Спосіб визначення стану макроорганізму

1. Способ определения состояния мзкроорганизма путем иммунологического исследования периферической крови, включающий получение изолированных лимфоцитов и лейкоконцентрата из перифе рической крови, проведение НСТ-спонтэнного и индуцированного теста сегментоядерных нейтрофилов и моноцитов в лейкоконцентрате, определение Е-розеткообразования изолированных лимфоци тов, предынкубированных с теофиллином и ЕАС-розеткообразования изолированных лимфоцитов, определение естественной клеточной киллерной активности, проведе ние реакции бласттрансформации изолиро ванных лимфоцитов на Т- и В-клеточный митоген, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что дополнительно из периферической крови выделяют аутологичные эритроциты и плаз му, которую разделяют на белокассоциированную и безбелковую фракции, а затем проводят иммунологические исследования в следующем порядке: после проведения НСТ-тестз и определения Е-и ЕДС-розеткообразования изолированных лимфоцитов и* предынкубировэнных с теофиллином, определяют Е- и ЕАС-розеткообразование изолированных лимфоцитов последовательно в присутствии лейкоконцентрата, белокэссоциированной и безбелковой фракции аутоплаэмы и в присутствии различных препаратов гормонального, противовоспалительного или иммуномодулирующего действия, определяют розеткообразование изолированных лимфоцитов и отдельно в присутствии лейкоконцентрата белокэссоциированной и безбелковой фракции аутоплазмы и в присутствии аутоэритроцитов совместно с различными иммунотропными препаратами, определяют естественную клеточную киллерную активность сначала изолированных лимфоцитов, а потом отдельно в присутствии белокассоциированной и безбелковой фракции аутоплэзмы, проводят реакцию бласттрансформации на Т-и В-клеточной митоген после изолированных лимфоцитов, отдельно от изолированных лимфоцитов в присутствии белокассоциированной и безбелковой фракции аутоплазмы и иммунотропных препаратов. 2. Способ по п.1,о т л и ч а ю щ и й с я тем, что в качестве иммунотропного гормонального препарата используют дексазон, в качестве противовоспалительного - индометацин и в качестве иммуномодулятора интерферон. о 9772 Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано для изучения различных состояний сложной биологической системы при моделировании широкого спектра патологических процес- 5 сов аутоиммунных, опухолевых, инфекционных и т.п., а также для диагностических исследований и индивидуального, подбора лекарственных средств путем иммунологического тестирования периферической кро- 10 ви при лечении аутоиммунных, опухолевых инфекционных заболеваний, бесплодия или в процессе лре- и посттрэнсплэнтационно-го мониторинга. Известны способы тестирования пери- 15 ферической крови для определения иммунного состояния организма, например путем определения содержания инсулина и исследования динамики его изменения: определения резистентности организма при 20 инкубировании лейкоцитов с тест-микробной взвесью в присутствии аутологичной сыворотки; определения иммунореактивно-сти при одновременном проведении двух реакций розеткообразования: лимфоцитов 25 с эритроцитами барана в присутствии иммуностимулирующего препарата (левамизола, спленина и т.д.) и лимфоцитов в присутствии эутоплазмы. Общим недостатком известных спосо- 30 бов является проведение одного-двух иммунологических тестов, по которым нельзя объективно оценить сложную иммунную систему организма. Более информативно исследование 35 проводят при осуществлении двухэтапного способа диагностического определения им мунного состояния человека, являющийся способом-прототипом. Первый этап, назы ваемый ориентирующим, включает следую- 40 щие операции: определение относительного и абсолютного количества лимфоцитов; тесты Е- и ЕАС-розеткообразоаания для определения относительного и абсолютного количества J- и В-лимфоцитов 45 крови; определение концентрации сывороточных иммуноглобулинов основных классов (М, G, А); определение фагоцитарной активности лейкоцитов. Этот этап может быть осуществлен в 50 условиях клинической лаборатории а течение суток. Второй этап, называемый аналитическим, включает следующие операции: определение субпопуляций регуляторных 55 Тлимфоцитов (Т-хелперов, Т-супрессоров); прямой тест определения спонтанной миграции лейкоцитов и тест торможения миграции лейкоцитов с использованием в качестве стимулятора фитогемагглютинина (FGA); оценка функциональных свойств иммунорегуляторных клеток в тестах конканавалин-А-индуцированной суп рессорной активности; постановка важных тестов гиперчувствительности замедленного и немедленного типа на туберкулин, грибковые антигены, DNHB, искомые аллергены; оценка пролиферативной активности Т- и В-лимфоцитов в реакции бласттрансформации на митогены, антигены, аллогенные клетки; определение В-лимфоцитов, несущие поверхностные иммуноглобулины разных классов; оценка синтеза иммуноглобулинов в культуре В-лимфоцитов; непрямой тест торможения миграции лейкоцитов; оценка активности киллерных клеток (К- и ЕК-лимфоцитов); тесты на оценку наиболее значимых медиаторов иммунной системы, в том числе интерлейкин - продуцирующей активности клеток; определение различных компонентов комплемента; оценка различных компонентов фагоцитоза и рецепторного аппарата фагоцитов. Если первый этап обязательный, то второй этап является рекомендательным, так как отличается значительной трудоемкостью (необходимо специальное оборудование, дефицитные реактивы, большой опыт и высокая квалификация исполнителя) и продолжительностью (общее время 5-7 сут). Однако несмотря на определение широкого диапазона иммунологических параметров, способ-прототип является недостаточно точным. Он объективен исключительно в отношении системы fn vitro, так как не учитывает участия гуморальных и клеточных факторов микроокружения в иммунном ответе, не исследует индивидуального действия иммунотропных препаратов, применяемых при терапии конкретного патологического процесса. Кроме того, из-за значительной продолжительности процесса 7 сут, этот способ не обеспечивает оперативной диагностической информации. Целью изобретения является повышение точности диагностики и эффективности коррекции состояния макроорганизма при одновременном ускорении способа. Для достижения цели в способе определения состояния макроорганизма путем иммунологического исследования периферической крови, проводят НСТ-спонтанный и индуцированный тест сегментоядерных нейтрофилов и моноцитов в лейкоконцентрате, определение Е-розеткообразования изолированных лимфоцитов, предынкубированных с теофиллином, определение