні та вирощуванні продуктив 95630 40 них і декоративних риб і в цьому випадку в спектр антибактеріального впливу поряд із зазначеними вище патогенами входять інші патогени, такі як, наприклад, Pasteurella, Brucella, Campylobacter, Listeria, Erysipelothris, corynebacteria, Borellia, Treponema, Nocardia, Rikettsia, Yersinia. Даний винахід також стосується застосування сполук, пропонованих у даному винаході, для лікування і/або профілактики захворювань, переважно - бактеріальних інфекційних захворювань. Даний винахід також стосується застосування сполук, пропонованих у даному винаході, для лікування і/або профілактики захворювань, переважно - зазначених вище захворювань. Даний винахід також стосується застосування сполук, пропонованих у даному винаході, для приготування лікарського засобу, призначеного для лікування і/або профілактики захворювань, переважно - зазначених вище захворювань. Сполуки, пропоновані в даному винаході, переважно застосовують для приготування лікарських засобів, які придатні для профілактики і/або лікування бактеріальних захворювань. Даний винахід також стосується способу лікування і/або профілактики захворювань, переважно - зазначених вище захворювань, з використанням антибактеріально ефективної кількості сполук, пропонованих у даному винаході. Даний винахід також стосується лікарських засобів, які включають принаймні одну сполуку, пропоновану в даному винаході, і принаймні один або більшу кількість інших активних інгредієнтів, переважно призначених для лікування і/або профілактики зазначених вище захворювань. Кращими активними інгредієнтами для комбінації є сполуки, які мають антибактеріальну активність й мають різні діапазони впливів, переважно - додатковий діапазон впливів і/або зі сполуками, які проявляють синергізм, пропонованими в даному винаході. Сполуки, пропоновані в даному винаході, можуть діяти системно і/або місцево. Для забезпечення такого впливу їх можна вводити придатним шляхом, таким як, наприклад, пероральний, парентеральний, назальний, сублінгвальний, лінгвальний, трансбукальний, ректальний, шкірний, черезшкірний, кон'юнктивальний, вушний, або у вигляді імплантату або стента. При цих шляхах введення сполуки, пропоновані в даному винаході, можна вводити в придатних препаративних формах. Придатними для перорального введення є препаративні форми, які діють відповідно до попереднього рівня техніки й вивільняють сполуки, пропоновані в даному винаході, швидко і/або модифікованим чином і які містять сполуки, пропоновані в даному винаході, у кристалічній і/або аморфізованій і/або розчиненій формі, такі як, наприклад, таблетки (таблетки без покриття або з покриттям, наприклад, які мають ентеросолюбільні покриття або покриття, які розчиняються із затримкою або нерозчинні й регулюють вивільнення сполук, пропонованих у даному винаході), таблетки або плівки/облатки, які швидко розпадаються в порожнині рота, плівки/ліофілізати, капсули (наприклад, капсули із твердого або м'якого желати 41 ну), таблетки, покриті цукром, гранули, пелети, порошки, емульсії, суспензії, аерозолі або розчини. Парентеральне ведення можна проводитиз виключенням стадії всмоктування (наприклад, внутрішньовенно, внутрішньоартеріально, внутрішньокарбіально, внутрішньохребцево або внутрішньопопереково) або із включенням стадії всмоктування (наприклад, внутрішньом'язово, підшкірно, внутрішньошкірно, нашкірно або внутрішньочеревно). Препаративними формами, придатними для парентерального ведення, зокрема, є, препарати для ін'єкції та вливання у формі розчинів, суспензій, емульсій, ліофілізатів або стерильних порошків. Придатними для інших шляхів введення є, наприклад, фармацевтичні форми для інгаляції (зокрема, для порошкових інгаляторів, розпилювачів), краплі, розчини, спреї для носа; таблетки, плівки/облатки або капсули для лінгвального, сублінгвального або трансбукального введення, супозиторії, препарати для очей і вух, вагінальні капсули, водні суспензії (лосьйони, суміші для збовтування), ліпофільні суспензії, мазі, креми, черезшкірні терапевтичні системи (такі як, наприклад, пластири), молочко, пасти, пінки, порошки для опудрювання, імплантати або стенти. Сполуки, пропоновані в даному винаході, можна перетворити на стандартні препаративні форми. Це можна виконати звичайним чином шляхом змішування з інертними, нетоксичними фармацевтично прийнятними інертними наповнювачами. Ці інертні наповнювачі, зокрема, включають носії (мікрокристалічна целюлоза, лактоза, маніт), розчинники (наприклад, рідкі поліетиленгліколі), емульгатори й диспергуючі або змочувальні агенти (наприклад, додецилсульфат натрію, поліоксисорбітанолеат), сполучні (наприклад, полівінілпіролідон), синтетичні й натуральні полімери (наприклад, альбумін), стабілізатори (наприклад, антиоксиданти, такі як, наприклад, аскорбінова кислота), барвники (наприклад, неорганічні пігменти, такі як, наприклад, оксиди заліза) і речовини, що коригують смак і/або запах. Даний винахід також стосується лікарських засобів, які включають принаймні одну сполуку, пропоновану в даному винаході, звичайно разом з одним або більшою кількістю інертних, нетоксичних фармацевтично прийнятних інертних напов 95630 42 нювачів, і їх застосування для зазначених вище цілей. Встановлено, що для забезпечення ефективних результатів при внутрішньовенному введенні звичайно краще вводити кількості, що складають приблизно від 0,001 до 100 мг/кг, краще - приблизно від 0,1 до 10 мг/(кг маси тіла) і при пероральному введенні доза становить приблизно від 0,01 до 50 мг/кг, краще - від 0,5 до 10 мг/(кг маси тіла). Проте при відповідних показаннях може виявитися необхідним відхилення від зазначених кількостей, зокрема, залежно від маси тіла, шляху введення, індивідуальної реакції на активний інгредієнт, природи препарату й часу або інтервалу між введеннями. Таким чином, у деяких випадках буде досить використовувати кількість, меншу зазначеної мінімальної, а в інших випадках необхідно перевищити зазначену верхню межу. У випадку введення більш значних кількостей може виявитися доцільним їх розділення на декілька окремих доз, які вводяться протягом доби. У наведених нижче дослідженнях і прикладах, якщо не зазначено інше, виражені у відсотках значення є масовими; виражені в частинах значення також є масовими. Співвідношення кількостей розчинників, співвідношення розведення та значення концентрації в розчинах рідина/рідина у всіх випадках є об'ємними. На прикладених кресленнях наведені діаграми стабільності для деяких типових сполук і лізобактину як порівняльний приклад. На них представлено наступне: Фіг. 1: Залежність від часу зміни концентрації лізобактину та продукту розкладання лізобактину в слабко лужному водному розчині. Фіг. 2: Залежність від часу зміни концентрації сполуки прикладу 19 у слабколужному водному розчині. Фіг. 3: Залежність від часу зміни концентрації сполуки прикладу 23 у слабколужному водному розчині. Фіг. 4: Залежність від часу зміни концентрації сполуки прикладу 25 у слабколужному водному розчині. Фіг. 5: Залежність від часу зміни концентрації сполуки прикладу 40 у слабколужному водному розчині. А. Приклади 43 95630 44 Абревіатури СМЕ Вос ДЦК ПХІ ДХМ ДІЕА ДМАП ДМСО ДМФ EA ЕДХ ЕДХНСІ ЕДТК IE екв. ІЕР год НАTU HOBt ВЕРХ РХ-МС ДАЛ ГМДСЛ ВР LLА(3-циклогексил) LLF ЛІДСМ МІК хв MRSA МС МТБЕ NCCLS NMM ЯМР ЧДА Pd Pd-C ПТФЕ ОФ-ВЕРХ КТ Rf Rt ТБАФ ТВТU ТCТU TFA ТФЕ ТГФ ТМГ ТМСЕ ЧПР УФ ВДC VRSA XPHOS Z, Cbz (бульйон) із серцево-мозковим екстрактом трет-бутоксикарбоніл дициклогексилкарбодіімід пряма хімічна іонізація (у МС) дихлорметан N,N-діізопропілетиламін 4-N,N-диметиламінопіридин диметилсульфоксид N,N-диметилформамід етилацетат 1-етил-3-(3-диметиламінопропіл)карбодіімід 1-етил-3-(3-диметиламінопропіл)карбодіімідгідрохлорид етилендіамінтетроцтова кислота іонізація електронним ударом (у МС) еквівалент(и) іонізація електророзпиленням (у МС) година(и) O-(7-азабензотриазол-1-іл)-N, Ν,Ν',Ν'-тетраметилуронійгексафторфосфат 1-гідроксибензотриазол високоефективна рідинна хроматографія рідинна хроматографія - мас-спектроскопія діізопропіламід літію гексаметилдисилазид літію високе розрізнення (у МС) D-Leu-Leu-(3 -циклогексил) Ala D-Leu-Leu-Phe з лазерною іонізацією та десорбцією з матриці мінімальна інгібуюча концентрація хвилина (хвилини) Staphylococcus aureus, резистентний до метициліну мас-спектроскопія метил-трет-бутиловий ефір Національний комітет клінічних лабораторних стандартів N-метилморфолін спектроскопія ядерного магнітного резонансу чистий для аналізу паладій паладій на вугіллі політетрафторетилен ВЕРХ з оберненою фазою кімнатна температура коефіцієнт утримання (у тонкошаровій хроматографії) час утримання (у ВЕРХ) тетрабутиламонійфторид O-(бензотриазол-1-іл)-Ν,Ν,Ν',Ν'-тетраметилуронійтетрафторборат O-(1Н-6-хлорбензотриазол-1-іл)-1,1,3,3-тетраметилуронійтетрафторборат трифтороцтова кислота 2,2,2-трифторетанол тетрагідрофуран Ν,Ν,Ν,N-тетраметилгуанідин 2-(триметилсиліл)етил часопролітна ультрафіолетовий у видимій ділянці спектра Stapylococcus aureus, резистентний до ванкоміцину дициклогексил(2',4',6'-триізопропілбіфеніл-2-іл)фосфін бензилоксикарбоніл Література Номенклатура пептидів і циклодепсипептидів представлена в публікаціях: 1. A Guide to IUPAC Nomenclature of Organic Compounds (Recommendations 1993), 1993, Blackwell Scientific publications. 45 2. Nomenclature і symbolism for amino acids and peptides. Recommendations 1983. IUPAC-IUB Joint Commission on Biochemical Nomenclature, UK. Biochemical Journal 1984, 219, 345-373, та cited literature. Матеріали та методики Аналітичні методики Методика 1: тип приладу ВЕРХ: HP 1100 Series; УФ ДДМ; колонка: Phenomenex Synergi 2 мкм Hydro-ΟΦ Mercury 20 мм4 мм; елюент А: 1 л води + 0,5 мл 50% мурашиної кислоти, елюент В: 1 л ацетонітрилу + 0,5 мл 50% мурашиної кислоти; градієнтний режим: 0,0 хв 90%А2,5 хв 30%А3,0 хв 5%А4,5 хв 5%А; швидкість потоку: 0,0 хв 1 мл/хв, 2,5 хв/3,0 хв/4,5 хв. 2 мл/хв; температура печі: 50°С; УФ-детектування 210 нм. Методика 2: тип приладу ВЕРХ: HP 1050 Series; УФ ДДМ; колонка: Phenomenex Synergi 2 мкм Мах-ОФ Mercury 20 мм4 мм; елюент А: 1 л води + 0,05% TFA, елюент В: 1 л ацетонітрилу; градієнтний режим: 0,0 хв 90%А2,5 хв 30%А3,0 хв 5%А4,5 хв 5%А; швидкість потоку: 0,0 хв 1 мл/хв, 2,5 хв/3,0 хв/4,5 хв. 2 мл/хв; температура печі: 50°С; УФ-детектування 210 нм. Методика 3: тип приладу ВЕРХ: HP 1050/1100 Series; УФ ДДМ 1100 Series; колонка: Kromasil C18, 602,1 мм, 3,5 мкм; елюент А: вода/0,5% хлорна кислота, елюент В: ацетонітрил; градієнтний режим: 0-0,5 хв 2%В, 0,5-4,5 хв 2-90%В, 4,5-6,5 хв 90%В, 6,5-6,7 хв 90-2%В, 6,7-7,5 хв 2%В; швидкість потоку: 0,75 мл/хв, температура печі: 30°С, УФ-детектування 210 нм. Методика 4: Прилад: HP 1100 детектування за допомогою ДДМ (детектор на діодній матриці); колонка: Kromasil 100 ОФ-18, 60 мм2,1 мм, 3,5 мкм; елюент А: 5 мл хлорної кислоти (70%)/л води, елюент В: ацетонітрил; градієнтний режим: 0 хв 2%В, 0,5 хв 2%В, 4,5 хв 90%В, 9 хв 90%В, 9,2 хв. 2%В, 10 хв 2%В; швидкість потоку: 0,75 мл/хв; температура колонки: 30°С; детектування: УФ 210 нм. Методика 5: Прилад: Agilent 1100 із ДДМ (G1315B), дві помпи (G1312A), автоматичний пробовідбірник (G1313A), пристрій дегазування розчинника (G13 79А) і термостат колонки (G1316A); колонка: Agilent Zorbax Eclipse XDB-C8 4,61505 мм; температура колонки: 30°С; елюент А: 0,05% 70% хлорна кислота у воді; елюент В: ацетонітрил; швидкість потоку: 2,00 мл/хв; градієнтний режим: 0-1 хв 10% В, лінійна зміна, 4-5 хв 90% В, лінійна зміна, 5,5 хв 10% В. Методика 6: Прилад: Agilent 1100 із ДДМ (G1315B), дві помпи (G1312A), автоматичний пробовідбірник (G1313A), пристрій дегазування розчинника (G1379A) і термостат колонки (G1316A); колонка: Agilent Zorbax Eclipse XDB-C8 4,61505 мм; температура колонки: 30°С; елюент А: 0,01% TFA у воді; елюент В: 0,01% TFA в ацетонітрилі; швидкість потоку: 2,00 мл/хв; градієнтний режим: 0-1 хв 10% В, лінійна зміна, 4-5 хв 90% В, лінійна зміна, 5,5 хв 10% В. Методика 7: Agilent 1100 із ДДМ (G1315B), дві помпи (G1312A), автоматичний пробовідбірник (G1313A), пристрій дегазування (G1379A) і термо 95630 46 стат колонки (G1316A); колонка: Synergi 4 мкм Hydro-ΟΦ 80А, 4,61505 мм; температура печі: 30°С; елюент А: вода + 0,05% 70% хлорна кислота; елюент В: ацетонітрил; швидкість потоку: 2,00 мл/хв; градієнтний режим: 