естественной клеточной киллерной активности изолированных лимфоцитов, реак 9772 цию бласттрансформации изолированных лимфоцитов на Т- и В-клеточные митогены, дополнительно из периферической крови выделяют аутологичные эритроциты и плазму, которую разделяют на белокассоцииро- 5 ванную и безбелковую фракции, а затем проводят иммунологические исследования в следующем порядке: после проведения НСТтеслэ и определения Е-розеткообраэо-вания изолированных лимфоцитов, предын- 10 кубированных с теофиллином и ЕАС-розеткообразования изолированных лимфоцитов последовательно в присутствии лейкоконцентрата, белокассоциировзнной и безбелковой фракции эутоплаэмы и в присутствии 15 лейкоконцентрата совместно с каждым из иммунотропных препаратов гормонального, противовоспалительного и иммуномодулирующего действия определяют розеткообразование изолированных лимфоцитов с 20 аутоэритроцитами и последовательно в присутствии лейкоконцентрата, белокассоциированной и безбелковой фракции зутоплазмы и совместно с каждым из указанных иммунотропных препаратов.; определяют 25 естественную клеточную киллерную активность после изолированных лимфоцитов последовательно в присутствии лейкоконцентрзта и белокассоциированной и безбелковой фракции аутоплззмы; проводят 30 реакцию бласттрансформации на Т- и Вклеточные митогены после изолированных лимфоцитов последовательно а присутствии белокассоциированной и безбелковой фракций аутоплазмы и совместно с каждым 35 из указанных иммунотропных препаратов. Существенные отличия нового способа в сравнении с известными аналогами заключаются в многоплановом исследовании периферической крови, что обеспечивается 40 изучением поведения в комплексе всех компонентов крови: изолированные лимфоциты, лейкоконцентрзт, аутоэритроциты и аутоплазма, дополнительно разделенная на белокассоциированную и безбелковую 45 фракции, а также их различных сочетаний в присутствии лекарственных препаратов. Благодаря такому разностороннему иммунологическому исследованию определяют состояние всего макроорганизма. Так, на- 50 пример, предложенная схема позволяет изучить параметры изолированных лимфоцитов с учетом клеточных факторов микроокружения (в лейкоконцемтрэте), а также с учетом влияния естественных пространст- 55 венных связей между лимфоцитами, которые могут резко изменять показатели поведения изолированных лимфоцитов, исследуемых в способе-прототипе Включение в объект исследований б^збелковой и белокассоциированной фракции аутоплазмы позволяет определить не только суммарное воздействие гуморальных факторов, как в известных способах, но и разграничить, в какой фракции плазмы находятся агрессивные (патологические) и компенсаторные (защитные) субстанции. Такое вычленение является принципиально важным, так как позволяет, используя современные инструментальные методики экстракорпоральной детоксикации (плазмофарез, гемодиализ, гемосорбция и их сочетания), удалять из макроорганизма вещества, поддерживающие патологический процесс, не ослаблять макросистему одновременным удалением субстанций, нарабатываемых ею для инактивации чужеродной информации. Кроме того, предложенный способ позволяет выявить способности лимфоцитов распознавать аутологичные тканевые антигены, например, экспрессируемые на мембрэнах собственных эритроцитов. Этот феномен отражает выраженность реакций против перекрестно реагирующих антигенов (например, антигенов эндо- и экзогенной микрофлоры и антигенов собственных тканей, представленных на эритроцитах, на которых в разной степени присутствуют мембраноассоциированные структуры, характерные и для других органов: почек, миокарда, печени, поджелудочной железы, соединительной, нервной ткани и т.д.) Он, как эпизодический, сопровождает большинство инфекционных заболеваний, а в определенном количестве случаев превращается в основное патогенетическое звено болезни, что имеет место при аутоиммунных поражениях соединительной и нервной ткани, почек, сердца, суставов и т.д. как следствие стрептококковой инфекции. Изучение действия иммунотропных препаратов в совокупности предложенных тестов никогда ранее не проводилось. Оно способствует уточнению клинического диагноза, так как демонстрирует поведение лимфоцитов в присутствии различных факторов: - противовоспалительных - блокирую щих синтез продуктов арахидоновой кисло ты: проста гланди нов, лейкотриенов, простациклинов, эйкозэноидов и т.д.; - гормонал ьных - аналогов преднизолона, кортизона и т.д.; - иммуномодулирующих - медиаторов различных звеньев иммунного ответа: интерферонов, интерлейкинов, тимопоэтинов, миелопептидов и др. По результатзм исследования конкретизируют природу воспзлительных реакций или признаки наличия воспэлительных ме 9772 диаторов, форму лируют инд ивиду альны е прогнозы э ффективнос ти пред лагаемого лечения, т. е. у точняют, какие лекарс твенные средства и в какой дозировке способны нормализовать исходно патологические сос тояния лимфоцитов. Пред ложенный способ позволяет провес ти иммунологические исслед ования пери феричес кой крови вс его за 4-6 ч (по короткой) и за 3 су т (по полной схеме) в отличие от известного способа, где анализы провод ят в течение 7 су т. Новый спос об позволяет провес ти компьютеризацию обработки результатов исслед ования в автоматическом режиме. Способ иллюс триру ется описанием общей схемы и примерами выполнения, пред ставленными в форме карты имму нологических исс ледований периферической крови с рекоменд ациями клиницис ту специаль но д ля конкретного больного. Способ осуществляетс я по с ледующей схеме. У пациента забирают 15 мл венозной периферической крови, которую с табилизируют 2,7% -ным рас твором ЭДТА (трилон В ) в соотношении 1:10. Из 10 мл крови в с тандартном град иенте плотнос ти фиколл - верогра фин а (1.07 6-1.0 78) в ыделяю т пу л мононуклеарных клеток, из которых инку бацией на плас тиковых поверхнос тях удаляют прилипающие (моноциты, макро фаги) клетки. Из ос тавш ейся крови (5 мл) отбирают лейкоконцентрат, макс имально освобож денный от э ритроцитов и плазмы (около 2 мл). Клетки лейкоконцентрата освобождают от плазмы трехкратным центрифугированием и отмыванием физиологическим рас твором. Половину объема полученной плазмы пропускают через фильтры с диаметром пор 0, 17 ммк и, таким образом, отд еляю т безбелковую фракцию от белокасс оциированной. В условиях in vitro трад иционными методами определяю т Е - и., ЕАС-розеткообразо в а н и е, р оз е тк о о б р аз о ва н и е с ау тологичными э ритроцитами, Е-розеткообразование лимфоцитов, пос ле пред ынкубац ии с тео фи л л и н ом: п ок аз а те л и НСТспонтанного и инду цированного