0-1 хв 10% В, лінійна зміна, 4-5 хв 90% В, лінійна зміна, 5,5 хв 10% В. Методика 8: Прилад: Agilent 1100 із ДДМ (G1315B), дві помпи (G1312A), автоматичний пробовідбірник (G1313A), пристрій дегазування розчинника (G1379A) і термостат колонки (G1316A); колонка: Agilent Eclipse XDB-C8 4,61505 мм; температура колонки: 40°С; елюент А: 0,05% 70% хлорна кислота у воді; елюент В: метанол; швидкість потоку: 2,00 мл/хв; ізократичний режим: 0-7 хв 55% В. Методика 9: тип приладу ВЕРХ: HP 1050 Series; УФ ДДМ; колонка: Zorbax 300 mSB-C18 3,5 мкм, 4,6 мм150 мм; елюент А: 1 л води + 0,1% TFA, елюент В: 400 мл ацетонітрилу/600 мл води + 0,1% TFA; градієнтний режим: 0,0 хв 100%А, 1,3 хв 10%В, 18,0 хв 80%В, 20,0 хв 80%В, 21,0 хв 100%В, 25,0 хв 100%В, 26,0 хв 0%В, 30,0 хв 0%В. Швидкість потоку: 1 мл/хв; температура печі: 40°С; УФдетектування 210 нм. Методика 10: тип приладу ВЕРХ: HP 1050 Series; УФ ДДМ; колонка: Zorbax 300 mSB-C18 3,5 мкм, 4,6 мм150 мм; елюент А: 1 л води + 0,1% TFA, елюент В: ацетонітрил; градієнтний режим: 0,0 хв 100%А, 15,0 хв 100%В, 17,0 хв 100%В, 18,0 хв 100%А. Швидкість потоку: 1 мл/хв; температура печі: 40°С; УФ-детектування 210 нм. Методика 11: тип приладу ВЕРХ: HP 1050 Series; УФ ДДМ; колонка: Zorbax 300 mSB-C18 3,5 мкм, 4,6 мм150 мм; елюент А: 1 л води + 0,1% TFA, елюент В: 400 мл ацетонітрилу/600 мл води + 0,1% TFA; градієнтний режим: 0,0 хв 100%А, 2,0 хв 10%В, 50,0 хв 80%В, 52,0 хв 100%В, 55,0 хв 100%А, 60,0 хв 100%А. Швидкість потоку: 1 мл/хв; температура печі: 40°С; УФ-детектування 210 нм. Методика 12: тип приладу ВЕРХ: HP 1050 Series; колонка SymmetryPrepC18, Waters, 502,1 мм, 3,5 мкм; елюент А: вода/0,1% TFA, елюент В: ацетонітрил; градієнтний режим: 0-3 хв 0%В, 3,019 хв 100%В, 9,01-11 хв 100%В, 11,01-12 хв 0100%А; температура печі: 40°С; швидкість потоку: 0,4 мл/хв; УФ-детектування 210 нм. Методика 13: тип приладу ВЕРХ: HP 1100 Series; УФ ДДМ; колонка: Chromolith Speed ROD RP18; елюент А: 1 л води + 0,05% TFA, елюент В: 1 л ацетонітрилу; градієнтний режим: 0,0-0,5 хв 95%А, 0,51-3,0 хв 5-95%В, 3,01-3,80 хв 95%А; швидкість потоку: 5 мл/хв; температура печі: 40°С; УФ-детектування 210 нм. Методика 14: колонка (сталева колонка, розміри 2504,6 мм); стаціонарна фаза (хіральний діоксид кремнію/поліамідний композит KBD 5326, на основі селектора полі(N-метакрилоїл-Lлейциндициклопропілметиламіду); елюент: етилацетат, ізократичний режим; швидкість потоку: 1 мл/хв; температура: 25°С; УФ-детектування 220 нм; проба: інжектування 10 мкл. Методика 15: стаціонарна фаза (Chiralcel OD); елюент: ізогексан/і-РrОН:9/1, ізократичний режим; швидкість потоку: 2 мл/хв; температура: 25°С; УФдетектування 254 нм. 47 Методика 16: тип приладу ВЕРХ: HP 1100 Series; колонка: Chiralpack AD-H 250 мм4,6 мм; елюент А: ізогексан, елюент В: етанол + 0,2%TFA + 1% Н2О; ізократичний режим; швидкість потоку: 1 мл/хв; температура печі: 40°С; УФ-детектування 230 нм. Методика 17: Daicel Chiralpak AD-H 5 мкм 250 мм4,6 мм, гексан/2-пропанол/метанол 85/6/9, швидкість потоку: 2,0 мл/хв, УФ-детектування при 254 нм. Методика 18: тип приладу МС: Micromass ZQ; тип приладу ВЕРХ: Waters Alliance 2795/НР 1100; колонка: Phenomenex Synergi 2 мкм Hydro-ΟΦ Mercury 20 мм4 мм; елюент А: 1 л води + 0,5 мл 50% мурашиної кислоти, елюент В: 1 л ацетонітрилу + 0,5 мл 50% мурашиної кислоти; градієнтний режим: 0,0 хв 90%А2,5 хв 30%А3,0 хв 5%А4,5 хв 5%А; швидкість потоку: 0,0 хв 1 мл/хв, 2,5 хв/3,0 хв/4,5 хв 2 мл/хв; температура печі: 50°С; УФ-детектування 210 нм. Методика 19: тип приладу МС: Micromass ZQ; тип приладу ВЕРХ: Waters Alliance 2795/НР 1100; колонка: Phenomenex Gemini 3 мкм С-18 100Å, 30 мм3 мм; елюент А: 1 л води + 0,5 мл 50% мурашиної кислоти, елюент В: 1 л ацетонітрилу + 0,5 мл 50% мурашиної кислоти; градієнтний режим: 0,0 хв 90%А2,5 хв 30%А3,0 хв 5%А4,5 хв 5%А; швидкість потоку: 0,0 хв 1 мл/хв, 2,5 хв/3,0 хв/4,5 хв 2 мл/хв; температура печі: 50°С; УФдетектування 210 нм. Методика 20: УФ-детектування 210 нм. тип приладу МС: Micromass ZQ; тип приладу ВЕРХ: Waters Alliance 2795; колонка: Phenomenex Synergi 2 мкм Hydro-ΟΦ Mercury 20 мм4 мм; елюент А: 1 л води + 0,5 мл 50% мурашиної кислоти, елюент В: 1 л ацетонітрилу + 0,5 мл 50% мурашиної кислоти; градієнтний режим: 0,0 хв 90%А2,5 хв 30%А3,0 хв 5%А4,5 хв 5%А; швидкість потоку: 0,0 хв 1 мл/хв, 2,5 хв/3,0 хв/4,5 хв 2 мл/хв; температура печі: 50°С; УФ-детектування 210 нм. Методика 21: Прилад: Micromass Quattro LCZ з ВЕРХ Agilent Series 1100; колонка: Phenomenex Synergi 2 мкм Hydro-ΟΦ Mercury 20 мм4 мм; елюент А: 1 л води + 0,5 мл 50% мурашиної кислоти, елюент В: 1 л ацетонітрилу + 0,5 мл 50% мурашиної кислоти; градієнтний режим: 0,0 хв 90%А2,5 хв 30%А3,0 хв 5%А4,5 хв 5%А; швидкість потоку: 0,0 хв 1 мл/хв, 2,5 хв/3,0 хв/4,5 хв 2 мл/хв; температура печі: 50°С; УФ-детектування 208-400 нм. Методика 22: Прилад: Micromass Platform LCZ з ВЕРХ Agilent Series 1100; колонка: Thermo Hypersil GOLD 3 мкм 20 мм4 мм; елюент А: 1 л води + 0,5 мл 50% мурашиної кислоти, елюент В: 1 л ацетонітрилу + 0,5 мл 50% мурашиної кислоти; градієнтний режим: 0,0 хв 100%А0,2 хв 100%А2,9 хв 30%А3,1 хв 10%А5,5 хв 10%А; температура печі: 50°С; швидкість потоку: 0,8 мл/хв; УФ-детектування 210 нм. Методика 23: тип приладу МС: Micromass LCT (ІЕР позитивні/негативні іони); тип приладу ВЕРХ: HP 1100 Series; УФ ДДМ 1100 Series; колонка SymmetryPrepC18, Waters, 502,1 мм, 3,5 мкм; елюент А: вода/0,1% мурашиної кислоти, елюент 95630 48 В: ацетонітрил/0,1% мурашиної кислоти; градієнтний режим: 0-1 хв 0 %В, 1-6 хв 0-90%В, 6-8 хв 90100%В, 8-10 хв 100%В, 10-10,1 хв 100-0%В, 10,112 хв 0%В, потім регенерація хроматографічної колонки. Температура печі: 40°С, швидкість потоку: 0,5 мл/хв (швидко до 1 мл/хв через 10,1 хв), УФ-детектування 210 нм. Методика 24: ЧПР-ВР-МС-ІЕР+ спектри знімають на приладі Micromass LCT (напруга на капілярі: 3,2 кВ, напруга на конусі: 42 В, температура джерела: 120°С, температура десольватації: 280°С). Для введення зразка використовують шприцеву помпу (Harvard Apparatus). Лейциненцефалін (Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu) використовують як стандарт. Методика 25: ЛІДСМ-МС/МС дослідження проводять