тес та сегментояд ерных нейтрофилоа и моноцитов; активнос ть ес тес твенных киллерных клеток; способнос ть лимфоцитов транс формироваться в блас ты при внесении различных митогенов. Вс е у казанные реакции проводят в соответс твии с Метод иками соглас но рекомендациям, описанным в спос обе-га рототипе[1]. I - НСТ-спонтанный и инду цированный тес т сегментоядерных нейтрофилов и моно 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 8 цитов, учитываемый в лейкоконцентрате (ес тес твенном клеточном, гуморальном и прос транс твенном микроокру жениях ). II - Е -розеткообразование (экспресс ия характерных Т-клеточных рецепторов): а) изолированных лимфоцитов (опред е ляю т процентное и абсолютное содержание Е-розеткообразующих клеток ); б) пред ынкубированных с теофиллином изолированных лимфоцитов (Т-хелперные и Т-супресс орные клетки, определяют их абсолютные количес тва и соотнош ение); в) в прису тс твии лейкоконцентрата (оп ред еляют отклонение от а); г) в прису тс твии безбелковой фракци и аутоплазмы (в качес тве э ффекторных клеток ис пользу ют изолированные лим фоциты и лейкоконцентрат) опред еляют отклонени е от а и в; д ) в пр ис у тс тв и и б е л окас с оц и ир ов а нной фракции ау топлазмы в качес тве э ффек тивных клеток использу ют изолированные лимфоциты и лейкоконцентрат, определяю т отклонение от ав; 111 - ЕА С-розеткообразование (экспрес сия х арактерных В-клеточных маркеров); а) изолированных лимфоцитов (опред еляют процентное и абсолютное сод ержание ЕАС-розеткообразующих клеток ); б) в прису тс твии лейкоконцентрата (опред еляют отклонение от а); в) в прису тс твии безбелковой фракции ау топлазмы (определяют отклонение от а и б, в качестве э ффекторных клеток использу ют изолированные лимфоциты и лейкоконцентрат); г) в присутс твии белокассоциированной фракции ау топлазмы (определяют отклоне ние от а и б, э ффекторные клетки - изолированные лим фоциты и лейкоконцентрат). IV - Р озеткообразование с ау тологич ными эритроцитами; а) изолированных лимфоцитов (определяю т процентное и абсолютное количес тво); б) в прису тс твии безбелковой фрак ции ау топлазмы (э ффекторные клетки - изолированные лимфоциты опред еляю т отклонение от а); в) в прису тс твии белок асс оциированной фракции ау топлазмы (э ффекторные клетки - изолированные лим фоциты, определяют отклонение от а). V - Опред еление Е -розеткообразования лим фоцитов лейкоконцентрата в прис у тс тв и и имму но троп н ых пре па ра тов * (предынку бация с препаратом д лится в течение 30 мин при 36, 7°С); - субтерапевтическая (0,1 терапевтической д озы) и терапевтическая д оза индометацина; 9772 - субтерапевтическая (0,1 терапевтиче ской дозы) и терапевтическая д оза д ексазона; - с у бтерапевтическая и терапевтиче ская д оза альфа-2-рекомбинантного интер ферона. V! - Опред еление розеткообразования лим фоцитов, пред ынку бированных с оглас но ус ловий э тапа V, с ау тологичными эритроцитами. VH - Опред еление ес тес твенной киллерной активнос ти (против ау тологичных опухолевых клеток, при отсу тс твии послед них в к ачес тве мишеневых исполь зую т клетки пер ев ива емо й л ин ии ч ел ов ечес ког о миелолейкоза - К-562); а) изолированных лимфоцитов; б) в прису тс твии белок асс оциированной фрак ц ии ау топ лэ змы (э ффек торны е клетки - изолированные л-имфоциты), опре деляю т отклонение от з); При необход имос ти в схему тес тирования могу т быть внес ены и д ругие препараты (различные гормоны: инс у лин, глюкагон, кортизол: иммуномодуляторы: лим фо- и монокины; антибиотики, цитос татики, наркотические вещ ес тва и т.д. ) в завис имос ти от конкретных задач; в) в прису тс твии безбелкоаой фракции ау топлазмы (э ффекторные клетки - изоли рованные лим фоциты), опред еляют откло нение от а. V III - Р еакция блас ттранс формаци и лим фоцитов на Т-клеточный митоген, например, фитогемзгглютинин (FGA, S erva, 30 мкг/ мл) и преимущ ес твенно В -клеточный митоген, например, липополис а - х арид (LPS, Serva, 100 мкг/мл): а) изолированных лимфоцитов (учет ин декса с тиму ляции); б) в прису тс твии безбелковой фракции ау топлазмы (э ффекторные клетки - изоли 10 рованные лимфоциты, опред еляю т отклонение от а); в) в прису тс твии белокасс оциированной фракции ау топлззмы (э ффекторные клетки 5 изолированные лимфоциты, определяют отклонение от а); г) внесение в тес т-сис темы, кроме фитогемагглютинина различных имму нотропных препаратов: 10 ~ с у б те р апе в тичес к их и те рап ев тич еских доз инд ометацина; - с у бтерапевтических и терапевтиче ских доз д екс азона; - к -2-рекомбинантного интерферона в ^5 д иапазоне клиничес ки ис пользу емых д оз, пересчитанных на in vit ro ку льтивирование: 12, 60, 300, 1500, 3000, 7500, 15000 МЕ/мл. Короткая сх ема ис с лед ования требу ет 20 минимального времени д ля вос произвед ения. В ней отсу тс твуют метод ы, требующие стерильнос ти и условий для работы с радиоактивными метками. Она включает I-VI э тапы. Но ее информативнос ть явно 25 недос таточна для исследования опухолевой болезни, при которой необх од имо получение обьективных данных и о характере взаимных влияний блас томы и макроорганиз ма. 3Q Полная с х ема более тру д оемка и вклю чает вс е опис анные э тапы. Она позволяет более д етально исследовать сос тояние макроорганизма, в том чис ле опух олеву ю болез нь, и бо ле е из би ра тель но п од ой ти к 35 выбору вида и дозы корректирующих препаратов. Короткая схема П р и м е р 1. 1. 1. Р езу льтаты имму нологичес кого ис с лед ования пери фер ичес кой 40 крови: ФИО А. возрас т 60 л ф24 ф-ла венозной крови: мон. 7 п,0 с.61 э4 Д. 24. 01.90 норма 4, 09 Общее количес тво лейкоцитов 7,8 Процентное 9, 0 х 10 / л 18-38% 9 содержание лимфоцитов 24 Абс олютное 0, 8-3, 6 х 10 / л количес тво лимфоцитов1, 87 НСТ-тес т: нейтрофилов спонт. 5 инду ц. 9 спонт. < инду ц. моноцитов споит. 3 инду ц. 5 спонт. < инду ц. Т-лимфоциты (Е -РОК) изолированные на фиколле; процентное сод ержание 21 40-60% 0. 