за допомогою приладу 4700 Proteomics Analyzer (Applied Biosystems, Framingham, MA, USA), оснащеного оптичним пристроєм для дослідження іонів ЧПР/ЧПР і лазером 200 Гц Nd:YAG (355 нм). Квазімолекулярні іони прискорюють у джерелі іонів при 8 кВ, відбирають електричним детектором (MS1) і вводять у зіткнення з атомами аргону в комірці для зіткнень, розташованій між MS1 і MS2. Одержані іони фрагментів повторно прискорюють при 15 кВ і другий раз досліджують за допомогою часопролітного аналізатора (MS2). Препаративна хроматографія Методика 26: Прилад: Gilson Abimed HPLC; система із двома помпами; колонка: Nucleodur C18 Gravity, Macherey-Nagel, 5 мкм; 25021 мм; елюент А: вода/0,05%-0,1% TFA, елюент В: ацетонітрил; градієнтний режим: 0-8 хв 5%В, 8-40 хв 5-60%В, 40-60 хв 60%В, 60-75 хв 60-100%В, 75-80 хв 100%В, потім регенерація хроматографічної колонки; швидкість потоку: 7-15 мл/хв; УΦ детектор 210 нм. Методика 27: Прилад: Gilson Abimed HPLC; система із двома помпами; колонка: Nucleodur C18 Gravity, Macherey-Nagel, 5 мкм; 25021 мм; елюент А: вода/0,05%-0,1% TFA, елюент В: ацетонітрил; градієнтний режим: 0-8 хв 5%В, 8-40 хв 5-60%В, 40-60 хв 60%В, 60-75 хв 60-100%В, 75-80 хв 100%В, потім регенерація хроматографічної колонки; швидкість потоку: 7-15 мл/хв; УФ детектор 210 нм. Методика 28: Прилад: Gilson Abimed HPLC; система із двома помпами; колонка: Nucleodur C18 Gravity, Macherey-Nagel, 5 мкм; 25040 мм; елюент А: вода/0,05-0,1% TFA, елюент В: ацетонітрил/ 0,05-0,1% TFA; градієнтний режим: 0-10 хв 10%В, 10-24 хв 10-30%В, 24-28 хв 30-50%В, 28-35 хв 50%В, 35-45 хв 50-60%В, 45-53 хв 60-70%В, 53-60 хв 60-90%B, 60-70 хв 100%В, потім регенерація хроматографічної колонки; швидкість потоку: 15-45 мл/хв; УФ детектор 210 нм. Методика 29: Прилад: Gilson Abimed HPLC; система із двома помпами; колонка: Nucleodur C18 Gravity, Macherey-Nagel, 5 мкм; 25021 мм; елюент А: вода/0,2% оцтова кислота, елюент В: ацетонітрил/0,2% оцтова кислота; градієнтний режим: 0-10 хв 10%В, 10-24 хв 10-30%В, 24-28 хв 30-50%В, 2835 хв 50%В, 35-45 хв 50-60%В, 45-53 хв 60-70%В, 53-60 хв 60-90%В, 60-70 хв 100%В, потім регене 49 рація хроматографічної колонки; швидкість потоку: 7-15 мл/хв; УФ детектор 210 нм. Методика 30: Прилад: Gilson Abimed HPLC; система із двома помпами; колонка: Nucleodur C18 Gravity, Macherey-Nagel, 5 мкм; 25040 мм; елюент А: вода/0,2% оцтова кислота, елюент В: ацетонітрил/0,2% оцтова кислота; градієнтний режим: 0-10 хв 10%В, 10-24 хв 10-30%В, 24-28 хв 30-50%В, 2835 хв 50%В, 35-45 хв 50-60%В, 45-53 хв 60-70%В, 53-60 хв 60-90%В, 60-70 хв 100%В, потім регенерація хроматографічної колонки; швидкість потоку: 15-45 мл/хв; УФ детектор 210 нм. Методика 31: Прилад: Gilson Abimed HPLC; система із двома помпами; колонка: Kromasil-100A C18, 5 мкм; 25030 мм; елюент А: вода/0,25% оцтова кислота, елюент В: ацетонітрил; градієнтний режим: 0-3 хв 5%В, 3-30 хв 5-100%В, 30-38 хв 100%В, потім регенерація хроматографічної колонки; швидкість потоку: 25 мл/хв; УФ детектор 210 нм. Методика 32: Прилад: Gilson Abimed HPLC; система із двома помпами; колонка: Kromasil-100A C18, 5 мкм; 25030 мм; елюент А: вода/0,05-0,5% TFA, елюент В: ацетонітрил; градієнтний режим: 05 хв 5%В, 5,01-10 хв 10%В, 10,01-20 хв 40%В, 20,01-27 хв 50%В, 27,01-40 хв 60%В, 40,01-45 хв 90%В, 45,01-60 хв 100%В; швидкість потоку: 15-60 мл/хв; УΦ детектор 210 нм. Методика 33: Прилад: Gilson Abimed HPLC; УФ детектор 210 нм; колонка: Kromasil ОФ-18 5 мкм, 100Å, 25020 мм; елюент А: вода + 0,05% TFA, елюент В: ацетонітрил + 0,05% TFA: швидкість потоку: 10 мл/хв; 0-3 хв 10% В, лінійна зміна, 30-38 хв 90% В, 38-45 хв 10% В. Методика 34: Прилад: Gilson Abimed HPLC; У Φ детектор 210 нм; колонка: Gromsil ODS-4HE 10 мкм, 25040 мм; елюент А: вода + 0,05% TFA, елюент В: ацетонітрил + 0,05% TFA: швидкість потоку: 20 мл/хв; 0-3 хв 10% В, лінійна зміна, 30-35 хв 90% В, 35-40 хв 90% В. Методика 35: Прилад: Gilson Abimed HPLC; система із двома помпами; колонка: Waters Symmetry-Prep C18, 7 мкм, 30019 мм; елюент А: вода/0,2% льодяної оцтової кислоти, елюент В: ацетонітрил; градієнтний режим: 0-8 хв 5%В, 8-25 хв 5-100%В, 25,01-40 хв 100%В, потім регенерація хроматографічної колонки; швидкість потоку: 15 мл/хв; У Φ детектор 210 нм. Методика 36: Прилад: Gilson Abimed HPLC; система із двома помпами; колонка: Waters Symmetry-Prep C18, 7 мкм, 30019 мм; елюент А: вода/0,1% TFA, елюент В: ацетонітрил; градієнтний режим: 0-5 хв 5%В, 5,01-32 хв 5-100%В, 32,0135 хв 100%В, потім регенерація хроматографічної колонки; швидкість потоку: 15 мл/хв; У Φ детектор 210 нм. Методика 37: колонка: Kromasil-100 C18, 5 мкм; 25020 мм; елюент: 25% вода + 0,2 TFA/75% ацетонітрил; ізократичний режим; 0-8,5 хв; швидкість потоку: 25 мл/хв; УФ детектор 220 нм; температура 30°С. Методика 38: колонка (сталева колонка, розміри 25030 мм); стаціонарна фаза (хіральний діоксид кремнію/поліамідний композит KBD 5326, на основі селектора полі(N-метакрилоїл-L 95630 50 лейциндициклопропілметиламід); елюент етилацетат, ізократичний режим; швидкість потоку: 25 мл/хв; температура: 24°С; УФ-детектування 225 нм; проба: повторюване інжектування 2000 мкл. Методика 39: колонка (сталева колонка, розміри 43075 мм); стаціонарна фаза (хіральний діоксид кремнію/поліамід на основі селектора полі(N-метакрилоїл-Dлейциндициклопропілметиламід); елюент ізогексан (80%)/ТГФ (20%), ізократичний режим; швидкість потоку: 200 мл/хв; температура: 24°С; УФдетектування 254 нм; проба: повторюване інжектування 10000 мкл. Методика 40: колонка (сталева колонка, розміри 25020 мм); стаціонарна фаза (Daicel Chiralpak AD-H, 5 мкм); елюент: ізогексан (70%)/ 2пропанол + 0,2% оцтова кислота + 1% води (30%), ізократичний режим; швидкість потоку: 15 мл/хв; температура: 29°С; УФ-детектування 220 нм; проба: повторюване інжектування 750 мкл. Методика 41: Прилад: Gilson Abimed HPLC; колонка: Daicel Chiralpak AD-H 5 мкм; 25020 мм; елюент А: ізогексан, елюент В: 0,2% оцтова кислота/1% вода/2-пропанол; ізократичний режим; швидкість потоку: 15 мл/хв; У Φ детектор 212 нм. Методика 42: колонка (сталева колонка, розміри 50040 мм); стаціонарна фаза (Daicel Chiralpak AD 20 мкм), ізогексан/ізопропанол/метанол 95/2/3, швидкість потоку: 100 мл/хв, УФ-детектування 230 нм. Методика 43: Прилад: Gilson Abimed HPLC; УФ детектор 210 нм; система із двома помпами; колонка: SymmetryPrepC18, Waters, 7 мкм; 300 мм19 мм; швидкість потоку: 25 мл/хв; елюент А: вода/0,2% TFA, елюент В: ацетонітрил; градієнтний режим: 0-10 хв 15-65%В, потім регенерація хроматографічної колонки. Методика 44: Прилад: Gilson Abimed HPLC; УФ детектор 210 нм; колонка: Waters Symmetry-Prep С-18, 7 мкм, 30019 мм; елюент А: вода + 0,05% TFA, елюент В: ацетонітрил + 0,05% TFA: швидкість потоку: 10 мл/хв; 0-3 хв 10% В, лінійна зміна, 30-38 хв 90% В, 38-45 хв 10% В. Методика 45: Гель-хроматографію проводять без подачі тиску на Sephadex LH-20 (Pharmacia). Фракції відбирають за даними УФ детектування (УФ детектор при 254 нм, Knauer) (пристрій збирання фракцій ISCO Foxy 200). Колонка розміри: 327 см (діапазон 1000-100 мкмоль); 304 см (діапазон 100-10 мкмоль); 252 см (діапазон 10-1 мкмоль). Як елюент використовують метанол. Методика 46: Прилад: Gilson Abimed HPLC; УФ детектор 210 нм; колонка: Biotage Flash40 ОФ-18 або сумісний модуль Varian Metaflash С18 40М, 35 мкм, 15040 мм; елюент А: вода + 0,05% TFA, елюент В: ацетонітрил + 0,05% TFA: швидкість потоку: 40 мл/хв; 0-3 хв 10% В, лінійна зміна, 30-38 хв 90% В, 38-45 хв 10% В. Методика 47: Препаративне розділення фрагментів відщіплення хімотрипсину 1-3 і 4-11 від дигідролізобактину проводять за допомогою хроматографії з оберненою фазою. Колонка: Source 15RPC (GE-HealthCare), діаметр 5 см, довжина 12 см, об'єм 235 мл. Елюент А: 0,1% оцтова кислота у 51 воді. Елюент В: 0,1% оцтова кислота в метанолі. Швидкість потоку: 30 мл/хв. УФ-детектування 215 нм, 280 нм. Завантаження: приблизно 6-7 мг загального білка/мл смоли. Завантаження зразка: Колонці надають рівноваги з елюентом А, подають профільтрований через отвори розміром 0,2 мкм розчин суміші для розщеплення й колонку промивають елюентом А. Елюювання: 0-45% з використанням приблизно 18 об'ємів колонки, наступне промивання за допомогою приблизно 1,3 об'ємів колонки 100%В. Фракціонування: фракції по 50 мл збирають із початку елюювання. СІР: Колонку промивають за допомогою 2 об'ємів колонки 1 н. розчину гідроксиду натрію при зниженій швидкості потоку (5 мл/хв). Спеціальні методики аналізу амінокислот і пептидів Методика 48: Аналіз амінокислот проводять із використанням аналізатора амінокислот LC 3000, який випускається фірмою Eppendorf/Biotronik. Використовують дещо модифіковану стандартну програму розділення Eppendorf/Biotronik. Програми розділення й робота аналізатора докладно описані в керівництві з експлуатації приладу (Handbuch des Aminosaurenanalysators LC 3000, Wissenschaftliche Gerate GmbH Biotronik, Maintal, 1996). Методика 49: Капілярний електрофорез дозволяє розділяти пептиди й білки в електричному полі на основі їх заряду. Якість розділення залежить від буферу, рН, температури та використаних добавок. Використані капіляри являють собою так називані колонки із плавленого кварцу із внутрішнім діаметром, що дорівнює 50-100 мкм. Ця методика досить надійна для оцінки чистоти пептиду й для моніторингу утворення продуктів ферментативного розщеплення. Пептиди дигідролізобактин і октагідролізобактин елююються з капілярної колонки приблизно через 21 хв, фрагмент 4-11 приблизно через 18 хв, 1-3 (LLF) приблизно через 24 хв, 1-3 (LLА(3-циклогексил)) приблизно через 22 хв, форми з відщипленими амідними групами - у вигляді подвійного піку приблизно через 30 хв (1-11) і 24 хв (4-11). Через 24 год спостерігається явне збільшення кількості продуктів з відщипленими амідними групами в буфері. Приблизно 4 нг продуктів ферментативного розщеплення або вихідних сполук дигідролізобактин і октагідролізобактин, або суміші досліджують за допомогою капілярного електрофорезу на скляній колонці (довжина 72 см, внутрішній діаметр 50 мкм). Умови: струм 90 мкА, температура колонки 25°С, 100 мМ фосфатний буфер з рН 3,0, УФ-детектування 210 нм, завантаження під тиском протягом 3 с. Методика 50: 3 нмоль Фрагментів, розчинених у суміші 60% ацетонітрил/0,1% TFA поміщають на лист секвенсера, попередньо інкубований з Polybren. Білки секвенують у звичайному циклі секвенсера. РТН-амінокислоти ідентифікують за допомогою ВЕРХ, яка працює в реальному масштабі часу із використанням 40 пмоль стандарту РТН. Непротеіногенні амінокислоти ідентифікують за їх положенням відносно стандартів амінокислот. Чистоту пептидів оцінюють за допомогою амі 95630 52 нокислоти 1-го циклу РТН. Різні пептиди секвенуються протягом 4-12 стадій. Інші аналітичні та препаративні методики Методика 51: Прилад: Micromass Quattro LCZ з ВЕРХ Agilent Series 1100; колонка: Phenomenex Onyx Monolithic С18, 100 мм3 мм. Елюент А: 1 л води + 0,5 мл 50% мурашиної кислоти, елюент В: 1 л ацетонітрилу + 0,5 мл 50% мурашиної кислоти; градієнтний режим: 0,0 хв 90%А2 хв 65%А4,5 хв 5%А6 хв 5%А; швидкість потоку: 2 мл/хв; температура печі: 40°С; УФ-детектування 208-400 нм. Методика 52: тип приладу МС: Micromass ZQ; тип приладу ВЕРХ: Waters Alliance 2795; колонка: Phenomenex Synergi 2,5 мкм МАХ-ОФ 100A Mercury 20 мм4 мм; елюент А: 1 л води + 0,5 мл 50% мурашиної кислоти, елюент В: 1 л ацетонітрилу + 0,5 мл 50% мурашиної кислоти; градієнтний режим: 0,0 хв 90%А0,1 хв 90%А3,0 хв 5%А4,0 хв 5%А4,01 хв 90%А; швидкість потоку: 2 мл/хв; температура печі: 50°С; УФдетектування 210 нм. Методика 53: Прилад: Agilent 1100 із ДДМ (G1315B), дві помпи (G1312A), автоматичний пробовідбірник (G1313A), пристрій дегазування розчинника (G1379А) і термостат колонки (G1316A); колонка: Agilent Zorbax Eclipse XDB-C8 4,61505 мм; температура колонки: 30°С; елюент А: 0,01% TFA у воді; елюент В: 0,01% TFA в ацетонітрилі; швидкість потоку: 2,00 мл/хв; градієнтний режим: 0-1 хв 10% В, лінійна зміна, 10-14 хв 90%, повторне кондиціювання. Методика 54: Прилад: Agilent 1100 із ДДМ (G1315B), дві помпи (G1312A), автоматичний пробовідбірник (G1313A), пристрій дегазування розчинника (G1379A) і термостат колонки (G1316A); колонка: Agilent Zorbax Eclipse XDB-C8 4,61505 мм; температура колонки: 30°С; елюент А: 0,01% TFA у воді; елюент В: 0,01% TFA в ацетонітрилі; швидкість