6-2, 1 9 абс олютное количес тво 0,39 х 10 / л модуляция ау топлазмой: • цельной - „- 12 модуляции нет без белка 6 модуляции нет' Т-лимфоциты (Е -РОК ) в лейкоконцентрате: процентное с од ержание 15 моду ляция ау топлазмой: 11 9772 12 цельной 10 модуляции нет без белка 3 модуляции нет модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозах: индометацином 27 23 дексазоном 20 20 Л-2-рекомбинантным интерфероном 17 20 В-лимфоциты (ЕАС-РОК), 20-26% 0,3изолированные на фиколле: 0,5 х 109/л процентное содержание 6 абсолютное количество 0,11 модуляции нет модуляция аутоплэзмой: модуляции нет цельной 1 без белка 4 В-лимфоциты (ЕАС-РОК) в лейкоконцентрате: процентное содержание 4 модуляция аутоплазмой: модуляции нет цельной 1 модуляции нет без белка 0 .., . Розеткообразование лимфоцитов с зутологичными эритроцитами: процентное содержа. ние 0 нет абсолютное количество 0 нет модуляция аутоплазмой: цельной 0 модуляции нет без белка 0 модуляции нет модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозе: индометацином 0 0 дексазоном 0 А-2-рекомбинантным интерфероном 0 Т-хелперы: Т-супрессоры 2,0 2,2:3,3 (теофиллиновый тест) 30 1.2. Заключение Пациент А. Дата исследования 24 01.90. У пациента, обслуживаемого системой, вторичный иммунодефицит, описываемый де следующими показателями: Способность изолированных Т-лимфоцитов образовывать Е-розетки понижена. ©акторы клеточного микроокружения усугубляют ситуацию - уменьшают снижен- 40 ную активность изолированных Т-лимфоци-тов. Бегюкассоциированная фракция нэтив-ной аутологичной плазмы усугубляет ситуацию уменьшает пониженную активность 45 изолированных Т-лимфоцитов. Безбелковая фракция аутологичной плазмы усугубляет ситуацию - уменьшает сниженную активность изолированных Тлимфоцитов, 50 Белокассоциированная фракция натив-ной аутологичной плазмы в присутствии клеточного микроокружения усугубляет ситуацию - уменьшает сниженную способность Т-лимфоцитов лейкоконцентрата 55 участвовать в Е-розеткообразовзнии. Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы в присутствии клеточного михроокружения усугубляет ситуацию уменьшает сниженную способность Т-лим фоцитов лейкоконцентрата участвовать в Ерозеткообразовании. Способность изолированных В-лимфоцитов образовывать ЕАС-розетки понижена. Факторы клеточного микроокружения практически не изменяют пониженную активность изолированных В-лимфоцитов. Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы усугубляет ситуацию - уменьшает пониженную активность изолированных В-лимфоцитов. Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы практически не изменяет пониженную активность изолированных В-лимфоцитов. Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы практически не изменяет пониженную способность В-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в ЕАС-розеткообразовании. Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы усугубляет ситуацию уменьшает сниженную способность В-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в ЕАС-розеткообразовании. Таким образом, нарушения в иммунокомпетентной сфере обусловлены иммуноделрессивном воздействием на функции 13 9772 лимфоцитов клеточного и гуморального микроокружения. In vitro нарушенные показатели лимфоидной функции нормализуются: удалением факторов белокассоциированной и безбелковой фракции аутологичной плазмы, дексазоном, индометацином. 1.3. Рекомендации клиницистам. Показано: детоксикационное лечение, направленное на снижение концентрации 10 безбелковых и белокассоциированных иммунодепрессивных факторов в нативной 14 аутоплазме; параллельный курс противовоспалительной терапии субтерапевтическими дозами индометацина и дексазона. Спустя две недели после окончания лечения необходимо контрольное исследование. Описание соответствует исследованным параметрам состояния иммунокомпетентной сферы. П р и м е р 2.Полная схема 2.1. Результаты иммунологического исследования периферической крови: возраст 60,0 лф24 ФИО А. ф-ла венозной крови: мон 7 пО с 61 эА Д 24.01.90 норма 4,0-9,0 х 109/л Общее количество лейкоцитов 7~8 18-38% Процентное содержание лимфоцитов 24 0,8-3,6 хЮ9/л Абсолютное количество лимфоцитов 1,87 НСТтест спонт. < индуц. нейтрофилов спонт. 5 индуц. 9 спонт. < индуц. моноцитов спонт. 3 индуц. 5 Т-лимфоциты (E-FOK), изолированные на фиколле: 40-60% 0,6процентное содержание 21 9 абсолютное количество 0,39 2,1 10 /л модуляция аутоплазмой: модуляции нет цельной " 12 модуляции нет без белка 6 Т-лимфоциты (Е-РОК) в лейкоконцентрате: процентное содержание 15 модуляция аутоплззмой: * »' «,, модуляции нет цельной ' * 10 модуляции нет без белка 3 модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозах: индометацином 27 23 дексазоном 20 20 А-2-рекомбинантным интерфероном 17 20 В-лимфоциты (ЕАС-РОК), изолированные на фиколле; процентное содержание 6 20-26% абсолютное количество 0,11 0,3-0,5109/л модуляция аутоплазмой; цельной; ' * 1 модуляции нет без белка 4 модуляции нет В-лимфоциты (ЕАС-РОК) в лейкоконцентрате: процентное содержание 4 модуляция аутоплазмой: •* цельной 1 модуляции нет без белка 0 модуляции нет Розеткообразование лимфоцитов с аутологичными эритроцитами; процентное содержание 0 нет абсолютное количество 0 нет модуляция аутоплазмой: ' . цельной 0 модуляции нет без белка 0 модуляции нет модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозе; индометацином 0 0 дексазоном А-2-рекомбинантным интерфероном 0 Т-хелперы; Т-супрессоры 2,0 (теофиллиновый тест) 2,2:3,3 Естественная киллерная активность лимфоцитов: 24 модуляция 19,29 + 0,8% аутоплазмой: 15 9772 цельной 29 модуляции нет без белка 42 . модуляции нет модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтичекой дозе : индометэцином 10 13 дексазоном 13 16 12. X -2-рекомбинантным интерфероном (ЕД/мл): 12 10, 60 300 10, 1500 14, 300 8, 7500 0, 15000 0; Реакция бласттрансформации лимфоцитов: Уровень спонтанного выше FGA-индуциро ванного 3-8 бластогенеза 3-8 FGA-индуц. бластогенез 0,65 3-6 Кон-А -"1,23 LPS -"0,38 моду ляц ии нет модуляция аутоплазмой: модуля ции нет цельной спонт. 0,69 моду ляц ии нет FGA 1,0 модуля ции нет Кон-А 0,08 модуля ции нет LPS 1,0 модуля ции нет без белка спонт. 0,97 модуля ции нет FGA ' 1,53 моду ляц ии н ет Кон-А 0,02 LPS 2,1 модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозе: индометацином 1,4 1,4 дексазоном 1,9 2,1 А-2-рекомбинантным интер фероном (ЕД/мл): уровня спонтанного 1.0. бластогенеза 12 0,86 60 1,0, 300 1500 1,1, 3000 1,3, 7500 1,0, 15000 1,3 FGAиндуцированного бластогенеза 12 0,9, 60 0,6, 300 1500 0,6. 0,6, 3000 0,6, 7500 0,7, 15000 0,5 2.2. Заключение Пациент А. Дата исследования 24.01.90. У пациента, обслуживаемого системой, вторичный иммунодефицит, описываемый следующими показателями: Способность изолированных Т-лимфоцитов образовывать Е-розетки понижена. Факторы клеточного микроокружения усугубляют ситуацию - уменьшают сниженную активность изолированных Т-лимфоцитов. Белокассоциированная фракция натив ной аутологичной плазмы усугубляет ситуацию - уменьшает пониженную активность изолированных Т-лимфоцитов. Безбелковая фракция аутологичной плазмы усугубляет ситуацию - уменьшает сниженную активность изолированных Тлимфоцитов. Белокассоциированная фракция натив ной аутологичной плазмы в присутствии клеточного микроокружений усугубляет си туацию - уменьшает сниженную способность Т- лим фо ци тов лейкокон цен тр а та участвовать в Е-розеткообразовании. Беэбелковая фракция нативной аутологичной плазмы в присутствии клеточног о микроокружения усугубляе т ситуацию уменьшает сниженную спос обность Т-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в Ерозеткообразовании. Способность изолированных В-лим фо-20 цитов образовывать ЕАС-розетки понижена. Факторы клеточного микроокружения практически не изменяют пониженную ак тивность изолированных В-лимфоцитов. 35 Белокассоци иров анн ая фрак ция н а тив ной аутологичной плазмы усугубляет ситуацию уменьшает пониженную активность изолированных В-лим фоцитов. Безбелковая фракция нативной аутоло-40 гичной плазмы практически не изменяет пон и ж ен н ую а к ти в н ос ть и з о ли р о в а н н ых Влимфоцитов. Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазм ы практически не 45 изменяет пониженную способность В-лимфоци тов лейкоконцентра та участвова ть в ЕАС-розеткообрэзовании. Безбелковаяфракция нативной аутологич н о й п лаз м ы усугу бля е т с иту а цию - 50 уменьшает сниженную способность В-лимфоци тов лейкоконцентра та участвова ть в ЕАС-розеткообразовании. Белокассоциированная фракция наживной ауто логичной плазм ы резко угнетае т 55 КонА-индуцированный бластогенез лимфо цитов, снижая его до уровня FGA- и LPS-индуцированного бластогенеза. Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы увеличивает уровень ЕК-активности лим фоцитов. 17 9772 Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы резко увеличивает уровень ЕК-активности лимфоцитов. Таким образом, нарушения в иммунокомпетентной сфере обусловлены иммунодепрессивным воздействием на функции лимфоцитов факторов клеточного и гуморального микроокружения. In vitro нарушенные показатели лимфоидной функции нормализуются: удалением 10 факторов белокассоциированной и безбелковой фракции аутологичной плазмы, дексазоном, индометацином. 2.3. Рекомендации клиницистам. 15 18 Показано: детоксикационное лечение, направленное на снижение концентрации безбелковых и белокассоциированных иммунодепрессивных факторов в нзтивной аутоплазме: параллельный курс противовоспалительной терапии субтерапевтическими дозами индометацина и дексазона. Спустя две недели после окончания лечения необходимо контрольное исследование. Описание соответствует исследованным параметрам состояния иммунокомпетентной сферы. П р и м е р З.Короткая схема 3.1. Результаты иммунологического исследования периферической крови: возраст 42 ФИО Б. лф 19 Д 22.11.89 4,0ф-ла венозной крови мон 17 п 0 с 64 э 0 норма 9,0 х 109/л 18общее количество лейкоцитов 4,8 38% 0,8-3,0 процентное содержание лимфоцитов 19 хЮ9/л абсолютное количество лимфоцитов 0,91 НСТ-тест: спонт, < индуц. нейтрофилов спонт. 12 индуц. 8 спонт. < индуц. моноцитов спонт. 9 индуц, 5 Т-лимфоциты (Е-РОК), изолированные на фиколле: 40-60 % процентное содержание 18 0,6-2,1 хЮ9/л абсолютное количество 0,16 модуляция аутоплазмой: модуляции нет цельной 0 модуляции нет без белка 0 Т-лимфоцитов (Е-РОК) в лейкоконцентрате: процентное содержание 36 модуляция аутоплазмой: модуляции нет цеяьной 0 модуляции нет без белка 2 модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозах: индометацином 25 23 дексазоном 22 18 А -2-рекомбинантным интерфероном 19 34 В-лимфоциты (ЕАС-РОК), изолированные на фиколле: 20-26% 0,3процентное содержание 28 0,5 хЮ9/л абсолютное количество 0,26 модуляции аутоплазмой: модуляции нет цельной ' 0 модуляции нет без белка 2 В-лимфоциты (ЕАС-РОК) в лейкоконцентрате: процентное содержание 15 модуляция аутоплазмой: модуляции нет цельной 17 модуляции нет без белка 25 Розеткообразование лимфоцитов с аутологичными эритроцитами: процентное содержание 14 нет абсолютное количество 0,13 нет модуляция аутоплазмой: цельной 24 . модуляции нет без белка 26 модуляции нет модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозе: индометацином 2 0 дексазоном 0 0 А-2-рекомбинантным интерфероном 18 6 Т-хелперы: Т-супрессоры 0,33 2,2:3,3 (теофиллиновый тест) 19 9772 3.2. Заключение Пациент Б. Дата исследования 22.11.89. У пациента, обслуживаемого системой, вторичный иммунодефицит, описываемый следующими показателями: 5 Способность изолированных Т-лимфоцитов образовывать Е-розетки понижена. Факторы клеточного микроокружения частично компенсируют ситуацию - увеличивают сниженную активность изолирован- JO ных Т-лимфоцитов. Белокзссоциированная фракция нативной эутологичной плазмы усугубляет ситуа цию - уменьшает пониженную активность изолированных Т-лимфоцитов. 15 Безбелковая фракция аутологичной плазмы усугубляет ситуацию - уменьшает сниженную активность изолированных Тлимфоцитов. Белокассоциированная фракция нзтив- 20 ной аутологичной плазмы в присутствии клеточного микроокружения усугубляет ситуацию - уменьшает сниженную способность Т-лимфоцитов лейкоконцентрзта участвовать в Е-розеткообразовании, - 25 Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы в присутствии клеточного микроокружения усугубляет ситуацию уменьшает сниженную способность Т-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в Е- 30 розеткообразовании. Способность изолированных В-лимфоцитоа образовывать ЕАС-розетки повышена. Факторы клеточного микроокружения 35 инвертируют активность изолированных Влимфоцитов. Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы инвертирует активность изолированных В-лимфоцитов, 40 Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы инвертирует активность изолированных В-лимфоцитов. Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы практически не 45 изменяет пониженную способность В-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в ЕАС-розеткообразовании. Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы нормализует способность В- 50 лимфоцитов участвовать в ЕАС-розеткообразовании. 20 Отсутствие повышения показателей НСТ-теста сегментоядерных нейтрофилов и моноцитов (индуцированный НСТ-тест) может свидетельствовать об истощении ферментов "дыхательного взрыва" фагоцитирующих клеток. Исходно увеличенное розеткообразование лимфоцитов с аутологичными эритроцитами, увеличенные показатели спонтанного НСТ-теста сегментоядерных нейтрофилов и моноцитов свидетельствуют в пользу гипотезы о наличии во внутренней среде организма раздражителя иммунокомпетентной сферы (антигены экзо- или эндогенной микрофлоры, распознавание нормальных и дифференцировочных антигенов аутологичных тканей), причем (n vitro способность лимфоцитов образовывать розетки с аутологичными эритроцитами увеличивается под воздействием обеих фракций нативной аутоплазмы. Таким образом, иммунное воспаление реализуется, вероятнее всего, как продуктами арахидоновой кислоты (простагландинами, лейкотриенами и т.