потоку: 1,40 мл/хв; градієнтний режим: 0 хв 10% В, лінійна зміна, 2,5-5 хв 90%, повторне кондиціювання. Методика 55: Колонка (сталева колонка, розміри 25020 мм); стаціонарна фаза (Daicel Chiralpak AD-H, 5 мкм); елюент: ізогексан (90%)/етанол + 0,2% АсОН + 1% Н2О (10%), ізократичний режим; швидкість потоку: 15 мл/хв; температура: 30°С; УФ-детектування 220 нм; проба: повторюване інжектування 500 мкл. Методика 56: Колонка (сталева колонка, розміри 2504,6 мм); стаціонарна фаза (Daicel Chiralpak AD-H, 5 мкм); елюент: ізогексан (90%)/етанол + 0,2% АсОН + 1% Н2О (10%), ізократичний режим; швидкість потоку: 1,0 мл/хв; температура: 30°С; УФ-детектування 220 нм; проба: інжектування 10 мкл. Методика 57: Колонка: колонка: Kromasil 100 С18, 602,1 мм 3,5 мкм, температура колонки та печі 30°С, швидкість потоку: 0,75 мл/хв, детектор: 210 нм, тривалість експерименту: 15 хв; елюент А: вода з 5 мл НСІO4/л води), елюент В: ацетонітрил; градієнтний режим: 0-1 хв 2%В, лінійна зміна, 9-13 хв, 98% В, повторне кондиціювання. Методика 58: (Хіральна препаративна ВЕРХ, Chiralpak AD-H 40-60); колонка (сталева колонка, 53 розміри 25020 мм); стаціонарна фаза (Daicel Chiralpak AD-H, 5 мкм); елюент: ізогексан (40%)/ етанол + 0,2% АсОН + 1% Н2О (60%), ізократичний режим; швидкість потоку: 15 мл/хв; температура: 30°С; УФ-детектування 220 нм; проба: повторюване інжектування 500 мкл. Методика 59: (Хіральна аналітична ВЕРХ, Chiralpak AD-H 40-60); колонка (сталева колонка, розміри 2504,6 мм); стаціонарна фаза (Daicel Chiralpak AD-H, 5 мкм); елюент: ізогексан (40%)/ етанол + 0,2% АсОН + 1% Н2О (60%), ізократичний режим; швидкість потоку: 1,0 мл/хв; температура: 30°С; УФ-детектування 220 нм; проба: інжектування 10 мкл. Загальні процедури Процедура 1 (видалення захисних груп Вос за допомогою TFA): Сполуку, яка містить захисні групи Вос суспендують у дихлорметані (1/5-1/10 розчину реакційної суміші) і потім у захисній атмосфері аргону додають 30% TFA у дихлорметані (приблизно 1 мл/10 мг вихідної речовини в діапазоні 100-1 ммоль, приблизно 1 мл/1 мг у діапазоні 100-1 мкмоль) і суміш перемішують при КТ, поки одержана з допомогою ВЕРХ хроматограма не вказує на повне перетворення (наприклад, методика 1). Потім розчинник відганяють у вакуумі й у цей час температура бані не повинна перевищувати 30°С. Неочищений продукт суспендують у толуолі, повторно концентрують у роторному випарнику, і сушать у високому вакуумі. Цю процедуру повторюють декілька разів (2-5 разів). Якщо чистота продукту недостатня, його очищають, якщо це доцільно, за допомогою хроматографії, наприклад, за допомогою препаративної ВЕРХ або за допомогою гель-хроматографії. Процедура 2 (видалення захисної групи Вос за допомогою 30% TFA у дихлорметані): Вихідну речовину розчиняють в 30% TFA (розчин у дихлорметані) і перемішують при кімнатній температурі протягом 30 хв. Потім розчинник відганяють у вакуумі, і в цей час температура бані не повинна перевищувати 30°С. Потім продукт сушать до постійної маси у вакуумі, який створюється масляною помпою. Процедура 3 (видалення захисної групи Вос за допомогою 4 н. хлористоводневої кислоти в діоксані): Сполуку (1 ммоль), яка містить захисну групу N-(трет-бутоксикарбоніл), розчиняють у діоксані (23 мл) у захисній атмосфері аргону. При КТ або при охолодженні льодом і при енергійному перемішуванні по краплях додають 4 н. хлористоводневу кислоту в діоксані (30 мл). Перемішування продовжують, поки аналітична ВЕРХ (методика 1) не вказує на повне перетворення (приблизно від 30 хв до 2 год). Реакційну суміш випарюють у вакуумі при КТ. Неочищений продукт розчиняють у невеликій кількості дихлорметану й розчинник повторно видаляють у вакуумі. Цю процедуру повторюють декілька разів з толуолом (двічі) і дихлорметаном (двічі). На закінчення неочищений продукт ліофілізують або відразу вводять у реакцію після сушіння у високому вакуумі. Якщо чистота продукту недостатня, його очищають, якщо це доцільно, за допомогою хроматографії, наприклад, 95630 54 за допомогою препаративної ВЕРХ або за допомогою гель-хроматографії. Процедура 4 (гідрогенолітичне розщеплення складного ефіру 1): Бензиловий ефір пептиду роз-4 чиняють у метанолі або діоксані (приблизно 3·10 -3 - 2·10 моль/л), потім додають 0,1% водний розчин TFA або 0,1 н. хлористоводневої кислоти (6-10 екв.) і у захисній атмосфері аргону додають 10% паладій на вугіллі (10 мол.%). Гідрування проводять при КТ при атмосферному тиску, поки аналітична ВЕРХ (наприклад, методика 1) не вказує на повне перетворення. Реакційну суміш фільтрують (наприклад, через кізельгур, целіт), концентрують в вакуумі и сушать в високому вакуумі. Якщо чистота продукту недостатня, його очищають, якщо це доцільно, за допомогою хроматографії, наприклад, за допомогою препаративної ВЕРХ або за допомогою гель-хроматографії. Процедура 5 (гідрогенолітичне розщеплення складного ефіру 2): Бензиловий ефір пептиду роз-4 -3 чиняють у метанолі (приблизно 3·10 - 2·10 моль/л) і у захисній атмосфері аргону додають 10% паладій на вугіллі (2-10 мол.%). Гідрування проводять при КТ при атмосферному тиску, поки аналітична ВЕРХ (наприклад, методика 1) не вказує на повне перетворення. Реакційну суміш фільтрують (наприклад, через кізельгур, целіт), концентрують в вакуумі и сушать у високому вакуумі. Якщо чистота продукту недостатня, його очищають, якщо це доцільно, за допомогою хроматографії, наприклад, за допомогою препаративної ВЕРХ або за допомогою гель-хроматографії. Процедура 6 (гідролітичне розщеплення складного ефіру, гідроліз): Ефір карбонової кислоти (3 ммоль) розчиняють у захисній атмосфері аргону в суміші ТГФ/вода/ДМФ 200/100/2,5 (20 мл). При 0°С при строгому регулюванні температури при енергійному перемішуванні до розчину порціями додають порошкоподібний гідроксид літію (3,6 ммоль, 1,2 екв.). Якщо через 2 год за допомогою аналітичної ВЕРХ (методика 13) виявляється, що перетворення не є повним, то повторно додають твердий гідроксид літію (3,3 ммоль, 1,1 екв.). Цю процедуру повторюють до завершення перетворення, після чого значення рН реакційної суміші доводять до 3-4 при 0°С 0,1 н. водним розчином хлористоводневої кислоти, концентрують у вакуумі й