д.), так и "воспалительными" гормонами (типа преднизолона). In vitro нарушенные показатели лимфоидной функции нормализуются: удалением аутоагрессивных и иммуноблокирующих факторов белокассоциированной и безбелковой фракции нативной аутологичной плазмы, дексазоном и интерфероном. 3.3. Рекомендации клиницистам. Показано; детоксикационное лечение, направленное на снижение концентрации безбелковых и белокассоциированных аутоагрессивных и иммуноблокирующих факторов аутоплазмы: параллельный курс лечения субтерапевтическими дозами дексазона и терапевтическими дозами интерферона. Спустя две недели после окончания лечения необходимо контрольное исследование. Описание соответствует исследованным параметрам состояния иммунокомпетентной сферы. Пр и м е р 4.Полная схема 4.1. Результаты иммунологического исследования периферической крови: возраст 42 лф 19 Д22.11.89 ф-ла венозной крови: мон 17 п0 с 64 эО общее количество лейкоцитов 4,8 норма 4.0-9,0 х 10% 18-38% 0,8-3,6 х 109/л процентное содержание лимфоцитов 19 Абсолютное количество лимфоцитов 0,91 спонт. < индуц. НСТ-тест: нейтрофилов споит 12 индуц. 8 ФИО Б, 21 9772 22 моноцитов спонт. 9 индуц. 5 спонт. < индуц. Т-лимфоцит (Е-РОК), изолированные на фиколле: 40-60% 0,6-2,1 х109/л 18 процентное содержание абсолютное количество 0,16 модуляции нет модуляции модуляция аутоплазмой: v .. нет цельной 0 без белка 0 Т-лимфоциты (Е-РОК) в лейко концентрате: процентное содержание 36 модуляции нет модуляции модуляция аутоплазмой: нет цельной 0 модуляция препаратами в без белка субтерапевтической и терапевтической дозах: индометацином 25 23 дексазоном 22 18 Я-2-рекомбинантным интерфероном 19 34 В-лимфоциты (ЕАС-РОК), изолированные на фиколле: процентное содержание 28 20-26% абсолютное количество 0,26 0,3-0,5x10 /л модуляция аутоплазмой: цельной " ' 0 модуляции нет без белка 2 модуляции нет В-лимфоциты (ЕАС-РОК) в лейкоконцентрате: процентное содержание 15 модуляция аутоплазмой: цельной 17 модуляции нет без белка 25 модуляции нет Розеткообразование лимфоцитов с аутологичными эритроцитами: процентное содержание 14 нет абсолютное количество 0,13 нет модуляция аутопдаімрй: цельной ' ' 24 модуляции нет без белка 26 модуляции нет модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозе: индометацином 2 0 дексазоном 0 0 Я-2-рекомбинантным интерфероном 18 6 Т-хелперы: Т-супрессоры 0,33 2,2:3,3 (теофиллиновый тест) Естественная киллерная активность лимфоцитов: . . 21 19,29 + 0,8% модуляция аутоплазмой: цельной 10 модуляции нет без белка 15 модуляции нет модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозе: индометацином 21 15 дексазоном 19 10 Я-2-рекомбинантным интерфероном (ЕД/мл): 12 20, 60 21, 300 17, 1500 14, 3000 10, 7500 18. 15000 24; Реакция бласттрансформации лимфоцитов: Уровень спонтанного ниже FGA-индуцированного бластогенеза 3-8 FGA-индуц. бластогенез 1,73 3-8 Кон-А -я0,89 LPS -"0,55 3-6 модуляция аутоплазмой: цельной спонт. 0,38 модуляции нет FGA 1,0 модуляции нет Кон-А 0,08 модуляции нет LPS 1,0 модуляции нет без белка спонт. 0,62 модуляции нет FGA 1,53 модуляции нет Кон-А 0,02 модуляции нет 23 9772 24 LPS 2,1 модуляции нет модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозе, индометацином 1,4 1,4, дексазоном 1,9 2,1 А-2-рекомбинантным интерфероном (ЕД/мл): уровня спонтанного бластогенеза 12 0,86 60 1,0 300 1,0, 1500 1,1, 3000 1,3, 7500 1.0, 15000 1,3 FGA-индуцированного бластогенезз12 0,9, 60 0,6, 300 0.6. 1500 0.6. 3000 0.6, 7500 0,7. 15000 0,5 4.2. Заключение. Пациент Б. Дата исследования 22.11.89. У пациента, обслуживаемого системой, вторичный иммунодефицит, описываемый следующими показателями; Способность изолированных Т-лим фоцитов образовывать Е-розетки понижена. Факторы клеточного микроокружения частично компенсируют ситуацию - увеличивают сниженную активность изолированных Т-лммфоцитов. Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы усугубляет ситуацию - уменьшает пониженную активность изолированных Т-лимфоцитов. Безбелковая фр акция ауто логичной плазмы усугубляет ситуацию - уменьшает сниженную активность изолированных Тлимфоцитов. Белокассоциированная фракция натив ной аутологичной плазмы в присутствии клеточного микроокружения усугубляет ситуацию - уменьшает сниженную способность Т-лим фо ци тов лейкоко нцен тра та участвовать в Е-розеткообраэовэнии. Беэбелковая Фракция нативной аутологичной плазмы в присутствии клеточного микроокружения усугубляе т ситуацию уменьшает сниженную способность Т-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в Ерозеткообразовании, Способность изолированных В-лимфоцитов образовывать ЕАС-роэетки повышена Факторы клеточного микроокружения инвертируют активность изолированных Влимфоцитов Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы инвертирует активность изолированных В-лимфоцитов. Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы инвертирует активность изолированных В-лимфоцитов. Белокассоциированная фракция натив ной аутологичной плазмы практически не изменяет пониженную способность В-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в ЕАС-розеткообразовэнии. Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы нормализует способность В 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 лим фоцитов участвовать в ЕАС-розеткообразовании. Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы угнетает способнос ть ли м фо ци то в уч ас тво ва ть в лектининдуцированной реакции бласттрансформации и увеличивает способность лим фоцитов отвечать на LPS. Безбелковая фракция нэтивной аутологичной плазмы увеличивает способность лим фоцитов отвечать на митогены бласттрансформацией. Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы снижает уровень ЕК-активности лимфоцитов. Отсутств ие повышения показа те лей НСТ-теста сегментоядерных нейтрофилов и моноцитов (индуцированный НСТ-тест) может свидетельствовать об истощении ферме н то в "д ых а те ль но го в зр ыв а" фагоцитирующих клеток. Исходно увеличенное розеткообразование лимфоцитов с аутологичными эритроци тами, увеличенные показатели спонтанного НСТ-теста сегментоядерных нейтрофилов и моноцитов, увеличенный уровень спонтанного бластогенеза лим фоцитов, отрицательная регуляция Л -2-рекомбинантн ым интерфероном ЕК-активности и способности лимфоцитов трансформироваться в бласты под влиянием лектина. нормализующее воздействие на эти показатели противовос палительных препаратов свидетельствуют в пользу гипотезы о наличии во внутренней среде организма раздражителя иммуноком петентной сферы (антигены экэо- или эндоге н н о й м и к р о фло р ы , р ас п оз н а в а н и е нормальных и ди фференцированных антигенов аутологичных тканей), причем In vitro способность лим фоцитов образовывать розетки с аутологичными эритроцитами увеличивается под воздействием обеих фракций нативной эутоплазмы. Таким образом, иммунное воспаление реализуется, вероятнее всего, как продуктами арахидоновой кислоты (простагландинами, л е йк ок о три е н ам и и т. д ), так и . "воспалительными" гормонами (типа преднизолона). 25 In vitro нарушенные показатели лимфоидной функции нормализуются удалением аутоагрессивных и иммуноблокирующих факторов белокассоциированной и безбелковой фракции нативной аутологичной плазмы, дексазоном и интерфероном. 4.3. Рекомендации клиницистам. ' Показано: детоксикационное лечение, направленное на снижение концентрации безбелковых и белокассоциированныхзутоагрессивных и иммуноблокирующих факто- ров аутоплазмы: параллельный курс 9772 26 лечения субтерапевтическими дозами дексазона и терапевтическими дозами интерферона. Спустя две недели после окончания ле5 чения необходимо контрольное исследование. Описание соответствует исследованным параметрам состояния иммунокомпетентной сферы. 10 П р и м е р 5.Короткая схема. 5.1. Результаты иммунологического исследования периферической крови: ФИО В, возраст 85 ф-ла венозной крови: мон 15 п 0 с 71 э2 лф 12 Д 17.04.90 общее количество лейкоцитов 8,8 норма 4,0-9,0 109/л процентное содержание лимфоцитов 12 18-38% Абсолютное количество лимфоцитов 1,05 0,8-3,6 109/л НСТ-тест: нейтрофилов споит. 26индуц. 6 спонт. < индуц. моноцитов спонт. 0 индуц. 2 спонт. < индуц. Т-лимфоциты (Е-РОК), изолированные на фиколле: процентное содержание 76 40-60% абсолютное количество ' д. , 0,8 0,6-2,1 х 109/л модуляция аутоплазмой: цельной 16 модуляции нет без белка 70 модуляции нет Т-лимфоциты (Е-РОК) в лейкоконцентрате: процентное содержание 6 модуляция аутоплазмой: цельной 23 модуляции нет без белка , 35 модуляции нет модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозах: индометацином 21 26 дексазоном 15 18 А-2-рекомбинантным интерфероном 34 4 В-лимфоциты (ЕАС-РОК), изолированные на фиколле: процентное содержание 45 20~26% абсолютное количество 0,48 0,3-0,5 109/л модуляция аутоплазмой: цельной • 12 модуляции нет без белка 37 модуляции нет В-лимфоциты (ЕАС-РОК) в лейкоконцентрате: процентное содержание 19 т . ' модуляция аутоплазмой: цельной 2 модуляции нет без белка ,. 31 модуляции нет Розеткообразование лимфоцитов с аутологичными эритроцитами: процентное содержание 26 нет абсолютное количество 0,27 нет модуляция аутоплазмой: ' цельной 46 модуляции нет ( без белка 45 модуляции нет модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозе: индометацином 10 0 дексазоном 10 6 А-2-рекомбинантным интерфероном 8 24 Т-хелперы: Т-супрессоры (-) 2,2:3,3 (теофиллиновый тест) У пациента, обслуживаемого системой, 5.3. Заключение вторичный иммунодефицит, описываемый Пациент В. Дата исследования 17.04.90. следующими показателями: 27 Способность изолированных Т-лим фо цитов образовывать 6-розетки повышена. Факторы клеточного микроокружения инвертируют активность изолированных Тлимфоцитов. Белокассоциировзнная фракция нативной аутологичной плазмы инвертирует ак тивность изолированных Т-лим фоцитов. Безбелковая фр акция ауто логичной плазмы частично компенсирует ситуацию уменьшает высокую активность изолированных Т-лим фоцитов. Белокассоциированная фракция натив* ной аутологичной плазмы в присутствии клеточного микроокружения частично ком пенсирует ситуацию - увеличивает сниженную с пос о бн ос ть Т- ли м фо ци то в лейкоконцентрата участвовать в Е-розеткообразовании. Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы в присутствии клеточного микроокружения частично компенсирует ситуацию - увеличивает сниженную способность Т-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в Е-розеткообразовании. Способность изолированных В-лимфо цитов образовывать ЕАС-розетки. повышена. Факторы клеточного микроокружеиия инвертируют активность изолированных Влимфоцитов. Белокассоциированная фракция натив ной аутологичной плазмы инвертирует ак тивность изолированных В-лимфоцитов. Безбелковая фракция нативной аутопо гичной плазмы частично компенсирует ситу а ци ю у мень ш ае т а к ти в н о с ть изолированных В-пимфоцитов. Белокассоциированная фракция натив ной аутологичной плазмы усугубляет ситуацию - уменьшает пониженную способность В-лим фоцитов лейкоконцентрата участвовать в ЕАС-розеткообразовании. Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы инвертируют способность В лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в ЕАС-розеткообразовании, Отсутствие повышения показате ле й НСТ-теста сегментоядерных нейтро филов (индуцированный НСГ-тест) может свидетельствовать об истощении ферментов "дыха те ль ног о вз р ыв а" фаг о ци ти рующ их клеток. 9772 28 Сниженные показатели НСТ-теста моноцитов могут свидетельствовать о ригидности ферментов "дыхательного взрыва" и функциональной несостоятельности фаго5 цитирующих клеток. Исходно увеличенное розеткообразование лим фоцитов с аутологичными эритроцитами, увеличенные показатели спонтанного НСТ-теста сегментоядерных нейтрофилов и 10 извращенное за счет преобладания Т-хелперных клеток соотнгшение иммунорегуляторных клеток свидетельствуют а пользу гипотезы о наличии во внутренней среде организма раздражителя иммунокомпетен15 тной сферы (антигены экзо- или эндогенной микро флоры, распознавание нормальных и диференцировочных антигенов аутологичных тканей), причем In vitro способность лим фоцитов, образовывать розетки с ауто20 логичными эритроцитами увеличивается под воздействием обеих фракций нативной аутоплазмы. Таким образом, иммунное воспаление реализуется, вероятнее всего, как продукта25 ми арахидоновой кислоты (простагландинами, л е йк о тр ие н ам и и т. д), так и . "воспалительными" гормонами (типа преднизолона), а также за счет преобладания Тлимфоцитов хелперов. 30 in vitro нарушенные показатели лим фо идной функции нормализуются удалением аутоагрессивных факторов белокассоциированной и безбелковой фракции нативной аутологичной плазмы, индометацином, де35 ксазоном и интер фероном. 5.3. Рекомендации клиницистам. Показано: детоксикационное лечение, направленное на снижение концентрации безбелковых и белокассоциированных ауто40 агрессивных факторов аутоплазмы; паралле льн ый курс про тивовосп али те льн ого лечения субтерапевтическими дозами индо метацина. дексазона и интерферона. Спустя две недели пос ле окончания ле 4 ^ чения необходимо контрольное исследование. Описание соответствует исследованным параметрам состояния иммунокомпетентной сферы. 