потім сушать виморожуванням. Потім неочищений продукт можна обробити за допомогою гельхроматографії (наприклад, методика 45) і/або піддати ретельному очищенню за допомогою препаративної ВЕРХ (наприклад, методика 31). Процедура 7 (зв'язування з пептидом на смолі): Зв'язану із хлортритильною смолою амінокислоту, яка містить захисну групу Fmoc, змішують із 20% розчином піперидину в ДМФ і струшують протягом 30 хв. Потім розчин фільтрують із відсмоктуванням через пористий фільтр, повторно додають розчин піперидину й струшування продовжують протягом ще 30 хв. Розчин фільтрують із відсмоктуванням, і смолу промивають за допомогою ДМФ, метанолу, ТГФ і дихлорметану. Полімер, у якого вилучені захисні групи, суспендують у ДМФ (1 мл розчинника на 100 мг смоли) і додають амінокислоту (1,3-2,0 екв.), яка міс 55 тить захисну групу Fmoc, ДІЕА (2,0-3,0 екв.) і TBTU (1,5-2,0 екв.), розчинені в ДМФ. Смолу струшують при КТ протягом ночі. Для обробки полімер збирають фільтруванням з відсмоктуванням через пористий фільтр і потім промивають за допомогою ДМФ, ТГФ і дихлорметану. Після відбирання зразка в суміші оцтова кислота/трифторетанол/дихлорметан 1:1:3 наявність пептиду можна підтвердити за допомогою аналізу. Процедура 8 (автоматичний твердофазовий синтез за допомогою робота Chemspeed): Прилад: Chemspeed ASW 2000, оснащений реакторами об'ємом 75 мл і пристроєм прямого фільтрування з відсмоктуванням розчинника у відходи. Змішування шляхом струшування. Реагенти: Використовують амінокислоти, які містять захисну групу N-[(9Н-флуорен-9-ілметокси)карбоніл] 2 (групу Fmoc) у положенні N . На додаток до захисної групи Fmoc у поло2 женні N використовують додаткові захисні групи в бічних ланцюгах наступних амінокислот: аргінін і D-аргінін містять [(2,2,5,7,8-пентаметил-3,4дигідро-2Н-хромен-6-іл)сульфонільну групу (групу РМС) у гуанідиновому фрагменті; серин і треонін містять у бічних ланцюгах захисні групи, які утво3 рюють O -трет-бутилсерин і -треонін відповідно. Аміногрупи в бічних ланцюгах лізину, орнітину, 2,4діаміномасляної кислоти й 2,3-діаміномасляної кислоти захищені бензилоксикарбонільними групами (групами Cbz). Процедура 1,7 г 2-Хлортритилхлоридної смоли (Iris Biotech, CAS No 42074-68-0) (на яку попередньо нанесена амінокислота, яка містить захисну групу -Fmoc, 0,85 ммоль/г) використовують у сухому вигляді в кожному реакторі, додають 17 мл ДМФ і суміш струшують протягом 30 хв. ДМФ видаляють фільтруванням з відсмоктуванням. Для синтезу описаних октапептидів використовують 7 циклів видалення захисної групизв'язування, кожний з яких включає наступні стадії: 1.) Видалення Fmoc - Додають 12,75 мл ДМФ і 4,25 мл піперидину. - Суміш струшують протягом 30 хв. - Суміш ДМФ/піперидин видаляють фільтруванням з відсмоктуванням. - Додають 12,75 мл ДМФ і 4,25 мл піперидину. - Суміш струшують протягом 10 хв. - Суміш ДМФ/піперидин видаляють фільтруванням з відсмоктуванням. 2.) Стадія промивання (повторюють 5 разів) - Додають 17 мл ДМФ. - Суміш струшують протягом 30 хв. - ДМФ видаляють фільтруванням з відсмоктуванням. 3.) Зв'язування амінокислоти - Додають 10,2 мл відповідної амінокислоти (1,5 екв.), яка містить захисну групу Fmoc, розчиненої в ДМФ. - Додають 6,8 мл TBTU (2 екв.), розчиненого в ДМФ. - Додають діізопропілетиламін (3 екв.). 95630 56 - Реакційну суміш струшують протягом 2 год і потім видаляють фільтруванням з відсмоктуванням. 4.) Стадія промивання (повторюють 3 рази) - Додають 17 мл ДМФ. - Суміш струшують протягом 30 хв. - ДМФ видаляють фільтруванням з відсмоктуванням. Після завершальної стадії реакції одержану смолу, яку зібрали фільтруванням з відсмоктуванням, за допомогою 10 мл дихлорметану переносять на фільтр, збирають фільтруванням і двічі промивають порціями по 5 мл дихлорметану. Процедура 9 (вилучення з повним видаленням захисних груп): Смолу з пептидом у посудині для проведення реакції змішують із основною фритою з 50% TFA у ДХМ (20 мл розчину для кількості суміші, зазначеної в процедурі 8), додають триізопропілсилан (100 мкл) і воду (100 мкл) і суміш струшують при кімнатній температурі протягом ночі. Потім темний розчинник видаляють фільтруванням з відсмоктуванням, смолу промивають 4 порціями ДХМ, щоразу струшуючи протягом 2 хв, і повторно збирають фільтруванням з відсмоктуванням. Фільтрати поєднують і розчинник відганяють. Залишок перемішують із МТБЕ, збирають фільтруванням з відсмоктуванням і розчиняють у метанолі. На закінчення, метанол відганяють у вакуумі. Процедура 10 (зв'язування з містковим активним складним ефіром): Октапептид і активний складний ефір (сполука 17А або сполука 277А (1,1 екв.) розчиняють у ДМФ (20-40 мкл/мкмоль октапептиду) при 0°С додають і ДІЕА (4-5 екв.). Реакційну суміш додатково перемішують при кімнатній температурі протягом від 90 хв до 2 год. Суміш розчиняють в ацетонітрилі й очищають за допомогою хроматографії. Фракції, які містять продукт, поєднують і ліофілізують. Процедура 11 (циклізація): Вихідну сполуку розчиняють у ДМФ (приблизно 50 мкл/мкмоль) і розчин охолоджують до 0°С. Додають 4метилморфолін (6 екв.) і HATU (3 екв.) і суміш перемішують при 0°С протягом 2 год. Обробку проводять шляхом безпосереднього завантаження повної реакційної суміші та розділення згідно з методикою 45 або за допомогою однієї із зазначених методик ВЕРХ. Фракції, які містять продукт, поєднують і ліофілізують або концентрують у роторному випарнику. Процедура 12 (видалення захисної групи Fmoc за допомогою піперидину): Пептид при 0°С змішують із сумішшю ТГФ і піперидин (4+1, приблизно 20 мкл/мкмоль). Потім суміш перемішують при цій температурі протягом 1 год. Реакційну суміш безпосередньо очищають згідно з методикою 45 і Фракції, які містять продукт, поєднують і концентрують. Процедура 13 (зв'язування з пептидом з використанням HATU у рідкій фазі): Циклічний пептид з N-кінцевою групою, яка не містить захисну групу (наприклад, сполука прикладу 407, 408, 409 і т.п.) і дипептид (наприклад, сполука 8А, 10А і т.