50 П р и м е р 6. Полная схема. 6. 1. Результаты иммунологического исследования пери ферической крови: ФИО В. ф-ла венозной крови мои 15 п 0 общее количество лейкоцитов процентное содержание лимфоцитов Абсолютное количество лимфоцитов НСТ-тест: возраст 85 с 71 э2 лф12 Д 17.04 .90 у норма 4 ,0-9,0 х10 /л 8.8 12 1,05 18 -38%Q 0,8-3, 6х10 / у 29 9772 ЗО нейтрофилов спонт. 26 индуц. 6 спонт, < индуц. моноцитов спон т. 0 индуц. 2 спонт. < индуц. Т-лимфоциты (Е-РОК), изолированные на фиколле: процентное содержание 76 40~60% абсолютное количество 0,8 0,6-2,1 х10ч /л модуляция аутоплчзмой: цельной 16 модуляции нет без белка 70 модуляции нет Т-лимфоциты (Е-РОК) з лейкоконцентрате: процентное содержание 6 модуляция аутоплазмой цельной 23 модуляции нет без белка 35 модуляции нет модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозах : индометацином 21 26 дексазоном 15 18 X -2-рекомбинэнтным интерфероном 34 4 В-лимфоциты (ЕАС-РОК), изолированные на фиколле : процентное содержание 45 20-26% абсолютное количество 0,48 0,3-0,5 х10 9/л модуляция аутоплазмой: цельной 12 модуляции нет без белка 37 модуляции нет В-лимфоциты (ЕАС-РОК) в лейкоконцентрате: процентное содержание 19 модуляция аутоплазмой: цельной 2 модуляции нет без белка 31 модуляции нет Розеткообразование лимфоцитов с аутологичными эритроцитами процентное содержание 26 нет абсолютное количество 0,27 нет модуляция аутоплазмой: цельной 46 модуляции нет без белка 45 модуляции нет модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозе : индометацином 10 0 дексазоном 10 6 А-2-рекомбинантным интерфероном 8 24 Т-хелперы: Т-супрессоры (-) 2,2:3,3 (теофиллиновый тест) Естественная киллерная активность лимфоцитов _ 32 19.29 + 0,8% модуляция аутоплазмой цельной 2 модуляции нет без белка 28 модуляции нет модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозе : индометацином 10 5 дексазоном 13 10 Я -2-рекомбинантным интерфероном (ЕД/мл): 12 24, 60 18, 300 20, 1500 14, 3000 18, 7500 24, 15000 20; Реакция бласттрансформации лимфоцитов: Уровень спонтанного ниже FGA-индуцированного бластогенеза 3-8 FG^-индуц. бластогенез 3.14 3-8 Кон-А -"1.35 LPS 3-6 3.37 модуляция аутоплазмой: цельной спонт. 1,83 модуляции нет FGA 0.55 модуляции нет Кон-А 2,89 модуляции нет LPS 2.0 модуляции нет без белка спонт, 1,65 модуляции нет FGA 0.81 модуляции нет 31 9772 32 Кон-А 2,18 модуляции нет LPS 0,77 модуляции нет модуляция препаратами в субтерапевтической и терапевтической дозе; индометацином 2,7 1,4, дексазоном 1,25 1,1 Я -2-рекомбииэнтным интерфероном (ЕД/мл): уровня спонтанного бластогенеза 16 0,76, " 60 0,69, 300 0,7, 1500 0,5, 3000 0,6, 7500 0,6, 15000 0,5 FGA-индуцированного бластогенеза 12 1,12. 60 1,1 300 2,1, 1500 2.6, 3000 1,2, 7500 0,7, 15000 0,4 6.3. Заключение Пациент В. Дата исследования 17.04.90. У пациента, обслуживаемого системой, вторичный иммунодефицит, описываемый следующими показателями: Способность изолированных Т-лимфоцитов образовывать Е-розетки повышена. Факторы клеточного микроокружения инвертируют активность изолированных Тлим фоцитов. Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы инвертирует активность изолированных Т-лим фоцитов. Безбелковая фр акция ауто логичной плазмы частично компенсирует ситуацию уменьшает высокую активность изолированных Т-лим фоцитов. Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы в присутствии клеточного микроокружения частично ком пенсирует ситуацию - увеличивает сниженную с п ос о бно с ть Т- ли м фо ц ито в лейкоконцентратэ участвовать в Е-розеткообразовании. Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы в присутствии клеточног о микроокружения частично компенсируе т ситуацию - увеличивает сниженную способность Т-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в Е-розеткообрззовании. Способность изолированных В-лим фоцитов образовывать ЕАС-розетки повышена. Факторы клеточного микроокружени я инвертируют активность изолированных Влим фоцитов. Белокассоциированная фракция нативной аутологичной плазмы инвертирует активность изолированных В-лимфоцитов. Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы частично компенсирует ситу а ци ю у мень ш ает а к ти в н о с ть изолированных В-лимфоцитов. Белокассоциированная фракция натив ной аутологичной плазмы усугубляет ситуацию - уменьшает пониженную способность В-лимфоцитов лейкоконцентрата участвовать в ЕАС-розеткообразовании. Безбелковая фракция нативной аутологичной плазмы инвертирует спос обность В лим фоцитов лейкокорцентрата участвовать в ЕАС-розеткообразовании. Белокассоциированная фракция натив ной аутологичной плазмы увеличивает уро15 вень спонтанного и Кон-А-индуцировзнного бластогенеза. уменьшает уровень FGA- и LPS-иидуцированного бластогенеза. Беэбелковая фракция нативной аутологичной плазмы увеличивает уровень спонтайн ого бластогенеза, снижае т уровень 20 FGA- и LPS-индуцированного бластогенеза. Отсутств ие повышен ия показателей НСТ-теста сегментоядерных нейтро филов (индуцированный НСТ-тест) может свиде-25 тельствовать об истощении ферментов "дыха те льн ог о вз р ыв а" фа го ци ти рующ их клеток. Сниженные показатели НСТ-теста моноцитов могут свидетельствовать о ригид30 ности ферментов "дыхательного взрыва" и функциональной несостоятельности фаго цитирующ их клеток. Исходно увеличенное розеткообразова-ние лимфоцитов с эутологичными эритроцитами, 35 увеличенные показатели спонтанного НСТ теста сегментоядерных нейтрофилов и извращенное за счет преобладания Т-хелперных клеток соотношение иммунорегуля то р н ых к ле ток , исх од н о п ов ыш е н н ый 40 уровень ЕК-активности лимфоцитов свиде тельствуют в пользу гипотезы о наличии во внутренней среде организма раздражителя иммунокомпетентной с феры (антигены эк-зоили эндогенной микро флоры, рзспознэ-45 вание нормальных и ди фференцировочных антигенов аутологичных тканей ), причем in vitro способность лим фоцитов образовывать розетки с аутологичными эритроцитами увеличивается под воздействием обеих 50 фракций нативной аутоплазмы. Таким образом, иммунное воспаление реализуется, вероятнее всего, как продуктами арахидоновой кислоты (простагландинами, ле йк о трие на м и и т.д .), так и 55 "воспалительными" гормонами (типа преднизолона), а также за счет преобладания Тлимфоцитов хелперов. In vitro нарушенные показатели лим фо идной функции нормализуются удалением аутоагрессивных фак тором ^ UA УКРАЇНА 9772 (13) СІ