п.) (1,5 екв.) розчиняють у ДМФ (приблизно 30-80 мкл/мкмоль циклопептиду) і розчин охолоджують 57 до 0°С. Додають 4-метилморфолін (4 екв.) і HATU (1,6 екв.) і суміш перемішують при кімнатній температурі протягом 2 год. Потім реакцію зупиняють за допомогою 3 мл метанолу й очищають за допомогою хроматографії згідно з методикою 45. Фракції, які містять продукт, поєднують і концентрують. Вихідні сполуки Приклад 1А D-Лейцил-L-лейцил-L-фенілаланіл-[(3R)лейцил]-L-лейцил-D-аргініл-L-ізолейцил Одержання лізобактинбістрифторацетату шляхом ферментації і його виділення описано в WO 2004/099239. Лізобактинбістрифторацетат (20 г, 13,29 ммоль) розчиняють у двох порціях суміші ізопропанол/вода 9:2 (по 110 мл). У захисній атмосфері аргону додають паладій на вугіллі (10%; по 5 г). Реакційну суміш (після дегазації) протягом 12 год перемішують під тиском водню, що дорівнює 80-70 бар, і при 40°С в автоклаві під тиском. До реакційної суміші повторно додають паладій на вугіллі (10%; 5 г). Реакційну суміш (після дегазації) повторно перемішують під тиском водню, що дорівнює 80-70 бар, і при 40°С в автоклаві під тиском протягом 12 год. Реакційну 95630 58 алотреоніл-гліцил-[(3S)-3-гідроксіаспарагініл]серинтрифторацетат(дигідролізобактин) та Приклад 2А D-Лейцил-L-лейцил-[3-циклогексил-L-аланіл][(3R)-лейцил]-L-лейцил-D-аргініл-L-ізолейцилалотреоніл-гліцил-[(3S)-3-гідроксіаспарагініл]серинтрифторацетат (октагідролізобактин) суміш (після дегазації) ще раз перемішують під тиском водню, що дорівнює 80-70 бар і при 40°С в автоклаві під тиском протягом 12 год. За допомогою аналітичної ВЕРХ (методика 10) лізобактин більше не виявляється. Реакційну суміш фільтрують через кізельгур, концентрують у вакуумі та сушать у високому вакуумі. Одержують 20,10 г (99% від теоретичного виходу) продукту (60% дигідролізобактин, 40% октагідролізобактин). Приклад 3А [(3R)-Лейцил]-L-лейцил-D-аргініл-Lізолейцил-алотреоніл-гліцил-[(3S)-3гідроксіаспарагініл]-серинтрифторацетат 59 Препаративне розщеплення хімотрипсину в суміші субстратів дигідро/октагідролізобактин при концентрації 5 мг/мл 20 г Дигідро- (приблизно 40%) і октагідролізобактину (приблизно 60%) розчиняють в 400 мл метанолу й потім додають 3400 мл буфера для розщеплення (0,1 Μ бікарбонат амонію/0,5 Μ сечовина рН 8). Перед додаванням ферменту розчин нагрівають до 37°С у сушильній шафі. Додають 800 мг хімотрипсину (100 мл хімотрипсину в розчині вода/етиленгліколь 1:1, 4 мг/мл; 1:25; попередньо нагрітого до 37°С) і реакцію проводять при 37°С. Через 0,5, 1 год відбирають аліквоти по 200 мкл і розщеплення ферменту зупиняють за допомогою 200 мкл суміші 30% ацетонітрил/0,1% TFA. Зразки паралельно з розщепленням ферменту аналізують за допомогою ВЕРХ протягом 15 хв (час утримання фрагмента 4-11 приблизно 3,6 хв, фрагмента 1-3 (LLF) приблизно 9,6 хв, фрагмента 1-3 (LLА(3-циклогексил)) приблизно 11,3 хв) (розчинник А 0,1% TFA, розчинник В 60% ацетонітрил/0,1% TFA, градієнтний режим 0 хв 30% В, 10 хв 80% В, 11 хв 100% В, 12 хв 30% В, 15 хв 30% В; швидкість потоку: 0,7 мл/хв, температура: 40°С, УФ-детектування 210 нм). Реакцію ферменту зупиняють через 60 хв за допомогою 150 мл ацетонітрилу й приблизно 30 мл TFA. Значення рН розчину повинно дорівнювати від 1 до 2. До препаративного розділення розчин можна зберігати при -20°С. Активність партії хімотрипсину (70 Од/мг), яка використовується, визначають шляхом контрольного розщеплення білком інтерлейкін-4 подвійний мутеїн Arg(121)Asp(121)/Tyr(124)Asp(124) (Bayer Healthcare AG, D-Wuppertal). Препаративне очищення: 500 мл Порції розчину суміші для розщеплення, описаної вище, спочатку фільтрують через шар целіту у вакуумі й потім через лійку з фільтром під тиском (450 мкм із попереднім фільтром). Фільтрат вводять у картридж Varian Metaflash С-18 40М. Після цього елюювання проводять за наступною програмою: розчинник А: 0,05% TFA у воді, розчинник В: 0,05% TFA в ацетонітрилі. Швидкість потоку: 50 мл/хв; 03 хв 5% В; лінійна зміна; 30 хв 90% В, 33 хв. 90% В. Фракції, які містять продукт, поєднують і ліофілізують. 11,8 г (87% від теоретичного виходу) цільової сполуки одержують із об'єднаних фракцій, які містять продукт. Приклад 4А Метил-(Z)-2-[(трет-бутоксикарбоніл)аміно]-4,4диметилпент-2-еноат 95630 60 Піровиноградний альдегід (303,2 г, 3,41 моль, 10 екв.) і метил-{[(третбутокси)карбоніл]аміно}(диметоксифосфорил)ацетат (101,5 г, 0,341 моль, 1,0 екв.) розчиняють у ТГФ (800 мл) і охолоджують до -70°С. При -70°С по краплях повільно додають ТМГ (78,7 г, 0,683 ммоль, 6,95 мл, 2,0 екв.) і потім суміш перемішують при -70°С протягом 4 год і потім при КТ протягом 4 днів. Реакційну суміш концентрують і потім екстрагують шляхом струшування з етилацетатом (двічі по 500 мл) і водою і об'єднані органічні фази промивають насиченим розчином хлориду натрію (100 мл) і сушать над сульфатом натрію. Після концентрування неочищений продукт хроматографують (1,5 кг силікагелю, елюент: циклогексан/етилацетат 5:1). Одержують 67 г (76% від теоретичного виходу) цільової сполуки. Альтернативно, неочищений продукт після водної обробки можна очистити за допомогою кристалізації із суміші циклогексан/етилацетат. Rf(силікагель, циклогексан/етилацетат 4:1)=0,5 РХ-МС (методика 18): Rt=2,5 хв; МС (ІЕР+): + m/z (%)=158 (100) [Μ - С4Н8 - СО2 + Н] , 280 (5) + [М+Na] . 1 Н ЯМР (400 МГц, d6-ДМСО):  1,08 (s, 9Н, С(СН3)3), 1,38 (s, 9Н, ОС(СН3)3), 3,61 (s, 3H, СО2СН3), 6,40 (s, 1Н, Н), 8,14 (s, 1Н, NH). 13 С ЯМР (126 МГц, d6-ДМСО):  28,46 (3С), 29,53 (3С), 33,28, 52,22, 78,89, 125,62, 147,05, 154,67, 166,25. + ВР-ЧПР-МС (методика 24): C13H23NO4 [М+Н] знайдено 258,1696, розраховано 258,1700. Приклад 5А 2 Метиловий ефір N -(трет-Бутоксикарбоніл)-3трет-бутил-D-аланіну Метил-(2Z)-2-[(трет-бутоксикарбоніл)аміно]4,4-диметилпент-2-еноат (приклад 4А, 60 г, 233,2 ммоль) розчиняють у суміші етанол ЧДА/діоксан 3:1 (1000 мл). Захисну атмосферу аргону подають через голку (~10 хв). Розчин поміщають в ультразвукову ванну (приблизно 5 хв) і додають (+)-1,2біс[(2R,5R)діетилфосфолано]бензол(циклооктадієн)родій(І)трифлат (600 мг, 1 мас. %). Суміш гідрують при тиску водню, що дорівнює 3,5 бар, і при КТ протягом 3 днів. Реакційну суміш фільтрують через кізельгур і елюент концентрують. Неочищений продукт хроматографують (силікагель, елюент: циклогексан/етилацетат 4:1). Одержують 60 г (99% від теоретичного виходу) цільової сполуки.